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．基础研究电刺激小脑顶核对缺血／再灌注大鼠脑组织内
ＮＦ—ＫＢ活性及其活化的影响
万东罗勇谢鹏
【摘要】目的观察Ｗｉｓｔａｒ大鼠局灶脑缺血／再灌注后，脑内核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活性及其活化的基
本规律，并探讨电刺激小脑顶核（ＦＮＳ）对其影响。方法成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２７只，随机分为正常组、单
纯局灶脑缺血／再灌注组（模型组）和局灶脑缺血／再灌注＋电刺激小脑顶核治疗组（ＦＮＳ治疗组）。采用线
栓法制备右侧大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）模型，缺血时间均为２ｈ，根据再灌注时间分为缺血２ｈ／再灌注３，６，
１２和２４ｈ组。模型组不给予任何干预处理，ＦＮＳ治疗组在缺血２ｈ再灌注即刻给予ＦＮＳ治疗１ｈ。用
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测缺血脑组织核抽提物中ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白的表达，用电泳迁移率改变分析法（ＥＭＳＡ）检测
核抽提物中ＮＦ．ＫＢＤＮＡ的结合活性。结果正常组大鼠脑组织核抽提物中有少量ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白，ＮＦ－ＫＢ
ＤＮＡ结合活性较弱。模型组再灌注各时间点，即再灌注３，６，１２和２４ｈ，ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白含量均高于正常
组，其中再灌注６ｈ和１２ｈ均显著高于正常组（Ｐ＜０．０５）。模型组ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白含量变化趋势为：再灌注
３ｈ＜再灌注６ｈ＜再灌注１２ｈ，再灌注１２ｈ达峰值，各组间差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；再灌注２４ｈ时
ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白含量明显低于再灌注６ｈ和１２ｈ（Ｐ＜０．０５）。模型组ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性除再灌注３ｈ外，
其余３个时间点均显著高于正常组（Ｐ＜０．０５）；模型组再灌注３ｈ时，ＮＦ—ＫＢＤＮＡ结合活性明显弱于组内
其余３个时间点（Ｐ＜０．０５），这３个时间点均为高活性状态，组内差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＦＮＳ治疗
组ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白含量及ＮＦ—ＫＢＤＮＡ结合活性的变化趋势与模型组相似。其中，再灌注６ｈ和１２ｈ时，
ＦＮＳ治疗组ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白含量明显低于模型组相应时间点（Ｐ＜０．０５）；再灌注６，１２和２４ｈ时，ＦＮＳ治疗
组ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性也明显低于模型组相应时间点（Ｐ＜０．０５）。结论大鼠局灶脑缺血／再灌注后缺血
脑组织中ＮＦ—ＫＢ活化明显，活性增强；ＦＮＳ可下调ＮＦ?ＫＢ活化程度，抑制ＮＦ－ＫＢＤＮＡ结合活性，这可能是
ＦＮＳ具有“抗炎”作用的重要机理之一。
【关键词】电刺激小脑顶核；局灶脑缺血／再灌注；核因子一ＫＢ；ＤＮＡ结合活性；电泳迁移率改变
分析法
ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｌｅｃｔｒｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆａｓｔｉｇｉａＩｎｕｃｌｅｕｓｏｎｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒＫＢ
ａｆｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＷＡＮＤｏｎｇ，ＬＵＯＹｏｎｇ，ＸＩＥＰｅｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａ?
ｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６，Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ（ＮＦＫＢ）
ａｆｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（ＣＩＲ）ｉｎｒａｔｓ，ａｎｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｌｅｃｔｒｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆａｓｔｉｇｉａｌ
ｎｕｃｌｅｕｓ（ＦＮＳ）ｏｎｔｈｅｓｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｗｅｎｔｙ—ｓｅｖｅｎａｄｕｌｔｍａｌｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ
ｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ：ａｎｏｒｍ．ａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｎ＝３），ａＣＩＲｇｒｏｕｐ（ｎ＝１２）ａｎｄｕＣＩＲ＋ＦＮＳｇｒｏｕｐ（ｎ＝１２）．Ｍｉｄｄｌｅｃｅ—
ｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｂｔｕｒａｔｉｏｎ（ＭＣＡＯ）ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｓｕｔｕｒｉｎｇｔｈｅｒｉｇｈｔＭＣＡ，ａｎｄｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｒａｔｓｗｅｒｅｔｈｅｎｒａｎｄｏｍｌｙ
ｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｓｕｂｇｒｏｕｐｓｒｅｐｅｆｆｕｓｅｄｆｏｒ３ｈ，６ｈ，１２ｈａｎｄ２４ｈ．ＦＮＳｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄｔｏｔｈｅＣＩＲ＋ＦＮＳｇｒｏｕｐｓ
ａｔ２ｈａｆｔｅｒＣＩＲｆｏｒ１ｈ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｔｈｅＣＩＲｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦＫＢ１）６５ｐｒｏｔｅｉｎｉｎ
ｎｕｃｌｅａｒｅｘｔｒａｃｔｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｕｓｉｎｇｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，ａｎｄｔｈｅＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮＦＫＢｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏ?
ｐｈｏｒｅｔｉｃｍｏｂｉｌｉｔｙｓｈｉｆｔａｓｓａｙ（ＥＭＳＡ）．ＲｅｓｕｌｔｓＮＦＫＢｐ６５ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｅｘｔｒａｃｔｓｗｅｒｅｉｎ?
ｃｒｅａｓｅｄａｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙａｔ６ｈａｎｄ１２ｈ（Ｐ＜０．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｏｎ—
ｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＮＦＫＢＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｅｒｅａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｄａｔ６ｈ，１２ｈａｎｄ２４ｈ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍ—
ｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣＩＲｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＮＦＫＢｐ６５ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＣＩＲ＋ＦＮＳｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄａｔ６ｈ
ａｎｄ１２ｈａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｐ＜０．０５）．ｗｈｉｌｅｔｈｅＮＦＫＢＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｗｅｒｅｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄａｔ６ｈ，
１２ｈａｎｄ２４ｈ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦＫＢｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＮＦＫＢＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｃａｎ
基金项目：国家自然科学基金（Ｎｏ．３０４７０６０６）；重庆市科委应用基础项目（渝科计［２００２］１８?９３）；重庆市卫生局中医药
科研计划项目（渝中医［２００２］４２－３０）；重庆市科委攻关项目（渝科计［２００３］４３－６）
作者单位：４０００１６重庆，重庆医科大学附属第一医院神经内科，重庆市神经病学重点实验室
通讯作者：罗勇
虫垡塑垄匿堂皇鏖复盘查！！！！生！！旦箜！！鲞箜！！塑鱼！也！里！！！坚盟墅！！！！！：Ｑ！！！！！！！！！！！！！！：！！：堕！：！！。６６１?
ｂｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙＦＮＳ，ｗｈｉｃｈｍｉｇｈｔｂｅｏｎｅｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔｈｅａｎｔｉ?ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆＦＮＳ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｅｌｅｃｔｒｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ；Ｆａｓｔｉｇｉａｌｎｕｃｌｅｕｓ；Ｆｏｃａｌｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；Ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ
ｋａｐｐａＢ；ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｍｏｂｉｌｉｔｙｓｈｉｆｔａｓｓａｙ
近年来国内外学者研究发现，电刺激小脑顶核（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｓｔｉｇｉａｌｎｕｃｌｅｕｓ，ＦＮＳ）可产生广泛的神经保护作用。ＦＮＳ可上调脑缺血后多种脑保护因子的表达¨。；减少脑缺血后多种继发性炎性损伤因子的产生旧４ｏ。预先ＦＮＳ１ｈ，可使随后１０ｄ内大鼠永久性大脑中动脉闭塞（ｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ＭＣＡＯ）所致脑梗死体积缩小约５０％，肢体功能明显改善＂’６１；还可使大脑皮质局部脑血流（ｒｅｇｉｏｎａｌｃｅｒｅｂｒａｌｂｌｏｏｄｆｌｏｗ，ｒＣＢＦ）增加达正常对照组的３００％，但不伴随脑组织糖代谢率的改变。“。大鼠ＭＣＡＯ以后才给予ＦＮＳ１ｈ，亦可使脑梗死体积减少达５０％以上，且能够恢复缺血皮质区脑电图的波幅；只要在大鼠ＭＣＡＯ后最初６ｈ内给予ＦＮＳ治疗，均可使梗死体积缩小，脑水肿减轻¨。。
