贵阳中医学院
硕士学位论文
辨证施治中药制剂三方促进家兔骨折三期愈合的实验观察
姓名：黄海
申请学位级别：硕士
专业：中医骨伤科学
指导教师：李良栋;胡建山
20070601
贵阳中医学院硕士学位论文相关声明
原 创 性 声 明
本文声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果尽我所知除了论文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表论文中所撰写过的研究成果
也不包含为获得贵阳中医学院或其他单位的学位或证书而使用过材料与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确说明
作者黄 海 日期2007年3月30日
关于学位论文使用授权说明
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作者签名黄 海 导师签名
日期2007年3月30日
中文摘要
目的观察辨证施治中药制剂三方对家兔骨折三期愈合的治疗作用并探
讨其促进骨折愈合的相关机制为其在临床上促进骨折的愈合提供理论依据
方法将28只健康新西兰大白兔造成双侧桡骨中下段3mm骨缺损的骨折模型,便随机分成辨证施治中药制剂三方高剂量组辨证施治中药制剂三方低剂
量组药物对照组即伤科接骨片组和空白对照组即家兔骨折模型组四个组, 分别运用辨证施治中药制剂三方高剂量低剂量伤科接骨片和生理盐水灌胃给药,于术后第102030天心脏采血检测血清碱性磷酸酶(ALPase).术后第35天时处死实验家兔取桡骨标本, 摄X线片作生物力学测试和光镜下骨组织形态学观察
结果术后第10,20天四组血清碱性磷酸酶ALPase都不同程度升高,辨证施治三方高低剂量组及药物对照组均明显高于空白对照组,而且高剂量组与空白对照组相比,差异具有极显著性意义P<0.01与伤科接骨片组相比差异具有显著性意义P<0.05术后第30天时四组血清碱性磷酸酶ALPase都不同程度下降,其中辨证施治中药三方高剂量组下降最快,与药物对照组相比差异有显著性意义P<0.05与空白对照组相比有极显著性差异P<0.01术后第
35天时辨证施治中药三方高剂量组的X线片评分显示其骨折修复优于伤科接骨片组和空白对照组P<0.05P<0.01而低剂量组和药物对照组相比无显著性
差异P>0.05辨证施治中药三方高剂量组抗折力测定和光镜下骨组织形态学
观察结果均优于药物对照组及空白对照组P<0.05P<0.01
结论辨证施治中药三方具有明显促进骨折愈合的作用
关键词辨证施治中药三方骨折愈合分期用药实验观察
An experimental observation of Dialectical Impementary three Chinese Medicine Prescription on Improving Three Time Fracture Healing of Rabbits
Abstract
Objective: To observe the therapeutic effect of Dialectical Implementary Three Chinese Medicinal Prescription(DITCMP) on three time fracture healing of rabbits, and expore the mechanism of that the DITCMP promote fracture healing, in oder to provide the theorietical basis on promoting fracture healing on clinic .
Method: Twenty-eight rabbits were selected to make fracture at both sides with 3mm defect, and divided randomly into four groups: The high dose of DITCMP gorup The low dose of DITCMP gorup the drug control group and the blank control group. They were fed respectively with the high low dose of DITCMP, SHANGKEJIGU table and normal saline. Their blood was drawn on the 10th20th or 30th day after fracture, and were examined
for alkaline-phosphatase(ALPase) in serum. They were put to death on the 35th day after fracture, and the radius specimens were taken out, the indices for observation included X-ray picture bicomechanical tests and tissue observation.
Results: On the 10th day after operation, four groups were characterized by an increase in the ALPase level, and the high low dose of DITCMP group and the drug control group were higher singnificantly than those in the blank group. Moreover the level of ALPase in high dose of DITCMP group was obviously higher than that of the blank group(P<0.01), and it was higher than that of the drug control group(P<0.05). On the 30th day after operation, the level of ALPase in four groups falled, the high dose of DITCMP group was lowest than it of others, and it of the high dose
of DITCMP group was lower than it of the drug control group(P<0.05), and was lower obviously than it of the blank group(P<0.01)On the 35th day after operation, the X-ray picture suggested that the rabbits fracture healing of the high dose of DITCMP group were best than that of both the drug control group and the blank control group(P<0.05 orP<0.01), and suggested that the level of fracture healing in both the low dose DITCMP group and the drug control group was not different (P>0.05). The antitwisting test and tissue observation idicated that the fracture healing of the high dose of DITCMP group were bset than that of both drug control group and blank control group P<0.05orP<0.01.
