各类鼻咽癌细胞株特性及来源 CNE1 为鼻咽高分化鳞状细胞癌细胞系;CNE2、HNE1 、HNE2 、HNE3、HONE1 为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系；5 一8F为鼻咽低分化鳞状细胞癌，细胞系SUNE —1亚株，具有高转移、高成瘤能力；6- 10B为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系SUNE-1亚株，具有高成瘤潜能, 不转移特性。C666-1为长期携带EB病毒基因的低分化鼻咽癌细胞株；HK-1为携带EB病毒基因的高分化鼻咽癌细胞株. NP69 为永生化鼻咽上皮细胞系，于1XKsFM（keratinoeyte serum-free medium, KSFM）培养基中,37C、5%CO2、饱和湿度条件下培养，呈现鳞状上皮样、贴壁生长，具有正常鼻咽上皮的特性。 CNE11 癌组织来源 病人王某某, 女, 58 岁, , 籍贯吉林省,,中国医学科学院日坛医院住院号： 2382248.1975 年8月1 3日患者因头痛耳鸣、鼻衄等症状来院就诊。临床检查鼻咽部有菜花样肿物, 肿瘤已侵犯颅底和颅神经（川,IV，区刘）,双颈淋巴结转移,诊断为鼻咽癌。X光诊断为鼻咽后壁软组织肿物符合鼻咽癌, 颅底象见左侧翼状突外板可疑骨质破坏,鼻咽部肿物作活检, 病理诊断为高分化鳞癌。 培养过程 在第12代时（培养后的6个月）,在上皮样细胞培养中发现有少量梭形细胞。在有的培养 瓶中, 梭形细胞逐渐增加。在接种少量细胞的培养瓶中,有的全为上皮样细胞, 有的全为梭形细胞。选择全为上皮样的细胞传代，称CNE细胞株；全为梭形的细胞传代，称CNF细胞株
CNE细胞株容易形成空泡，不传代的老细胞，在显微镜下可见到有些细胞的胞浆突出，然后脱落成死细胞，还有多核巨细胞。在这二株细胞，特别是CNF细胞的单层或多层细胞上有很多圆形细胞, 核大,浆少。在培养液中也有大量圆的脱落细胞。将培养液中的悬浮细胞接种于培养瓶,细胞仍能贴瓶,生长出原来的上皮样细胞或梭形细胞。将CNE , CNF细胞和这二株细胞的脱落细胞培养成单层后, 不传代, 每周换液二次, 继续培养7 个月,未能得到类淋巴母细胞株，在培养过程中未见到肿瘤组织培养中常见到的成纤维细胞生长。 特性 CNE-22 组织来源和培养方法 组织取自鼻咽癌（W期）患者,林XX,63岁，男性,广东籍,活检组织病理检查为慢性鼻咽炎,但同时负压吸引的鼻咽脱落细胞为低分化鳞状细胞癌（图1）. 病人血清的E B病毒抗体和鼻咽脱落细胞的EBNA检测，病人血清的各种抗EB病毒抗体的滴度分别为：VCA/IgG 1: 320 , EA IgG 1: 160, VCA/lgA 1: 40, EA/lgA<1 : 5 ,抗EBNA 抗体为1:160=鼻咽脱落细胞中发现成团的癌细胞呈EBNA阳性 细胞株的EB病毒抗原 用抗补体免疫荧光试验检查CNE- 2细胞中各种EB病毒抗原。体外培养第3代细胞可见 2谷淑燕，赵文平，曾毅，唐慰平赵明伦邓惠华,李昆.从低分化鼻咽癌病人建立鼻咽癌上皮细 胞株[J].癌症,1983,02:70-72+129-130.
恶性肿瘤干细胞标记物ＣＤ４４在鼻咽癌 组织中的表达及临床意义＊ 陈海霞 金 风＊＊ 吴伟莉 龙金华 贵阳医学院附属医院肿瘤科（５５０００４） 贵州省肿瘤医院头颈肿瘤科（贵阳５５０００４） 李媛媛 龚修云 陈潇潇 刘 梅 摘 要 目的 研究恶性肿瘤干细胞标记物Ｃ Ｄ４４在鼻咽癌组织中的表达及与放、化疗疗效之间的关系。方法通过纤维鼻咽镜取３０例鼻咽癌组织和１０例声带息肉，通过Ｔｒｉｚｏｌ法提取总ＲＮＡ后，进行逆转录，ＳＹＢＲ方法进行实时荧光定量ＰＣＲ反应检测各组织中ＣＤ４４的表达，对２０例初治鼻 咽癌病人予诱导化疗加同步放、化疗治疗。结果鼻咽癌组织和声带息肉组织中均表达ＣＤ４４； 鼻咽癌组织ＣＤ４４表达均高于声带息肉组织；ＣＤ４４在鼻咽癌组织和声带息肉组织中表达具有明显差异（ Ｐ＜０． ０５）。鼻咽癌组织ＣＤ４４表达与Ｎ分期的关系有明显差异（Ｐ＜０．０５）；ＣＤ４４表达和Ｔ分期、病理类型、性别、年龄、及近期疗效间的关系均无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论鼻咽癌肿瘤组织中有ＣＤ４４ 表达，且高于声带息肉组织；ＣＤ４４的表达与Ｎ分期相关； 还需扩大病例数，进一步研究加以证明。 关键词 鼻咽癌 Ｃ Ｄ４４ 实时荧光定量ＰＣＲ 诱导时间调节化疗 调强放疗Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｍａｒｋｅｒｓ ＣＤ４４ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇ ｅａｌ ｃａｒ－ｃｉｎｏｍａ Ｃｈｅｎ Ｈａｉｘｉａ，Ｊｉｎ Ｆｅｎｇ，Ｗｕ Ｗｅｉｌｉ，Ｌｏｎｇ Ｊｉｎｈｕａ，Ｌｉ Ｙｕａｎｙｕａｎ，Ｇｏｎｇ Ｘｉｕｙ ｕｎ，Ｃｈｅｎ Ｘｉ－ａｏｘｉａｏ，Ｌｉｕ Ｍｅｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ，Ｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５ ５０００４，Ｃｈｉｎａ．Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊ ｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｍａｒｋ－ｅｒｓ ＣＤ４４ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｆｔｅｒ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ ｇｅｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｆｉｂｅｒ ３０ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ １０ｃａｓｅｓ ｏｆ ｖｏｃａｌ ｃｏｒｄ ｐｏｌｙｐ，ｔｈｒｏｕｇｈ ＲＮＡ ａｆｔｅｒ Ｔｒｉｚｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐ －ｔｉｏｎ，ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ＳＹＢＲ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑ ｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅ－ｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＣＤ４４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｎａｓｏｐｈａｒｙｎ－ｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｒｅｃｅｉｖｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｒａ－ｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＣＤ４４ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｖｏ－ｃａｌ ｃｏｒｄ ｐｏｌｙｐ ｔｉｓｓｕｅ；ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｏｒ－ｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｏｃａｌ ｃｏｒｄ ｐｏｌｙｐ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇ ｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｖｏｃａｌ ｃｏｒｄｐｏｌｙｐ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，ｔｈｅ Ｐｖａｌｕｅｓ ｗｅｒｅ＜０．０５．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ｗｉｔｈ Ｎ ｓｔａｇｅｓ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ Ｔ ｓｔａｇ ｅ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｙｐｅ，ｇｅｎｄｅｒ，ａｇｅ，ａｎｄｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎ ｐｏｌｙｐ ｏｆ ｖｏｃａｌ ｃｏｒｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４４ａｓｓｏｃｉａｔ－ｅｄ ｗｉｔｈ Ｎ ｓｔａｇｅ．Ｉｔ ｉｓ ｎｅｅｄ ｔｏ ｅｘｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃａｓｅｓ，ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｏ ｐｒｏｖｅ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＣＤ４４ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲＣｈｒｏｎｏｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ 注： ＊基金项目：贵州省科技攻关联合基金项目［黔科合（２０１０）３１６４］＊＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｎｆ８８６５＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 中图分类号：Ｒ７３９．６３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－７４４Ｘ（２０１２）０７－０５８３－ ０４ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ ．ＩＳＳＮ．１０００－７４４Ｘ．２０１２．０７．００２·３８５·贵州医药２０１２年７月第３６卷第７期
人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的光声光 谱(1) 】目的:了解人鼻咽癌细胞的光谱吸收特性。方法：利用单光束光声光谱 技术测量两株人鼻咽癌细胞（CNE1、CNE2）的归一化光声光谱。结果： 在波长为380nm～700nm范围内，这两株人鼻咽癌细胞的光声光谱吸收特性存在着显著差异,它们的光谱吸收强度大小为：CNE2> CNE1。结论：利用光声光谱技术能够区分不同的人鼻咽癌细胞株的光谱差异性，从而表明该技术能为 鼻咽癌的研究提供一种新方法。 