一ＦＮＳ究竟是通过什么机制发挥其神经保护作用呢？董为伟。６１认为，ＦＮＳ的即刻脑保护作用可能与脑内钾通道的开放有关，晚发长程的脑保护效果可能是通过抑制脑缺血后炎症反应，减少细胞凋亡而实现。既往的研究发现，ＦＮＳ确实能够明显减少脑缺血灶内炎性白细胞的浸润，下调细胞间黏附分子－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕ—ｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ一１，ＩＣＡＭ．１）、诱生型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）等炎症相关因子在脑缺血（包括脑缺血／再灌注）后的表达，而这些因子的表达则受核转录因子一ＫＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ，ＮＦ．ＫＢ）调控。ＮＦ．ＫＢ在脑缺血后过度活化被认为是介导脑缺血后炎性损伤的中心环节。至于ＦＮＳ对脑缺血后ＮＦ．ＫＢ的过度活化有无直接的调控作用，目前尚未进行深人研究。
本实验选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠ＭＣＡＯ模型，以ＦＮＳ为干预措施，应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和电泳迁移率改变分析法（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｍｏｂｉｌｉｔｙｓｈｉｈａｓｓａｙ，ＥＭＳＡ）检测脑缺血／再灌注大鼠缺血脑组织核抽提物中ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白表达和ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性，观察Ｗｉｓｔａｒ大鼠局灶脑缺血／再灌注后缺血脑组织中ＮＦ．ＫＢ的活性及其活化的基本规律，并探讨ＦＮＳ对其影响，从核转录水平进一步阐释ＦＮＳ的“抗炎”作用及其脑保护作用机制。
材料与方法
一、实验动物与材料
成年健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２７只，体重２００～２５０ｇ，由四川Ｉ省医学科学院实验动物研究所提供。ＮＦ．ＫＢｐ６５兔多克隆抗体、碱性磷酸酶标记羊抗兔ＩｇＧ为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品；凝胶迁移率改变分析系统试剂盒为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品，内含ＨｅＬａ细胞核抽提物、Ｔ４多核苷酸激酶、ＮＦ．ＫＢ结合位点的双链寡聚核苷酸探针（５’．ＡＧＴＴＧＡＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＣ．３’，３’．ＴＣＡＡＣＴＣＣＣＣＴＧＡＡＡＧＧＧＴＣＣＧ．５’）、ＡＰ．Ｉ结合位点的双链寡核苷酸探针（５’．ＣＧＣＴＴＧＡＴＧＡＧＴＣＡＧＣＣＧＧＡＡ－３’．３’－ＧＣＧＡＡＣＴＡＣＴＣＡＧＴＣＧＧＣＣＴＴ－５’）以及５×结合缓冲液等；ｐｏｌｙ（ｄＩ－ｄＣ）ｐｏｌｙ（ｄＩ－ｄＣ）购自Ｓｉｇｍａ公司；［１－３２Ｐ］ＡＴＰ（５０００Ｃｉ／ｍｍ０１）为北京福瑞生物工程公司产品。垂直电泳槽、电泳仪、电转槽为美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品，图像扫描采用Ｓｃａｎ－ＭａｋｅｒＥ６系统，图像灰度分析采用２．０版ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒＶＤＳ软件。
二、动物分组
实验动物适应性喂养１周后，随机分为正常组３只、单纯局灶脑缺血／再灌注组（简称模型组）１２只和局灶脑缺血／再灌注＋电刺激小脑顶核治疗组（简称ＦＮＳ治疗组）１２只。其中，模型组和ＦＮＳ治疗组分别根据再灌注时间分为脑缺血２ｈ／再灌注３ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ等４个亚组，每亚组３只动物。正常组不给予任何干预处理。
三、脑缺血／再灌注模型的制备
参照Ｌｏｎｇａ等。９１和罗勇等¨叫报道的方法，采用经颈内动脉线栓法制备大鼠右侧ＭＣＡＯ模型。腹腔注射３．５％水合氯醛（３５０ｍｇ／ｋｇ体重）麻醉大鼠后，将其仰卧位固定于手术台上，经颈正中切口，分离和暴露右侧颈总动脉，再向头端分离和暴露颈内、外动脉，结扎并切断颈外动脉。用尖刀在颈外动脉残端作一纵行小切口，用头端约５ｍｍ涂有聚胺酯的尼龙钓鱼线（直径为０．２５～０．２６ｍｍ）从右侧颈外动脉插入颈内动脉。从颈总动脉分叉处送人颈内动脉约１．９～２．１ｃｍ时遇到阻力为大脑中动脉起始处栓塞成功的标志。栓塞大脑中动脉２ｈ后，再次麻醉动物，拔除线栓至颈外动脉残端内，实现再灌注。
模型成功的判断标准：（１）左侧肢体疼痛回缩迟钝或消失；（２）提尾倒悬时左上肢不能向前下伸；（３）行走时向左侧偏倒或原地向左侧转圈；（４）右侧出现Ｈｏｎｅｒ征。
四、ＦＮＳ方法
参照Ｎａｋａｉ等＂３和王健等。１刈的方法进行小脑顶核电刺激。大鼠大脑中动脉栓塞２ｈ实施再灌注即刻（此时大鼠仍处于麻醉状态），将其以俯卧位固定于江