Conclusion: the DITCMP can promote obviously the rabbits fracture healing.
Key words: Dialectical Implementary Three Chinese Medicinal Prescription(DITCMP) fracture healing experimental observation time curing by Chinese medicine.
前言
骨折是创伤疾病中最常见的一种好发疾病发病率高随着我国经济的不断发展交通业的发达和工矿业的兴旺骨折的发病率有明显升高的趋势而且骨折病人在治疗中出现延迟愈合或者不愈合在临床上是较常出现的问题也是一个棘手的问题因此对骨折的治疗与康复也提出了新的更高的要求如何缩短骨折患者的骨愈合时间使患者早日重返工作岗位减轻医疗费用一直是骨科医生所追求的目标目前国内外促进骨折愈合方面的药物虽多但疗效不甚理想值得进一步探索
国内外目前对促进骨折愈合的文献报道甚多其中中医药促进骨折愈合的历史悠久疗效肯定且方便易行成本低廉毒副作用低为一重要有效的治疗方法之一而且中医药促进折愈合一直是骨科研究的重点并且中医中药在骨折的治疗方面近年取得了长足的发展大量的研究显示中医药促进骨折愈合疗效肯定自从1959年刘润田[1]首次报道中药促进骨折愈合的动物研究以来人们通过各种不同手段从不同的角度进行了深入研究显示中医药促进骨折愈合的生命力随后1972年胡美珠等[2]以丹参作针剂注射于家兔桡骨骨折部位研究表明丹参促进新生毛细血管增殖改善其局部血循环有利于骨折愈合接着1986年王智兴等[3]研究报道了自然铜可诱导成纤维细胞转变为成骨细胞促进骨的生成还发现自然铜中的顺磁物质可导入骨折端提高局部氧量加速成骨细胞和胶原的形成使骨折愈合快而坚固据查从1992年1月至2005年12月间中医药促进骨折愈合的动物实验研究报道中密切相关的文献有约百多篇其中王军跃等[4]研究报道接骨七厘片有较好的促进骨折部位骨痂形成和增强抗折力强度的作用陈超鹏等[5]研究显示跌打接骨片能促进骨膜细胞的增生.转
化促进软骨细胞活跃增强软骨细胞的的功能从而起到促进骨折愈合的作用
李洪专等[6]实验研究表明生骨再造散能调节血脂水平改善血液流变学指标促进血液循环这是有利于骨折愈合的机制从所查文献分析国内很多单位有此方面的研究文献报道但这些文献报道中所涉及的中药及配方方法与本课题是不完全相同的而且多用单味中药或单方进行动物实验研究到目前为止尚没有按照中医对骨折愈合的分期采用辨证论治的原则分别运用三个药方对骨折愈合的三期进行辨证治疗的相关动物实验研究的文献报道
黔南州中医院自2001年来邀请了23位在本院工作过的离退休师带徒
及在职的接骨老中青年的中医医师利用中医中药的传统优势认真总结
分析整理根据中医对骨折愈合的的不同分期采用辨证论治的原则将医院近30年来所用的疗效比较确切临床应用广泛的骨伤秘验方与医院制剂科共同研究结合西医理论知识开发适用于临床使用的自制伤科接骨系列中药制剂包括:号胶囊,号合剂和号胶囊分三期进行治疗早期宜攻运用号胶囊中期宜和运用号合剂后期宜补运用号胶囊治疗这样一方面减少了病人的疾苦另一方面减轻了病人的经济负担大大地缩短了创伤骨折的治疗进程迎合了社会发展的需求
本课题基于国内外研究成果并结合国内外研究情况对辨证施治中药制剂三方(即自制伤科接骨系列中药制剂,包括:号胶囊,号合剂和号胶囊)促进骨折愈合进行动物实验研究以观察辨证施治中药制剂三方促进骨折愈合的药物疗效学并初步探讨其促进骨折愈合的相关机制从而为辨证施治中药三方促进骨折愈合的临床治疗提供客观科学的理论依据,这为临床上促进骨折愈合的治疗提供一种新的有效的方法及理论依据对解决创伤骨折病人在临床治疗中出现延迟愈合或者不愈合具有重要意义有着广泛的社会及经济效益
