健脾养荣片对环磷酰胺致免疫功能低下
小鼠的保护作用
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
【摘要】【目的】观察健脾养荣片对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。【方法】取NIH小鼠60只随机分为6组，即健脾养荣片低、中、高剂量组（剂量分别为4、8、16g·kg-1·d-1），鲨肝醇组（剂量为0.055g·kg-1·d-1），模型组和正常组，每组各10只，分别按设计剂量灌胃给药，在第5天时用环磷酰胺200mg/kg腹腔注射复制小鼠免疫低下模型，至第9天检测各组小鼠外周血白细胞计数、碳粒廓清实验、骨髓有核细胞计数、脾指数和脾淋巴细胞增殖反应。【结果】健脾养荣片中、高剂量组和鲨肝醇组小鼠白细胞数显著高于模型组（P＜0.01）；健脾养荣片中剂量组白细胞数与鲨肝醇组比较显著升高（P＜0.05）。健脾养荣片中、高剂量组廓清指数K显著升高（P＜0.05），经校正后，其校正廓清指数a值比较，健脾养荣片中剂量组高于模型组（P＜0.01）。健脾养荣片中剂量组骨髓有核细胞数与模型组比较显著升高（P＜0.01），显著高于健脾养荣片低剂量组和鲨肝醇组（P＜0.05）。健脾养荣片中剂量组和鲨肝醇组的脾指数显著升高（P＜0.05）；健脾养荣片中、高剂量组
和鲨肝醇组均能拮抗环磷酰胺对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的抑制作用（P＜0.01）。【结论】健脾养荣片能增强免疫功能低下小鼠的免疫功能，升高小鼠外周血白细胞数。
【关键词】健脾养荣片/药理学白细胞减少/中药疗法白细胞减少/免疫学疾病模型动物小鼠
健脾养荣片是广州中医药大学第一附属医院根据许鑫梅教授多年临床经验方研制而成的治疗脾胃气血亏虚证的中成药，对白细胞减少症有良好的疗效［1］。本研究观察了健脾养荣片对免疫功能低下模型小鼠免疫功能的影响。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物
NIH小鼠，6～8周龄，雌雄各半，体质量18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供，粤检证字第0025458号。
1.2 药品
环磷酰胺注射剂由上海华联制药有限公司生产（批号：2006306），每瓶200g，用蒸馏水溶解，稀释成10mg/mL；鲨肝醇片由广东市桥制药厂（番禺）生产（批号：051209），用蒸馏水溶解，稀释成2.75mg/mL；健脾养荣片水煎剂由广州中医药大学第一附属医院购得饮片，用蒸馏水水煎浓缩，配制成浓度0.20、0.40、0.80g/mL；中华墨汁由北京一得阁制，使用时先高速离心去其下层液，再低速离
心去其上清液，将中层液用生理盐水配成浓度为250g/L的墨汁；RPMI1640培养基为Gibco公司产品；脂多糖（LPS）、T细胞丝裂源刀豆蛋白A（ConA）、二甲基噻唑二苯基四唑溴盐（MTT）均为美国Sigma 公司产品。
1.3 仪器
722分光光度计由上海仪器分析二厂生产；CX21奥林巴斯光学显微镜由日本奥林巴斯公司生产。
1.4 造模［2］、分组给药
NIH小鼠60只，在动物房适应饲养3d后，将小鼠随机分为6组：正常组，模型组，健脾养荣片低、中、高剂量组（剂量分别为4、8、16g·kg-1·d-1），鲨肝醇组（剂量为0.055g·kg-1·d-1），每组各10只。正常组按常规方法喂养，其他组小鼠均灌胃给予相应药液4d，于第5天腹腔注射0.2g/kg环磷酰胺1次，然后继续灌胃给药4d。
1.5 小鼠血白细胞计数
各组于实验第1天（给药前）、第5天、末次给药（第9天）后1h分别于眼眶静脉丛取血测定白细胞。每次取血20μL，吹入盛有0.38mL白细胞稀释液的试管中，摇匀，将盖玻片放在白细胞计数板正中，充液，静置2～3min，计数白细胞，数4角大方格的白细胞
总数，×50即为白细胞数/mm3，再×106即转换成标准单位×109·L-1。
1.6 小鼠碳粒廓清试验［3］157
于末次给药后1h尾静脉注入250g/L中华墨汁10mL/kg，于注射后1、5min用吸管分别从眼球后静脉丛取血20μL，溶于1g/LNa2CO32mL溶液中摇匀，置分光光度计在波长675nm下比色，测定光密度（D）。将小鼠颈椎脱臼处死，称取体质量，取出小鼠肝脏、脾脏，分别称肝脾质量。按下列公式计算廓清指数K或校正廓清指数a：K=（LogD1-LogD2）/（t2-t1）;a=3K×mbody/（m肝+m脾）
其中，D1、D2为不同时间所取血的光密度；t2-t1为取2份血样的时间差。
1.7 小鼠骨髓有核细胞计数［5］253
于末次给药后1h，颈椎脱臼处死小鼠，剥离股骨，取右肢股骨，用体积分数3%的醋酸10mL冲出骨髓内细胞，在血细胞计数板上计数4个大方格的细胞数，所得数×2.5×104，即为一根股骨中的骨髓有核细胞数。
1.8 小鼠脾指数实验、脾淋巴细胞增殖反应
小鼠活杀后，分别取出各组小鼠的脾脏，用扭力天平称质量，
所得值×100/体质量为脾指数（I脾）。取出脾脏后，无菌制成脾细胞悬液，并配制成5×106/mL，加入96孔细胞培养板，每孔100μL，再分别加入完全RPMI1640+ConA（5μg/mL）溶液或LPS（20μg/mL）溶液各100μL，置孵箱中培养72h，终止培养前4h掺入MMT，20μL/孔，培养终止时，先轻轻吸出上清，每孔再加入100μL细胞裂解液，过夜培养以充分溶解MMT，最后于酶标仪570nm处测D值。
1.9 统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。
2 结果
2.1 各组小鼠白细胞计数
表1结果显示，第1天和第5天时各组小鼠外周血白细胞数比较无显著性差异（P＞0.05）。第9天经环磷酰胺处理后，模型组白细胞计数显著低于正常组（P＜0.01）；健脾养荣片中、高剂量组和鲨肝醇组小鼠白细胞数与模型组比较显著升高（P＜0.01），而健脾养荣片低剂量组则无显著性差异（P＞0.05）；健脾养荣片中、高剂量组和鲨肝醇组白细胞计数与健脾养荣片低剂量组比较显著升高（P＜0.01）；健脾养荣片中剂量组白细胞计数显著高于鲨肝醇组（P＜0.05）。
2.2 各组小鼠骨髓有核细胞计数、脾指数比较
表2结果显示，模型组与正常组比较，骨髓有核细胞计数、脾指数均显著降低（P＜0.01）；健脾养荣片中剂量组与模型组比较，
骨髓有核细胞计数显著升高（P＜0.01），且高于健脾养荣片低剂量组与鲨肝醇组（P＜0.05），但健脾养荣片高剂组与模型组比较无显著性差异（P＞0.05）。健脾养荣片中剂量组和鲨肝醇组脾指数均高于模型组（P＜0.05），健脾养荣片低、高剂量组与模型组比较无显著性差异（P＞0.05）；健脾养荣片中、高剂量组和鲨肝醇组脾指数均高于健脾养荣片低剂量组（P＜0.05）。
表1 各组小鼠外周血白细胞计数比较（略）
Table 1 Comparison of peripheral WBC count in mice of different groups
统计方法：方差分析；①P＜0.01，与正常组比较；②P＜0.01，与模型组比较；③P＜0.05，与鲨肝醇组比较；④P＜0.01，与健脾养荣片低剂量组比较
