薄层层析通用显色剂
1 通用试剂
(1) 重络酸钾-硫酸:检查一般有机物.
喷洒剂:5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中.
薄层检查:喷洒后加热到150℃至班点出现
(2) 荧光素-溴:检查不饱和化合物
喷洒剂:0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中
溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液
喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检
查荧光,荧光素与溴化和成曙红(Eosin)(无萤光),而不饱和化合物则成溴加成物,
保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.
(3) 碘:检查一般有机物.
方法:a 层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑点。
b 层析谱放碘蒸气中5分钟（或喷5％碘的氯仿溶液）取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后，喷1％淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。
(4)硫酸：通用
喷洒剂：5％的浓硫酸乙醇溶液，或15％浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸－醋酸（1：1）
喷洒后处理：空气中干燥15分钟，再热至110℃直至出现颜色或荧光。
(5)硝酸银－氢氧化铵（Tollen-Zaffaroni）试剂：检查还原性物质。
溶液I : 0.1%N硝酸银; 溶液II: 5N氢氧化铵
喷洒剂: I和II以1:5混合(临用前混合)
喷洒后处理: 105℃加热5~10分钟,至深黑色斑点出现.
(6)磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体
喷洒剂: 5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液
喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现.
沉淀试剂: 1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性.
2 生物碱
(7)硫酸: 检查生物碱及含碘化合物
喷洒剂: 0.1克硫酸?混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清.
喷洒后处理: 110℃加热数分钟至斑点出现.
(8)碘化铋钾(Dragendorff)试剂:检查生物碱及其他含氟化合物.
溶液I: 0.85克次硝酸铋溶于10毫升冰醋酸40毫升水中
溶剂II: 8克碘化钾溶于20毫升水中.
制备液I+II,等体积混合.可用于棕色瓶中保存较长时间,一般制备液可作沉淀试剂用.
喷洒液: 制备液1毫升与2毫升醋酸,10毫升水混合即得
(9).碘化汞钾(Mayer)试剂: 检查生物碱.
制备液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化钾各溶于20毫升水中,等体积混合并用水稀释至1000毫升.
喷洒液: 制备液加1/10体积的17%盐酸.
喷洒后处理: 观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出.
(10) ?酸纳-浓硫酸(Mandelin)试剂:检查生物碱.
1%>酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色.
(11)碘－碘化钾(Wagner)试剂:检查生物碱.
1克碘及10克碘化钾,溶于50毫升水中,加热,加2毫升醋酸,再用水稀释至100毫升.
可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.
3 酚类,鞣质
(12)三氯化铁:检查酚类及??酸.
喷洒剂:1~5%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.??酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点.
(13)铁氰化钾-三氯化钾:检查酚类,芳香胺类及还原性物质.
喷洒剂: 1%铁氰化钾水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合.
喷洒后处理: 喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷2N盐酸,能使颜色加深,纸谱可用稀盐酸洗去喷洒液.
(14) 4-胺基安替比林-铁氰化钾(Emerson反应): 检查酚类.
喷洒剂: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;
II. 8%铁氰化钾水溶液.
或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液
方法: 先喷洒I,再喷洒II,即显色,或再放入密闭缸中,缸内放25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色.
(15) 对氨基苯磺酸,重氮盐(Pauly试剂): 检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物.
喷洒剂: 4.5克对氨基苯磺酸,加热溶于45毫升12N盐酸中,用水稀释至500毫升,取10毫升稀释液用冰冷却,加10毫升冷4.5%亚硝酸钠水溶液,0℃放15分钟(此试剂于0℃可保存3天),用前加等体积1%碳酸钠水溶液.
一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.
(16) 对甲苯磺酸: 检查甾体,黄酮,鞣质.
喷洒剂: 20%对甲苯磺酸氯仿溶液.
喷洒后处理: 100℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点.
4 含氧杂环及蒽醌类*
(17) 三氯化铝: 检查黄酮体.
喷洒1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光
(18)碱式醋酸铅: 检查黄酮体.
喷洒剂: 饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液.
于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.
(19)醋酸镁: 检查蒽醌甙,甙元及黄酮体
喷洒剂: 0.5%醋酸镁甲醇溶液
方法: 90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点.
(20)氢氧化钾: 检查香豆素,蒽醌甙及甙元
喷洒剂: 5~10%氢氧化钾的甲醇溶液.
于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点.
5 萜类,甾体
(21) 三氯化锑(Carr-Price试剂): 检查甾体,萜类,皂类.
喷洒剂: 25克三氯化锑溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液). 喷洒后处理: 100℃加热5分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光.
(22) 五氯化锑: 检查甾体,萜类,皂甙.
喷洒剂: 五氯化锑-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鲜配制.
喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示.
(23)香兰醛-硫酸: 检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油.
喷洒剂: 1克香兰素溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香兰醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中.
喷洒后处理: 室温或120℃加热观察显色斑点.
(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.试剂): 检查? Azulene 及?前体Proazulene.
喷洒剂: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存数月)
?:烃室温即成蓝紫色斑点,>前体于80℃加热10分钟出现蓝紫色斑点.
(25) 氯胺T－三氯醋酸: 检查强心甙.
喷洒剂: I. 3%氯仿T水溶液新鲜制备.
II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存数天).
10毫升I加40毫升II,用前混合.
喷洒后处理: 110℃加热7分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光. (26) 亚硝酸基铁氰化钠-氢氧化钠(Legal试剂): 检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲基,常用于强心甙
喷洒剂: 1克亚硝基铁氰化钠溶于100毫升2N氢氧化钠-乙醇(1:1)的水溶液.
显红色或紫色斑点.
(27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal试剂): 检查强心甙,α,β-不饱和内酯.
喷洒剂: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氢氧化钾50毫升.
强心甙呈紫红色斑点.
6 糖类
(28) 邻苯二甲基苯胺: 检查还原糖.
喷洒剂: 0.93克苯氨,1.66克邻苯二甲酸溶于100毫升水饱和的正丁醇中.
喷洒后处理: 105℃加热10分钟.
(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：检查还原糖及其他还原物质。溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液；溶液II：1N氢氧化钠。
喷洒液：I，II，临用前等体积混合。
喷洒后处理：100℃加热5～10分钟，得红色斑点。
(30) Keller-Kiliani试剂：检查α－去氧糖，常用于强心甙。
试液：100毫升冰醋酸加三氯化铁试液0.5毫升混合均匀.
试样1毫克加试液2毫克溶解后,沿试官管壁滴入浓硫酸2毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部呈蓝色.
(31) 1,3-二羟基萘-磷酸: 检查糖类.