正文
1材料与方法
1 1 实验室
黔南州中医院动物实验研究中心实验室
1 2 实验动物及饲养
健康新西兰大白兔28只4月龄SPF级体重2kg 2.5kg雌雄不限单笼单只饲养家兔标准颗粒饲料贵阳医学院动物实验中心生产的复合饲料喂养自由取食及摄水通风良好饲育室温在1525之间实验动物由贵阳医学院实验动物中心提供合格证号SCXK黔20020001
1 3 实验药物
13 1 辨证施治中药三方即自制伤科接骨系列中药制剂包括:号胶囊,号合剂和号胶囊由黔南州中医院制剂科生产提供
131 1 号胶囊组方由三七红花血竭乳香等提取物组成具有
活血化瘀通络消肿的作用能促进血肿的吸收和机化用于骨折及软组织损伤初期0.4g/粒
1312号合剂组方由炒土鳖炒地龙党参熟地等中药提炼制成有和营止痛接骨续筋的作用能促进原始骨痂的形成为棕黑色液体每毫升含生药1.13 g
1313号胶囊组方为锁阳当归自然铜桂元肉等中药提炼制成具有补益肝肾舒筋接骨的作用能促进原始骨痂的改造塑型, 0.4g/粒
13 2 伤科接骨片药物对照组实验动物灌胃所用药物. 由大连美罗中药厂有限公司生产,规格0.3 g片批号200505219
133戊巴比妥钠粉剂实验动物造模时麻醉用使用时配制成3戊巴比妥钠溶液按ml kg静脉注射上海新亚药业有限公司生产批号
200503571
134青霉素钠动物造模后抗感染用由华北制药股份有限公司生产批号Y0502111
1 4 实验试剂
14 1 血清碱性磷酸酶(ALPase)试剂盒-------北京九强生物技术有限公司
14 2 10%甲醛--------河北大学化工厂
14 3 二甲苯----------河北大学化工厂
14 4 10%硝酸---------遵义高等师专化学试剂厂
14 5 丙酮--------广东西陇化工厂
1 5 实验仪器
15 1 DUO DIAGNOST 数字化X光机-----PHILPS Medical systems
15 2 AGFA-X线成像系统------德国爱克发医疗服务中心
15 3 TG328A电光分析天平-----上海天平仪器厂
15 4 YPS-2000彩色病理图文分析系统-----湖北孝感市亚光医用电子有限公司
15 5 AU-400全自动生化分析仪------日本进口奥林巴斯
15 6 CX41RF光学显微镜------日本进口奥林巴斯Olympus
157 KSF003测力控制仪------湘潭市科联分析仪器有限公司
158 常用冰箱----------澳柯玛有限公司
159 HH-W21-600电热恒温冰箱---------上海医用恒温设备厂
1510 多管架自动平衡离心机---------长沙湘仪离心机仪器有限公司
1511 5ml10ml等一次性注射器-----江阴市华达医用制品有限公司1512 骨科常用手术器械-------由黔南州中医院手术室提供
1513 牙科钻---------浙江瑞安市振华医用器械厂
1514 石蜡切片机----------无锡华元化工设备制造有限公司
1 6 动物造模
将上述28只健康新西兰大白兔适应性饲养1周后再造模按照中华外科杂志中所载柴本甫的骨折模型造模方法[7]用3戊巴比妥钠溶液按1ml/kg体重进行耳缘静脉注射麻醉成功后将家兔左右侧前肢剪毛备皮常规消毒后在无菌条件下显露桡骨中段用牙科钻的圆砂轮于旋前圆肌止点处远端将家兔左右侧桡骨锯成3mm的骨缺损常规缝合皮下组织及皮肤不做任何固定术后每天肌注青霉素钠4104U/kg连用3天以抗感染见附图一
17 动物分组 上述实验家兔造模成功后采用完全随机的原则将实验家兔分为四组