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湾ＩＩ型大鼠脑立体定位仪上。根据大鼠脑立体定位图谱¨副确定小脑顶核座标：以前囟为零点，头颅矢状位正中线向后１１．４—１１．８ｍｍ、旁开０．８～１．０ｍｍ、深５．２—５．７ｍｍ。在左侧颅骨上钻孔，插入双极同芯圆针电极（直径０．１ｍｍ），以刺激左侧小脑顶核。用小脑顶核电刺激仪（由重庆大学理论电气工程研究所研制）进行刺激，刺激电流为频率５０～１００Ｈｚ、时程０．５ｍｓ的直角方波脉冲，电流强度为５０“Ａ，调节小脑顶核刺激部位，以刺激时大鼠出现摆尾、竖毛，伴随短暂性呼吸、心跳加快和血压增高作为刺激成功的标志，持续刺激１ｈ。刺激过程中动物均处于浅麻醉状态。刺激结束后拔除针电极，缝合头皮。术后将大鼠置于电热毯上保暖，麻醉清醒后放回笼中。
五、实验取材
各组实验动物于各观察时间点用３．５％水合氯醛深麻醉，并经心脏灌注约１００ｍｌ生理盐水后断头取脑，以右侧大脑中动脉支配的脑区（即缺血侧）为取材对象，准确称取０．１ｇ脑组织，置液氮中保存备用。另取等量正常大鼠脑组织作为对照。
六、制备脑组织核抽提物
于０．１ｇ脑组织中加入１ｍｌ冰冷的胞浆裂解液［成分为蔗糖０．５ｍｏｌ／Ｌ、ＨＥＰＥＳ１０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ值７．９）、ＭｇＣｌ，１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＣｌ１０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＥＤＴＡ１ｍｍｏｌ／Ｌ、甘油１０％（Ｖ／Ｖ）、ＤＴＴ１ｍｍｏｌ／Ｌ、ＰＭＳＦ１ｍｍｏｌ／Ｌ、Ａｐｒｏｔｉ．ｎｉｎ５仙ｇ／ｍｌ、Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ５Ｉ－ｔｇ／ｍ１］，于冰上匀浆２—３ｍｉｎ，至脑组织完全变成匀浆；冰浴３０ｍｉｎ；应用Ｓｉｇｍａ公司产１－１５Ｋ型低温离心机，４℃下４０００×ｇ离心１０ｍｉｎ；取上清（含胞膜和胞浆裂解物）置于４。Ｃ预冷的Ｅｐ管中，液氮速冻、一７０℃保存备用。再用０．５ｍｌ冰冷的胞浆裂解液垂悬沉淀，震荡混匀；４℃下４０００×ｇ离心１０ｒａｉｎ；弃上清，向沉淀（含有胞核成分）中加入０．２ｍｌ冰冷的胞核裂解液［成分为ＨＥＰＥＳ２０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ值７．９）、ＭｇＣｌ，１．５ｍｍｏＬ／Ｌ、甘油２０％（Ｖ／Ｖ）、ＥＤＴＡ０．２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮａＣｌ０．３ｍｏｌ／Ｌ、ＤＴＴ０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＰＭＳＦ０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ５肛ｇ／ｍｌ、Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ５斗ｇ／ｍ１］，震荡混匀，冰浴６０ｒａｉｎ；４℃下１２０００×ｇ离心３０ｍｉｎ；取上清（含核抽提物）置于４。Ｃ预冷的Ｅｐ管中，液氮速冻、一７０℃保存。用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法Ⅲ１测定核抽提物中蛋白浓度，并用胞核裂解液将核抽提物的蛋白浓度调至２¨ｇ／斗ｌ。
七、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测
用１０％变性不连续十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ．ＰＡＧＥ）分离含５０¨ｇ蛋白的核抽提物；电泳结束后，将蛋白电转印至硝酸纤维素膜；ＴＴ—Ｂｓ洗膜后，用ＮＦ．ＫＢｐ６５兔多克隆抗体工作液（稀释比例为１：５００）孵膜，４℃过夜（１６—１８ｈ）；ＴＴＢＳ洗膜４次后，用碱性磷酸酶标记羊抗兔ＩｇＧ工作液（稀释比例为１：１０００）孵膜，３７ｃｃ下１ｈ；ＴＴＢＳ洗膜４次后，将膜片移人碱性磷酸酶底物ＢＣＩＰ／ＮＢＴ工作液中，避光显色５—１０ｍｉｎ；终止显色反应后，用自来水漂洗膜片，自然晾干后扫描并采集图像。
八、ＥＭＳＡ
根据凝胶迁移率改变分析系统试剂盒说明书及操作指南进行预实验后，拟定主要操作步骤：用Ｔ４多核苷酸激酶将ＮＦ．ＫＢ探针标记上１．”Ｐ；建立ＤＮＡ－核蛋白结合反应体系；结合反应物进行７％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；电泳结束后，取下凝胶，置于滤纸上，另一面用保鲜膜覆盖，３７℃下干燥１ｈ；一７０℃下放射自显影３ｄ；冲洗胶片后扫描并照像。
九、凝胶电泳迁移率竞争抑制实验
建立４种不同反应体系，即阳性对照反应体系（含ＨｅＬａ细胞核提取物２Ｉｘｌ）、阴性对照反应体系（含ＨｅＬａ细胞核提取物０ｔｘｌ）、非特异性竞争抑制反应体系［含ＨｅＬａ细胞核提取物２¨ｌ、未标记的ＡＰｌ探针１斗ｌ（相当于７－”Ｐ标记的ＮＦ－ＫＢ探针的１００倍）］、特异性竞争抑制反应体系（含ＨｅＬａ细胞核提取物２“ｌ、未标记的ＮＦ－ＫＢ探针１¨１）。在４种不同反应体系中各加入５×结合缓冲液２Ｉｘｌ，并用无核酸酶纯水补足至总体积９ｔｘｌ。上述各体系室温下反应１０ｍｉｎ后，加入１．”Ｐ标记的ＮＦ．ＫＢ探针１ｔｘｌ，室温下反应２０一３０ｍｉｎ后，进行ＥＭＳＡ检测和放射自显影。
十、半定量分析