喷洒液: 0.2%1,3-二羟基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,与10毫升85%磷酸混合.
(32) 费林溶液(Fehling): 检查还原糖.
溶液I: 69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中.
上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合.
7 氨基酸
(33) 茚三酮: 检查氨基酸及氨基糖.
喷洒剂: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中).
喷洒后处理: 110℃加热至斑点出现.
(34) 吲哚醌: 检查氨基酸和一些肽.
喷洒剂: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.
喷洒后处理: 100~110℃加热10分钟.
(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin试剂): 检查氨基酸.
喷洒剂: 新鲜制备0.02克1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于100毫升5%碳酸钠中.
喷洒后处理: 室温放于,不同氨基酸出现不同颜色.
8 有机酸
(36) 酸碱指示剂: 检查有机酸.
喷洒剂: 0.05%溴酚蓝(或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液.
(37) 氧化还原显色剂: 检查有机酸.
喷洒剂: I. 0.075%溴甲酚绿及0.025%溴酚蓝的无水乙醇液.
II. 0.5%高锰酸钾及1%碳酸钠.10H2O的蒸馏水液.临用前,取I和II按1:1混合后喷酒.
喷酒后处理: 稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色. (38) ??? (Acridine): 检查酸.
喷洒剂: 0.005%的??乙醇溶剂.
紫外线分析灯下呈黄色荧光.
(39) 芳香胺-还原糖: 检查酸.
喷洒剂: 芳香胺(如苯氨5克)和还原糖(如木质糖5克)溶于50%含水乙醇中.
喷洒后处理: 125~130℃加热出现棕色斑点.
氧化苦参碱的提取和鉴定
中药苦参是豆科植物苦参(Sophors Flavescens Ait)的干燥根,味苦,性寒,有清热燥湿,杀虫等作用.临床上用于治疗痢病,黄胆和皮肤瘙痒症.近年还发现具有抗肿瘤,升白,抗病毒性肝炎等药理作用,苦参中主要含生物碱,此外还有黄铜类成分. 一, 苦参中主要已知生物碱的结构和性质
1.氧化苦参碱（oxymarrine）C12H24N2O2，白色棱晶，易溶于水，甲醇，乙
醇，氯仿，不溶于乙醚，苯。溶点：207～208℃（不含结晶水）162～163℃（含一个结晶水）77～78℃（含多个结晶水）结晶水可在145～150℃／0。002mmHg 下除去，可于许多金属离子如Fe2＋Cu2+ Cr3+等生成沉淀，［α］？？＋47.7℃(乙醇).
2.苦参碱(matrine)C15H24N2O在轻石油醚中结晶时，由于温度等条件不同，可以得到αβδ三种结晶（溶点分别为76℃87℃84℃）和一种流体即γ型。通常室温下结晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。［α］？？＋39.11[乙醇]
3.脱氢苦参碱(槐果碱)（sophocarpine）C15H24N2O白色棱晶。溶点80～81℃，易溶于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。［α］？-29.44(乙醇)
4.槐定(sophoridine)C15H24N2O白色棱晶，溶点106～108℃，为苦参碱的一种空间异构体。
二．实验目的与要求
（1）通过苦参生物碱的提取掌握用渗滤法和离子交换法提取生物碱的方法。（2）掌握沙氏提取器的使用方法。
（3）掌握氧化铝吸附薄层层离法和柱层层离法鉴定和分离生物碱的方法。三．原理
氧化苦参碱为喹诺里西汀类生物碱，叔胺氮氧化合物与酸成盐溶于水与非生物碱分开，提取的生物碱盐的阳离子部分与H+型树脂发生交换生物碱吸附在柱上，吸附有生物碱的树脂，碱化呈游离生物碱，可被氯仿等有机溶剂提取。
R-SO3-Na+ ＋H+CL- ——>R-SO3-H+ + NaCL
SO3Na + H2O
生物碱
四. 实验方法.
1 酸水提取和离子交换
（1）渗漉法
取苦参碱400克,加入适量0.5%(g/v)的盐酸湿润后放置一小时，装入渗滤液的PH值及生物碱反应，使渗滤液通过离子交换脂柱，待经过树脂柱的滤液生物碱反应或微弱的反应时，停止交换，将树脂倒入烧杯中，酮蒸馏水洗涤几次，滤干，
树脂放入搪瓷盘中自然晾干。
（2）浸提法
300克？？0.5HCL(g/v) 6倍量浸泡48小时，浸出浸液，。。在处理1～2次，2次浸液全体合并。
2 总生物碱的洗脱
将晾干的树脂放入烧杯中，加14％氨水，搅匀，使温度适宜（树脂充分膨胀，但又无过剩的水）约用氨水30～60毫升，静置20分钟后，装入沙氏提取器中，用400毫升95％的乙醇回流洗脱4～5小时（或用氯仿回流提取5～8小时）回收溶剂至干，所得浸膏用70～80毫升氯仿溶解，并转入分液漏斗，充分静置后，弃掉上层油状物，过滤氯酚溶液后用无水硫酸钠干燥，回收氯仿至干，残留物用2～3倍量丙酮处理，即析出固体粉末，放置，过滤，得生物碱粗品，丙酮重结晶一次得浅黄色产品。
3 苦参生物碱的氧化铝薄层鉴定。
样品：氧化苦参碱标准品，粗品，母液
溶剂系统：氯仿：甲醇＝19：1（二次展开）
石油醚：乙醚：甲醇＝9：9：1
显色剂：改良碘化铋钾（改良Dragendorff）
4 氧化苦参碱的分离与纯制
（1）取0.2克氧化苦参碱粗品用少量氧化铝搅伴,30克氧化铝(80~120目,I~III)装柱(1＊45),先加30毫升氯仿洗脱,再用氯仿和甲醇(99:1)混合溶剂洗脱.速度
控制在1毫升/分左右,每10毫升收集一份,经薄层检识,将氧化苦参碱的流份合并,回收溶剂至干,用少量丙酮溶解,放置吸晶,得氧化苦参碱纯品,薄层检识后,干燥,侧溶点.
（2）苦参总碱0.1克进行低压柱层析
吸附剂:薄层用硅胶15克(已用NH4OH减活)
洗脱剂:CHCL3 50毫升,CHCL3-MeOH(98:2)100毫升,(95:5)100毫
升,MeOH100毫升
流速1毫升/分10毫升收集一份.
5. 氧化苦参碱的还原
取氧化苦参碱粗品1.0克,溶于15毫升10%盐酸水溶液中,放入1.0克锌粉,室温放置,不时摇动,放置24小时后过滤,浓度调到PH=9~10,用500毫升乙醚分多次提取.合并乙醚溶液,无水硫酸钠干燥过夜,回收乙醚淡黄色粘稠体放置于冰箱中,得浅黄色固体,石油醚重结晶后得白色结晶,测熔点.