A 组
为辨证施治中药三方高剂量组B 组为辨证施治中药三方低剂量组
C 组为伤科
接骨片组即药物对照组D 组为空白对照组即模型组每组7只
18 给药方式和剂量 采用药物混悬液灌胃法给药并参照文献资料[8]对家兔骨折愈合过程的分期将辨证施治中药三方高低剂量两组即A B 两组于造模后第1-6天7-20天21-35天分别灌胃号胶囊号合剂和号胶囊的高低剂量
18 1 A 组(即辨证施治中药三方高剂量组)分期所给药物剂量分别为
号胶囊550mg/kg.d
号合剂3.56ml/kg.d 和号胶囊550mg/kg.d 分别相当
于临床等效剂量的2倍
182 B 组(即辨证施治中药三方低剂量组)分期所给药物剂量分别为
号胶囊275mg/kg.d
号合剂1.78ml/kg.d 和号胶囊275mg/kg.d 分别相当于临床等效剂量
183 C 组(即药物对照组)实验全程灌胃伤科接骨片165mg/kg.d 相当于临床等效剂量
184 D 组(即空白对照组)实验全程灌胃10ml 生理盐水以上A B
C 三组实验动物所给药物
实验时均用蒸馏水稀释至10ml 的混悬液灌胃给药
19 标本采集与检测指标 19 1 血样分析 将上述实验动物于造模后第102030天分别心脏采血2ml, 将血液于370C 水浴箱中静置两小时然后在离心机中以1500转/min 分离心5 min 后分离出血清将制成血清置于-200C 低温冰箱中冷藏以备测定血清碱性磷酸酶的含量采用金氏法测定
19 2 X 片观察 于造模后第35天用空气栓塞法处死全部实验动物将处死后动物的左侧桡骨从肘腕关节处离断 然后把标本置于同一胶片盒摄X 线正侧位片拍摄条件为电压5KV 电流50mA 时间0.1秒距离100cm 请副高职称以上资深放射科医师阅片
并采用上海骨伤研究所X 光片评价标准[9]
来评定骨折愈合程度
19 3 抗折力测定 将上述摄完X 线片后的实验标本
附着于桡骨的皮
肤肌腱等软组织和尺骨剥离掉保留桡骨骨膜然后行三点弯曲实验即抗折力实验将上述所得桡骨标本置于KSF003测力控制仪中的测试支架上桡骨骨
折面向下跨距L=50mm骨折线巨中T型头正对骨折线上方以10mm/min速度均匀下降直至标本断离标本刚好断离时测力控制仪所显示的数据即为桡骨骨折局部的抗弯载荷抗折力
19 4 组织形态学观察将实验动物的右侧桡骨于从肘腕关节处离断分离桡骨并弃除附着于桡骨的软组织从桡骨骨折部位上下2cm处锯断然后置于10福尔马林溶液固定48小时脱水5%的硝酸脱钙然后彻底冲洗24小时再用酒精梯度脱水二甲苯透明常规石蜡包埋切片片厚57mm常
规采用苏木素一伊红(HE)染色然后置于Olympus光学显微镜1010倍下观察.
110 统计学处理
X线片评分结果所得的数据采用秩和检验进行组间比较并求出p值. 血清碱性磷酸酶含量测定和抗折力实验所得的数据用(x-s)表示用SSPS软件进行方差分析采用T检验求P值P<0.05时为差异具有显著性意义P<0.01时为差异具有极显著性意义P>0.05时无统计学意义
2实验结果
2 1 血清碱性磷酸酶分别于造模后第10天20天30天测定血清碱性磷酸酶(ALPase)所得实验数据显示造模后第1020天四组实验动物的血清碱性磷酸酶(ALPase)都不同程度的升高, 其中辨证施治中药三方高低剂量组及伤科接骨片组均明显高于空白对照组, 而且辨证施治中药三方高剂量组与伤科接骨片组相比, 差异具有显著性意义P<0.05与空白对照组相比具有极显著
性意义P<0.01辨证施治中药三方低剂量组与伤科接骨片组相比, 差异无统
计学意义P>0.05造模后第30天四组动物的血清碱性磷酸酶ALPase都