表2 各组小鼠脾指数、骨髓有核细胞计数比较（略）
Table 2 Comparison of spleen index and bone marrow nucleated cell count in different groups
统计方法：方差分析；①P＜0.01，与正常组比较；②P＜0.05，③P＜0.01，与模型组比较；④P＜0.05，与鲨肝醇组比较；⑤P＜0.05，与健脾养荣片低剂量组比较
2.3 各组小鼠淋巴细胞增殖反应
表3结果表明，环磷酰胺可抑制小鼠脾淋巴细胞对ConA和LPS增殖的反应，而鲨肝醇组和健脾养荣片中、高剂量均能显著拮抗
环磷酰胺的抑制作用（P＜0.01），但3组间比较差异无显著性意义（P ＞0.05）。
表3 各组对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响（略）
Table 3 Comparison of proliferative reaction of spleen lymphocytes in different groups
统计方法：方差分析；①P＜0.01，与正常组比较；②P＜0.01，与模型组比较；③P＜0.05，与健脾养荣片低剂量组比较
2.4 小鼠碳粒廓清试验
表4结果表明，健脾养荣片中、高剂量组和鲨肝醇组与模型组及健脾养荣片低剂量组比较，碳粒廓清指数K显著升高（均P＜0.05），碳粒廓清指数经校正为校正指数a值后，健脾养荣片中剂量组a值显著高于模型组（P＜0.01）。
表4 小鼠碳廓清指数K和校正廓清指数a值比较（略）
Table 4 Comparison of carbon clearance index K and corrected carbon clearance value
统计方法：方差分析；①P＜0.05，与正常组比较；②P＜0.05，
③P＜0.01，与模型组比较；④P＜0.05，与健脾养荣片低剂量组比较
3 讨论
肿瘤的放、化疗治疗对造血系统及免疫系统有严重的抑制不良反应，甚至可以出现因不能耐受放、化疗毒副作用而不得不终止治
疗情况，有时这些毒副作用直接成为危及患者生命的主要原因［4］。近年来，运用中药配合放、化疗综合治疗肿瘤在临床上已取得明显的效果［5］，而具有增强机体免疫功能和造血功能的中药种类非常丰富，依据中医药理论组成的复方对临床常见的白细胞减少和免疫功能低下有确切的疗效［6］。中医认为，白细胞减少和免疫功能低下多属”虚劳”之气血虚范畴。为气血虚弱，不能濡养全身所致的一组证候。脾为气血生化之源，脾虚则气血生化不足，脾旺则气血充盈，故健脾可以生气血，所以说脾为后天之本。健脾养荣片即是以健脾益气方药为主组成的，主要由人参、白术、绞股蓝等组成，共奏健脾养胃、益气生血之功。有研究表明［7］，运用健脾养荣片治疗气血两虚之白细胞减少症，效果与鲨肝醇片相似。
环磷酰胺属于细胞周期非特异性化疗药物，对增殖周期中各期血细胞均有杀灭作用，但对GO期细胞的作用较弱［8］。注入小鼠腹腔后在其有杀灭细胞活力的4h内很快将骨髓中处于增殖池的各种血细胞杀灭或部分杀灭（取决于环磷酰胺的剂量），而对于处于GO期的血细胞或非增殖池（或称成熟储备池）血细胞作用较弱。小鼠注入环磷酰胺后4～96h外周血白细胞总数依靠骨髓非增殖池白细胞血液释放得以维持，由于增殖池向成熟池补充能力下降，外周血白细胞象无源之水越来越少，经4d降低至最低，到第5天时，小鼠的免疫状态就开始有所恢复［9］，故本实验选择在第5天时造模，再用药4d 的给药方案，观察在免疫功能最低时小鼠的免疫能力和白细胞等情
器官相对质量的变化在免疫评价中占有重要地位，如研究结果与其他免疫指标所得结果（如外周血白细胞计数）相平行，则该结果更为可靠，常供药物初筛实验时用［3］722。从本实验结果来看，健脾养荣片中、高剂量组均能预防白细胞减少，加强白细胞中吞噬细胞功能，能刺激骨髓造血，促进骨髓有核细胞的增生，增强造血功能，增强小鼠脾脏指数和脾淋巴细胞的增殖反应，从而提高免疫功能低下小鼠的免疫功能。其确切机制有待进一步研究。
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注射用环磷酰胺说明书安道生
注射用环磷酰胺说明书 【药品名称】 通用名称：注射用环磷酰胺 商品名称：安道生Endoxan? 英文名称Cyclophosphamide for Injection 汉语拼音Zhusheyong huanlinxian’an 【成份】 本品主要成份为环磷酰胺。 安道生?200mg Endoxan? 200mg 每瓶安道生200mg注射剂含有单水化(环)环磷酰胺213.8mg(相当于无水环磷酰胺200mg)。 化学名称：2-[2-(氯乙基)-氨基]-四氢-2H-1，3，2-嘿氮杂磷酸酯-2-氧化物 2-Ibis-(chloroethyl)-amino]一tetrahyd ro-2H-1，3，2-oxazaphorine-2-oxide 化学结构式
分子式:C7H15CI2N2O2P 分子量:261.08 CAS No.：50-18-0 辅料:无。 【性状】白色结晶或结晶性粉末。 【适应症】 环磷酰胺以联合化疗和单剂治疗可用于下列疾病 自血病： 急性或慢性淋巴细胞性和髓性白血病 恶性淋巴瘤 何杰金氏病、非何杰金氏病、浆细胞瘤 转移性和非转移性的恶性实体瘤; 卵巢癌，睾丸癌、乳腺癌、小细胞肺癌、成神经细胞瘤、Ewings肉瘤 进行性自身免疫性疾病： 关节病、系统性红斑狼疮、硬皮病、全身性脉管炎(例如伴有肾病综合征 类风湿性关节炎、psoriatic关节病、系统性红斑狼疮、硬皮病、全身性脉管（例如伴有肾病综合征）某些类型的肾小球肾炎(例如伴肾病综合征)、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素病。 器官移植时的免疫抑制治疗 【规格】0.2g／支 【用法用量】
激素使用的七大副作用汇总 一：肾上腺皮质功能的损害 临床上造成肾上腺皮质功能损害的原因有两个： ?长期大量用药和使用不恰当的种类和剂型， ?不适当的停药方式。 造成的结果有两种： ?药源性肾上腺皮质功能亢进 表现为向心性肥胖，满月脸、痤疮、多毛、乏力、低血钾、水肿、高血压、糖尿病等。一般停药后可以自行消失。 ?医源性肾上腺皮质功能不全 大剂量长期使用外源性糖皮质激素，抑制了ACTH的分泌，从而使内源性糖皮质激素分泌减少。 连续使用泼尼松（20~30mg/d）2周以上，可以导致下丘脑-垂体-肾上腺轴反应迟钝，如果突然停药，则可能出现恶心、呕吐、低血糖、低血钠、低血氯、高血钾、心律不齐、低血压等撤药反应。 预防的方法是合理地逐渐撤药或给予一定量的ACTH。 二：骨质疏松和自发性骨折 骨质疏松是激素治疗，尤其是长疗程激素治疗的主要副作用之一。但该副作用却常常被临床医生忽视，不少病人发生了骨折才被重视，但已为时过晚。 准备接受糖皮质激素治疗（相当于强的松大于5mg/d）超过3个月者应遵循以下规则 ?改变生活方式，减少危险因素：戒烟、减少饮酒、适当运动 ?使用活性维生素D并补充钙剂 ?使用双磷酸盐（绝经后妇女慎用） ?使用性激素替代治疗（如果缺乏或有临床表现） ?检测腰椎和/或臀部骨密度（BMD） ?如果BMD不正常（T-评分小于-1）使用双磷酸盐（绝经后妇女慎用）?如果患者禁忌使用或无法耐受双磷酸盐治疗，降钙素可作为二线治疗?如果BMD正常，每年或半年重复随访BMD 三：对儿童生长发育和生殖功能的影响 ?传统治疗Still病的方案是首选糖皮质激素。在激素减量的过程中，常常出现病情复发，大部分需要长期使用较大剂量的激素治疗。 ?但是长期使用较大剂量的激素治疗，导致激素明显的副作用，尤其是生长发育障碍。 ?尼美舒利和甲氨蝶呤联合治疗成人Still病，可获得到比传统大剂量激素更好的疗效和更少的副作用。 ?经检索PubMed数据库，国际上至今未见有取代激素治疗成人Still病的治疗方案。