薄层检识
氧化铝干板(120目以上)
样品:苦参碱标准品,氧化苦参碱标准品,苦参碱
溶剂系统:氯仿:甲醇=8:2
显色剂:改良碘化铋钾溶液
附:阳离子交换树脂的处理
(1) 预处理及转型:
将100克聚苯乙烯磺酸钠型树脂(交联度1~7%粒度范围16~50目)放入烧杯中,用80℃蒸馏水温热使之充分膨胀1小时,后加入2N盐酸300毫升洗,水洗至PH5~7,5%NaOH浸泡1H???????浸泡过夜(注意开始要搅动几次).次日把树脂装入层离柱,并使全部酸液流过树脂柱,用蒸馏水洗至中性至无氯离子反应为止,可用于无生物碱交换.
(2) 再生
将已洗去生物碱的树脂,置渗滤筒中,加2倍的2N盐酸浸泡过夜,次日树脂上面的盐酸慢慢流过树脂,用水洗至中性,然后用5%的氢氧化钠浸泡1~2小时,时常搅伴,倾倒出上层碱液,用馏水洗至中性,在空气中晾干,留作下一次使用.
四. 思考题
1. 酸水法及离子交换树脂法提取分离生物碱的原理.
2. 应如何检查(1)渗滤液中是否含有生物碱?
(2)渗滤液中生物碱是否可以被交换在树脂上?
(3)离子交换树脂是否已达到饱和?
3. 氧化铝薄层层析的原理是什么?适用于什么成分的分离鉴定?
4. 当用硅胶薄层板层析时应如何操作?
五. 参考文献.
1. 江苏中医学院:中药大辞典上海人民出版社1977年
2. 张宁芳: 中草药通讯1977(1):38 1977(2):39. 1977
3. 中国医科院第五研究室: 放射医学1977(1):1.1977
4. 白世泽等: 中草药13(4);8.1982
5. Shigenobu Okuda : Chem Pharm Bull 13:485.1965
芦丁的提取,分离及鉴定
芦丁(Rutin)亦称芸香苷（Rstinoside），广泛存在于植物界中，其中以槐米和荞麦叶的含量较高，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物，Sophora japonica的花蕾，自古作为止血药。槐花米中所含主要成分芸香苷有减少毛细血管的通透性作用，临床上主要为防止高血压病的辅助治疗药物。此外，芦丁对于放射性伤害所引起的出血症亦有一定作用。一．实验的目的和要求
1．以芦丁为实例学习黄酮类成分的提取分离方法。
2．掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，甙元和糖部分的鉴定方法。
3．通过？皮素紫外吸收光谱的测定及应用化学位移确定黄酮类烃基位量的方法。
4．通过？皮素与其五乙酰化合物的红外光谱测定该化合物的功能团并与标准谱对照。
二．槐花米中已知主要成分的理化性质：
槐花米中芦丁的含量可高达20％，另含少量的皂苷，皂苷水解后，可得到桦皮醇（Betulin C30H50O2）及槐二醇（Sophoradiol，C30H50O2）。
1．芦丁（芸香苷Rutin）
本品为淡黄色细小针状结晶，C27H36O16。3H2O，MP为177～178℃，无水物MP190℃（不完全），214～215℃发泡分解。芦丁溶于热水（1：200），难溶于冷水（1：8000）；溶于热乙醇（1：7），冷乙醇（1：100）；热乙醇（1：30）。冷乙醇（1：300），难溶于乙酸乙酯，丙酮，不溶于苯，氯仿，乙醚，及石油醚等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
2．？皮素（Quercettin）
即云香苷苷元，为黄色结晶，C13H10O7，MP313～314℃，无水溶点316℃。？
皮素溶于热乙醇（1：23），冷乙醇（1：300）。可溶于冰醋酸，吡啶，乙酸乙酯，丙酮等溶剂。不溶于石油醚，苯，乙醚，氯仿和水中。
3．皂苷
易溶于水，吡啶，能溶于甲醇。经酸水解后得桦皮醇及槐二醇，均溶于苯，乙醚，氯仿，丙酮，乙酸乙酯，乙醇，甲醇。
三．自槐花米中提取芦丁：
1．提取方法：
方法1 ：取槐花米40克（完整），置于100毫升烧杯中，用冷水快速清洗去泥沙等杂质沥干水，加0.4％硼砂水沸熔液400毫升,直火加热微沸,即时侧PH 值, 当PH数值改变成微酸性时,以石灰乳调至PH8,继续加热微沸30分钟,随时补充水份,同时保持PH8,静置约5~10分钟,倾出上清液,用尼龙布过滤, 重复提取一次,合并滤液,将滤液用盐酸调至PH3左右,再加泥泊金,放置过夜,抽滤用水洗
3~4次,空气自然干燥得粗芦丁.
方法2：取槐花米20 克,置于500毫升圆底烧瓶中,加乙醇150毫升,加热回流1小时,稍冷后抽滤,滤渣再加乙醇100毫升回流1小时,合并乙醇提取液,放冷,析出絮状沉淀.过滤,滤液浓缩至50毫升,放置过夜,析出结晶,滤去母液继续浓缩一半,放置又析出结晶.合并结晶,用乙醚30~50毫升分次洗去脂溶性成分(油脂, 叶绿素等),再用丙酮10毫升洗涤一次,得粗芦丁.