不同程度的下降, 其中辨证施治中药三方高剂量组下降最快, 与伤科接骨片组相比差异具有显著性意义P<0.05与空白对照组相比具有极显著性意义
P<0.01而低剂量组与伤科接骨片组相比, 差异无统计学意义P>0.05以
上实验结果说明辨证施治中药三方能够提高成骨细胞的成骨活性见表1及统
计分析图一
表1
各组间血清碱性磷酸酶ALPase 的计量分析(X S )
组别 动物数 (只) 血清碱性磷酸酶(金氏单位)
10d 20d 30d
A 组 B
组 C 组 D 组
7 7 7 7 154.9920.75# 237.8315.36# 137.9219.26# 137.3818.52* 207.3429.15* 147.2111.53* 137.54
23.79* 202.7220.58* 150.6628.24* 110.9919.25
177.2827.32
191
.15
20.64 注 *与D 组比较P<0.05#与D 组比较P<0.01
与C 组比较P<0.05与C 组比较P>0.05
各组间血清碱性磷酸酶
ALPase 计量的统计分析图一
22 X 线评分分析 采用上海骨伤研究所X 光片评价标准通过骨痂投射
断端边缘骨膜反应骨痂结构骨痂密度骨痂边缘5项指标来评定骨折愈合程度[9], 分别用,,,,表示,+号越多表明骨折愈合程度越好.所得数据采用卡方检验进行组间比较, 结果显示辨证施治中药三方高剂量组骨折修复明显优于伤科接骨片组和空白对照组
P<0.05低剂量组和伤科接骨片组比较差异无统计学意义P>0.05见表2及附图二
三 含量金氏单位
表
四组间的血清碱性磷酸酶计量统计分析图
表2X线评分统计学分析
组别动物数
(只)
造模后第35天
+ + + + + + + + + +
A组B组
C
组
D
组
7
7
7
7
0 0 1 3# 3#
0 0 1 4* 2*
0 1 1 3* 2*
2 2 2 1
注秩和检验 *与D
组比较P<0.05#与
C组比较
P<0.05#与D组比较P<0.01
B C两组间比较无明显差异其P>0.05
2 3 抗折力实验测定结果分析辨证施治中药三方高剂量组与伤科接骨片组比较有显著性意义P<0.05与空白对照组相比差异有极显著性意义P<0.01低剂量组与伤科接骨片组比无统计学意义P>0.05见表3及抗折力实验测定结果统计分析图二
表3桡骨抗折力实验计量分析(X S)
组别动物数(只) 抗折力(kg)
A组
B组
C组
D组
7
7
7
7
5.028 1.255#
4.167 1.082*
3.9750.982*
2.682 1.103
注*与D组比较P<0.05#与D组比较P<0.01与C组比较P<0.05与C 组比较P>0.05
兔桡骨抗折力计量统计分析图二
2 4 组织形态学观察 造模后第35天辨证施治中药三方高剂量组软骨性骨痂基本骨化, 软骨细胞基本消失, 有较多骨小梁形成连接, 大多数细胞按照应力方向有序排列,
绝大部分髓腔再通大部分标本形成与健康骨形态相似的致密性骨皮质低剂量组和伤科接骨片组光镜下观察结果大致相同, 见内外骨痂基本会师,骨小梁形成较多,骨性骨痂骨化不全,可见少量软骨细胞存在,并且有少许增生的纤维细胞小部分髓腔再通而空白对照组骨痂生长稀疏排列紊乱, 大部分标本未见内外骨痂基本会师桥接, 骨性骨痂形成较少, 骨折处见较多纤
维细胞软骨细胞存在
见附图四 3讨论 3 1
骨折愈合概念的讨论
骨折愈合是指骨折断端间的组织修复反应
这种反应表现为愈合过程最终结局是恢复骨的正常结构与功能这一过程不仅需要纤维组织完成愈合过程还需使纤维组织继续转化为骨来完成骨愈合过程骨折愈合过程包括骨祖细胞的趋化增殖分化并合成细胞外基质它以对细胞血管