注射用环磷酰胺说明书 【药品名称】 通用名称：注射用环磷酰胺 商品名称：安道生Endoxan? 英文名称Cyclophosphamide for Injection 汉语拼音Zhusheyong huanlinxian'an 【成份】 本品主要成份为环磷酰胺。 安道生?200mg Endoxan? 200mg 每瓶安道生200mg注射剂含有单水化(环)环磷酰胺213.8mg(相当于无水环磷酰胺200mg)。 化学名称：2-[2-(氯乙基)-氨基]-四氢-2H-1，3，2-嘿氮杂磷酸酯-2-氧化物 2-Ibis-(chloroethyl)-amino]一tetrahyd ro-2H-1，3， 2-oxazaphorine-2-oxide 化学结构式 分子式:C7H15CI2N2O2P 分子量:261.08 CAS No.：50-18-0 辅料:无。 【性状】白色结晶或结晶性粉末。
【适应症】 环磷酰胺以联合化疗和单剂治疗可用于下列疾病 1 / 10 自血病： 急性或慢性淋巴细胞性和髓性白血病 恶性淋巴瘤 何杰金氏病、非何杰金氏病、浆细胞瘤 转移性和非转移性的恶性实体瘤; 卵巢癌，睾丸癌、乳腺癌、小细胞肺癌、成神经细胞瘤、Ewings肉瘤进行性自身免疫性疾病： 关节病、系统性红斑狼疮、硬皮病、全身性脉管炎(例如伴有肾病综 合征 类风湿性关节炎、psoriatic关节病、系统性红斑狼疮、硬皮病、全身性脉管（例如伴有肾病综合征）某些类型的肾小球肾炎(例如伴肾病 综合征)、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素病。 器官移植时的免疫抑制治疗 【规格】／支 【用法用量】 环磷酰胺使用需要有经验的肿瘤专家指导，剂量根据个体不同有差异，除非有特别的处方，一般建议如下剂量使用： 环磷酰胺200mg／瓶
目录 英文缩略词对照表 (1) 英文摘要 (3) 中文摘要 (10) 论文正文青蒿琥酯对CLP免疫抑制模型小鼠的保护作用及其作用机制的研究 (16) 第一章前言 (16) 第二章小鼠CLP脓毒症免疫抑制模型的建立与评价 (19) 2.1 材料与方法 (19) 2.2 实验结果 (24) 2.3 小结 (37) 第三章青蒿琥酯对CLP脓毒症免疫抑制小鼠的治疗作用 (38) 3.1 材料与方法 (38) 3.2 实验结果 (42) 3.3 小结 (54) 第四章青蒿琥酯对CLP脓毒症免疫抑制模型小鼠治疗作用的机制研究 (55) 4.1 材料与方法 (55) 4.2 实验结果 (62) 4.3 小结 (78) 全文总结 (79) 参考文献 (90) 文献综述脓毒症免疫抑制发生机制及治疗药物的研究进展 (95) 参考文献 (101) 研究生期间相关成果 (106) 致谢 (107) 万方数据
第三军医大学硕士学位论文 1 英文缩略词对照表 英文缩写 英文全称 中文全称 APCs AP antigen presenting cells ammonium persulfate 抗原呈递细胞 硫酸铵 AS artesunate 青蒿琥酯 ATCC American type culture collection 美国典型菌种保藏中心 ATP BASO Adenosine Triphosphate basophile granulocyte 三磷酸腺苷 嗜碱性粒细胞 CARS compensatory anti-Inflammatory response syndrome 代偿性抗炎反应综合征 CASP colon ascendens stent peritonitis 升结肠支架腹膜炎 CD leukocyte differentiation antigen 白细胞分化抗原 CFU colony forming unit 菌落形成单位 CLP cecal ligation and puncture 盲肠结扎穿孔术 DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 DSM DW dried skim milk distilled water 脱脂奶粉 蒸馏水 ECL EOS enhanced chemilumine scence eosinophile granulocyte 增强化学发光液 嗜酸性粒细胞 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 GM-CSF granulocyte-macrophage colony-stimulating factor 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 HLA-DR human leukocyte antigen DR 人类白细胞 DR 抗原 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 ICU intensive care units 重症监护室 IFN interferon 干扰素 IL interleukin 白细胞介素 IRAK Interleukin-1 receptor-associated kinase 白细胞介素1受体相关激酶 LPS LYMPH lipopolysaccharide lymphocyte 脂多糖 淋巴细胞 万方数据
常用化疗药物主要副作用 各种化疗药物均对生长活跃的组织有毒性作用，都有不同程度的骨髓抑制及消化道反应，下表仅指其需要特别注意的副作用 1、丝裂霉素MMC；?骨髓抑制：4－6周最明显 2、博莱霉素BLM；?毒副作用：肺毒性：肺炎样症状、肺纤维化， 皮肤反应：指趾关节皮肤肥厚，色素沉着。 发热：38度左右，可自行消退。 3、新一代铂类，包括：奥沙利铂、络铂、奈达铂 高发生率不良反应有：周围神经毒性、骨髓抑制、腹泻 经对症处理、减量、停药，基本可控制