2．重结晶方法
方法一：取粗芦丁2克，加乙醇50～60毫升加热溶解，呈热抽滤，将滤液浓缩至20～30毫升，放置，析出结晶，母液再浓缩一半，又析出结晶。合并结晶再用乙醇重结晶一次。
方法二：取粗芦丁2克，加去离子水或蒸馏水400毫升，加热煮沸，趁热煮沸，趁热抽滤（以滑石粉助滤）；放置过夜析晶（或放冷析晶）。抽滤。得精制芦丁。思考题：提取芦丁工艺中影响产量和质量的因素是什么？为什么药加硼砂水溶液？
记录：粗芦丁得率多少？精制芦丁得率多少？溶点？
3．芦丁的水解
取芦丁1克，加2％H2SO4 80毫升，小火加热微沸回流30分钟至1小时。开
始加热10分钟为澄清溶液，逐渐析出黄色小针状结晶，即？皮素，抽滤取结晶（保留滤液20毫升，以检查其中所含单糖），加50％乙醇（按1克90毫升量）加热回流使？皮素粗晶溶解，趁热抽滤，放置结晶，抽滤得精制品，在减压下110℃干燥可得？皮素无水物。测熔点，进行纸层析法鉴定。
思考题：芦丁水解不完全时将产生什么结果？
记录：芦丁的水解产物是什么？主要产物得率？溶点？
四．芦丁，？皮素，糖及？皮素衍生物的鉴定：
1．纸层析：
新华一号层析滤纸
样品：自制芦丁，？皮素
对照品：芦丁，？皮素
展开剂：（1）正丁醇－醋酸－水（4：1：5上层或4：1：1）
（2）25％醋酸水溶液
（3）85％醋酸水溶液
显色：（1）可见光下观察，再在紫外灯下观察
（2）经氨气熏后再观察
（3）喷三氯化铝试剂后再观察
2．芦丁和？皮素的聚酰胺薄层鉴定：
样品：同纸层析
展开剂：乙醇－水（7：3）
显色：同纸层析
3．糖的检出——纸层析法
取上述滤出？皮素时保留的水解滤液200毫升，加Ba(OH)2细粉（约2.ǚ克）中和至PH7,滤除生成的BaSO4沉淀(可用滑石粉助滤),滤液浓缩至1毫升,供纸层析法点样用.
展开剂：正丁醇－醋酸－水（4：1：5上层或4：1：1）
对照品：葡萄糖，鼠李糖水溶液
显色剂：苯氨邻苯二甲酸试剂喷后，105℃烘10分钟，显棕色或棕红色斑点。4．红外光谱测定：
5．？皮素五甲醚的制备：
取？皮素结晶400Mg置于150毫升三颈瓶中，加50毫升无水丙酮，装上电动搅拌器，冷凝管及温度计，加热回流搅拌，每间隔一适当时间加入无水碳酸钾0.2 克和硫酸二甲醇0.2毫升,大约1.5小时后加完4克无水碳酸二甲酮,继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为止,约需4~5小时,停止加热,取下烧杯, 反应液经过滤,沉淀用热丙酮洗涤数次,合并系,滤液,蒸馏回收部分丙酮,留存10~15毫升,放置,渐渐析出无色结晶,表示过?的硫酸二甲酯存在,应加5%NaOH数滴,振摇使硫酸二甲酯水解,此时又可析出一小部分结晶(检查所析出结晶对1%FeCL3的反应,甲基化完全者呈负反应),合并,以乙醇重结晶,得?皮素五甲醚
(MP152~153℃).甲基化不完全者时对三氯化铁出呈正反应,主要产品为3,7,3”,4”甲醚,MP161~161.5℃.
6．？皮素的降解
取？皮素50Mg，置于50毫升的圆底烧瓶中，加水50毫升，乙醇6毫升，KOH？，置水浴上加热回流10小时，蒸去乙醇，加水50毫升溶解，用稀盐酸酸化至PH2～3，用乙醚萃取3次，合并乙醚液，回收乙醚，蒸滞小体积供薄层层析点样用。7．？皮素降解产物的薄层层析：
硅胶－CMC－Na薄层
对照品：原儿茶酸（Protocatechuic acid），间苯三酚9Phlorogluoinol)。
展开剂：氯仿－丙酮－醋酸（8：2：0.5）
显色剂：三氯化铁试剂
思考题：
（1）芦丁和？皮素用不同展开剂系统展开层将出现什么结果？为什么？
（2）芦丁和？皮素聚酰胺薄层将出现什么结果？为什么？
（3）试比较？皮素红外光谱图和五酰基？皮素红外光谱图的差异。
记录：
（1）芦丁和？皮素的纸层析，聚酰胺薄层层析结果。
（2）糖的检出纸层析结果。
8．紫外吸收光谱测定？皮素
（一）原理
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该化合物烃基的额位置。
（二）试剂配制
1．无水乙醇：用分析纯的甲醇，加入10％CaO，放置24小时后并加热回流1小时，回流时冷凝管顶端应安装CaCL2干燥管，然后蒸馏得无水甲醇。
2．甲醇钠溶液：取0.25克金属钠,剪碎,小心的加入无水甲醇50毫升中,放置24小时后全溶.
3．氢氧化钠溶液：取2.5克无水三氯化铝,加10毫升水溶解.
4．三氯化铝溶液：2.5克无水三氯化铝(呈黄绿色)小心的加入无水甲醇50毫升中,放置24小时后全溶.
5．醋酸钠：用水粉状醋酸钠。
6．硼酸饱和液：将无水硼酸加入适量无水甲醇，制成饱和溶液。
依照上述方法制备的贮备液可放置6个月。
(三)．测定方法：
１．酮烃基位置的测定：
精密称取黄酮样品（？皮素）约１.２mg，用无水甲醇溶解，在稀释至100毫升。
（1）黄酮光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯（1CM）中，在200～300nm 波段内进行扫描。重测一次，视光谱的再现性。
（2）氢氧化钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入氢氧化钠溶液2～3滴立即测定。放置5分钟后，在进行测定。
（3）甲醇钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入甲醇钠溶液5～7滴后，立即测定。放置5分钟后，再进行测定。
（4）三氯化铝光谱：在盛有约3毫升样品溶液的石英杯中，加入三氯化铝溶液6滴，放置1分钟后进行测定。测定后，加入3滴盐酸溶液（浓盐酸：水＝1：1），再进行测定。
（5）醋酸钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀；杯底剩有2mm的醋酸钠后，二分内进行测定。
（三）测定结果：
？皮素加位移试剂结界表（）
加入试剂编号II峰I峰位移值羟基
无水甲醇1 256 371
NaOH 2 430 I峰△59 4‘－OH
NaOH 5‘ 2‘ 分解分解3，4‘－OH
MeONa 3 416 I峰△45 3－OH
MeONa5 3‘ 分解分解3，4‘－OH
ALCL 4 270 450 I峰△79 3，5及3‘，4‘－OH
ALCL，／HCL 4‘ 265 425 I峰△54 3，4‘－OH
NaAc 5 277 387 II峰△21 7－OH
NaOAc／H3BO3 6 259 385 I峰△14 3，4‘－OH
克分子吸收系数的测定：根据已测定的黄酮光谱，测量吸收峰的波长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后取样品溶液约3毫升，置于1cm的石英杯中，用紫外光谱仪，仔细测量在上述波长范围内的各波长的吸收值，反复测定3次。
记录：
（1）位移测定结果
（2）测定克分子吸收系数皂吸收峰前后20nm波长范围内，依次测定波长和吸收值，用方格纸作图，精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记录测定结果。
薄层层析应用
一.定性点滴反应
1.样品
(1).氨基酸混合液
(2).薄荷油
(3).芦丁甲醇溶液
(4)甘草次酸乙醇液
(5)原儿茶酸乙醇液
(6)小檗碱乙醇液
2.检出试剂
(1).三氯化铁1%乙醇溶液
(2).三氯化铝1%乙醇溶液
(3).茚三酮0.2%乙醇溶液
(4).碘化铋钾(见附录I)
(5).*香草醛-硫酸0.5%硫酸-乙醇(4:1)溶液
(6)??酸5%乙醇溶液.