【关键词】光声光谱鼻咽癌细胞株 The Photoacoustic Spectroscopy of CNE1 and CNE2 Human Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Abstract Objective: To investigate optical absorption characteristics of human nasopharyngeal carcinoma cell lines. Methods: The standardized photoacoustic spectroscopy of the two human nasopharyngeal carcinoma cell lines (CNE 2 and CNE1) were measured respectively using single beam photoacoustic spectroscopy technique. Result: In the range from 380nm to 700nm, the marked difference between CNE 2 and CNE 1 is found in the photoacoustic spectroscopy absorption characteristics. Optical ahsorqtion intensity of the two cell lines is : CNE2> CNE 1. Conclusion: The results shows that tells the difference about different nasopharyngeal carcinoma cell lines on spectroscopy using the photoacoustic spectroscopy technique.The photoacoustic spectroscopy technique may provide a new way on further research on nasopharyngeal carcinoma. Key words photoacoustic spectroscopy; nasopharyngeal carcinoma; cell line 光声光谱技术是一种灵敏度高和普适性强的吸收光谱探测新技术。研究物 质的光声光谱对样品制备求简单，不需预处理，特别适用于具有强散射、不透 明和粘糊状样品的光谱吸收特性测量。目前该技术已用于生物组织及血液的研究，能区分正常组织与异常组织、正常血液与异常血液的光谱差异性，从而为 医学的研究提供一种新技术［1～4］。人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2在 光谱方面是否存在差异性值得我们探讨。为此，本研究应用一套单光束光声光
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?１２４? ５～７Ｌ／ｒａｉｎ吹拂创面，改善氧供、扩张毛细血管，达到清洁刨面、减少渗出、抑制细菌生长、加速愈合的目的；主要用于放疗Ⅱ，Ⅲ度急性放射性皮炎（湿性脱皮）。但是局部吹氧后必须局部用药，避免或缓解创面干燥而导致的不适ｕ７１。２．２．３氦氖激光使用氦氖激光照射局部扩张毛细血管，提高代谢率，加快受损组织的愈合，主要适用无炎症的皮肤破损，可结合维生素Ｂ。：联合使用¨引。 ３放射性皮炎的护理 ３．１环境与温度提供安静、舒适、温湿度适宜的环境，保持室内清洁、空气流通。室温保持在２８—３２ｃＣ为宜，相对湿度维持在５０％一６０％为宜¨…。 ３．２心理护理肿瘤患者极易出现消极情绪，鼻咽癌患者放疗后皮肤会出现变黑、渗液，更加重其心理负担。放疗前应与患者交谈评估焦虑程度，及时发现和疏导患者ｍＪ。根据患者的性格、文化素养、经济状况、心理状态等，个案讲解放疗知识及其重要性，取得家人和朋友的关心帮助，指导患者用高领衣服遮挡画线野等方法，使其积极配合治疗与护理工作，保持乐观的心态面对疾病。 ３．３营养支持以高蛋白质、高维生素及含碳水化合物丰富的食品为主，戒烟酒、忌辛辣食物，多饮水。中医认为放疗后多为阴虚津枯之体，故应多食新鲜水果蔬菜，忌食辛辣温热之品，以免伤阴助火使津液更为枯竭。患者饮食方面宜适当增加一些滋阴润燥生津的食物，如各种水果汁，保证全面营养。具体的病症选择中医辨证后诊治效果更为明显。 ３．４病情观察了解患者接受放射治疗的次数，观察皮肤颜色的改变及破损程度，如出现皮肤损害按照标准分度，根据具体情况，给予用药指导，用药后观察用药效果。 ３．５皮肤护理 ３．５．１预防性护理放疗前应摘除假牙、耳环、项链等金属制品，以免增加射线的吸收，加重皮肤的损伤；应修剪患者指甲，以免睡眠时搔抓局部皮肤引起糜烂。 ３．５．２一般皮肤护理保持照射野皮肤清洁干燥避免刺激，避免物理、化学性和机械性摩擦，避免过冷、过热和酸碱刺激，禁止直接用肥皂清洗照射区皮肤，可用温水毛巾轻轻沾洗。内衣及用物要柔软、宽松、吸湿性好，注意领子不能太硬、太高，穿圆领或无领衣服为宜。冬夏季应减少户外活动，外出时避免阳光直接暴晒，冷风直吹。不宜佩带项链，避免摩擦，保持皮肤完整性，保持照射野标记的清晰。 ３．５．３干性脱皮的护理如果放射局部皮肤见界线分踞的红斑区，伴有暗紫色色素沉着，或伴有毛发脱落、刺痒灼痛，此时不要用手抓，以免引起皮肤脱屑甚至破皮导致皮肤感染，局部用消毒棉棒涂羊毛脂，也可涂用ｌ％一２％薄荷淀粉、六神爽身粉，以减轻瘙痒的刺激。 ３．５．４湿性脱皮的护理如果放射局部皮肤出现水泡、表皮破损、有严重烧灼感，应立即停止放疗，遵医嘱用药。若经治疗溃疡已结痂，痂皮不能用手抠除，应让其自行脱落。３．５．５早期湿敷研究表明馆¨湿性护理受照皮肤比传统的于性方法效果更佳。 ３．６用药护理正确的分级判断后，按照患者现在的情况具体分析后用药：Ｉ度反应时可使用医用射线防护喷剂、皮肤保护凝胶、湿敷的方法保护局部皮肤，预防皮损的发生；ＩＩ度放射性皮炎要注意保护皮肤，防止破损，使用贝复剂、比亚芬等促进皮损的愈合；Ⅲ度反应宜采取暴露疗法，局部喷涂比亚芬、使用积雪草苷霜等，如并发感染，可加用抗生素，严重者应暂停放疗；ｌＶ度反应以上不应该在放射治疗中发生，如一旦发生应终止放疗，及时换药，减轻疼痛，控制感染。整个治疗过程应该结合中医辨证论治提高抵抗力，必要时全身用药抗感染。用药后按时观察作用效果及副作用，及时调整用药。３．７延续性护理患者出院后仍有很高的健康照护需求陋】。正确指导他们劳逸结合、合理饮食，遵医嘱服药，按时到医院复查。放疗区的皮肤易出现灼痛、搔痒等感觉，避免不良刺激及皮肤损伤，保持局部皮肤清洁干燥最为重要。内衣要干净柔软，以全棉类为宜，切忌用肥皂水擦洗、粗糙毛巾摩擦、用手抓挠和阳光直射。适当的参与社会活动，寻求社会支持系统，保持心情愉快，提高生存质量。 ４小结 随着医疗护理的不断深入，放射性皮炎患者的治疗效果逐步提高，治愈时间明显缩短。但目前都倾向于单一用药研究，忽略了人的整体性，有一定的局限性。因此，有必要从多角度多方面给予护理，如健康教育、个体护理、分期用药等，从而更加有效地预防和治疗放射性皮炎，提高肿瘤患者的生存质量。 参考文献 ［１］李风玉，王舒琦．放射性皮炎的防治［Ｊ］．山西医药杂志，２０１２，４１（１）：４７－４９． ［２］ＴｒｏｔｔｉＡ．Ｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋｃａｒｌｃｅｒ：８．ｒｅｖｉｅｗｏｆｔｒｅｎｄｓａｎｄｉｓ－鲫髑［Ｊ］．ＩｎｔＪＲａｄｌａｔＯｎｃｏｌＢｉｏｌｐｈｙｓ，２０００。４７（１）：ｌ一１２． ［３］陈强，程岩，任淑萍，等．放射性皮肤损伤病变规律初探．中国实验诊断学。２００８，１２（５）：６７６—６７７． ［４］ＧｏｌｄｂｅＩｇＭＴ，ＭｃＧｙｎｎＢ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２弛３ａｔｅｄｓｋｉｎ姗ＰＰＢｒｙａｎｔＢＡ，ｅｄｓ［Ｍ］．Ａｃｕｔｅａｎｄｃｈｒｏｎｉｃｗｏｕｎｄ８：Ｎｕｒｓｉｎｇｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．２ｎｄｅｄ，２０００：３６７—３８６． ［５］李亚莉．喜疗妥乳膏治疗急性放射性皮炎疗效观察［Ｊ］．实用医技杂志，２００８。１５（２）：１９７—１９８． ［６］李翠萍．贝复剂防治鼻咽癌放疗所致放射性皮炎的观察［Ｊ］．当代护士（学术版），２００７，６：５７—５８． ［７］江月来，吴福才，张金莲．不同方法护理放射性皮肤损伤的效果比较［Ｊ］．当代护士（学术版），２０１１，５：８７—８９． ［８］梁建博，龚海英，李叶琴．济安舒能治疗放射性湿性皮炎的效果观察及护理［Ｊ］．现代Ｉ晦床护理，２０１０，９（１）：２８—２９． 万方数据
鼻咽癌基础研究的新前沿——长链非编码RNA 夏世同 王跃建 【摘要】最新研究证明人类基因组中的非蛋白编码部分在致癌和肿瘤细胞转移中有重要作 用。在众多种类的非蛋白编码RNA 中，长链非编码RNA （long non-coding RNA ，lncRNA ）在癌症生物学中承担了关键的监管作用。本文对lncRNA 在人类肿瘤，特别是鼻咽癌中的研究现状做一综述。 【关键词】RNA （RNA ）；基因表达调控（Gene Expression Regulation ）；肿瘤标记，生物学（Tumor Markers ，Biological ）；鼻咽肿瘤（Nasopharyngeal Neoplasms ） DOI ：10.3760/cma.j.issn.1673-4106.2015.01.008作者单位：528000 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）耳鼻咽喉头颈外科 通信作者：王跃建，Email ：wyjian@https://www.doczj.com/doc/525907347.html, ·综述：头颈肿瘤· 鼻咽癌好发生于中国南部、东南亚及北非地区，是我国南方地区最常见的恶性肿瘤之一，总的5年生存率已经提高至70%左右。但首程放疗后的复发率仍较高，另外转移也是鼻咽癌治疗失败的主要原因之一，其病因和发病机制尚不清楚，由于其非特异性的早期症状而导致确诊时常处于晚期，目前已造成了严重的全球性健康问题。鼻咽癌的发生发展是多步骤、多因素、多基因参与的过程。因此，探索其动态发展的分子机制，寻找早期诊断及评估预后相关的特异性分子标志物，以进一步明确发病机制，对实现降低复发转移率有深远意义，在基因组中大量转录的长链非编码RNA （long non-coding RNA ，lncRNA ）因在致癌和抑癌途径中显露出的潜在作用成为继microRNA 之后的研究新热点。 【lncRNA 概述】非编码RNA 包括以miRNA 、siRNA 和piRNA 等为代表的短小RNA 和lncRNA 。lncRNA 是一类转录本长度超过200 nt 核苷酸单位的功能性RNA 分子。Okazaki 等[1]在对小鼠全长互补DNA （complementary DNA ，cDNA ）文库的大规模测序过程中首次发现了新的转录物，即lncRNA ，其本身并不编码蛋白，而是以RNA 的形式在多种层面上调控基因的表达水平。lncRNA 在基因组内广泛分布，位于编码mRNA 基因的内含子或外显子中或编码mRNA 基因之间的序列。lncRNA 序列一般具有低保守性，但在启动子区域和二级结构上具有进化保守性，这不同于 mRNA 必须保证密码子的正确性以防止开放阅读 框改变。起初lncRNA 被认为是基因组转录的“噪声”，并不具有任何生物学功能[2]。但最近的研究表明，lncRNA 参与了基因组印记及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程[3]。 1. 作用方式。lncRNA 调控基因表达的方式具多样性，调控机制也多种多样。lncRNA 对于基因表达调控的方式大体上可分为以下几种。 1.1 染色质重塑。染色质状态是转录活性的关键因素，包括核小体结构和组蛋白修饰等[4]。一些lncRNA 通过影响染色质状态来调控基因表达，如同源异型框基因反义基因间RNA （HOX antisense intergenic RNA ，HOTAIR ）转录自同源异型框基因C （Homeobox C ，HOXC ）位点，通过募集PRC2复合体，反式抑制HOXD 位转录。Tsai 等[5]研究显示HOTAIR 作为骨架分子发挥作用，其两端结合不同的组蛋白修饰复合体-5'端结合PRC2复合体，而3'端结合LSD1/CoREST/REST 复合体。前一复合体具有促甲基化作用，后一复合体具有脱甲基化作用，由他们分别决定不同靶基因的特异性组蛋白修饰模式。HOTAIR 的过表达将引起PRC2复合体在全基因组范围内的重新定位，使若干抑癌基因沉默，终促进癌细胞的转移。 1.2 转录调控。①基因沉默。INK4位点反义非编码RNA （antisense non-coding RNA in the INK4 locus ，ANRIL ）是周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B （Cyclin-dependent kinase inhibitor 2B ，CDKN2B ，即p15 INK4b ）基因的反义转录物，参与抑癌基因周期蛋白依赖性激酶抑制