4、长春瑞宾NVB：从外周静脉给药时，刺激大，静脉炎发生率高，切勿外渗。 周围神经毒性：腱反射消失、指、趾麻木、四肢疼痛、肌肉震颤。 骨髓抑制：主要为中性粒细胞减少，但无剂量累积毒性。 5、依立替康： 1）急性反应： 乙酰胆碱综合征，表现为多汗、多泪、唾液分泌增多、视物模糊、痉挛性腹痛、“早期”腹泻； 在用药24小时内出现，多可自行缓解，严重者给阿托品治疗； 恶心呕吐常见。 2）亚急性反应： 延迟性腹泻，剂量限制毒性，用药24小时后出现，水样便，可带血，发生率80%~90%，严重者占39%； 大剂量易蒙停有效； 骨髓抑制明显，亦为剂量限制毒性。 6、托泊替康：骨髓抑制明显；4度血小板降低发生率达26%，中位持续时间为5天，血小板降低至最低中位发生时间为15天。 7、草酸铂L－OHP： 外周神经毒性：感觉迟钝、异常，遇冷加重，偶见可逆性急性咽喉感觉异常。 与依立替康合用可发生胆碱能综合征（腹痛、唾液分泌过多等）危险，阿托品可以预防。 护理措施：------四禁 ?禁止用N.S稀释 ?禁止用冰水漱口和冷食 ?禁止与碱性药物或溶液配伍输注 ?制备药液及输注时避免接触铝制品、避开离子 8、掌握化疗药物的正确溶酶，保证药物有效性 用N.S稀释的药物：氮芥、CTX、VDS、BLM、喜树碱、VP－16、DDP 用G.S稀释的药物：MTX、CBP、草酸铂、秋水酰碱、THP、光辉霉素、抗癌锑等。 需要避光的常用药物：DTIC MMC 放线菌素D、光辉霉素、秋水仙碱、喜树碱、长春碱类 需冷藏的常用药物：在2－8度以下冰箱内保存：CCNU、ME－CCNU、长春花碱（VLB）、VDS、NVB、紫杉醇、泰索帝、DTIC 低温保存：去甲氧柔红霉素、门冬酰胺酶
1材料与方法 1. 1. 2 主要试剂环磷酰胺、RPMI 1640 培养 液( 含L-谷氨酰胺，)、Hanks 液( HyClone)、MTT 试剂、 PBS 缓冲溶液( pH 值7. 2 ～ 7. 4，HyClone)、丝裂霉素C、SA 缓冲液，绵羊红细胞，补体( 豚鼠血清)、都氏试剂、LDH 基质液、 P815 细胞( 购于协和医科大学基础医学细胞中心)、YAC-1 细 胞、FITC-Anti-CD3、PE-Anti-CD4、PerCP-Anti-CD8 荧光抗体)。 1. 2 动物与分组 Balb /C 小鼠90 只，雌性，6 ～ 8 周龄，体重18 ～ 22g。颗粒饲料，室温(22 ± 2)℃，湿度60% ～ 80% 。 动物在实验室条件下检疫1 周后，实验分为3 项处理进 行，(1) 处理一:测定动物体重、脾脏重量及系数;(2) 处理二: 测定NK 细胞活性，细胞毒性T 细胞活性;(3) 处理三:测定血 清半数溶血值。每项处理随机分为空白对照组、CTX-1 组和 CTX-2 组。 1. 3 实验方法和测定指标 1. 3. 1 剂量选择试验前经急性经口毒性试验确定CTX 的LD50为240mg / kg，以1 /4 LD50做为本试验中CTX-1 组的 CTX 剂量，即60 mg / kg 环磷酰胺，用蒸馏水配制，每日经口给予。CTX-2 组每日经口给予蒸馏水，试验结束前一天经腹腔 注射给予动物200 mg / kg 环磷酰胺［2，3］( 用蒸馏水配制)。另设空白对照组，蒸馏水代替受试物，每日经口给予。动物灌胃 容积为0. 3ml /10g，每周称量体重调整灌胃量，连续灌胃4 周 后测定各项免疫指标。 1. 3. 2 血液中T、B 淋巴细胞分类计数［4］动物处死前眼 眶内眦静脉取血，EDTA-K2抗凝，每只设定3 支流式试管进行 测定，每管加入50μl 抗凝血。分别在3 管中加入CD3 /CD19 ，CD3 /CD4 /CD8.不同荧光素标记的单克隆小鼠抗体。每管加 入2ml FACS 红细胞裂解液，室温下避光保存20min。1200r / min 离心5min，弃去上清液。每管再加入2ml PBS，1200r /min 离心5min，弃去上清液。加入0. 5ml PBS 混匀后上流式细胞仪进行检测。 1. 3. 3 细胞毒性T 淋巴细胞活性试验［5，6］ 1. 3. 3. 1 脾细胞悬液的制备( 效应细胞) 无菌取脾，用4 层 纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液。用Hank＇s 液洗2 次，每次离 心10min(1000r /min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0. 5ml 灭 菌水20s，裂解红细胞后再加入5ml Hank’s 液，混匀后1000r / min，10min 离心，用1ml 含10% 小牛血清的RPMI1640 完全培 养液重悬，调整细胞浓度为2 × 107 个/ml;加0. 5ml 此细胞悬 液于24 孔培养板，留一孔不加脾细胞作为对照孔。 1. 3. 3. 2 制备刺激细胞1000r /min，10min 离心处于对数生 长期的P815 细胞，用5ml DMEM 培养液悬浮P815 细胞于 15ml 离心管中，计数细胞。加入丝裂霉素C，相当于50μg / (2 ～ 5) × 107 个细胞。用锡纸包裹离心管以避光，在37℃水浴 30min。用Hank’s 液洗P815 细胞3 次，之后Hank’s 液悬浮
药理： 药效学 在体外无抗肿瘤活性，进入体内后先在肝脏中经微粒体功能氧化酶转化成醛磷酰胺，而醛酰胺不稳定，在肿瘤细胞内分解成酰胺氮芥及丙烯醛，酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。环磷酰胺是双功能烷化剂及细胞周期非特异性药物，可干扰DNA及RNA功能，尤以对前者的影响更大，它与DNA发生交叉联结，抑制DNA合成，对S期作用最明显。 药动学 口服后吸收完全，迅速分布到全身，少量可通过血脑屏障。环磷酰胺本身不与白蛋白结合，其代谢物约50％与蛋白结合。静注后血浆Ｔ1/2为4～6.5小时，50～70％在48小 时内通过肾脏排泄。 适应症： 适用于恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、淋巴细胞白血病、实体瘤如神经母细胞瘤、卵巢癌、 乳癌、各种肉瘤及肺癌等。 用法用量： 1.成人常用量口服每日按体重2~3mg/kg.静脉注射每次4mg/kg，每日或隔日一次。 或每次600~1200mg，每7~10日一次。 2.小儿常用量口服每日按体重2~6mg/kg，静脉注射每次2—6mg/kg，每日或隔日 一次。或每次10~15mg/kg，每周一次，以氯化钠注射液20ml稀释后缓慢注射。 [制剂与规格]环磷酰胺片50mg 注射用环磷酰胺（1）100mg（2）200mg （1）抗肿瘤：口服，一次50mg，一日3次；静注，一次每平方米400-600mg，每周一次，总量8g左右为一疗程。也可肌注，剂量同静注。动脉内注射，每次100-500mg，鞘内注射，每次50-100mg。（2）免疫抑制：一日50-150mg，两次粉服，连服4-6周。 静注，每次100-200mg，每日或隔日1次，连用4-6周。 禁用慎用： （1）孕妇用药须慎重考虑，特别在妊娠初期的三个月，由于环磷酰胺有致突变或致畸胎作用，可造成胎儿死亡或先天性畸形。本品可在乳汁中排出，在开始用环磷酰胺治疗时必 须中止哺乳。 （2）下列情况应慎用：骨髓抑制：有痛风病史、肝功能损害、感染、肾功能损害、肿瘤细胞浸润骨髓、有泌尿系结石史、以前曾接受过化疗或放射治疗。医学教育网搜集整理 肝病患者慎用。
激素使用的7大副作用汇总 一：肾上腺皮质功能的损害 临床上造成肾上腺皮质功能损害的原因有两个： 长期大量用药和使用不恰当的种类和剂型， 不适当的停药方式。 造成的结果有两种： 药源性肾上腺皮质功能亢进 表现为向心性肥胖，满月脸、痤疮、多毛、乏力、低血钾、水肿、高血压、糖尿病等。一般停药后可以自行消失。 医源性肾上腺皮质功能不全 大剂量长期使用外源性糖皮质激素，抑制了ACTH的分泌，从而使内源性糖皮质激素分泌减少。 连续使用泼尼松（20~30mg/d）2周以上，可以导致下丘脑-垂体-肾上腺轴反应迟钝，如果突然停药，则可能出现恶心、呕吐、低血糖、低血钠、低血氯、高血钾、心律不齐、低血压等撤药反应。