3.实验方法.
取硅胶CMC-Na薄层板1~2块,用软铅笔按下图划线,构成方格,将各样品先滴加于相应的格子中,再将各试剂分别自空白其5逐点点加试剂,观察并记录反应变化.具腐蚀性试剂也可用空白磁板.
(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7)
空白
(1)
(2)
(3)
(4)
*香草醛-硫酸为1克香草醛(Vanillin)溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香草醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中,喷洒后用电吹风加热至120℃,观察颜色变化.
二.鉴别中草药中的化学成分
1. 单向展层
例一. （1）硅胶CMC-Na 薄层(载玻片板)
(2) 样品薄荷油,薄荷脑的0.1%乙醇溶液
（3）展开剂①石油醚
②乙酸乙酯
③石油醚－乙酸乙酯（85：15）
（4）显色剂香草醛－硫酸（压板法）
点样展层后，稍干，后扣在一块同样大小并涂布一层（不可多加，多了会使斑点扩散）显色剂的玻璃板上，压紧稍后一下，取除玻璃片，使薄层面向上，观察层面向上，观察颜色变化。由结果判断何种展开剂最适合分离薄荷油？
例二．（1）硅胶CMC—Na薄层（载玻片板）
（2）样品四季青提取物
原儿茶碱（Protocatechuic Acid）1％乙醇溶液
原儿茶碱（Protocatechuic Acid）1％乙醇溶液
（3）展开剂①石油醚
②氯仿
③甲醇
④氯仿：丙酮（8：2）
⑤氯仿：丙酮：甲醇：醋酸（7：2：0.5：0.5）
(4) 显色剂三氯化铁1%乙醇溶液
由展层结果判断选用何种展开剂为最合适?展开剂⑤中为何药加醋酸。
2 双向展层
（1）硅胶CMC-Na薄层板（8＊8cm），不活化。在薄层板距两边各1.5cm交点的地方点样品。
（2）样品？？氨基酸（精氨酸，脯氨酸，亮氨酸的1％水溶液）
（3）展开剂：第I向为正丁醇－醋酸－水（4：1：1）（V/V）
第II向为苯酚－水（75：25）（W/W）（苯酚需要蒸后使用）
第一向展开剂展层后，用热风吹使溶剂挥发，再将样品已展层的一向作起始线，在第II向溶剂中展开。
（4）显色剂：0.2％茚三酮乙醇溶剂，喷洒后，以电吹风见加热（110℃）显色，观察各斑点的颜色变化。最后喷洒2％硫酸》水溶液固色。
3．硝酸银－硅胶薄层
（1）硝酸银硅胶悬浮浆的制备（2.5％AgNO3制硅胶薄层）：用20克硅胶G 和55毫升水中含5g硝酸银（8％）的溶液调制成，阿波常法捕薄层板（4＊7cm，
约30块）。避光阴干后于105℃活化半小时避光储存备用。
（2）样品：1，龙脑2，香橙醇3，牛龙牛儿醇
（3）展开剂：10％的硫酸乙醇液二氮甲烷：氯仿：乙酸乙酯：正丁醇＝45：45：4.5：4.5
（4）显色点：110℃加热
三．薄层板上原位化学反应
本法使直接在薄层板上进行的化学反应，又称原位反应薄层。先将样品滴加在薄层板上，然后滴上适当的溶剂展开反应物。有时先在试官内进行反应，而后在薄层板上进行层析检识。根据原化合物的Rf值再联系产物的层析行为，Rf值，可供鉴别一个化合物或者提供鉴定一个化合物有价值的线索。应用这些特殊反应只消耗未知物极微量的样品却提供了有关结构鉴别的信息，操作简便。如氧化，还原，脱水，水解，卤代，酶的催化作用，酯化，硝化，衍生物的制备，混合反应等均可在薄层板上进行。例：
１．酯化反应
（1）取原儿茶酸乙醇溶液，在一薄层板上点两个相同的样点，其中一份样点的原点上，再点加试剂：醋酸－吡啶（3：1），待溶剂挥发后，再重复点加试剂几次，干后，以氯仿－丙酮（8：2）展开。（用点蒸气熏显色，可见其中点加醋酐吡啶试剂的样点已展来在前，而未加试剂的样点仍在起始线）。两者Rf值不同的理由是：？
（2）取原儿茶醛乙醇，在同一薄层上点加两个相同的样点，其中一分样点的原点上，在点加酸酐－吡啶（3：1），待试剂挥散后，在重复点加试剂数次，用氯仿－丙酮（8：2）展层。用2，4二硝基苯肼显色，可显示加酰化剂前后样品点有什么变化。
２．成盐反应
取原儿茶醛乙醇溶液，在同一薄层板的起始线上点加2个相同样点，其中一份样点的原点上，再点加10％碳酸氢钠溶液（另一份不加），以氯仿－丙酮－甲醇（8：2：1）展层，并用三氯化铁乙醇溶液喷雾显色，可见其中点加碳酸氢钠的样点Rf值已有变化，未加碱的样点照常展开。为什么？
３．苯氨反应
取原儿茶碱乙醇溶液，在同一薄层上点两个相同的样点，其中一份样点的原点上，在点加2，4二硝基苯肼试剂，给以热风以促使呈腙反应，然后以氯仿－丙酮（8：2）展层，可见出现两个棕红色斑点。在红棕色斑点下，再喷以三氯化铁试剂，又出现紫蓝色斑点。上面的红棕色斑点是原儿茶碱与2，4－二硝基苯肼所形成的胺，下面紫蓝色斑点是剩下的部分未成腙的原儿茶醛。2，4－二硝基苯肼的斑点呈黄色，Rf值最大。
由原位反应的结果判断原来化合物的结构上有何集团特征。并绘制出薄层层析图谱。
4 化合物纯度的检测：
（1）化合物纯度的检查，可采用的方法测溶点，对纯品而言，溶点距1～2℃之间
（2）HPLC法显示一个主降按面积归一法，应.>95％
（3）薄层层析法，按药典规定制备薄层点样100μg 展距17cm 未见杂质斑点，操作同上，只是需配制一定浓度的检测液定量点样。
纸层析的应用
鉴别天然产物中的糖类,氨基酸等极性化学成分常被采用.
