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clontech race primer

clontech race primer
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介绍&协议概述

The SMARTer RACE cDNA 扩增试剂盒提供了一种执行包括5’和3’ cDNA末端快速扩增的方法(RACE),这种试剂盒是改进版本,包括一种新的SMARTer II A低聚核苷酸SMARTScribe 反转录,它提供了更好的敏感性,更少的背景材料和较高的特异性,这种强大的系统允许您从只有10ng总RNA中隔离你的完整的目标转录本的5’序列,The SMARTer RACE cDNA 扩增试剂盒的基础是一种智能技术,它在RACE PCR中排除了有问题的接头连接的需要,让你直接用第一条cDNA,使RACE更快更简便,另外SMARTer RACE试剂盒利用Clontech专利的抑制PCR和跨步PCR以提高RACE反应的敏感性降低背景材料。结果是您可以使用polyA+或总RNA作为构建甚至非常少的转录本的完整的cDNAs的开始材料。

SMART智能技术在反转录反应中提供了一种合成全长cDNAs机制。使得SMARTer II A 低聚核苷酸和SMARTScribe反转录联合反应成为可能。这个SMARTScribe 反转录,一旦到达RNA模板的末端,就表现出末端转录的活性, 使第一股cDNA的3 '端增加3 – 5个残基(图1) 这个SMARTer低聚糖包含一个使延长的cDNA尾巴退火的修饰碱基的末端延伸,从而允许这个低聚糖作为反转录的模板,SMARTScribe反转录从mRNA分子到SMARTer低聚糖改变模板,产生一个的初始RNA的完整cDNA复制其末端有额外SMARTer序列。由于这种模板仅当酶到达RNA模板末端时改变反转录活性。这个SMART er序列通常仅仅纳入到第一条全长cDNAs。该技术更多信息请阅读···。这个过程保证高质量的RNA的使用将使得一套有最大数量的5 '序列cDNAs的形成。

在反转录之后SMART技术允许第一条cDNA链在5 ' -3'RACE PCR反应中直接使用。第一条cDNA合成时在单步中通用引物结合位点的合并排除了冗长的第二条链的合成和接头连接的需要。这个简单的和高效的SMARTer cDNA合成方法在扩增你的目标cDNA时确保更高的特异性。抑制PCR及跨步PCR技术与SMARTer技术结合在RACE PCR扩增中降低背景材料。SMARTer RACE cDNA扩增的唯一需要是要知道最少23-28个核苷酸序列信息,目的是为5 ' -3'RACE反应设计基因特异性引物。(额外的序列信息将会有助于你的RACE产品的分析)这有限的需要通过多种方法表征基因特征使得SMARTer RACE更加理想,方法包括cDNA敲除、差异显示,RNA的指纹图,est,文库筛查等。SMARTer RACE cDNA扩增是一个灵活的工具。许多研究人员使用这个试剂盒代替传统的试剂盒来扩增特意cDNA的仅5 '或 3 '端。其他人执行包括5 '和3'RACE中,然后使用后面协议的部分介绍了这个两种方法之一继续克隆全长cDNAs。在许多情况下,研究人员获得完整的cDNAs不用构建或筛选cDNA文库。

下面的表描述了生成RACE准备的cDNA、执行5 ' & 3 'RACE PCR反应, 和用SMARTer RACE cDNA 扩增试剂盒描绘最终RACE产品结果的必要步骤。请参阅执行每步细节的特别部分。

引物设计

A.引物序列

基因特异性引物(GSP)应该是

23-28nt

50-70%GC

Tm≥65°C;如果Tm>70°C能得到最好的结果(确保降落PCR的使用)

GSP与Universal Primer Mix的3’端无互补性

对你感兴趣的基因有特异性

用在SMARTer RACE反应的模板引物和产生的PCR产物在下图有详细介绍,完整的说明书中,你需要至少两个GSP:一个5’-RACE PCR的反义引物和一个3’-RACE PCR 的正义引物,如果你只进行其中一个反应,那就只需要一个GSP,所有的引物应该是23-28nt,用大于30nt的效果反而不好,如图所示的引物产生了两个反应的重叠序列,如果一个合适的限制位点位于该地区的重叠区域,那么这些片段可以随后会参与限制消化和连接来创建完整的cDNA。通过设计引物在PCR产物中产生100-200bp的交叠片段,你也可以用一起这些引物为PCR产物作正面控制,然而产生重叠序列也并非完全必要。对于大的或和罕见的cDNA你使用接近cDNA末端的引物,可能会更好。因此也不能产生重复序列,另外引物本身也能重叠。

在我们的实验中,长的引物退火温度在70度以上扩增效果较好,特别是较差的样本水平,Tm超过70允许你使用降落PCR,如果设计的GSP1和GSP2有相似的Tm将有利于该实验的进行,可通过跑梯度来确定其Tm,避免使用序列互补引物。