预防的方法是合理地逐渐撤药或给予一定量的ACTH。 二：骨质疏松和自发性骨折 骨质疏松是激素治疗，尤其是长疗程激素治疗的主要副作用之一。但该副作用却常常被临床医生忽视，不少病人发生了骨折才被重视，但已为时过晚。 准备接受糖皮质激素治疗（相当于强的松大于5mg/d）超过3个月者应遵循以下规则 改变生活方式，减少危险因素：戒烟、减少饮酒、适当运动 使用活性维生素D并补充钙剂 使用双磷酸盐（绝经后妇女慎用） 使用性激素替代治疗（如果缺乏或有临床表现） 检测腰椎和/或臀部骨密度（BMD） 如果BMD不正常（T-评分小于-1）使用双磷酸盐（绝经后妇女慎用）如果患者禁忌使用或无法耐受双磷酸盐治疗，降钙素可作为二线治疗如果BMD正常，每年或半年重复随访BMD 三：对儿童生长发育和生殖功能的影响 传统治疗Still病的方案是首选糖皮质激素。在激素减量的过程中，常
常出现病情复发，大部分需要长期使用较大剂量的激素治疗。 但是长期使用较大剂量的激素治疗，导致激素明显的副作用，尤其是生长发育障碍。 尼美舒利和甲氨蝶呤联合治疗成人Still病，可获得到比传统大剂量激素更好的疗效和更少的副作用。 经检索PubMed数据库，国际上至今未见有取代激素治疗成人Still 病的治疗方案。 尼美舒利与MTX联合治疗成人Still病用药方法： 口服尼美舒利100mg，每12小时1次，对于体温超过39℃的高热者，为防止体温聚降过低，尼美舒利首剂为50mg。 生理盐水40ml + MTX 10mg，静脉注射，每周1次，4次后改为口服MTX 10mg，每周1次。 尼美舒利和MTX联合治疗2周，体温仍不下降者，加口服泼尼松，每日10mg。 联合治疗持续至症状好转（包括体温正常、多汗现象消失、关节疼痛消失）2周后先停用尼美舒利。 血沉、C反应蛋白、血白血胞、血清铁蛋白均恢复正常后8周，且症状和实验室指标均无反复，则MTX剂量减半，4周后仍病情稳定，症状和实验室指标无反复则停用MTX。 儿童SLE
拮抗化疗药物体外免疫抑制模型的建立及活性成分筛选 以小鼠脾淋巴细胞为试验材料 , 将有丝分裂原刀豆蛋白 A(ConA)或细菌脂多糖(LPS)与化疗药物5氟尿嘧啶(5 Fu)联合使用建立了体外免疫抑制模型，并比较了多糖样品对5 Fu抑制淋巴细胞增殖的拮抗作用。结果表明 , 在供试样品中 ,F1 1[ 龙须菜 (Gracilaria lemaneiformis) 中分离多糖]和BW沪农灵芝1号(Ganoderma lucidum) 子实体中分离 ] 对 5 Fu 产生的轻度抑制有完全拮抗作用,19号[沪农灵芝1号(G. lucidum)子实体中分离] 样品刺 激淋巴细胞增殖活性最好 , 但对 5 Fu 产生的抑制基本无拮抗作用 , 表明样品刺激淋巴细胞增殖的活性与拮抗化疗药物抑制淋巴细胞增殖的活性无正相关性。 免疫抑制 ; 化疗药物 ; 多糖 肿瘤是危害人类健康的严重疾病 , 对其发生机制及治疗手段的 研究一直是医学领域的热点 [1] 。目前化疗仍是临床上治疗肿瘤的三大有效手段之一 , 化疗在杀灭患者体内的癌细胞方面有很好的效果 , 但均有不同程度的毒副作用 , 如化疗后往往会出现白细胞减少 , 特别是中性粒细胞减少 , 血小板减少等情况 [2], 严重的会造成人体免疫功能降低甚至是免疫功能缺陷 [3], 限制了化疗药物的使用 , 影响到癌症的治疗效果。因此 , 寻找能减轻化疗药物免疫抑制副作用的活性成分 , 对提高化疗药物的治疗效果和扩
大其适用范围有重要的意义。 研究表明 ,多糖具有免疫调节和抗肿瘤活性 , 其抗肿瘤活性主 要是通过调节机体的免疫功能而间接实现的 [4], 实验表明多糖在减轻化疗药物免疫抑制副作用方面效果明显 [5] 。如今多糖药物作为免疫调节剂已经成为辅助化疗、放疗和手术治疗肿瘤的重要组成部分。但多糖种类繁多、结构复杂 , 为了更好地对其进行开发利用 , 需要建立有效的活性筛选模型。常用的筛选减轻化疗药物免疫抑制副作用的模型多为动物体内模型 [6,7], 结果可信度高 , 但由于其耗时长、费用高、所需的样品量大等缺点 ,不适用于大量样品的初筛及样品分离过程中各组分活性的跟踪检测。若利用高效的体外细胞筛选模型进行初步筛选 , 获得相关的线索后再进行体内试验验证 , 将能大大提高活性成分的筛选效率。雷林生等 [8] 利用不同品系小鼠淋巴细胞相互作用后会引起淋巴细胞增殖这一特性 , 在细胞水平上考察了灵芝多糖拮抗抗肿瘤药物免疫抑制作用的效果 ,但该模型应用少、操作较复杂 ,因此需要建立方便、有效的筛选体系。 5 氟尿嘧啶 (5 Fu) 为临床上常用的化疗药物 , 主要副作用为 骨髓抑制 , 对在体内处于增殖状态的免疫细胞损伤较大。为了筛选拮抗化疗药物免疫抑制作用的样品 , 本研究取用小鼠的脾淋巴细胞,通过外加有丝分裂原刺激其增殖 , 模拟体内免疫细胞快速增殖的状态 ,再与 5 Fu 合用,建立免疫抑制模型。常用的有丝分裂原刀豆蛋白 A(ConA)和细菌脂多糖(LPS)分别刺激T淋巴细胞和 B 淋巴细胞增殖 , 为考察样品对不同淋巴细胞亚群的影响 , 本试验选用ConA和LPS两
2015年3月份护理业务培训 时间：2015年3月19日 地点：护理站 主讲人： 参加人员： 学习内容: 环磷酰胺的使用注意事项 一、药品名称 通用名称：环磷酰胺 英文名称：Cyclophosphamide 二、成份 本品主要成份为环磷酰胺。其化学名称为：P-［N，N-双(β-氯乙基)］-1-氧-3-氮-2-磷杂环己烷-P-氧化物一水合物。 三、适应症 环磷酰胺是广泛应用的抗癌药物之一，治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、尤文瘤、软组织肉瘤以及急性白... 四、用法用量 1、成人常用量：单药静脉注射按体表面积每次500～1000mg/m2，加生理盐水20～30ml,静脉注射，每周1次，连用2次，休息1～2周重复。联合用药500～600mg/m2。 2、儿童常用量：静脉注射每次10～15mg/kg，加生理盐水20ml稀释后缓慢注射，每周1次，连用2次，休息1～2周重复。也可肌内注射。 五、禁忌 1.抗癌药物，必须在有经验的专科医生指导下用药。 2.凡有骨髓抑制、感染、肝肾功能损害者禁用或慎用。 3.对本品过敏者禁用。 4.妊娠及哺乳期妇女禁用。 六、不良反应 1.骨髓抑制是环磷酰胺的剂量限制性毒性，可引起白细胞下降，但较易恢复，血小板下降常不明显。 2.出血性膀胱炎本品的代谢产物特别在大剂量注射时，可引起膀胱刺激症状如尿频、尿急、尿痛、镜下血尿或肉眼血尿、尿少、蛋白尿等。
3.肝功能损害可有肝功能损害，一般较轻，停药可恢复。 4.胃肠反应食欲减退、恶心或呕吐多不严重，停药后2-3天可消失。 5.其他脱发、免疫抑制，偶有大剂量环磷酰胺引起水中毒，呋塞米可预防和治疗水中毒。骨髓移植预处理应用大剂量环磷酰胺可出现心脏毒性反应。 七、注意事项 1.应用本药应鼓励病人多饮水，必要时输液，保证足够的输入量和尿量，大剂量环磷酰胺宜同时给予美司钠，以预防和减少尿路并发症。 2.用药期间应监测血象、尿常规、肝肾功能。 3.肝病患者慎用。 4.本药配成溶液后不稳定，应于2-3小时内输入体内。 八、药代动力学 静注后血浆半衰期4～6小时，48小时内经肾脏排出50%～70%，其中68%为代谢产物，32%为原形。 护士长签字： 2015年3月19日