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ硝酸纤维素膜片和ＥＭＳＡ放射自显影（自显影时间相同）胶片用ＳｃａｎＭａｋｅｒＥ６系统进行灰度扫描，并用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒＶＤＳ图像分析软件测定Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ各显色条带的积分光密度值（ＯＤ值）和ＮＦ．ＫＢ结合带的积分ＯＤ值。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果以ＯＤ值／仙ｇ蛋白表示，ＥＭＳＡ结果以积分ＯＤ值表示。
十一、统计学分析
实验数据以（元±ｓ）表示，用ＳＡＳ８．０版统计分析软件进行ＡＮＯＶＡＳ分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
结果
一、缺血脑组织核抽提物中ＮＦ－ＫＢｐ６５含量的动态变化及ＦＮＳ对其影响
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果显示：正常组大鼠脑组织核抽提物中有少量ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白。模型组及ＦＮＳ治疗组苒灌注３ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ时ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白含量均比正常组高；其中，再灌注６ｈ和１２ｈ时，模型组及ＦＮＳ治疗组明显高于正常组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；表明脑缺血／再灌注可明显激活脑内ＮＦ—
虫堡塑堡匿堂皇鏖复苤查！！！！生！！旦笙！！鲞箜！！塑！！！！！坠塑堕型旦！！坐！！！Ｑ！！！！竺！！！！：！！！：！！！盟！：！！。６６３?黧ｔ。擘－．ＫＢ。雾苎．擎堡：，｛垩妻曼些璧，除，掌耋．７．！三、凝胶电泳迁移率竞争抑制实验结果
竺：．蔓盒。３．奠曼灌注８７、字。望苎型苎．竺一ＦＮ：治罗璺脑Ｈｅ泛。磊矗菘磊毳妨；赫久”…．／＿３２一ｐ：：习的ＮＦ．ＫＢ璺篓警苎量粤守Ｎ，Ｆ－Ｋ．Ｂ．雹蔓挚导孽孽烹．（．！。：？：盟。ｏ探针后，出ｉ鬲…，Ｎ…ｆｌ＇ｇ…ＮＦ－。Ｋ二’若Ｎ二结’，合ｘ条，ｌ／ｊ带ｉｉｃｋ，ａ而Ｈ．￥在ｓｌｘ加入模型组夏掌鎏、！。｜Ｉｊ：三ｈ．翟２＇！，，竺磐曼兰穗罂竺妻；葫。蓓某杀话一ＮＦ－ＫＢ探针体系；磊囊；ｊ：艾最ＬａＮＩＦ：！！．孥呈高活性鉴毒．，三乏８兰望皇望毕较．，差异无统细秸云拓。廷易的体系中曷某苗磊Ｎ—Ｆ－Ｋ“ＢＤｒａＮ／４Ａ１。结合条奠竺搴墨（Ｐ＞０．０，５），呈盟是妻．Ｉ曼堂冀？。！苎墨！：！！幂：聋某谍ｔ苫酶芜美亲针；▲Ｐ．ｊ）对ＮＦ．ＫＢ与Ｄ…ＮＡ。磊鬯震性！￡！。：譬ｈＦ。Ｎ．ｓ鎏字组譬挛竺警彗主蹙型组吝芜萌盖荔磊：菇票。Ｅ～ＭＳ—Ａ检测踣染具有特鼻性、稳羞尊竺：除再灌鋈ｉｈ．。竺ｉ蔓金ｊ；。竺曼驾注时间喜ＦＮ。Ｓ．注葙哥藁茬！。菇苗‘３。一～“一一～…。…’。治疗组ＮＦ－ＫＢ活性均明显低于模型组（Ｐ＜０．０５）。见’。
…。。
表１各组脑组织核抽提物中ＮＦ?ＫＢｐ６５蛋白含量及
ＮＦ．ＫＢＤ．ＮＡ结合活性比较（ｉ±ｓ）
注：与正常组比较，’Ｐ＜０．０５；与模型组相应时间点比较，。Ｐ＜０．０５；与再灌注３ｈ组内比较，６Ｐ＜０．０５；与再灌注６ｈ组内比较，。Ｐ＜０．０５；与再灌注１２ｈ组内比较，‘Ｐ＜０．０５
注：Ｒ代表再灌注
图１各组脑组织核抽提物中ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白含量（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测）
注：１为阴性对照；２为阳性对照；３为特异性竞争抑制；４为非特异性竞争抑制
图３凝胶电泳迁移率竞争抑制实验结果
讨论
ＮＦ．ＫＢ是转录因子家族中的重要成员，参与多种炎性细胞因子、趋化因子和成纤维细胞因子的合成，调控细胞增殖、分化和凋亡等生理或病理过程。ＮＦ—ＫＢ主要由ｐ５０和ｐ６５两个亚基组成，其蛋白质分子Ｎ端的３００个氨基酸与Ｒｅｌ原癌基因编码的产物具有高度的同源性，称之为Ｒｅｌ同源区。Ｒｅｌ同源区包括ＤＮＡ结合功能域、二聚体化功能域、ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶Ａ磷酸化位点和一段核定位序列。细胞在静息状态下，ＮＦ．ＫＢ与其抑制因子ＩＫＢ结合，形成ＮＦ－ＫＢ／ＩＫＢ
复合体，封闭了ＮＦ－ＫＢ的核定位序列，使ＮＦ－ＫＢ以无
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活性的形式存在于胞浆中；当细胞受到细菌内毒素、氧自由基、前炎症细胞因子（如肿瘤坏死因子－ｄ，白介素．１Ｂ等）、缺氧／复氧等刺激后，ＩＫＢ发生快速泛素化及蛋白酶解，暴露出ＮＦ—ＫＢ的核定位序列，ＮＦ．ＫＢ即被活化，并很快转位人核，与靶基因启动子或增强子上的ＫＢ位点结合，启动靶基因的转录和蛋白合成。尤其在脑缺血／再灌注损伤时，ＮＦ．ＫＢ受氧自由基、细胞因子、钙超载等因素刺激而活化，活化的ＮＦ．ＫＢ又可诱导细胞因子、黏附分子、免疫受体、炎性酶类的表达，氧自由基形成以及细胞内钙超载，从而形成炎症反应的恶性循环，加剧脑缺血后继发性炎性脑损伤¨４’”一。