B.引物序列的定位

我们曾经已经利用该试剂盒通过GSP结合位点延伸至6.5kb,而且对于优化的结果,我们推荐你选择你的引物,这样你的产物是2kb或更少。

C.降落PCR

我们已经发现降落PCR能提高RACE的特异性,降落PCR在初始循环中退火温度高于一般引物,如果你的GSP大于70度,仅有严格的特异性产物产生,然后的退火温度降低到UPM相适应的水平。允许高效,指数放大的基因特定的模板。正如上面所提到的,我们建议使用引物Tm的大于70°C,允许您使用降落PCR。

D.嵌套引物

我们建议你在开始实验时不使用嵌套PCR,用这个UPM引物和GSP通常可以生成好的PCR产物,Southern 印记通过以嵌套GSP为探针描述你的RACE产品是有用的。

而且嵌套式pcr以单独GSP在太高的背景水平的或非特异性扩增的反应进行5 ' -或3”RACE 反应的情况下可能是必要的。在嵌套式PCR中,通过外引物执行主要的扩增,如果模糊产生,用其中一份PCR产物用内引物扩增,技术说明书中包括可选步骤表明嵌套式引物可以用,嵌套式一般引物A可以用于5和3’PCR(试剂盒提供)

嵌套的基因特异性引物要根据上面讨论的指导方针进行设计,如果可能的话,嵌套的引物和外基因特异性引物不应该重叠,如果他们有有限的序列信息必须重叠,3 '端内引物应该有尽可能多独特的序列。

门禁系统使用说明书

安装、使用产品前,请阅读安装使用说明书。 请妥善保管好本手册,以便日后能随时查阅。 GST-DJ6000系列可视对讲系统 液晶室外主机 安装使用说明书 目录 一、概述 (1) 二、特点 (2) 三、技术特性 (3) 四、结构特征与工作原理 (3) 五、安装与调试 (5) 六、使用及操作 (10) 七、故障分析与排除 (16) 海湾安全技术有限公司

一概述 GST-DJ6000可视对讲系统是海湾公司开发的集对讲、监视、锁控、呼救、报警等功能于一体的新一代可视对讲产品。产品造型美观,系统配置灵活,是一套技术先进、功能齐全的可视对讲系统。 GST-DJ6100系列液晶室外主机是一置于单元门口的可视对讲设备。本系列产品具有呼叫住户、呼叫管理中心、密码开单元门、刷卡开门和刷卡巡更等功能,并支持胁迫报警。当同一单元具有多个入口时,使用室外主机可以实现多出入口可视对讲模式。 GST-DJ6100系列液晶室外主机分两类(以下简称室外主机),十二种型号产品: 1.1黑白可视室外主机 a)GST-DJ6116可视室外主机(黑白); b)GST-DJ6118可视室外主机(黑白); c)GST-DJ6116I IC卡可视室外主机(黑白); d)GST-DJ6118I IC卡可视室外主机(黑白); e)GST-DJ6116I(MIFARE)IC卡可视室外主机(黑白); f)GST-DJ6118I(MIFARE)IC卡可视室外主机(黑白)。 1.2彩色可视液晶室外主机 g)GST-DJ6116C可视室外主机(彩色); h)GST-DJ6118C可视室外主机(彩色); i)GST-DJ6116CI IC卡可视室外主机(彩色); j)GST-DJ6118CI IC卡可视室外主机(彩色); k)GST-DJ6116CI(MIFARE)IC卡可视室外主机(彩色); GST-DJ6118CI(MIFARE)IC卡可视室外主机(彩色)。 二特点 2.1 4*4数码式按键,可以实现在1~8999间根据需求选择任意合适的数字来 对室内分机进行地址编码。 2.2每个室外主机通过层间分配器可以挂接最多2500台室内分机。 2.3支持两种密码(住户密码、公用密码)开锁,便于用户使用和管理。 2.4每户可以设置一个住户开门密码。 2.5采用128×64大屏幕液晶屏显示,可显示汉字操作提示。 2.6支持胁迫报警,住户在开门时输入胁迫密码可以产生胁迫报警。 2.7具有防拆报警功能。 2.8支持单元多门系统,每个单元可支持1~9个室外主机。 2.9密码保护功能。当使用者使用密码开门,三次尝试不对时,呼叫管理中 心。 2.10在线设置室外主机和室内分机地址,方便工程调试。 2.11室外主机内置红外线摄像头及红外补光装置,对外界光照要求低。彩色 室外主机需增加可见光照明才能得到好的夜间补偿。 2.12带IC卡室外主机支持住户卡、巡更卡、管理员卡的分类管理,可执行 刷卡开门或刷卡巡更的操作,最多可以管理900张卡片。卡片可以在本机进行注册或删除,也可以通过上位计算机进行主责或删除。