激素使用的7大副作用汇总 临床上造成肾上腺皮质功能损害的原因有两个： 1.长期大量用药和使用不恰当的种类和剂型； 2.不适当的停药方式。 造成的结果有两种： 1.药源性肾上腺皮质功能亢进 表现为向心性肥胖，满月脸、痤疮、多毛、乏力、低血钾、水肿、高血压、糖尿病等。一般停药后可以自行消失。 2.医源性肾上腺皮质功能不全 大剂量长期使用外源性糖皮质激素，抑制了ACTH的分泌，从而使内源性糖皮质激素分泌减少。 连续使用泼尼松（20~30mg/d）2周以上，可以导致下丘脑-垂体-肾上腺轴反应迟钝，如果突然停药，则可能出现恶心、呕吐、低血糖、低血钠、低血氯、高血钾、心律不齐、低血压等撤药反应。 预防的方法是合理地逐渐撤药或给予一定量的ACTH。 二：骨质疏松和自发性骨折 骨质疏松是激素治疗，尤其是长疗程激素治疗的主要副作用之一。但该副作用却常常被临床医生忽视，不少病人发生了骨折才被重视，但已为时过晚。 准备接受糖皮质激素治疗（相当于强的松大于5mg/d）超过3个月者应遵循以下规则：
改变生活方式，减少危险因素：戒烟、减少饮酒、适当运动 使用活性维生素D并补充钙剂 使用双磷酸盐（绝经后妇女慎用） 使用性激素替代治疗（如果缺乏或有临床表现） 检测腰椎和/或臀部骨密度（BMD） 如果BMD不正常（T-评分小于-1）使用双磷酸盐（绝经后妇女慎用）如果患者禁忌使用或无法耐受双磷酸盐治疗，降钙素可作为二线治疗如果BMD正常，每年或半年重复随访BMD 三：对儿童生长发育和生殖功能的影响 传统治疗Still病的方案是首选糖皮质激素。在激素减量的过程中，常常出现病情复发，大部分需要长期使用较大剂量的激素治疗。 但是长期使用较大剂量的激素治疗，导致激素明显的副作用，尤其是生长发育障碍。 尼美舒利和甲氨蝶呤联合治疗成人Still病，可获得到比传统大剂量激素更好的疗效和更少的副作用。 经检索PubMed数据库，国际上至今未见有取代激素治疗成人Still 病的治疗方案。 尼美舒利与MTX联合治疗成人Still病用药方法： 口服尼美舒利100mg，每12小时1次，对于体温超过39℃的高热者，为防止体温聚降过低，尼美舒利首剂为50mg。 生理盐水40ml + MTX 10mg，静脉注射，每周1次，4次后改为口服MTX 10mg，每周1次。
应用环磷酰胺对免疫抑制模型的建立及免疫抑制模型的检测 摘要 目的：应用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型并检测免疫抑制模型建立是否成功方法：十六只小鼠分为四大组，每组四只。将四只小鼠平均分为两组，分别为对照组和免疫抑制组，第一天对两组的四只小鼠进行初次免疫，对照组小鼠分别注射0.4mlNS和0.4mlOVA-AL(OH)3，免疫抑制组小鼠分别注射0.4mlNS 和0.4mlOVA-AL(OH)3。此后分别于第8、10、12、14天给对照组小鼠注射0.4mlNS，给免疫抑制组小鼠注射100mg/kg的CTX。于第十五天对两组小鼠加强免疫，对照组小鼠分别注射0.4mlNS和0.4mlOVA-AL(OH)3，免疫抑制组小鼠分别注射0.4mlNS和0.4mlOVA-AL(OH)3，即四组分别为NS-NS组、OVA-NS组、NS-CTX组、OVA-CTX组，免疫抑制模型建立。用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬墨汁试验对天然免疫功能进行检测，淋巴细胞转化试验对细胞免疫功能进行检测，双向免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验对体液免疫功能进行检测。 结果：细胞免疫的检测（淋转实验）结果全为阴性，吞噬细胞功能的检测（吞噬实验）结果为阴性，体液免疫的检测（双扩实验和ELISA）结果有三项测定项目为阳性。 结论：虽然本实验不足以证明CTX对免疫功能的抑制作用，但从一些数据可以看出CTX的免疫抑制功能。 Abstract Objective:cyclophosphamide was applied to establish the mice immunos uppression model and detection whether the immunosuppression model s uccess or not. Meyhod:Divid the 16 mice into four groups, each group of four. Divid the four mice into two groups, control group and immunosuppressive gro ups. On the first day giver primary immune to the two groups of fou mic e, Control group mice were injected NS 0.4ml and OVA - AL (OH) 3 0.4 ml, Immunosuppressive mice were injected NS 0.4ml and OVA - AL (O H) 3 0.4 ml. In 8, 10, 12, 14 days inject 0.4 ml NS to the control group mice, inject 100 mg/kg CTX to the immunosuppressive mice. In the fift eenth day give strengthen immunity to the two groups of mice. Control g roup mice were injected NS 0.4 ml and OVA - AL (OH) 3 0.4 ml, Immu nosuppressive mice were injected NS 0.4ml and OVA - AL (OH) 3 0.4ml, which means the four groups were NS-NS group, OVA-NS grpoup, NS -CTX group, OVA-CTX group.,Immunosuppression model is established. Use macrophage cell in abdominal cavity of mice phagocytosis ink expe riment to test the natural immune function, The lymphocyte transformatio n test to test the cellular immune function, double immunodiffusion test, ELISA to test the humoral immune function.