多缓冲溶液和碱性纸层析法的应用(原理属分配分离)
一. 混合单糖的PC
(1). 层析滤纸按纤维长丝方向(纵向)切成适当大小的纸条,在一端2cm处用铅笔划一条线为起始线，在起始线上点样，点样斑点的直径小于0.3cm，点间距1～1.5cm。
（2）样品：2.5％葡萄糖鼠李糖混合溶液
（3）展开剂：正丁醇－醋酸－水（4：1：1或4：1：5上层）
（4）显色剂：邻苯二甲酸－苯氨试剂*喷雾后于105℃加热10分钟。呈现桃色或棕色。
记录：贴PC滤纸条
葡萄糖Rf：
鼠李糖Rf：
二．混合氨基酸的PC－阿胶水解液
（1）层析滤纸5*20cm一张，点样同上。
（2）样品：阿胶酸水解液，猪阿胶酸水解液
（3）展开剂：正丁醇：甲醇：水（15：3：2）
（4）显色剂：0.2％茚三酮乙醇液
记录：贴PC滤纸条
比较二种阿胶所含氨基酸是否一样
三．多缓冲液和碱性纸层析法
（一）蒽醌衍生物的分离
＊苯氨－邻苯二甲酸试液为苯氨0.93克和邻苯二甲酸1.66克溶于100毫升正丁醇（用水饱和）中。
（1）缓冲滤纸的制备：取新华滤纸（3*12cm）一张，距下端2cm处划一起始线，向上面每隔1.5cm划一平行线按右图在各条带上图布PH缓冲液和碱液，然后将其夹在两片滤纸中吸至半？使润湿指数为1.5倍）备用。
（2）样品：大黄素（Emodin）大黄素甲醚（Physcion）芦荟大黄素（Aloe-emodin）
大黄酸（Rhein）的氯仿溶液。
（3）点样：每隔2cm点样。
（4）展开剂：氯仿
（5）显色剂：荧光检出
（6）结果：记录图谱，并说明这些化合物的酸度。
［附］PH缓冲液的配置：
PH3：取0.2M磷酸氢二钠溶液4.1ml加0.1M柠檬酸15.89毫升配成。
PH5：取0.2M磷酸氢二钠溶液10.30ml加0.1M柠檬酸9.70毫升配成。
PH8：取0.2M磷酸氢二钠溶液19.45ml加0.1M柠檬酸0.55毫升配成。
PH9.9：取0.1M NaCO3 5ml加0.1M NaHCO3 5毫升配成。
0.2M Na2HPO4 溶液含35.61克／升
0.1M柠檬酸溶液含21.01克／升
薄层层析溶剂/展开剂/显色剂的选择配制及注意事 项 摘要： 薄层色谱方法总结：使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比(如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V)，或者绝对量(如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇)。其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相(上层或下层)，备用 相关专题薄层层析（TLC）技术薄层色谱方法总结 1.方法原理 (1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 (2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- (诱导) - 偶极相互作用， 氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 2.溶剂 使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比(如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V)，或者绝对量(如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇)。其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相(上层或下层)，备用。 一、溶剂选择规则： 1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。 2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂 3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。 4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。 5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。 6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。 二、展开剂的选择条件： ①对的所需成分有良好的溶解性; ②可使成分间分开; ②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间; ③不与待测组分或吸附剂发生化学反应; ⑤沸点适中，黏度较小; ⑥展开后组分斑点圆且集中; ⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 三、溶剂极性参数表 环已烷:-0.2、石油醚(Ⅰ类，30~60℃)、石油醚(Ⅱ类，60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 1、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入
薄层色谱展开剂与显色剂 展开剂的选择： 一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：< p> Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Eth er, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中，黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
1 用薄层色谱发分离两极性组分，其Rf 的值分别为和，可采取哪种措施改善分离效果 A换用极性较弱的展开剂 B换用活性更强的吸附剂 C换用极性较强的展开剂 D换用活性较差的吸附剂 我选的是C，答案是A。为什么 B ，D 两个选项怎么考虑 解答： 由题意知，Rf 1=，Rf 2 =，这两个组分的Rf值非常接近，即ΔRf=Rf 1 -Rf 2 =值 很小。故要改善分离效果，需要增加ΔRf值。 从理论上讲，改变固定相或展开剂（流动相）的种类都可以改变ΔRf值的大小，但由于薄层色谱的固定相种类有限，而可以用作展开剂的有机溶剂的种类却很多且方便易得，因此通常情况下优先考虑改变展开剂的种类来调整展开剂的极性，以改善分离效果。对于极性组分，换用极性相对较弱的展开剂，此时的展开剂的洗脱能力会下降，则展开的时间也会增加，这样能够增加ΔRf值，从而改善分离效果。换用活性相对较强的吸附剂同样也能使展开剂的洗脱能力下降，但如果吸附剂的活性过强会导致吸附太牢固而无法洗脱。 因此，此题的最佳答案应为A。
（三）吸附薄层色谱条件的选择 根据被测组分的极性大，选择吸附剂的活度要小，流动相极性要大；被测组分的极性小，选择吸附剂的活度要大，流动相极性要小。 1．被分离物质的极性与结构的关系 （1）基本母核相同，基团极性愈大，分子极性愈强；极性基团数目增加，分子极性增强。常见的取代基极性大小顺序：烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<脂类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类<羧酸类。 （2）分子双键愈多，共轭度愈大，吸附性愈大。 （3）空间排列影响极性，如能产生分子内氢键的分子极性下降。 2．吸附剂的活度选择被分离物质的极性大，吸附剂活度要小，以免吸附太牢，不易洗脱；被分离物质的极性小，则吸附剂的活度要大，以免不被吸附，而无法分离。可改变板活化温度和时间来控制吸附剂的活度。 单一溶剂的极性顺序：石油醚<环己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯、甲苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮 <正丙醇<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水。 4．混合溶剂选择的一般规则先用单一的中等极性展开剂试验，得出合适的极性。再改用二元展开剂，调节比例达到预期的极性，得到混合展开剂。目的是通过混合展开剂的极性和溶剂的强度，使各组分具有适宜的Rf值，从而达到良好的分离效率。
Stains for Developing TLC Plates Once a TLC has been developed, it is frequently necessary to aid in the visualization of the components of a reaction mixture. This is true primarily because most organic compounds are colorless. Frequently, the organic compounds of interest contain a chromophore which may be visualized by employing either a short or a long wave UV lamp. These lamps may be found as part of a standard organic chemistry research or teaching lab. Typical examples of functional groups which may be visualized through this method are aromatic groups, α,β-unsaturated carbonyls, and any other compounds containing extensively π-conjugated systems. While exposing these TLC plates to UV light, you will notice that the silica gel will fluoresce, while any organic molecule which absorbs UV light will appear as a dark blue spot. Circling these spots gently with a dull pencil will permit an initial method for visualization. Fortunately, there are a number of permanent or semi-permanent methods for visualization which will not only allow one to see these compounds but also provide a method for determining what functional groups are contained within the molecule. This method is referred to as staining the TLC plate, and experience will allow you to determine what functional groups will appear as what color upon visualization. Following is a listing of the most commonly employed stains, the kind of compounds for which they're usually employed, and a typical recipe. A Note on TLC Plates Although it should be obvious, be sure that the kind of TLC plate you are using is compatible with the stain or the conditions for its development. For instance, the inexpensive plates using a plastic polymer backing cannot be used for stains requiring heat for development. Glass backing is fine for this, but the silica gel is typically not tightly bonded to the glass, and tends to be inadvertantly scraped off very easily; thus, these are not suitable for storage following development. In our group, we use aluminum-backed plates, which are less expensive than glass, are heat-impervious, the silica gel is very tightly bound to the backing, and are so thin that, if desired, a particularly spectacular plate can be taped into your lab notebook. The Stain List Iodine The staining of a TLC plate with iodine vapor is among the oldest methods for the visualization of organic compounds. It is based upon the observation that iodine has a high affinity for both unsaturated and aromatic compounds. Recipe A chamber may be assembled as follows: To 100 mL wide mouth jar (with cap) is added a piece of filter paper and few crystals of iodine. Iodine has a high vapor pressure for a solid and the chamber will rapidly become saturated with iodine vapor. Insert your TLC plate and allow it to remain within the chamber until it develops a