非活化状态的ＮＦ．ＫＢ位于胞浆中，而活化状态的ＮＦ－ＫＢ主要位于胞核内。因此，检测细胞核内ＮＦ．ＫＢ的表达量，可以大致了解ＮＦ—ＫＢ活化及核转位的水平。本研究应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测了各组大鼠缺血脑组织核抽提物中的ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白水平，发现正常组大鼠脑组织核抽提物中存在少量ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白，表明在正常的生理状态下，ＮＦ．ＫＢ的活化水平比较低，仅有极少量ＮＦ－ＫＢ转位进入细胞核，这种低水平的活化可能是ＮＦ—ＫＢ参与多种生理功能所必需。大鼠局灶脑缺血２ｈ／再灌注３ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ，缺血脑组织核抽提物中ＮＦ－ＫＢｐ６５蛋白水平均高于正常组，尤其是再灌注６ｈ和１２ｈ时与正常组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；其总体变化趋势是再灌注３ｈ＜再灌注６ｈ＜再灌注１２ｈ（均Ｐ＜０．０５），再灌注２４ｈ时ＮＦ—ＫＢｐ６５蛋白水平呈明显下降趋势，显著低于再灌注６ｈ和１２ｈ的水平（Ｐ＜０．０５），提示局灶脑缺血／再灌注损伤可诱导和促进缺血脑组织中ＮＦ．ＫＢ的活化及核转位的发生，并具有再灌注时间依赖性。在本研究所观察的时间点内，再灌注１２ｈ是局灶脑缺血／再灌注大鼠脑内ＮＦ．ＫＢ活化及核转位发生的高峰时间，这一峰值出现的时间正好与脑缺血／再灌注损伤后脑内众多炎性损伤因子表达和释放的高峰时间相吻合，如促炎性细胞因子、黏附分子（如细胞间黏附分子－１、内皮细胞黏附分子－１等）以及选择素（如Ｐ－选择素、Ｅ一选择素等）等，这些炎性损伤因子大多在损伤后１ｈ表达上调，１２ｈ达高峰，２～５ｄ后表达减少，这提示脑缺血／再灌注后脑内活化的ＮＦ．ＫＢ在其病理生理过程中可能发挥重要的作用。大鼠局灶脑缺血２ｈ、再灌注即刻给予１ｈＦＮＳ治疗后，同一时间点缺血脑组织核抽提物中的ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白水平均低于模型组，特别是缺血２ｈ／再灌注６ｈ和１２ｈ时，ＦＮＳ治疗组与模型组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），提示ＦＮＳ可明显抑制局灶脑缺血／再灌注大鼠脑内ＮＦ—ＫＢ活化及核转位的发生。
ＮＦ－ＫＢ激活并转位进入细胞核是其完成转录调控功能的前提和基础，但是并非所有进入细胞核的ＮＦ．ＫＢ都能与靶基因启动子或增强子上的ＫＢ位点结合并完成其转录调节功能。事实上，有多种因素参与这一过程的调节，如外界因素的干扰、亚基自身的变构能力以及亚基与ＤＮＡ的亲和力等，尤其是ＩＫＢ家族在调节ＮＦ－ＫＢ与ＤＮＡ结合这一环节中发挥了重要的作用。有研究发现¨６’”１，ＩＫＢｏｃ、ＩＫＢｌ３和ＩＫＢ８等都能进入核内抑制ＮＦ—ＫＢ与ＤＮＡ的结合，而且ＩＫＢｃＹ还能将核内的ｐ６５／ｐ５０异源二聚体从ＫＢ结合位点上解离下来并转运至胞浆，明显地抑制ＮＦ．ＫＢ与ＤＮＡ结合。还有研究发现¨“，糖皮质激素与胞浆中糖皮质激素受体形成复合物进入细胞核，能与核内处于活化状态的ＮＦ．ＫＢ结合，阻止ＮＦ－ＫＢ与靶基因上的ＫＢ位点结合，降低ＮＦ．ＫＢ的ＤＮＡ结合活性。这些研究结果表明，细胞核蛋白中ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白水平的高低只能反映ＮＦ－ＫＢ的活化程度和核转位的多少，不直接反映ＮＦ．ＫＢ的ＤＮＡ结合活性的高低。因此，本实验进一步应用ＥＭＳＡ检测脑组织核抽取物中的ＮＦ—ＫＢＤＮＡ结合活性，结果发现，大鼠局灶脑缺血２ｈ／再灌注３ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ，缺血脑组织核抽取物中ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性均高于正常组，尤其是再灌注６ｈ、１２ｈ和２４ｈＤ，－ｊ＂，ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性与正常组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），且这３个时间点ＮＦ—ＫＢＤＮＡ结合活性比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），均为高活性状态。大鼠局灶脑缺血２ｈ，再灌注即刻给予１ｈＦＮＳ治疗后，再灌注各时间点缺血脑组织核抽提物中ＮＦ—ＫＢＤＮＡ结合活性均低于模型组，特别是再灌注６ｈ、１２ｈ和２４ｈ时，ＦＮＳ治疗组与模型组比较，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），提示ＦＮＳ可明显抑制局灶脑缺血／再灌注大鼠脑内ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性。同时，本实验结果还显示，大鼠局灶脑缺血２ｈ／再灌注３ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ时，缺血脑组织核抽提物中ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性的总体变化趋势与ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白水平的变化趋势并不完全一致，从而进一步证实了细胞核抽提物中ＮＦ．ＫＢｐ６５蛋白水平的高低不能全面反映ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性的高低。