鼻咽癌 摘要 鼻咽癌局部侵蚀力强，浸润性扩展，极易侵犯邻近组织器官，区域淋巴结 转移率高，初诊病例多为Ⅲ期、Ⅳ期患者，常规放疗毒副反应大，局部复发率 和远处转移率高。现就鼻咽癌概况、EBV、征兆、诊断、治疗做一概述。 关键词鼻咽癌征兆化疗 鼻咽癌是指发生于鼻咽腔顶部和侧部的恶性肿瘤，是我国南方高发恶性肿 瘤之一，且以长江以南地区的发病率为高。鼻咽癌发生部位隐蔽、结构复杂， 使鼻咽癌的早期诊断较为困难，故确诊时大部分患者已经是111或W期。我国90%以上的鼻咽癌是低分化鳞癌，对放射治疗敏感，调强放射治疗有着强大的剂量学优势，是目前放射疗法方式首选模式。但放疗只是针对局部病灶，不能防 止远处转移的发生，因此中晚期鼻咽癌患者加用化疗的综合疗效逐渐被人们认可。主要有辅助性化疗、同期放化疗和诱导化疗及多种联合的治疗方案。对于 晚期鼻咽癌患者，大部分学者推荐采用同期放化疗联合辅助化疗的方案，认为 此方案能够提高癌症的局部控制率、延长总生存率。有研究证实同期放化疗联 合辅助化疗可提高111、W期鼻咽癌患者的局部控制率，并能降低远处转移的发生。但无论放疗还是化疗均会对患者的机体免疫系统产生不同程度的抑制作用，即使是局部病灶的控制，而治疗失败的主要原因还是由于机体自身的细胞免疫 功能障碍而出现癌细胞的远处转移。 在不同分化程度鼻咽癌细胞、组织中 Notchl 胞内段( NIC) 表达有所差异，与患者年龄、性别无相关性，而与细胞分化程度相关，呈现分化程度越低表达 量越低的趋势。从慢性炎症组织到分化型鼻咽癌，再到末分化型鼻咽癌，NIC 的表达量逐渐增加，其定位由胞质至胞核，而未分化型鼻咽癌 NIC 主要表达于侵入癌巢的淋巴细胞上，提示 Notchl 在鼻咽癌发生中有促进作用，其作用途 径可能与淋巴细胞浸润相关。 鼻咽癌主要是EBV感染引起的。EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似，圆形、直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。
各类鼻咽癌细胞株特性及来源 CNE1为鼻咽高分化鳞状细胞癌细胞系;CNE2、HNE1、HNE2、HNE3、HONE1为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系;5一8F为鼻咽低分化鳞状细胞癌,细胞系SUNE一1亚株,具有高转移、高成瘤能力;6- 10B为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系SUNE-1亚株,具有高成瘤潜能,不转移特性。C666-1为长期携带EB病毒基因的低分化鼻咽癌细胞株;HK-1为携带EB病毒基因的高分化鼻咽癌细胞株. NP69为永生化鼻咽上皮细胞系,于1XKsFM(keratinoeyte serum-free medium，KSFM)培养基中,37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养,呈现鳞状上皮样、贴壁生长,具有正常鼻咽上皮的特性。 CNE11 癌组织来源 病人王某某，女, 58 岁，, 籍贯吉林省,，中国医学科学院日坛医院住院号：2382248.1975年8月13日患者因头痛耳鸣、鼻衄等症状来院就诊。临床检查鼻咽部有菜花样肿物, 肿瘤已侵犯颅底和颅神经( Ⅲ, Ⅳ, ⅨⅫ) , 双颈淋巴结转移, 诊断为鼻咽癌。X光诊断为鼻咽后壁软组织肿物符合鼻咽癌, 颅底象见左侧翼状突外板可疑骨质破坏,鼻咽部肿物作活检, 病理 诊断为高分化鳞癌。 培养过程 在第12代时(培养后的6个月)，在上皮样细胞培养中发现有少量梭形细胞。在有的培养瓶中, 梭形细胞逐渐增加。在接种少量细胞的培养瓶中,有的全为上皮样细胞, 有的全为梭形细胞。选择全为上皮样的细胞传代, 称CNE细胞株；全为梭形的细胞传代, 称CNF细胞株。CNE 细胞株容易形成空泡，不传代的老细胞, 在显微镜下可见到有些细胞的胞浆突出, 然后脱落成死细胞, 还有多核巨细胞。在这二株细胞,特别是CNF细胞的单层或多层细胞上有很多圆形细胞, 核大,浆少。在培养液中也有大量圆的脱落细胞。将培养液中的悬浮细胞接种于培养瓶,细胞仍能贴瓶, 生长出原来的上皮样细胞或梭形细胞。将CNE , CNF细胞和这二株细胞的脱落细胞培养成单层后, 不传代, 每周换液二次, 继续培养7 个月,未能得到类淋巴母细胞株，在培养过程中未见到肿瘤组织培养中常见到的成纤维细胞生长。 特性 CNE-22 组织来源和培养方法
人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的光声光谱 【摘要】目的:了解人鼻咽癌细胞的光谱吸收特性。方法：利用单光束 光声光谱技术测量两株人鼻咽癌细胞（CNE1、CNE2）的归一化光声光 谱。结果：在波长为380nm～700nm范围内，这两株人鼻咽癌细胞的光声光谱吸收特性存在着显著差异,它们的光谱吸收强度大小为：CNE2> CNE1。结论：利用光声光谱技术能够区分不同的人鼻咽癌细胞株的光谱差异性，从而表 明该技术能为鼻咽癌的研究提供一种新方法。 