薄层色谱方法总结 1.方法原理 (1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 (2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- （诱导）- 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 2.溶剂 使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。 一、溶剂选择规则： 1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。 2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂 3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。 4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。 5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首 先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。 6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开 的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象 （斑点较“拖”），最好是换溶剂。 二、展开剂的选择条件： ①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开； ②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间； ③不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小； ⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 三、溶剂极性参数表 环已烷:-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 1、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙 醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离； 2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节， 适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离； 3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性 很大的生物碱类化合物的分离。 四、展开剂的选择 物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。 以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。 1、类极性较小的挥发性物质 冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷－醋酸乙酯(3:1)，
碘： 不饱和或者芳香族化合物 配制方法 在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。 或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶 香草醛(香兰素) 广谱 配制方法 15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸 挥发油类可以用硫酸香草醛显色剂，还有高级醇、酚、甾类及精油都可以用它做显色剂。酸香草醛又称硫酸香兰素显色剂，其实是一种广谱性的显色剂，很多一般的物质如有机酸，挥发油，甾体，萜类等都可以显色，除生物碱、三萜或甾体皂甙类显色不明显，可用一些特殊显色剂外，一般都可使用香兰素显色。 二硝基苯肼(DNP) 醛和酮 配制方法：12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇 醛或酮与2，4-二硝基苯肼反应生成黄色、橙色或红色的2，4-硝基苯腙沉淀。2，4-二硝基苯腙的颜色与醛、酮的分子结构有一定的联系，不含共轭双键的醛、酮所形成的腙一般为黄色；和碳碳双键或芳环共轭的醛、酮所形成的腙一般为橙色或红色。 茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 广谱 配制方法 135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀 茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine) 配制方法 茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80) 磷钼酸(PMA) ：广谱配制方法： 10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇 次硝酸铋钾 溶液甲：0.85 g次硝酸铋+ 10 ml冰醋酸+ 40 ml水 溶液乙：8 g碘化钾+ 20 ml水。临用时取甲、乙二液各0.5 ml，加冰醋酸2 ml及水10 ml 混合。 该显色剂主要用来跟踪含氮化合物，浸泡后化合物显示桔红色。（生物碱）
碘： 适用于不饱和或者芳香族化合物 配制方法：在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶 高锰酸钾 适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛 配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3个月 磷钼酸(PMA) 广谱 配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇 紫外灯 适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物 硫酸铈 生物碱 配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液 氯化铁 苯酚类化合物 配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液. 桑色素(羟基黄酮) 广谱, 有荧光活性 配制方法：0.1% 桑色素+甲醇 茚三酮 适用于氨基酸
配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸 二硝基苯肼(DNP) 适用于醛和酮 配制方法：12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL 乙醇 香草醛(香兰素) 广谱 配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸 溴甲酚绿 适用于羧酸，pKa<=5.0 配制方法：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。 钼酸铈 广谱 配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL 浓硫酸 茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 广谱 配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀. 茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine) 配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)
薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 1.仪器与材料 （1）薄层板 按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，G、H表示含或不含石膏黏合剂。F254为在紫外光254nm 波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40μm）和高效薄层板（5～10μm）. 在保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固定相颗粒大小一般要求粒径为10～40μm。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 （2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 （3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 （4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 （5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。 （6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或
经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 2.操作方法 （1）薄层板制备 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110℃活化，置干燥器中备用。 自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水（或加有黏合剂的水溶液）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。 （2）点样除另有规定外，在洁净干燥的环境，用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板上，一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线距底边10～15mm，高效板一般基线离底边8～10mm。圆点状直径一般不大于4mm，高效板一般不大于2mm；接触点样时注意勿损伤薄层表面。条带状宽度一般为5～10mm。高效板条带宽度一般为4～8mm，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜，一般不少于8mm，高效板供试品间隔不少于5mm。 （3）展开将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭。除另有规定外，一般上行展开8～15cm，高效薄层板上
最全的TLC 经验 薄层色谱（TLC ）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。流动相则是一种极性待选的溶剂。在5.301 中以及大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。 根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。极性强的化合物会“粘” 在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。化合物移动的距离大小用Rf值来表达。这是一个位于0?1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。薄层色谱（TLC ）实验步骤： 1）切割薄板。通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形 状进行切割。在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不 要损坏硅胶面）。借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。当整块玻璃 被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。（开始的时候，也许你 会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。） 2）选取合适的溶剂体系。化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。在戊 烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶 剂前端，Rf 值最好在0.15~0.85 之间。虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层 色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。那么，应该选取 哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性（从LLP 中摘录）列于如下：强极性溶剂：甲醇〉乙醇〉异丙醇 中等极性溶剂：乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯 非极性溶剂：环己烷，石油醚，己烷，戊烷 常用混合溶剂： 乙酸乙酯/己烷：常用浓度0~30% 。但有时较难在旋转蒸发仪上完全除去溶剂。乙醚/戊烷体系：浓度为0~40%的比较常用。在旋转蒸发器上非常容易除去。乙醇/己烷或戊烷：对强极性化合物 5~30% 比较合适。 二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%，当其他混合溶剂失败时可以考虑使用。 3）将1~2mL 选定的溶剂体系倒入展开池中，在展开池中放置一大块滤纸。 4）将化合物在标记过的基线处进行点样。我们用的点样器是买来的，此外，点样器也可从加热过的Pasteur吸管上拔下（你可以参照UROP ）。在跟踪反应进行时，一定要点上起始反应物、反应混合物以及两者的混合物。 5）展开：让溶剂向上展开约90%的薄板长度。 6）从展开池中取出薄板并且马上用铅笔标注出溶剂到达的前沿位置。根据这个算Rf数值。7）让薄板上的溶剂挥发掉。 8）用非破坏性技术观察薄板。最好的非破坏性方法就是用紫外灯进行观察。将薄板放在紫外灯下，用铅笔标出所有有紫外活性的点。尽管在5.301 中不用这种方法，但我们将采用另一常用的无损方法--用碘染色法。（你可以参看UROP）。 9）用破坏性方式观测薄板。当化合物没有紫外活性的时候，只能采用这种方法。在 5.301 中，提供了很多非常有用的染色剂。使用染色剂时，将干燥的薄板用镊子夹起并放入染色剂中，确