感受态细胞的制备步骤和原理

实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体,我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。制备出感受态的细胞,我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中,使其繁殖,就能获得大量质粒。本次实验的目的就是增加质粒的数量。同时,我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 实验步骤 1挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中,37℃,180rpm培养过夜。 [让菌复苏,进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。] 2取过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中,37℃250rpm大约小时。 [减少达到所需亮的均所需繁殖的世代数,以减少菌的变异。] 3取培养物置于40mL的灭菌离心管中,冰浴10min,4000rpm4℃离心 10min,弃上清。(将所有上清倒光,可以将离心管倒过来) [使细菌的生长停止,代谢减慢。因为这时已经没有培养基了,如果细菌仍有很高的代谢效率,则有大量细菌死亡。] 4菌体重悬于10mL100mmol/L冰冷CaCl2中,轻吹,4℃30min,4000rpm 离心5min弃上清。 [细菌处于0度,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐混合物黏附于细胞表面(羟基来源于细胞壁上的糖,磷酸来源于DNA),经短时间420C热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。(一

定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)]5菌体重悬于1mL 100mmol/L冰冷的CaCl2中,轻吹,用于转化。 [除去所有的LB以及细胞破损后释放出来的细胞内含物。防止细胞分裂,以致大量细胞死亡。(一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 6取感受态细胞100uL,加入2uLpET-21a质粒,冰浴30 min受体菌:感受态细胞100uL,加入2 uL无菌双蒸水阴性对照:LCaCl2溶液100uL,加入2 uL阴性对照 [第一个阴性对照是为了验证LB中的抗生素有活性;第二个阴性对照是为了验证CaCl2溶液和pET-21a质粒未被污染。] [冰浴是为了降低细胞代谢率,防止细胞大量死亡。] 7热激42度,90s 【在低温处理后,热激,可以使细胞壁热胀冷缩,再低温,使细胞壁上黏附的质粒进入细胞体内。】 8冰浴2 min 9加入800 uL无抗生素的LB,37℃复苏1h 【用LB复苏细胞,使细胞恢复活力,从而使细胞中的质粒表达抗抗生素的基因,只有这样才能使转化成功的细菌在有抗生 素的LB平板上生长。】 10取100ul细胞直接在含50ug/mLCarbenicillin(羧苄西林)的LB培养基上铺平板,将平皿放置37 oC温箱30min至液体被吸收。倒置平皿37 oC培养过夜,出现菌落。 【这些菌落为转化成功的菌落,而对照组应该没有菌落。在目的菌落的旁边有可能出现卫星菌落,这是因为亩的菌落的抗性基因似的菌落周围的抗生素失效,长出了转化为成功的菌落。用羧苄西林因其对酸稳定、不易被细菌降解,所以可以降低卫星菌落的数量。

F6门禁管理系统用户手册

F6门禁管理系统用户手册 目录 1.系统软件 (2) 2.服务器连接 (2) 3.系统管理 (3) 3.1系统登录 (3) 3.2修改密码 (3) 4.联机通讯 (4) 4.1读取记录 (4) 4.2自动下载数据 (5) 4.3手动下载数据 (5) 4.4实时通讯 (6) 4.5主控设置 (6) 5.辅助管理 (8) 5.1服务器设置 (8) 5.2系统功能设置 (9) 5.3读写器设置 (10) 5.4电子地图 (13) 6.查询报表 (14) 6.1开锁查询 (14) 7.帮助 (18) 7.1帮助 (18)

1.系统软件 图1 门禁管理软件主界面 F6版门禁管理系统的软件界面如上图,顶端菜单栏包括“系统管理”、“联机通讯”、“辅助管理”、“查询报表”和“帮助”菜单;左侧快捷按钮包括“系统管理”、“联机通讯”、“辅助管理”、“查询报表”、“状态”等主功能项,每个主功能项包含几个子功能,在主界面上可以不依靠主菜单,就可在主界面中找到每个功能的快捷按钮。以下按照菜单栏的顺序进行介绍。 2.服务器连接 如图2点击设置则进入远程服务器设置,此处的远程服务器IP地址不是指数据库服务器,而是指中间层Fujica Server服务管理器的IP地址。 图2 服务连接

图2 远程服务器设置 3.系统管理 3.1系统登录 系统默认的操作员卡号为“0001”,密码为“admin”,上班人员输入管理卡号和密码后可以进入系统,进行授权给他的一切操作。 图3 系统登录 3.2修改密码 修改密码是指操作员登录成功后,可以修改自己登录的密码。先输入操作员的旧密码,再输入新密码并确认,则密码修改成功。

大肠杆菌感受态细胞制备

大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板∑恐? 5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时 6. 定时监控O.D.600值(培养1小时后每半小时测定一次) 7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时) 8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天) 9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升),然后加水稀释至离心管的2/3体积。 10. 照上面步骤重复离心,小心弃去上清液 11. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞 12. 离心,弃上清液 13. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞 14. 照上面步骤离心,小心弃去上清液(沉淀可能会很松散) 15. 用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml 16. 将细胞按150μl等份装入微量离心管,于-80°C保存 转化方法: 1. 在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μl DNA ,冰上培育约5分钟