【关键词】光声光谱鼻咽癌细胞株 The Photoacoustic Spectroscopy of CNE1 and CNE2 Human Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Abstract Objective: To investigate optical absorption characteristics of human nasopharyngeal carcinoma cell lines. Methods: The standardized photoacoustic spectroscopy of the two human nasopharyngeal carcinoma cell lines (CNE 2 and CNE1) were measured respectively using single beam photoacoustic spectroscopy technique. Result: In the range from 380nm to 700nm, the marked difference between CNE 2 and CNE 1 is found in the photoacoustic spectroscopy absorption characteristics. Optical ahsorqtion intensity of the two cell lines is : CNE2> CNE 1. Conclusion: The results shows that tells the difference about different nasopharyngeal carcinoma cell lines on spectroscopy using the photoacoustic spectroscopy technique.The photoacoustic spectroscopy technique may provide a new way on further research on nasopharyngeal carcinoma. Key words photoacoustic spectroscopy; nasopharyngeal carcinoma; cell line 光声光谱技术是一种灵敏度高和普适性强的吸收光谱探测新技术。研究物 质的光声光谱对样品制备要求简单，不需预处理，特别适用于具有强散射、不 透明和粘糊状样品的光谱吸收特性测量。目前该技术已用于生物组织及血液的 研究，能区分正常组织与异常组织、正常血液与异常血液的光谱差异性，从而 为医学的研究提供一种新技术［1～4］。人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2 在光谱方面是否存在差异性值得我们探讨。为此，本研究应用一套单光束光声 光谱测量装置，获得人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的归一化光声光谱， 发现它们的光声光谱吸收特性存在着显著差异,它们的光谱吸收强度大小为：CNE2>CNE1，结果提示光声光谱技术能为鼻咽癌的研究提供一种新方法。 1 实验方法
鼻咽癌的靶向治疗 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012
鼻咽癌的靶向治疗 由于鼻咽部位置隐蔽，患者常无不适症状，易造成误诊、漏诊，在确诊患者中，70%已为中晚期。近年来，针对中晚期患者的综合性个体化治疗已成为提高局部控制率与生存率的重要手段，然而常规放化疗手段毒性反应较大，部分患者不能耐受，有些患者对基于铂类的化疗耐药，对治疗抵抗。越来越多的分子靶向药物被应用于鼻咽癌的联合放疗中，可较特异地阻断对肿瘤细胞生长起关键作用的信号传导通路，在杀死肿瘤细胞的同时，减少对正常细胞的影响，毒副反应轻，安全性较好，能有效改善患者生存率和生活质量。 表皮生长因子受体抑制剂 抗EGFR单克隆抗体 西妥昔单抗西妥昔单抗能与表皮生长因子受体（EGFR）特异性结合，抑制受体介导的多种信号传导途径，从而抑制肿瘤细胞生长。对于EGFR高表达的头颈部肿瘤而言，西妥昔单抗显示出了高疗效和低毒性反应的优势，于2006年被FDA批准与放化疗联合，治疗头颈部肿瘤初治患者。 邦纳（Bonner）的研究表明，与单独放疗相比，大剂量放疗+西妥昔单抗治疗可显着提高局部进展期头颈部癌患者的中位局部控制时间（24.4个月对14.9个月）、中位无进展生存（PFS）期（17.1个月对12.4个月）和3年总生存（OS）率（55%对45%），且西妥昔单抗并未加重放疗相关毒性作用。 EXTREME多中心随机对照Ⅲ期临床研究表明，在标准化疗方案中联合应用西妥昔单抗能进一步提高患者生存率，且观察到的中位OS期（10.1个月）长于以往Ⅲ期临床研究的数据。 对于铂类耐药人群，西妥昔单抗同样显示出了优势。巴塞尔加（Baselga）等纳入96例铂类耐药的转移或复发性头颈部鳞状细胞癌患者，给予西妥昔单抗+顺铂或卡铂化疗，意向治疗人群（ITT）疗效评估显示，有效率为10%，疾病控制率达53%，中位至疾病进展时间（TTP）为85天，中位生存期为183天，治疗耐受性好，最常见的不良事件为痤疮样皮疹。 对于西妥昔单抗在鼻咽癌中的临床应用，目前文献报道不多。陈（Chan）等的多中心Ⅱ期临床研究表明，对于既往铂类治疗失败的复发或转移性鼻咽癌患者，西妥昔单抗+卡铂方案具有良好的临床有效性及安全性。 国内进行的多中心ENCORE研究纳入100例鼻咽癌患者进行调强放射治疗+同步放化疗+靶向治疗，放疗剂量为66~72Gy/30~32f，顺铂为80?mg/m2，每3周一次，同时每周应用西妥昔单抗。中位随访330天，无局部复发及颈部淋巴结复发，4例发生远处转移。该研究显示了西妥昔单抗治疗头颈部肿瘤的有效性。 尼妥珠单抗尼妥珠单抗是国内正式上市的第一种人源化表皮生长因子单克隆抗体，人源化程度达95%，能显着抑制肿瘤细胞增殖和肿瘤血管生成，诱导分化，促进细胞凋亡，增强放化疗疗效，其靶向性强、毒副作用低。国内Ⅱ期临床试验结果表明，尼妥珠单抗+放化疗可将鼻咽癌3年生存率提高至 84.29%。 目前西妥昔单抗己被列入2009年美国国立综合癌症网络（NCCN）头颈部肿瘤联合治疗指南，尼妥珠单抗也被2009年NCCN指南中国版推荐用于晚期鼻咽癌的联合治疗。