以及骨基质的损伤修复开始, 最终达到彻底的重新塑形而没有瘢痕形成, 同时骨折愈合也是一个极其复杂的生物学修复过程其过程表现为骨折断端首先出现纤维愈合然后有骨痂形成在经过塑形成为骨组织骨折端不但要重新获得骨性连接而且要恢复骨的正常结构与功能
[10]
因此
骨折愈合不是简单意义上的组织修复而是一面破坏清除同时再生修复的一个连接的过程是成骨细胞破骨细胞以及其
他许多组织细胞之间活跃的相互作用的过程
3 2
骨折愈合方式的讨论 3抗折力Kg
目前中西医骨科界都一致认为骨折愈合的方式有两种直接骨愈合即期骨愈合和间接骨愈合即期骨愈合这种分类方法是对一般情况下自
然愈合或坚强内固定条件下骨折后骨愈合过程的形态描述其中直接或期骨愈合是在加压固定绝对稳定时骨折断端的间隙极为微小时新生骨单位可由一个骨折端直接进入另一骨折端它没有肉芽组织的形成而是直接由软骨化骨完成骨愈合很少出现骨痂改造与塑型的现象而间接或期骨愈合是指骨折部位的骨膜及外部软组织反应伴随骨痂形成的骨愈合包含了膜内成骨及软骨内成骨两种骨发生方式而后者是期骨愈合的主要方式[11]它是在骨折断端无接触或间隙较大的情况下预先形成含成骨组织的肉芽组织和暂时性的骨痂其后骨痂塑型暂进性愈合转变为永久性愈合[10]期愈合时骨折局部有一定程度的活动存在一定的应力刺激骨折部骨痂由局部血管化形成[12]期愈合则
是自然的骨愈合方式是间接愈合通过软骨骨痂来完成由软骨组织转变成骨组织生理应力提供了组织生长发育和保持体内平衡的主要刺激由此而早期的血管重建首先来自周围组织骨的形成首先发生在周围先在软骨和血肿的外面形成一个壳远离骨折处的髓内循环是完整的膜内成骨的骨痂从骨皮质向外形成放射壮的骨小粱骨折的期愈合与期愈合是在不同内固定形式或者有无内固定的情况下不同应力刺激条件下的两种不同的愈合方式软骨内成骨
的期愈合与骨小梁直接通过骨折间隙进入另一骨折端的期愈合相比期愈合需要有一个再血管化和钙化过程而期愈合没有骨痂形成的中间阶段骨折断端直接连接没有哈氏系统破骨细胞在骨折断端塑形改造吸收阶段
3 3 家兔骨折期骨愈合模型建立的评价
本动物实验研究按照中华外科杂志中所载柴本甫的动物骨折模型的造模方法在麻醉下采用手术方式切开家兔桡骨中段附着的软组织然后锯成桡骨中下段3mm的骨缺损术中使其复位术后不使用任何内外固定依靠尺骨的支撑作用而维持其骨折局部位置造模术后家兔的生活基本不受影响饮食及睡眠等行为均正常造模术后通过X线片观察基本不发生移位见附图一本家兔骨缺损模型操作简便可靠性高科学性强对动物创伤性小较小影响造模术后家兔的骨修复接近临床骨折期骨愈合的方式
3 4 辨证施治中药制剂三方促进家兔骨折愈合的相关机制
34 1 能促进骨折愈合过程中的骨痂改建 X线片及骨组织形态学观察显示, 术后35天时辨证施治三方高剂量组骨折线已消失, 外骨痂基本改建成与健康骨形态相近似的致密性骨皮质, 骨小梁相互连接, 排列整齐, 按应力方向有序排列, 骨髓腔基本已再通, 而此时伤科接骨片组和辨证施治三方低剂量组内外骨痂虽已会师桥接但未形成与健康骨形态相近的致密性骨皮质, 骨折处可见纤维软骨组织,并可见较多破骨细胞, 骨性骨痂骨化不全部分髓腔未再通
空白对照组大部分标本骨折线仍然可见骨痂生长稀疏,排列紊乱光镜下部分
标本未见骨痂桥接, 骨性骨痂形成较少, 骨折处见较多纤维细胞,软骨细胞以
上说明辨证施治三方高剂量组能促进骨皮质的提早出现髓腔再通以及骨折愈
合后期骨痂的改建等而新生骨皮质的形成髓腔再通可以作为骨折组织学愈
合的标准[13]因此, 可以证明辨证施治三方高剂量组对骨折后骨愈合具有确切
的作用见附图二三