2. 添加1-3μl DNA ,冰上培育约5分钟 3. 转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器(无泡)中 4. 加载P1000,准备好300μl LB 或 2xYT 5. 对电穿孔容器进行脉冲(200 欧姆, 25μFd, 2.5 千伏)(检查时间常数,应该在3以上) 6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至电穿孔容器中 7. 37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原 大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板∑恐? 5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时 6. 定时监控O.D.600值(培养1小时后每半小时测定一次) 7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时) 8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天) 9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升),然后加水稀释至离心管的2/3体积。 10. 照上面步骤重复离心,小心弃去上清液

c++primerplus中文版第六版源代码

C++ primer plus 中文版第六版源代码 第二章到第四章,后续继续更新……… 第二章 1:#include void main() { using namespace std; int carrots; carrots=25; cout<<"I have "; cout<

2:#include int stonetolb(int); int main() { using namespace std; int stone; cout<<"Enter the weight in stone: "; cin>>stone; int pounds=stonetolb(stone); cout< void main()

{ using namespace std; int carrots; carrots=25; cout<<"How many carrots do you have?"<>carrots; cout<<"Here are two more."; carrots=carrots+2; cout<<"Now you have "< using namespace std; void main() { cout<<"Come up and C++ me some time.";

原核表达--宿主菌株选择指南

作为原核表达地宿主,对外源基因地表达会产生一定地影响,是勿庸置疑地.每一个宿主细胞都像一个微观地小工厂,按照细胞固有地程序完成“你给它们安排地生产任务”――因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行地,当出现问题时,我们需要经验判断问题所在.宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢? 知其然还要知其所以然.比如,菌株内源地蛋白酶过多,可能会造成外源表达产物地不稳定,所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想地起始表达菌株.堪称经典地系列就是和蛋白酶缺陷型,也是我们非常熟悉地表达菌株.大名鼎鼎地()融源菌则是添加聚合酶基因,为表达系统而设计.文档收集自网络,仅用于个人学习 真核细胞偏爱地密码子和原核系统有不同,因此,在用原核系统表达真核基因地时候,真核基因中地一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子,从而导致表达效率和表达水平很低.改造基因是比较麻烦地做法,系列就是更好地选择―― 这种携带质粒地衍生菌,补充大肠杆菌缺乏地七种(及)稀有密码子对应地,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中地表达水平.(已经携带有氯霉素抗性质粒)文档收集自网络,仅用于个人学习 当要表达地蛋白质需要形成二硫键以形成正确地折叠时,可以选择衍生菌系列,()和()两条主要还原途径双突变菌株,显著提高细胞质中二硫键形成几率,促进蛋白可溶性及活性表达.(卡那霉素敏感)文档收集自网络,仅用于个人学习 ? 则是综合上述两类菌株地优点,既补充种稀有密码子,又能够促进二硫键地形成,帮助表达需要借助二硫键形成正确折叠构象地真核蛋白.(卡那霉素敏感)文档收集自网络,仅用于个人学习 是衍生自突变地菌株,这个突变能根据地浓度精确调节表达产物,使得表达产物量呈现浓度依赖性.(四环素敏感)文档收集自网络,仅用于个人学习 在决定试用这些名字古怪地菌株时,有几个小要注意地,一个是不同菌株有时已经携带某个质粒或者已经具有某种抗生素抗性,要注意自己地表达质粒是否能与之兼容.比如已经携带有氯霉素抗性质粒,不能再用氯霉素筛选等等.文档收集自网络,仅用于个人学习 现象 可能原因 改进方案 建议菌株 无蛋白表达出现截短蛋白 . 地密码子偏移性 补充稀有密码子地;将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子 包涵体 二硫键形成困难 降低宿主胞质地还原性;利用促进二硫键形成地各种载体标签 表达过快,表达量过高 控制优化表达水平:降温,浓度优化

智能门禁管理系统说明书.doc

ID一体式/嵌入式门禁管理系统 使用说明书

1 软件使用说明 (1)配置要求 在安装软件之前,请先了解您所使用的管理电脑的配置情况。本软件要求安装在(基本配置): Windows 2000,windows xp操作系统; 奔腾II600或更高的处理器(CPU); 10GB以上硬盘; 128MB或更大的内存; 支持分辨率800*600或更高的显示器。 (2)安装说明 在光盘中运行“智能一卡通管理系统”安装程序(ID版),按照安装提示依次操作即可。 安装数据库以后,有两种创建数据库的方式,手动创建和自动创建。手动创建:在数据库SQL Server2000的数据库企业管理器中,建立一个database(数据库)。进入查询分析器/Query Analyzer 运行智能一卡通管理系统的脚本文件,形成门禁数据库表;自动创建:在安装智能一卡通管理软件中自动创建默认门禁数据库,默然数据名:znykt。 上述安装完后,在安装目录下,在first.dsn 文件中设置其参数,计算机server的名字(无服务器时即本机名)和数据库database的名字。 在桌面运行智能一卡通管理系统运行文件,选择卡号888888,密码为123456即可进入系统。 2 人事管理子系统 部门资料设置 首先运行‘智能一卡通管理系统’软件后,进入软件主界面,如下图所示:

然后点击进入“人事管理子系统”,如图所示: 选择<人事管理>菜单下的<部门管理>或点击工具栏内的‘部门管理’按钮,则会出现如下所示界面: 在<部门管理>中可以完成单位内部各个部门及其下属部门的设置。如果公司要成立新的部门,先用鼠标左键单击最上面的部门名,然后按鼠标右键弹出一菜单,在菜单中选择“增加部门”,则光标停留在窗口右边的“部门编号”输入框中,在此输入由用户自己定义的部门编号后,再在“部门名称”输入框中输入部门名称,最后按 <保存>按钮,此时发现窗口左边的结构图中多了一个新增的部门。如果要给部门设置其下属部门,则首选用鼠标左键选中该部门,再按鼠标右键弹出一菜单,在菜单中选择“增加”,最后输入、保存。同时也可以对选中的部门或下属部门进行“修改”或“删除”。特别要注意的是,如果是“删除”,则被选中的部门及其下属部门将被全部删除,所以要特别谨慎。

大肠杆菌感受态细胞的制备实验具体步骤及说明

大肠杆菌感受态细胞的制备实验具体步骤及详细说明 带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。 带有外源DNA 的重组质粒,在体外构建后,导入宿主细胞,随着细胞的大量复制、繁殖,才能够有机会获得纯的重组质粒DNA,该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,能容许外源DNA 的载体分子通过。 具体步骤 1、从37℃培养16-20 h的平板中挑取一个单菌落(直径2-3 mm),转到一个含有100 ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3 h。一般经验,1 OD600约含有大肠杆菌DH5α 109个/mL。 2、将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50 ml聚丙烯管中,在冰上放置10 min,使培养物冷却至0℃。 3、于4℃用Sorvall GS3特头(或与之相当的转头)以4 100 r/min离心10 min,以回收细胞。 4、倒出培养液,将管倒置1 min以使最后的痕量培养液流尽。

5、每50 ml初始培养液用30 ml预冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2,20 mmol/L CaCl2)重悬每份细胞沉淀。 6、于4℃用Sorvall GS3转头(或与之相当的转头)以41 00 r/min离心10 min,以回收细胞。 7、倒出培养液,将管倒置1 min以使最后的痕量培养液流尽。 8、每50 ml初始培养物用2 ml用冰预冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重悬每份细胞沉淀。 9、此时,可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验,也可以将细胞冻存于- 70℃。 注意事项 1. 为达到高效转化,活细胞数务必少于108个细胞/mL,对于大多散大脑杆菌来说,这相当于OD值为0.4左右。为保证细菌培养物的生长密度不致过高,可每隔15-20 min测定OD600值来监测,用监测的时间及OD值列一个图表,以便预测培养物的OD600值到0.4的时间,当OD600值达到0.35时,收获细菌培养物。 2. 在菌株与菌株之间,OD值与每毫升中活细胞散间的关系变化很大,因此有必要通过漶量特定脑杆菌的生长培养物在生长周期的不同时相的OD600值,并

C Primer Plus第6版编程练习答案

Chapter 2 Programming Exercises PE 2--‐1 /* Programming Exercise 2-1 */ #include <> int main(void) { printf("Gustav Mahler\n"); printf("Gustav\nMahler\n"); printf("Gustav "); printf("Mahler\n"); return 0; } PE 2--‐3 /* Programming Exercise 2-3 */ #include <> int main(void) { int ageyears; /* age in years */ int agedays; /* age in days */ /* large ages may require the long type */ ageyears = 101; agedays = 365 * ageyears; printf("An age of %d years is %d days.\n", ageyears, agedays); return 0; } PE 2--‐4 /* Programming Exercise 2-4 */ #include <> void jolly(void); void deny(void); int main(void) { jolly(); jolly(); jolly(); deny(); return 0; } void jolly(void) { printf("For he's a jolly good fellow!\n"); } void deny(void) { printf("Which nobody can deny!\n"); } PE 2--‐6 /* Programming Exercise 2-6 */ #include <> int main(void) { int toes; toes = 10; printf("toes = %d\n", toes);

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 ?1、从新活化的E.coli DH5α平板上挑取一单菌落,接种于3~5ml LB液 体培养中,37℃振荡培养至对数生长期(12h左右); ? 2、将该菌悬液以1:100~1:50转接于100ml LB液体培养基中,37℃振 荡扩大培养,当培养液开始出现混浊后,每隔20~30min测一次OD600,至OD600为0.3~0.5时停止培养,并转装到1.5 mL离心管中; ? 3、培养物于冰上放置20min; ? 4、 0~4℃,4000g离心10min,弃去上清液,加入1 mL冰冷的 0.1mo1/L CaCl2溶液,小心悬浮细胞, 冰浴20分钟; ?5、0~4℃, 4000g离心10min,倒净上清培养液,再用1.0 mL冰冷的 0.1mo1/L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞,冰浴20min; ? 6、 0~4℃, 4000g离心10min,弃去上清液,加入100 μL冰冷的 0.1mo1/L CaCl2溶液,小心悬浮细胞,冰上放置片刻后,即制成了感 受态细胞悬液; ? 7、制备好的感受态细胞悬液可直接用于转化实验,如果在4℃放置 12~24h,其转化效率可以增高4~6倍;也可加入占总体积15%左右 高压灭菌过的甘油,混匀后分装于1.5ml离心管中,置于-70℃条件下, 可保存半年至一年。

CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 1.前夜接种受体菌(DH5α或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中 37℃摇床培养过夜(约16小时); 2 .取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振 荡培养约2.5-3小时(250-300rpm); 3 .将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷;以下步骤需在超净工作台和冰上 操作; 4 .吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中,在冰上冷却10分钟; 5 .4℃下3000 g冷冻离心5分钟; 6 .弃去上清,加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动 打匀,使细胞重新悬浮,在冰放置20分钟; 7 . 4℃下3000 g冷冻离心5分钟; 8 .弃去上清,加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动 打匀,使细胞重新悬浮; 9 .细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂(15% - 20%甘油)后超 低温冷冻贮存备用(-70℃)。 注意事项 1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使 用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml); 2 .所有操作均应在无菌条件和冰上进行; 3 .经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的 推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的 活菌数随时间延长而减少造成的); 4 .化合物及无机离子的影响:在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子 (如Mn 2+或Co 2+)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高(100-1000倍); 5 .所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能 大大降低细菌的转化效率; 6 .质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的DNA; 7 .一定范围内,转化效率与外源DNA的浓度呈正比;

博克门禁系统使用说明书

《门禁系统使用说明书》

陕西********科技有限公司 单位地址:**************************** 联系电话:**************************** 目录 ( 1.1)软件系统---------------------------------------------------------------------------------------1-135 第一章软件基本操作...................................................................................................................... - 5 - 2.1进入操作软件 (5) 2.4人事管理 (7) 2.4.1 企业信息.................................................................................................................................................................. - 7 - 2.4.2添加/编辑部门信息 ................................................................................................................................................ - 9 - 2.4.2.1添加部门 ............................................................................................................................................................... - 9 - 2.4.2.2修改部门 ............................................................................................................................................................ - 10 - 2.4.2.3 删除部门 ........................................................................................................................................................... - 11 -

感受态细胞的制备步骤和原理

感受态细胞的制备步骤和原理 实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体,我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。制备出感受态的细胞,我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中,使其繁殖,就能获得大量质粒。本次实验的目的就是增加质粒的数量。同时,我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 实验步骤 1挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中,37℃,180rpm培养过夜。 [让菌复苏,进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。] 2取0.4mL过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中,37℃250rpm大约2.5小时。 [减少达到所需亮的均所需繁殖的世代数,以减少菌的变 GAGGAGAGGAFFFFAFAF

异。] 3取培养物置于40mL的灭菌离心管中,冰浴10min,4000rpm 4℃离心10min,弃上清。(将所有上清倒光,可以将离心管倒过来) [使细菌的生长停止,代谢减慢。因为这时已经没有培养基了,如果细菌仍有很高的代谢效率,则有大量细菌死亡。] 4菌体重悬于10mL 100mmol/L冰冷CaCl2中,轻吹,4℃30min,4000rpm离心5min弃上清。 [ 细菌处于0度,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸盐混合物黏附于细胞表面(羟基来源于细胞壁上的糖,磷酸来源于DNA),经短时间420C热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。(一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 5菌体重悬于1mL 100mmol/L冰冷的CaCl2中,轻吹,用于转化。 [除去所有的LB以及细胞破损后释放出来的细胞内含物。防止细胞分裂,以致大量细胞死亡。(一定要轻吹,这时细 胞壁打开,十分脆弱)] GAGGAGAGGAFFFFAFAF

C Primer Plus (第六版)中文版 6.16编程练习

//******************6.15复习题************************** //*********** 6 ************************** #include int main(void) { int i, j; for (i = 0; i < 4; i++) //外层循环控制行内层循环控制列 { for (j = 0; j < 8; j++) { printf("$"); } printf("\n"); } return 0; } //******************6.16 编程练习 ************************** //****************** 一 ************************** #include #define SIZE 26 int main(void) { char array[SIZE]; int index = 0; array[0] = 'a'; printf("%c", array[0]); for (index = 1; index < SIZE; index++) { array[index] = 'a' + index; printf("%c", array[index]); } return 0; } //****************** 二 ************************** #include int main(void)

{ int i, j;//i控制行,j控制列计数作用 for (i = 0; i < 5; i++) { for (j = 0; j < =i ; j++) { printf("$"); } printf("\n"); } return 0; } //****************** 三 ************************** #include int main(void) { int i;//外层循环控制行 int j;//内层循环控制列 char ch = 'F'; for (i = 0; i < 6; i++) { for (j = 0; j <= i; j++) printf("%c", ch-j ); printf("\n"); } return 0; } //****************** 四 ************************** #include int main(void) { int i;//外层循环控制行 int j;//内层循环控制列 char ch = 'A'; for (i = 0; i < 6; i++) { for (j = 0; j <= i; j++) printf("%c", ch++ ); printf("\n");