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２．Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６ 中国临床医学 ２ ０１２年１２月 第１９卷 第６期 ·论著· 人鼻咽癌细胞株中表皮生长因子受体蛋白表达与 西妥昔单抗抑制率的相关性研究 刘静 王斌斌 刘斐叶 左强 （南方医科大学南方医院肿瘤中心，广东广州 ５１０５１５ ）摘要 目的：探讨人鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）细胞株中表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）蛋白的表达水平与西妥昔单抗细胞抑制率的相关性。方法：用蛋白质印迹法检测人ＮＰＣ细胞株ＣＮＥ－１、ＣＮＥ－２、ＨＯＮＥ－１、Ｃ－６６６、ＳＵＮＥ－１、５－８Ｆ以及ＨＮＥ－１共７种细胞株中ＥＧＦＲ蛋白的表达水平，用ＭＴＴ法检测西妥昔单抗对细胞株的抑制率。结果：西妥昔单抗浓度为１５００μｇ／ｍＬ时，ＥＧＦＲ蛋白表达水平与抑制率呈正相关（ｒ＝０．４４４，Ｐ＝０．０４４），西妥昔单抗浓度增加至１８００μｇ／ｍＬ时，两者呈负相关（ｒ＝－０．４６８，Ｐ＝０．０３２）。结论：在ＮＰＣ细胞株中，ＥＧＦＲ蛋白表达水平与西妥昔单抗的细胞抑制率之间无相关性，ＥＧＦＲ蛋白表达水平不能作为预测西妥昔单抗疗效的指标。关键词 西妥昔单抗； 鼻咽癌； 表皮生长因子受体中图分类号 Ｒ７３９．６ 文献标识码 Ａ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＥＧＦＲ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｒａｔｉｏｓ ｏｆ Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇ ｅ－ａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ＬＩＵ Ｊｉｎｇ ＷＡＮＧ Ｂｉｎｂｉｎ ＬＩＵ Ｆｅｉｙｅ ＺＵＯ Ｑｉａｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ，ＮａｎｆａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇ ｚｈｏｕ ５１０５１５，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａ－ｔｉｏｓ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＥＧＦＲ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｈｕ－ｍａｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＣＮＥ－１，ＣＮＥ－２，ＨＯＮＥ－１，Ｃ－６６６，ＳＵＮＥ－１，５－８Ｆ ａｎｄ ＨＮＥ－１ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃ－ｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｕｓｉｎｇ ＭＴＴ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｄｅｎｓｉｔｙｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｗａｓ １５００μ ｇ／ｍＬ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＥＧＦＲ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ（ｒ＝０．４４４，Ｐ＝０．０４４）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｗａｓ １８００μｇ／ｍＬ（ｒ＝－０．４６８，Ｐ＝０．０３２）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＥＧＦＲ ｐ ｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＥＧＦＲ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃａｎ’ｔ ｓｅｒｖｅ ａｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｉｎ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ．Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ； Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ； Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ基金项目：广东省自然科学基金（编号：Ｓ２０１１０４０００３０６２）；南方医院院长基金（编号：２００９Ｃ０２８）刘静和王斌斌为共同第一作者 通讯作者 左强，Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｆｙｙｚｑ ＠１２６．ｃｏｍ 表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇ ｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）基因定位于染色体７ｐ１２［１］ 。ＥＧ－ＦＲ在人类部分肿瘤中呈高表达， 其介导的信号传导与肿瘤发生、发展及预后密切相关。鼻咽癌（ｎａ－ｓｏｐｈａｒｙｎｇ ｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）中ＥＧＦＲ高表达，并且这种高表达与不良预后相关［ ２］ 。