34 2 能提高骨折愈合过程中成骨细胞的活性血清碱性磷酸酶(ALPase)由成骨细胞分泌, 能分解有机磷酸化合物, 产生大量的无机磷酸盐离子, 促使其与钙离子结合成磷酸钙而沉淀于骨组织内, 而骨痂形成过程及形成以后均需不断的钙化目前认为碱性磷酸酶(ALPase)作为骨折愈合的局部因素对骨痂钙化有着重要的影响[14]成骨细胞分泌的血清碱性磷酸酶ALPase可以渗入血液, 使血液血清碱性磷酸酶(ALPase)含量增加血清中碱性磷酸酶ALPase含量增加就表示成骨细胞的成骨活性增强因此血清碱性磷酸酶(ALPase)可作为骨重建活跃性改变的标志即可作为一项观察骨折愈合的指标[15]造模后第10天时各组实验动物成骨均开始, 并且各组间出现明显差异性四组动物的血清碱性磷酸酶(ALPase)开始出现不同程度的升高, 并且辨证施治三方高低剂量组伤科接骨片组与空白对照组相比均有显著性差异尤其辨证施治三方高剂量组与空白对照组比较有极显著性差异到第20天时辨证施治中药三方高剂量组血清碱性磷酸酶(ALPase)含量达到高峰, 实验结果表明给药三组实验动物的成骨作用均强于空白对照组并且辨证施治中药三方高剂量组成骨作用优于伤科接骨片组第30天时辨证施治中药三方高剂量组骨折临床愈合已基本完成成骨活性趋于下
降故血清碱性磷酸酶(ALPase)的峰值较早开始下降与此相反空白对照组的
血清碱性磷酸酶(ALPase)的含量正处于上升时期说明空白对照组的成骨过程尚未完成而处于活跃阶段辨证施治中药三方高剂量组在骨折愈合过程的早中期均使血清碱性磷酸酶(ALPase)的数值显著性的增加说明辨证施治中药制剂三方高剂量能促进其的分泌使成骨细胞的活动性增加而使新故形成加快有研究表明中药促进骨折愈合的机制之一是通过增加血清碱性磷酸酶(ALPase)的活性来实现的[16]
34 3 能提高骨折愈合过程中骨痂质量骨的生物力学强度完全取决于骨折断端骨愈合后的骨质量本实验设计家兔骨缺损模型测量骨性骨痂的屈服负荷即愈合后的骨缺损局部抗折力通过本实验我们可以观察到骨性骨痂的
屈服负荷是随着骨折的愈合逐渐增高到造模后第35天时骨性骨痂把骨缺损的两端紧紧连在一起以致要施加一定压力到原骨缺损部位才发生断离这表明骨折愈合后期的骨性骨痂具有极强的抗弯曲载荷的机械性能本桡骨抗折力实验的测定结果显示造模后第35天时辨证施治中药三方高低剂量组及伤科接骨片组抗折力的生物性能均优于空白对照组并且以高剂量组抗折力的提高最为显著因此桡骨抗折力实验的测定结果证明了辨证施治三方高剂量组能通过增强抗折力的生物性能来提高骨折部骨痂质量
以上实验结果表明, 辨证施治三方高剂量具有加速骨折愈合的作用,而低剂量组可能因剂量不足,未能有效的促进骨折愈合因此辨证施治中药制剂三方
能加速骨折愈合
3 5 辨证施治中药制剂三方的组方原则
骨折愈合过程是一复杂的生物修复过程, 单纯性全程应用一种中成药合剂全程治疗骨折与祖国传统医学对骨折分期辨证施治的原则试想产生差异性针对这一问题黔南州中医院利用中医中药的传统优势根据中医对骨折愈合的不同分期采用中医辨证论证的原则将医院近二十年来所用60余个伤科接骨中药方剂中进行筛选,选出效果比较确切临床运用较广的接骨方剂用使用频率较高的一组骨伤秘验方与医院制剂科共同研究结合现代药理研究的新进展及中医骨折愈合三期分治原则研究制成自制伤科接骨系列中药制剂包括号胶囊,号合剂和号胶囊三方临床治疗时骨折愈合的三个期分别应用号胶囊,号合剂和号胶囊三方进行分期辨证治疗
3 6 关于中医理论分期论治用药依据的讨论
中国传统医学认为骨折愈合过程就是瘀去新生骨合的过程这一过程是持续和渐进的一般可分为血肿机化期原始骨痂形成期和骨痂改造塑型期[17]与此相对应中医骨伤科界对骨折治疗采取三期辨证分治的法则即骨折
初期用攻中期用和后期用补的骨折三期分治法我院自制的中
药接骨制剂(即辨证施治中药三方)遵循中医辩证论治的原则, 体现了中医对骨折愈合分期治疗的辨证观念根据骨折的不同时期采用不同的方法治疗