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚 Stains-for-Developing-TLC-P lates(薄层层析显色剂) Stains for Developing TLC Plates Once a TLC has been developed, it is frequently necessary to aid in the visualization of the components of a reaction mixture. This is true primarily because most organic compounds are colorless. Frequently, the organic compounds of interest contain a chromophore which may be visualized by employing either a short or a long wave UV lamp. These lamps may be found as part of a standard organic chemistry research or teaching lab. Typical examples of functional groups which may be visualized through this method are aromatic groups, α,β-unsaturated carbonyls, and any other compounds containing extensively π-conjugated systems. While exposing these TLC plates to UV light, you will notice that the silica gel will fluoresce, while any organic molecule which absorbs UV light will appear as a dark blue spot. Circling these spots gently with a dull pencil will permit an initial method for visualization. Fortunately, there are a number of permanent or semi-permanent methods for visualization which will not only allow one to see these compounds but also provide a method for determining what functional groups are contained within the molecule. This method is referred to as staining the TLC plate, and experience will allow you to determine what functional groups will appear as what color upon visualization. Following is a listing of the most commonly employed stains, the kind of compounds for which they're usually employed, and a typical recipe. A Note on TLC Plates Although it should be obvious, be sure that the kind of TLC plate you are using is compatible with the stain or the conditions for its development. For instance, the inexpensive plates using a plastic polymer backing cannot be used for stains requiring heat for development. Glass backing is fine for this, but the silica gel is typically not tightly bonded to the glass, and tends to be inadvertantly scraped off very easily; thus, these are not suitable for storage following development. In our group, we use aluminum-backed plates, which are less expensive than glass, are heat-impervious, the silica gel is very tightly bound to the backing, and are so thin that, if desired, a particularly spectacular plate can be taped into your lab notebook. The Stain List Iodine The staining of a TLC plate with iodine vapor is among the oldest methods for the visualization of organic compounds. It is based upon the observation that iodine has a high affinity for both unsaturated and aromatic compounds. Recipe A chamber may be assembled as follows: To 100 mL wide mouth jar (with cap) is added a piece of filter TLC展开剂选择及显色剂的总结(转自中国色谱网) ★ huyuchem(金币+1):谢谢 选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有： Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。 很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。 我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。）分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的Rf截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细分，对于分离未知的化学物质，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！ 溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。 薄层色谱显色剂的配置 ．通用显色剂 ①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液与0.5-1.5mol／L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。 ②0.5％碘的氯仿溶液对很多化合物显黄棕色。 ③中性0.05％高锰酸钾溶液易还原性化合物在淡红背景上显黄 色。 ④碱性高锰酸钾试剂还原性化合物在淡红色背景上显黄色。 溶液I：1％高锰酸钾溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液；溶液I和溶 液Ⅱ等量混合应用。 ⑤酸性高锰酸钾试剂喷1.6％高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注 意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热15～20min。 ⑥酸性重铬酸钾试剂喷5％重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC 烤薄层。 ⑦5％磷钼酸乙醇溶液喷后120o C烘烤，还原性化合物显蓝色，再 用氨气薰，则背景变为无色。 ⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂还原性物质显蓝色，再喷2mol／L 盐酸溶液，则蓝色加深。 溶液I：1％铁氰化钾溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液；临用前将 溶液I和溶液Ⅱ等量混合。 2．专属性显色剂 由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下： (1)烃类 ①硝酸银／过氧化氢 检出物：卤代烃类。 溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30％过氧化氢1滴。 方法：喷后置未过滤的紫外光下照射； 结果：斑点呈暗黑色。 ②荧光素／溴 检出物：不饱和烃。 溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳 溶液。 方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。 ③四氯邻苯二甲酸酐 检出物：芳香烃。 薄层色谱的显色反应 显色试剂 显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。显色剂种类繁多，本章只能列举一些常用的显色剂。l．通用显色剂 ①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液与0.5-1.5mol／L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。 ②0.5％碘的氯仿溶液对很多化合物显黄棕色。 ③中性0.05％高锰酸钾溶液易还原性化合物在淡红背景上显黄色。 ④碱性高锰酸钾试剂还原性化合物在淡红色背景上显黄色。 溶液I：1％高锰酸钾溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。 ⑤酸性高锰酸钾试剂喷1.6％高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC 加热15～20min。 ⑥酸性重铬酸钾试剂喷5％重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。 ⑦5％磷钼酸乙醇溶液喷后120oC烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。 ⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。 溶液I：1％铁氰化钾溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液；临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。2．专属性显色剂 由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下： (1) 烃类 ①硝酸银／过氧化氢 检出物：卤代烃类。 溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30％过氧化氢1滴。 方法：喷后置未过滤的紫外光下照射； 结果：斑点呈暗黑色。 ②荧光素／溴 检出物：不饱和烃。 溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。 方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。 ③四氯邻苯二甲酸酐 检出物：芳香烃。 溶液：2％四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。 方法：喷后置紫外光下观察。 ④甲醛／硫酸 检出物：多环芳烃。 溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。 (2)醇类 ①3，5一二硝基苯酰氯 检出物：醇类。Stains-for-Developing-TLC-Plates(薄层层析显色剂)
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