实验室常用的细菌作用及其选择

第一篇:JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别 1:DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。 基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1 2:BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3) 3:BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr 4:JM109菌株 该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株 基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac -proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15] 5:TOP10菌株 该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。 基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG 6:HB101菌株 该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验

门禁系统使用说明书

-- - XX职业技术学院信息工程学院 门禁管理系统 操作说明书

制作人:X珍海 日期:2014年3月25日 目录 (请打开【帮助H】下的【使用说明书】,这样方便您了解本系统) 第1章软件的基本操作3 1.1 登录和进入操作软件3 1.2 设备参数设置4 1.3 部门和注册卡用户操作4 1.3.1 设置部门4 1.3.2 自动添加注册卡功能(自动发卡)5 1.4 基本操作7 1.4.1 权限管理8 1.4.2 校准系统时间11 1.5 常用工具12 1.5.1 修改登陆用户名和密码12 第2章考勤管理功能模块13 2.1 正常班考勤设置13 2.1.1 设置考勤基本规则13 2.1.2 设置节假日和周休日14 2.1.3 请假出差的设置15 2.2 考勤统计和生成报表17 2.2.1 生成考勤详细报表17 2.2.2 启用远程开门错误!未定义书签。

第1章软件的基本操作 1.1登录和进入操作软件 1.点击【开始】>【程序】>【专业智能门禁管理系统】>【专业智能门禁管理系统】或双击桌面钥匙图标的快捷方式,进入登录界面。 2.输入缺省的用户名:abc 与密码:123(注意:用户名用小写)。该用户名和密码可在软件里更改。 3.登录后显示主操作界面

入门指南。如果您没有经验,您可以在该向导的指引下完成基本的操作和设置。我们建议您熟悉后, 关闭操作入门指南,仔细阅读说明书,熟悉和掌握软件的操作。 “关闭入门指南”后,操作界面如下。 1.2设备参数设置 1.3部门和注册卡用户操作 1.3.1设置部门 点击【设置】>【部门】,进入部门界面。 点击【添加最高级部门】。

感受态细胞的制备步骤和原理

感受态细胞的制备步骤和原理 实验目的为了获得大量的质粒作为克隆载体,我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细 胞内。制备出感受态的细胞,我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中,使其繁殖,就能 获得大量质粒。本次实验的目的就是增加质粒的数量。同时,我们能掌握大肠杆菌感受态细 胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。实验原理及过程实验步骤 1挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中,37C, 180rpm培养过夜。[让菌复苏, 进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。] 2取0.4mL过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中,37C 250rpm大约2.5小时。 [减少达到所需亮的均所需繁殖的世代数,以减少菌的变异。] 3取培养物置于40m L的灭菌离心管中,冰浴10min , 4000rpm 4C离心10min,弃上清。(将所 有上清倒光,可以将离心管倒过来) [使细菌的生长停止,代谢减慢。因为这时已经没有培养基了,如果细菌仍有很高的代谢效率,则有大量细菌死亡。] 4菌体重悬于10mL 100mmol/L 冰冷CaCl2中,轻吹,4 C 30min , 4000rpm离心5min弃上 [细菌处于0度,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,外源DNA形成抗DNA酶的羟基 -钙磷 酸盐混合物黏附于细胞表面(羟基来源于细胞壁上的糖,磷酸来源于DNA ),经短时 间420C热激处理,促进细胞吸收DNA复合物。(一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 5 菌体重悬于1mL 100mmol/L冰冷的CaCl2中,轻吹,用于转化。 [除去所有的LB以及细胞破损后释放出来的细胞内含物。防止细胞分裂,以致大量细胞死亡。 (一定要轻吹,这时细胞壁打开,十分脆弱)] 6取感受态细胞100uL,加入2uLpET-21a质粒,冰浴30 min受体菌:感受态细胞100uL, 加入2 uL 无菌双蒸水阴性对照:0.1mol/LCaCl2溶液100uL,加入2 uL阴性对照 [第一个阴性对照是为了验证LB中的抗生素有活性;第二个阴性对照是为了验证CaCl2溶 液和pET-21a质粒未被污染。][冰浴是为了降低细胞代谢率,防止细胞大量死亡。] 7热激42度,90s 【在低温处理后,热激,可以使细胞壁热胀冷缩,再低温,使细胞壁上黏附的质粒进入细胞体内。】8冰浴2 min 9加入800 uL无抗生素的LB, 37 C复苏1h 【用LB复苏细胞,使细胞恢复活力,从而使细胞中的质粒表达抗抗生素的基因,只有这样才能使 转化成功的细菌在有抗生素的LB平板上生长。】 10取100ul细胞直接在含50ug/mL Carbenicillin(短节西林)的LB培养基上铺平板,将平皿放置 37 oC温箱30min至液体被吸收。倒置平皿37 oC培养过夜,出现菌落。 【这些菌落为转化成功的菌落,而对照组应该没有菌落。在目的菌落的旁边有可能出现卫星菌落,这是因为亩的菌落的抗性基因似的菌落周围的抗生素失效,长出了转化为成功的菌 落。用短节西林因其对酸稳定、不易被细菌降解,所以可以降低卫星菌落的数量。 因为抗生素高温易失活,所以应等到LB600C时(热而不烫),加入抗生素。】