3. 6. 1 骨折损伤初期淤血留滞淤血不去新血不生.恶血留内
经络受阻应给予活血化淤[18]故以瘀滞为主宜采用攻利法运用号胶囊
行气活血祛瘀止痛加强骨折断端局部血液循环,促进血肿机化号胶囊中
三七红化血竭乳香等具有活血化瘀通络消肿止痛的功效其中三七
甘微苦温为伤科止血化瘀消肿定痛之圣药有止血不留瘀特点现代药理学
也证明这些药物能促进受损血管重建和加速骨折部的血液循环[19]并且有资料显示骨折愈合中的力学强度的恢复与骨折局部血管重建及血流率的变化成正相关关系[20]
3. 6. 2 中期局部肿胀基本消退疼痛逐渐消失但瘀肿虽消而未尽筋骨尚未连接故宜采用和法应用号合剂以和营生新接骨续筋活血祛瘀使骨样组织逐骨渐经过钙化而成骨组织其中号合剂中的主药土鳖虫性咸寒主归肝肾二经具有破瘀血续筋骨的功能用于筋骨折伤有研究表明炒土鳖虫可促进血管形成改善局部的血循环增加成骨细胞的活性和数量促进破骨细胞数量增加功能活跃带来骨折的提前愈合[21]
3. 6. 3后期局部瘀肿已消但筋骨尚未坚实功能还未恢复而气血耗
损根据中医骨生过程的特点以肝主筋肾主骨生髓理论为指
导故施补法采用以党参当归自然铜骨碎补等中药组成的号胶囊补气养血补肝肾壮筋骨其中号胶囊中大部分中药如锁阳当归骨碎补及自然铜等药物主归肝肾二经具有主骨生髓的功效其中, 骨碎补始载于唐
本草拾遗味苦性温归肝经肾经具有活血续伤补肾强筋骨根据相关现代药理学研究[22]认为骨碎补能促进骨对钙的吸收并提高血钙血磷
的水平从而有利于骨折的愈合自然铜味辛行散主入肝经血分能散瘀止痛
促进骨折愈合为伤科接骨疗伤之要药有研究论述了自然铜的作用[23]认为自然铜在骨折愈合过程中可诱导成纤维细胞转化成骨细胞而促进骨的生成从而加速骨折愈合同时认为自然铜中的顺磁物质可导入骨折端提高局部含氧量有利于成骨细胞和胶原的形成使骨折愈合快而坚固另有相关研究表明自然
铜骨碎补等中药在现代药理学研究能进行原始骨痂的改造与塑型新生骨小梁逐渐增加并且逐渐排列和致密而且骨折端无菌坏死部分经过血管和成骨细胞破骨细胞的浸入进行坏死骨的清除和形成新骨的爬行替代过程骨折部位形成骨性连接
依据上述祖国传统医学分期论治的辨证原则在骨折愈合的三个不同
分期里辨证地施用不同功效的药方进行辨证治疗与之相反而本动物实验的药物对照组的家兔骨折愈合的三个期均采用一层不变的方药治疗未能按照祖国传统医学对骨折愈合的分期辨证治疗违背了传统中医理论辨证施治的原则
故疗效明显不如辨证施治中药制剂三方高剂量因此辨证施治中药制剂三方高剂量具有显著加速骨折后的骨愈合的作用
结论
1到目前为止尚未见按照祖国传统医学对骨折愈合的辩证分期采用辨
证论治的原则分别运用三个药方对骨折愈合的三期进行辨证治疗的相关实验研究文献报道本课题研究结果显示按照传统中医理论辨证施治及整体
观念的原则用三个中药方剂分别对家兔骨折愈合的三个期进行分期辨证治
疗较药物对照组即本实验的伤科接骨片组只用一个药方促进骨折愈合的治疗效果更为显著充分说明了以前只用单味中药或单个中药方对骨折愈合的的整个过程进行治疗的动物实验研究方法是违背中医理论的
2通过本动物实验研究我们可以初步得到辨证施治中药制剂三方促进骨
折愈合的相关机制它能够通过提高骨折愈合过程中成骨细胞的活性来加速骨折愈合能加快骨折愈合过程中的原始骨痂的形成及骨痂改建与塑型能提高骨折愈合过程中骨痂质量.
3辨证施治中药三方(即自制伤科接骨中药制剂:号胶囊 ,号合剂和
号胶囊)具有加速骨折愈合的作用, 本课题研究为其促进骨折愈合的临床治
疗初步提供了一定的客观科学的理论依据, 对解决骨折病人在临床治疗中出现延迟愈合或者不愈合具有重要意义.迎合了临床上骨折患者的治疗需求具有
广泛的社会和经济效益