【通用名】环磷酰胺 【规格】12片*2板/盒 【制造商】天津金世制药有限公司 【适应症】本品为目前广泛应用的抗癌药物，对恶性淋巴瘤、急性或慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤有较好的疗效，对乳腺癌、睾丸肿瘤、卵巢癌、肺癌、头颈部鳞癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤及骨肉瘤均有一定的疗效。 用法用量成人常用量：口服每日2～4mg/kg,连用10～14天，休息1～2周重复。儿童常用量：口服每日2～6mg/kg,连用10～14天，休息1～2周重复。 【不良反应】骨髓抑制：白细胞减少最常见，最低值在用药后1～2周，多在2～3周后恢复。对血小板影响较小。可影响肝功。胃肠道反应：包括食欲减退、恶心及呕吐，一般停药1～3天即可消失。泌尿道反应：可致出血性膀胱炎，表现为膀胱刺激症状、少尿、血尿及蛋白尿，系其代谢产物丙烯醛刺激膀胱所致，但环磷酰胺常规剂量应用时，其发生率较低。其他反应尚包括脱发、口腔炎、中毒性肝炎、皮肤色素沉着、月经紊乱、无精子或精子减少及肺纤维化等。禁忌症、抗癌药物，必须在有经验的专科医生指导下用药。凡有骨髓抑制、感染、肝肾功能损害者禁用或慎用。对本品过敏者禁用。妊娠及哺乳期妇女禁用。 【性状】复方环磷酰胺为糖衣片，除去糖衣后显白色。
【药理毒理】复方环磷酰胺在体外无活性，进入体内被肝脏或肿瘤 内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解，变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用。其作用机制与氮芥相似，与DNA 发生交叉联结，抑制DNA的合成，也可干扰RNA的功能，属细胞周期非特异性药物。本品抗瘤谱广，对多种肿瘤有抑制作用。 【药代动力学】环磷酰胺口服易吸收，迅速分布全身，约1小时后 达血浆峰浓度，在肝脏转化释出磷酰胺氮芥，其代谢产物约50%与蛋白结合。静注后血浆半衰期4～6小时， 48小时内经肾脏排出50%～70%，其中68%为代谢产物，32%为原形。 【注意事项】复方环磷酰胺的代谢产物对尿路有刺激性，应用时应 鼓励患者多饮水，大剂量应用时应水化、利尿，同时给予尿路保护剂美司钠。近年研究显示，提高药物剂量强度，能明显增加疗效，当大剂量用药时，除应密切观察骨髓功能外，尤其要注意非血液学毒性如心肌炎、中毒性肝炎及肺纤维化等。当肝肾功能损害、骨髓转移或既往曾接受多程化放疗时，环磷酰胺的剂量应减少至治疗量的1/2～1/3。由于本品需在肝内活化，因此腔内给药无直接作用。孕妇及哺乳期妇女用药有致突变、致畸胎作用，可造成胎儿死亡或先天畸形。妊娠 期妇女禁用。本品可在乳汁中排出，在开始用药时必须中止哺乳。【药物相互作用】环磷酰胺可使血清中假胆碱酯酶减少，使血清尿 酸水平增高，因此，与抗痛风药如别嘌呤醇、秋水仙碱、丙磺舒等同用时，应调整抗痛风药物的剂量。此外也加强了琥珀胆碱的神经肌肉阻滞作用，可使呼吸暂停延长。环磷酰胺可抑制胆碱酯酶活性，因而
Chinese Journal of Veterinary Medicine 中国兽医杂志一2019年(第55卷)第2期 环磷酰胺构建动物免疫抑制模型的研究进展 伍维高,钟金凤 (湖南环境生物职业技术学院,湖南衡阳421005) 中图分类号:O571.21+1一一一一一文献标志码:A一一一一一文章编号:05296005(2019)02008703 收稿日期:20180528 基金项目:湖南省教育厅项目(16C0563);湖南省科技厅项目(2017JJ5026) 作者简介:伍维高(1979-),男,畜牧师,硕士,研究方向为动物繁殖与生产,E-mail:30942422@https://www.doczj.com/doc/5212588954.html, 通讯作者:钟金凤,E-mail:498379002@https://www.doczj.com/doc/5212588954.html, 一一近几年来,动物疫病肆意流行,免疫接种成为预防传染病的有效措施之一,而免疫反应过程相当复杂,诸多因素会影响接种效果,如免疫抑制性疾 病二不良的饲养环境二微量元素和蛋白质的缺乏等,常导致免疫接种失败,给生产带来不可挽回的重大损失三为提高机体抗病力,增强动物免疫力,免疫增强剂得以广泛运用三为了进一步研究此类制剂,人为构建免疫抑制模型的研究手段得到了诸多研究者的青睐三而环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX),以其诱导动物产生免疫抑制作用效果显著,且成本低廉,越来越广泛地运用到制备动物免疫抑制模型中三为此,本文对环磷酰胺构建免疫抑制模型进行综述三 1一环磷酰胺的药理作用 经口服或静脉注射的环磷酰胺主要在肝脏进行代谢,生成低毒性的4-羟基环磷酰胺和醛磷酰胺,分布全身,进一步降解为磷酰氮芥二丙烯醛和去甲氮芥,结合于快速生长细胞的DNA 上,产生强烈的细胞毒性三极少部分可进一步氧化成4-酮环磷酰胺和羧基环磷酰胺,无毒性,随尿排出[1] 三 2一CTX 免疫抑制机理 2.1一环磷酰胺对免疫基因的影响 2.1.1一抑制抗菌蛋白基因表达一内源性抗菌蛋白是天然免疫的重要组成部分,其中杀菌/渗透增强蛋白(Bactericidal /permeability increasing protein,BPI)二防御素(Defensins,DF)以及血小板型磷脂酶A 2(Phospholipase A 2,PLA 2)备受关注 [2] 三大鼠连续 5d 腹腔注射环磷酰胺40mg /kg四bw,对照组注射等体积生理盐水,结果显示,对照组大鼠的睾丸二附 睾二胸腺二肝二小肠二大肠6种器官均表达BPI二β-DF- 1二血小板型PLA 2;而环磷酰胺组胸腺二肝无BPI 表达,睾丸二胸腺二肝无β-DF-1表达,睾丸二胸腺无血小板型PLA 2表达,其他有表达的组织中其含量比对照组低[3],试验提示,环磷酰胺可抑制体内抗菌蛋白基因表达三 2.1.2一影响免疫相关基因的表达一环磷酰胺对免疫相关基因有一定影响三经环磷酰胺处理的荷瘤鼠脾脏二骨髓和血浆相关多种免疫调节因子基因上调,包括危险信号二模式识别受体二炎症介质二生长因子二细胞因子二趋化因子和趋化因子受体[4]三通过基因芯片技术检测环磷酰胺干预的胚胎干细胞发现:自体免疫激活和移植排斥相关基因如CD 3二CD 28二CTLA 4二MHC II 二PRF 1二GZMB 和IL-2R 基因下调,而免疫相关受体基因如IL 1R 2二IL 18R 1和FLT 3上调[5]三 2.2一环磷酰胺对动物转录水平的影响2.2.1一抑制骨髓细胞相关mRNA 表达一环磷酰胺诱导骨髓抑制,造成骨髓细胞(BM)降低三雄性昆明种小鼠连续3d 腹腔注射150mg /kg四d 环磷酰胺,7d 后采骨髓细胞通过Real time PCR 检测发现,试验组BM 细胞钙敏感受体(Calcium-sensing recep-tor,CaSR)和丝裂素活化蛋白激酶(Mitogen-activa-ted protein kinase,MAPK)mRNA 水平极显著高于对照组(P <0.01),引起BM 造血干细胞二间充质干细胞和内皮祖细胞增殖二分化和动员产生明显障碍[6]三 2.2.2一调节细胞凋亡相关mRNA 表达一环磷酰胺对细胞凋亡的影响主要体现在两方面:增加促凋亡基因mRNA 表达而抑制抗凋亡基因mRNA 表达,从而诱导细胞凋亡三SPF 级NIH 雄性小鼠于试验期第9二11二13天腹腔注射环磷酰胺10mg /kg,于14d二28d 取脾脏采用半定量RT-PCR 检测促凋亡基因- Caspase-9mRNA 和抗凋亡基因-B 淋巴细胞基因2(B-cell lymphonma gene 2,BCL-2)的表达,两次结果均显示,模型组Caspase-9mRNA 表达较对照组显著升高而BCL-2mRNA 表达显著降低[7]三8~12周远7 8