CPrimerPlus第6版中文版勘误表

注意:下面的勘误中,红色字体为修改后的文字,提请各位读者注意。 第 6 页,” 1.6 语言标准”中的第 3 行,将 1987 年修改为 1978 年。 第 22 页,” 2. main ()函数”中的第 1 行, int main (void ) 后面的分号( ; )删除。 第 24 页,“5. 声明”的第 10 行,也就 是一个变量、函数或其他实体的名称。 第 27 页,图 2.3 中,下划线应该只包含括号中的内容;第 2 段的第 4 行,而不是存储 在 源代码 中的指令。 第 30页,“2.5.4 打印多个值”的第 4行,双引 号后面的第 1 个变量。 第 34页,“2.7.3 程序状态”第 2段的第 4 行,要尽量忠实 于代码来模拟。 第 35页,“2.10 本章小结”第 2段的第 1句,声明 语句为变量指定变量名, 并标识该变量中存 储的数据类型;本页倒数第 2 行,即 检查程序每执行一步后所有变量的值。 第37页,“2.12编程练习”中第1题,把你的名和姓打印在一行……把你的 名和姓分别打印在 两行……把你的 名和姓打印在一行……把示例的内容换成你的 名字。 第 40 页,第 1 行,用于把英 磅常衡盎司转换为… … 第44页,“3.4 C 语言基本数据类型”的第 1句,本节将 详细介绍C 语言的基本属性类型…… 第 46页,“5. 八进制和十六进制”的第 4句,十六进制数 3的二进制数 是 0011,十六进制数 5 的二进制数 是 0101;“6. 显示八进制和十六进制”的第 1 句,既可以使用 也可以 显示不同进制 的数;将“回忆一下……程序在执行完毕后不会立即关闭执行窗口”放到一个括号里。 第 47页,“2. 使用多种整数类型的原因”第 3句,过去的一台运行 Windows 3.x 的机器上。 第 53 页,图 3.5 下面的第 4 行“上面最后一个例子( printf ( “ ” a \\ is a backslash. ” \n ” ); )” 第 56页,正文的第 2行和第 4行应该分别为 printf ( “me32 = %““d”“\n ”, me32); printf ( “me32 = %d\n ” , me32); 第 61 页,“无符号类型”的最后 1 句,相当于 unsigned int (即两者之间添加一个空格 )。 第 62 页,程序清单 3.8 中的第 1 行,将 //* typesize.c -- 打印类型大小 */ 中的第一个斜杠删 除。 第 63页,“3.6 参数和陷阱”第 2行, printf ( “ Hello,pal. ” )(即 Hello, 和 pal. 之间没有空 格)。 第 64 页,程序清单 3.10 中的第 1 行,使用 转义序列。 第 75 页,倒数第 8行, 何时使用圆括号 取决于运算对象是类型还是特定量。 第82页,第11行, . 格式字符串包含了两个待打印项 number 和pies 对应的 ..... 第83页,表4.4中的“ L”修饰符的含义介绍中,应该是示例: ” %L ”、“%10.4Le” 第 84 页,表 4.5 中的第 1 行,即,从字段的左侧开始打印该 项(即,应该只保留一个 项);在 “ 0”标记的含义中,添加一行: 示例:"%010d"和"%08.3f"。 第86页,第1段的第2行,……字段宽度是容纳 待打印数字所需的……; 倒数第4段中,根据%x 打印出1f,根据%打印出1F 第87页,“4.4.4转换说明的意义”第 2段,……读者认为原始值 被替换成转换后的值。 第89页,“参数传递”第2行,把变量n1、n2、n3和n4的值传递给程序(即,保留一个顿号)。 第 93页,第 5行的 2121.45 的字体应该与第 4行的 42 的字体保持一致;表 4.6 上面的最后一 行,对于 double 类型要使用 1 修饰符。 第 94 页,表中的第 3 行,把对应的数值存储为 unsigned short int 类型;把“ j ”转换说明的 示例 放到“ z ”转换说明中;在“ j ”转换说明的含义中添加:示例:” %jd”、” %ju”。 第95页,“3.scanf () 的返回值”上面一段的倒数第 3行,如果在格式字符串中把空格放到 %c 的前面 。 第98页,倒数第2段,strlen () 函数(声明在string.h 头文件中)可用于 ... 。 第 100 页,” 4.8 编程练习”中的第 2 题,将该题中的“名和姓”统一替换为“名字” ;并执行 以下 操作;第 3题,将 a 、 b 项中的“输入”替换为” The input is ”,将“或”替换为“ or”, 将末尾1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30.

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