西妥昔单抗（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）是一种人／鼠嵌合型Ｉｇ Ｇ单克隆抗体，可与细胞表面ＥＧＦＲ特异性结合，竞争性阻断表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）和其他配体如转化生长因子－α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－α，ＴＧＦ－α ）的结合，从而阻断ＥＧＦＲ依赖的肿瘤细胞增殖、 转移、侵袭以及血管生成等生物学效应。本研究应用蛋白质印迹法检测人ＮＰＣ细胞株ＣＮＥ－１、ＣＮＥ－２、ＨＯＮＥ－１、Ｃ－６６６、ＳＵＮＥ－１、５－８Ｆ以及ＨＮＥ－１ ７种细胞株中ＥＧＦＲ蛋白表达水平，用ＭＴＴ法检测西妥昔单抗对细胞株的抑制率，并探讨两者的相关性，了解检测ＥＧＦＲ蛋白表达水平是否能够判断西妥昔单抗治疗ＮＰＣ的疗效。１ 资料与方法 １．１ 研究材料 西妥昔单抗由德国Ｍｅｒｃｋ公司提供，β－ａｃｔｉｎ一抗与ＥＧＦＲ一抗购自武汉Ｂｏｓｔｅｒ公司，人ＮＰＣ细胞株ＣＮＥ－１、ＣＮＥ－２、ＨＯＮＥ－１、Ｃ－６６６、ＳＵＮＥ－１、５－８Ｆ以及ＨＮＥ－１由广州博川生物科技有限公司提供。采用ＲＰＭＩ １６４０培养液。２ ８５
鼻咽癌的分类法
鼻咽癌是原发于鼻咽部的恶性肿瘤。在我国常见，发病率以广东省最高，有“广东癌” 之称。男女病人之比例约为 3：1。国内所见最小年龄为 3 岁，最大为 86 岁，各个年龄组都 可发病，而大多数在 40-60 岁之间。
鼻咽癌的组织学分类
1.WHO 分类
1978 年，WHO 将鼻咽癌分为 3 型：角化鳞状细胞癌；非角化鳞状细胞癌；未分化癌。 1991 年修订后的 WHO 将鼻咽癌分为 2 型：角化鳞状细胞癌；非角化癌（分化型；未分化型）。 其间最重要的区别在于是否存在明显的角化证据。前者角化明显，多见于老年人，与 EB 病 毒感染关系不密切。后者占鼻咽癌大多数，无明显角化，它们（尤其是未分化型）与 EB 病 毒感染密切相关。在非角化癌中，分化型之癌细胞境界清楚，呈多层或铺砌状排列，而未分 化型之癌细胞境界不清，呈合体状，有些则呈梭形。非角化癌（尤其是未分化型）常见丰富 的淋巴细胞浸润。
2.国内分类
国内较权威的分类将鼻咽癌分为：原位癌、浸润癌两大类。而浸润癌则又包括 5 个亚 型：微小浸润癌、鳞状细胞癌（高、中、低分化）、腺癌（高、中、低分化）、泡状核细胞 癌、未分化癌。此种分类常被应用于国内病理诊断中。
NPC 的形态一般分为四种类型：
①给节型：肿瘤呈结节状或肿块状，是最常见的类型。
②菜花型；肿瘤呈菜花状，血管丰富而易出血。
③溃疡型；肿瘤边缘隆起、中央常坏死。
④粘膜下浸润型；肿瘤向腔内突起，但表面常有正常的粘膜组织覆盖。
治疗鼻咽癌的方法鼻咽癌的病理表现及症状？ 【临床表现】
(一)回吸性涕血 早期可有出血症状 表现为吸鼻后痰中带血或擤鼻时涕中带血 早
各类鼻咽癌细胞株特性 及来源 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]
各类鼻咽癌细胞株特性及来源 CNE1为鼻咽高分化鳞状细胞癌细胞系;CNE2、HNE1、HNE2、HNE3、HONE1为鼻咽低分 化鳞状细胞癌细胞系;5一8F为鼻咽低分化鳞状细胞癌,细胞系SUNE一1亚株,具有高转移、高成瘤能力;6- 10B为鼻咽低分化鳞状细胞癌细胞系SUNE-1亚株,具有高成瘤潜能, 不转移特性。C666-1为长期携带EB病毒基因的低分化鼻咽癌细胞株;HK-1为携带EB病毒基因的高分化鼻咽癌细胞株. NP69为永生化鼻咽上皮细胞系,于1XKsFM(keratinoeyte serum-free medium，KSFM)培养、饱和湿度条件下培养,呈现鳞状上皮样、贴壁生长,具有正常鼻咽上皮基中,37℃、5%CO 2 的特性。 CNE11 癌组织来源 病人王某某，女, 58 岁，, 籍贯吉林省,，中国医学科学院日坛医院住院号：年8月13日患者因头痛耳鸣、鼻衄等症状来院就诊。临床检查鼻咽部有菜花样肿物, 肿瘤已侵犯颅底和颅神经( Ⅲ, Ⅳ , ⅨⅫ) , 双颈淋巴结转移, 诊断为鼻咽癌。X 光诊断为鼻咽后壁软组织肿物符合鼻咽癌, 颅底象见左侧翼状突外板可疑骨质破坏,鼻咽部肿物作活检, 病理诊断为高分化鳞癌。 培养过程 在第12代时(培养后的6个月)，在上皮样细胞培养中发现有少量梭形细胞。在有的培 养瓶中, 梭形细胞逐渐增加。在接种少量细胞的培养瓶中,有的全为上皮样细胞, 有的全
为梭形细胞。选择全为上皮样的细胞传代, 称CNE细胞株；全为梭形的细胞传代, 称CNF细胞株。CNE细胞株容易形成空泡，不传代的老细胞, 在显微镜下可见到有些细胞的胞浆突出, 然后脱落成死细胞, 还有多核巨细胞。在这二株细胞,特别是CNF细胞的单层或多层细胞上有很多圆形细胞, 核大,浆少。在培养液中也有大量圆的脱落细胞。将培养液中的悬浮细胞接种于培养瓶,细胞仍能贴瓶, 生长出原来的上皮样细胞或梭形细胞。将CNE , CNF 细胞和这二株细胞的脱落细胞培养成单层后, 不传代, 每周换液二次, 继续培养7 个月,未能得到类淋巴母细胞株，在培养过程中未见到肿瘤组织培养中常见到的成纤维细胞生长。 特性 CNE-22 组织来源和培养方法 组织取自鼻咽癌( Ⅳ期) 患者, 林XX,63岁, 男性, 广东籍, 活检组织病理检查为慢性鼻咽炎,但同时负压吸引的鼻咽脱落细胞为低分化鳞状细胞癌(图1). 病人血清的E B 病毒抗体和鼻咽脱落细胞的EBNA检测，病人血清的各种抗EB病毒抗体的滴度分别为: VCA/IgG 1: 320 , EA IgG 1: 160, VCA/IgA 1: 40, EA/IgA<1 : 5 , 抗EBNA抗体为1:160。鼻咽脱落细胞中发现成团的癌细胞呈EBNA阳性 细胞株的EB病毒抗原 用抗补体免疫荧光试验检查CNE- 2细胞中各种EB病毒抗原。体外培养第3代细胞可见EB NA阳性, 胞核呈颗粒状明亮的荧光,细胞传至第11代后进行多次检查, EBNA均呈阴性。