紫杉醇，培美曲塞，多西他赛，顺铂，卡铂，伊立替康，贝伐珠单抗，奥沙利铂，多柔比星，表柔比星，长春新碱，环磷酰胺，氟尿嘧啶，吉西他滨，阿糖胞苷，曲妥珠单抗，利妥昔单抗，卡培他滨，替吉奥。 1、紫杉醇 用法: 静滴，滴注本药时应采用非聚乙烯材料的输液用具，治疗前按常规应用地塞米松和H2 受体拮抗剂进行预处理。 滴注时间: 3 小时 副作用: a 过敏反应、末梢神经障碍、肌肉酸痛、关节痛、心脏毒性( 特有的) b 骨髓移植 c 脱发 d 恶心呕吐 2、培美曲塞 用法用量: 静滴，本品联合顺铂时应在本品给要结束30min后再给予顺铂滴注，用0.9% 氯化钠注射液稀释至100ml, 静滴超过10min 保存：室温保存，配置好的溶液，置于冰箱冷藏或置于室温( 15-30C) 无需避光，其物理及化学特性24 小时内保持稳定。 副作用: 白细胞减少，中性细胞减少，发热，乏力，皮疹，腹痛，肝肾功能异常。护理要点: A 接受本药治疗同时接受叶酸和维生素B12的补充治疗，减少血液学和胃肠道的反应，第一次给予本药治疗开始5-7 天服用叶酸，-直服用整个治疗周期，在最后一次本品给药后21 天可停服。患者还需在第一次本品给药前7 天内肌注维生素B12 一次，以后每三个周期肌注一次，以后的维生素B12给药可与本品用药在同一天进行。 B 本品与吉西他滨合用时，应在使用吉西他滨90min 后再使用本药。C预服地塞米松可以降低皮肤反应的发生率及严重程度。 3、多西他赛 用法:静滴，治疗前一-天服用地米，持续至少三天，防止过敏和体液潴留。滴注时
间:1 小时。 副作用: A骨髓抑制； B过敏反应； C皮肤反应: 红斑，皮疹； D体液潴留: 水肿； E胃肠道反应； F本要外周用药后 1 周内可出现延迟性静脉炎或局部皮肤反应； G肝功能损害。 4、顺铂 用法: 静滴，胸腹腔内注射，动脉注射。 保存: 避光冷藏。 副作用: a 胃肠道反应: 严重的恶心呕吐，可持续一周； B骨髓抑制； c 脱发； D肾损害，听力损害，神经损害，为减轻肾脏负担，需在给药前2-16h 和给药后6h 内 大量补液，注意询问有无耳鸣； E不能接触含铝器具，会产生黑色沉淀及气体； F 变态反应症状，溶血性贫血。 5、卡铂 用法: 静滴，用5%葡萄糖溶解本品。 保存: 室温避光保存，因制剂中无抗菌成分，按规定稀释后的药液，在室温中保持8 小 时稳定。 副作用: a 特有的副作用: 延迟性呕吐； B骨髓抑制； C脱发； D肾损害较轻，听力损害，神经损害，肝损害少见。
环磷酰胺对小鼠免疫抑制的动物模型建立 摘要:[目的]建立环磷酰胺对小鼠的免疫抑制的动物模型，从天然免疫功能和获得免疫功能两方面检测对小鼠的影响。[方法]初次免疫设立实验组给予OVA-AL(OH)3(0.5/只)和对照组给予NS（0.5/只）；8d,10d,12d,14d分别给实验组和对照组注射NS和CTX(100mg/kg);与15d加强免疫分别注射NS和OVA-AL(OH)3(0.5/只)；22d检测免疫功能[结果]与NS-NS组相比，CTX-NS组的SI值，双向免疫及ELISA的效价无明显差别，但吞噬细胞指数及吞噬细胞百分率明显降低；与NS-OVA相比CTX-OVA组的SI 明显降低，双向免疫剂ELISA效价都降低[结论]环磷酰胺对小鼠的T淋巴细胞，B淋巴细胞以及吞噬细胞有抑制作用 Abstract:[aims] To establish animal model of cyclophosphamide in mice immunosuppression , test in mice from two aspects of natural immune function and immunity function [methods] Primary immune to set up the experimental group given OVA-AL(OH)3 and The control group given NS ; the 8th,10th,12th,14th day give the experimental group NS and the control group CTX ,and the 15th strengthen the immune;the 22th test the immune function [results] Compared with NS - NS group, the SI value of CTX - NS group, bidirectional immune potency and ELISA has no obvious difference, but the phagocyte index and phagocytes percentage decreased obviously; Compared with NS - OVA CTX - SI of OVA group was obviously lower, bidirectional immune agent ELISA titer were reduced [conclusion] Cyclophosphamide in mice of T lymphocyte, B lymphocyte and phagocytes have inhibition 关键词：环磷酰胺 CTX 免疫抑制动物模型淋巴细胞 建立一种环磷酰胺免疫抑制小鼠模型，并将其与正常小鼠进行对照，通过检测小鼠的天然及获得免疫功能对比其改变与不同，从而可知环磷酰胺对免疫抑制的作用，有利于进一步进行对临床应用抗肿瘤的研究。 1.材料与方法 1.1 材料 1.11 实验动物：ICR小鼠4只，雌性，20~22g，清洁级，吉林大学实验动物中心。 1.12 重要器材：显微镜，离心机，超净台，细胞计数板，细胞培养箱，酶标仪，打孔器，加样器（200μl,20μl），酶标板，EP管 1.13实验试剂：CTX(山西普德药业公司)，生理盐水（NS），OVA+AL(OH)3，苦味酸，培养液（IMDM）5%FCS,ConA(10μg/ml),MTT(5μg/ml),白细胞计数液（2%冰醋酸），二甲亚砜（DMSO）,1.5%琼脂，PBS，洗液（PBS-Tween20），封闭液BSA