本研究从ＮＦ—ＫＢｐ６５核转位和ＮＦ—ＫＢＤＮＡ结合活性这两个层面观察了ＦＮＳ对局灶脑缺血／再灌注后脑内ＮＦ—ＫＢ的影响，结果发现ＦＮＳ可减少脑缺血／再灌注后脑内ＮＦ．ＫＢｐ６５核转位的发生，直接抑制ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性。这意味着ＦＮＳ在一定程度上可下调脑缺血／再灌注后脑内众多受ＮＦ．ＫＢ调控的炎性介质的表达，能够有效遏制脑缺血／再灌注后继发性炎性脑损伤的发生和发展，从而体现其确切的“广谱抗炎”效果和缺血脑保护作用。
ＦＮＳ究竟是通过什么途径来抑制ＮＦ．ＫＢｐ６５核转位的发生呢？Ｇａｌｅａ等‘２４。在离体和在体实验中均发现，ＦＮＳ可明显增加脑缺血／再灌注大鼠脑微血管内皮细胞
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中ＩＫＢ—ｄｍＲＮＡ的表达，而ＩＫＢ（尤其是ＩＫＢ．０【）的降解是ＮＦ－ＫＢ活化的中心环节，因此ＦＮＳ上调ＩＫＢ．ＯＬ的表达可能是其抑制ＮＦ—ＫＢｐ６５核转位发生的重要机制之一。同时，曾锦旗等”?１９３发现，ＦＮＳ可上调急性脑出血大鼠血肿周围缺血区热休克蛋白７０（ｈｅａｔ
ｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ
７０，ＨＳＰ７０）的表达，ＨＳＰ７０表达少的脑区ＮＦ．ＫＢ的表达活跃，在ＨＳＰ７０表达活跃的皮质区，ＮＦ．ＫＢ的表达相对较少，并认为这可能与ＨＳＰ７０对ＮＦ．ＫＢ表达的抑制作用有关。另有研究则进一步证实心０’２¨，ＨＳＰ７０可直接抑制ＩＲＢ的降解和直接抑制ＮＦ—ＫＢ核转位的发生。因此，ＦＮＳ上调ＨＳＰ７０的表达可能是其抑制ＮＦ．ＫＢ核转位发生的另一重要机制。至于ＦＮＳ又是通过什么机制来抑制脑缺血／再灌注后脑内ＮＦ．ＫＢＤＮＡ结合活性，目前尚不完全清楚。总之，本研究结果显示，ＦＮＳ能明显抑制ＮＦ?ＫＢｐ６５核转位的发生，减少ＮＦ．ＫＢ在细胞核内的表达，这可能是ＦＮＳ抑制脑缺血／再灌注后脑内ＮＦ．
ＫＢ
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（修回日期：２００６—０７－１５）
（本文编辑：吴倩）
名别称
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址
编
《中华物理医学与康复杂志｝２００６年第１０期“继续教育园地＂答题卡
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（该答题卡复印有效）
答题卡请寄：４３００３０
武汉市解放大道１０９５号同济医院《中华物理医学与康复杂志》编辑部收
１２３４５
电刺激小脑顶核对缺血/再灌注大鼠脑组织内NF-κB活性及其
活化的影响
作者：万东， 罗勇， 谢鹏， WAN Dong， LUO Yong， XIE Peng
作者单位：400016,重庆,重庆医科大学附属第一医院神经内科,重庆市神经病学重点实验室
刊名：
中华物理医学与康复杂志
英文刊名：CHINESE JOURNAL OF PHYSICAL MEDICINE AND REHABILITATION
年，卷(期)：2006,28(10)
被引用次数：12次
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本文链接：https://www.doczj.com/doc/505609122.html,/Periodical_zhwlyx200610004.aspx
国活性干酵母生产的现状与发展-----------------------作者：
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国活性干酵母生产的现状与发展 一、中国活性干酵母生产的现状 酵母是一种单细胞微生物，属于真菌类，早在公元前3000多年前，人类就开始利用酵母来制作发酵产品，只是当时人们还没有认识酵母。但作为一种工业，从最初的啤酒酵母泥开始在市场上销售算起，酵母工业的发展历史仅200 多年。 中国酵母生产始于1922年，1949年以前只有大华利酵母厂，产品为压榨酵母（含水量70％左右）。国活性干酵母的研究和生产始于20世纪70年代，1974年，酵母厂首先试制出面包活性干酵母。国酵母的生产作为一种产业的出现则是在20世纪80年代，随着80年代中期安琪酵母股份（原名中国生物开发中心食用酵母基地）、丹宝利酵母厂和梅山马利酵母的相继投产，标志着中国的活性干酵母工业化生产达到了国际水平。 活性干酵母是以固体形式存在，而不失去活性的酵母细胞产品。活性干酵母有两个基本特征：一是常温下长期贮存而不失去活性，二是将活性干酵母在一定条件下复水活化后，即恢复成自然状态并具有正常酵母活性的细胞。 其中，细胞含量超过200 亿cfu ／g ，含水量小于6 ％的活性干酵母被称为高活性干酵母。高活性干酵母具有含水量低、复水快、贮藏时间长、使用方便等优点。 活性干酵母具有性能稳定、易于运输等优点，被广泛地应用于发酵面食加工和酿酒领域。 在食品工业中，活性干酵母作为优良的发酵剂和生物膨松剂被用于面包、馒头、包
子、打饼干等食品的加工，制成的食品香松可口、别具风味。与用化学发酵粉和老面头发酵剂制成的食品相比较，具有发酵力强、营养丰富、使用简便等优点，无苦涩粘牙和需要用碱中和等缺点。 在酿酒行业，活性干酵母也得到了广泛地使用。 目前国酒精厂、白酒厂都在使用酒精活性干酵母，其应用围包括酒精、麸曲白酒、液态白酒、小曲酒和大曲酒及制曲，具有提高发酵的安全性和稳定性、提高出酒率、节能降耗等优点。酒用活性干酵母自问世以来累计创造社会效益达30亿元。 除此以外，活性干酵母在医药、饲料、化妆品等领域也大有用武之地。酵母成为目前世界上唯一年产量超过百万吨的微生物。 1.活性干酵母产品产量、产值稳步增长，生产规模不断扩大 活性干酵母行业处于快速发展期，全国的销售量每年基本上以10％-15 ％的速度递增。1998年国高活性干酵母的总产量为1.8 万t ，2001年活性干酵母总产量达3.5 万t ，2002年的总产量在4.5 万t 左右，2003年国高活性干酵母总产量可达4.8 万t ，活性干酵母生产企业也由1998年的3 家发展到目前规模不等的企业14家。 2.活性干酵母品种由单一化向多样化发展 按品种分，目前国产活性干酵母已问世正式推向市场的有家庭用小包装面包酵母、面包高活性面包酵母（低糖）、面包高活性面包酵母（高糖）、耐高温酒精活性干酵母、常温酒精高活性干酵母、生香酒用高活性干酵母、黄酒高活性干酵母、葡萄酒高活性干酵母、啤酒高活性干酵母等。 3.国产活性干酵母的发酵技术、生产工艺逐步提高，装备水平达到国际先进水平糖蜜处理、杂菌控制、发酵、离心、过滤、干燥、包装技术水平不断提高，生产线自动化
活性干酵母和非活性酵母 活性干酵母实际上是处于“冬眠状态”，它还是活的生物体，它在遇到水和有糖分的环境之后，就会“苏醒”，繁殖生长。比如在做馒头、面包的时候加的就是活性干酵母。活性酵母不能直接食用。 而非活性的酵母是被灭杀了的酵母，是死的酵母，但是它们的营养物质还存在。比如可以直接食用的营养酵母（或者叫即食酵母）。 你说的做面膜的酵母粉实际上就是通用的营养酵母，是非活性的。含有优质的高蛋白、多种微量元素，对美白、增强皮肤弹性效果非常显著。 很多知名化妆品都使用营养酵母作为原料生产美白护肤用品。 在网上也可以购买到营养酵母（安琪酵母公司就有），既可以内服（有一定减肥效果），也可以用酸奶和营养酵母做成面膜直接涂抹在脸上，保持30分钟左右洗净即可。每周做1-2次。相信你一定会变的更美丽！ 即食酵母粉是一种纯天然的食物。它能有合理的促进营养平衡吸收。它含有丰富的蛋白质、必需氨基酸、B族维生素、矿物质和膳食纤维，而糖、胆固醇和脂肪比较少，因此非常适合现代人食用。 如果妈妈食用这种东西，可以在短时间获得牛羊无法达到的蛋白含量，所”产”出的奶中含有的蛋白是牛羊的2000倍，而且它大大降低了牛羊所带来的负面癌症几率，因为它增加了人体抗癌的一些元素。吸收到即食酵母粉进入体内后的硒便与即食酵母粉蛋白、多糖等结合起来，形成生物态的硒元素。这样不仅有效地降低了单独补充无机硒的毒性，而且硒的吸收率也特别高。如果每天人体摄入200微克微量元素硒，会使大肠癌降低48％，肺癌降低46％，前列腺癌降低63％。即食酵母粉还有含有很多人体所需的微量元素，很适合儿童和孕妇食用，是安全食物。 酵母菌一般有很高的营养价值，特别是含有较多蛋白质，很多B族维生素、核酸和矿物质，同时也能产生一些保健功能活性物质。维生素B群可控制人体的代谢功能，保持正常的神经作用。维生素B2与维生素B6对皮肤是很重要的维生素。维生素B12有防止贫血的作用，且有促进肠内维生素合成的作
国内活性干酵母生产的现状与发展 一、中国活性干酵母生产的现状 酵母是一种单细胞微生物，属于真菌类，早在公元前3000多年前，人类就开始利用酵母来制作发酵产品，只是当时人们还没有认识酵母。但作为一种工业，从最初的啤酒酵母泥开始在市场上销售算起，酵母工业的发展历史仅200 多年。 中国酵母生产始于1922年，1949年以前只有上海大华利酵母厂，产品为压榨酵母（含水量70％左右）。国内活性干酵母的研究和生产始于20世纪70年代，1974年，上海酵母厂首先试制出面包活性干酵母。国内酵母的生产作为一种产业的出现则是在20世纪80年代，随着80年代中期湖北安琪酵母股份有限公司（原名中国生物开发中心宜昌食用酵母基地）、广东丹宝利酵母厂和广东梅山马利酵母有限公司的相继投产，标志着中国的活性干酵母工业化生产达到了国际水平。 活性干酵母是以固体形式存在，而不失去活性的酵母细胞产品。活性干酵母有两个基本特征：一是常温下长期贮存而不失去活性，二是将活性干酵母在一定条件下复水活化后，即恢复成自然状态并具有正常酵母活性的细胞。 其中，细胞含量超过200 亿cfu ／g ，含水量小于6 ％的活性干酵母被称为高活性干酵母。高活性干酵母具有含水量低、复水快、贮藏时间长、使用方便等优点。 活性干酵母具有性能稳定、易于运输等优点，被广泛地应用于发酵面食加工和酿酒领域。 在食品工业中，活性干酵母作为优良的发酵剂和生物膨松剂被用于面包、馒头、包
子、苏打饼干等食品的加工，制成的食品香松可口、别具风味。与用化学发酵粉和老面头发酵剂制成的食品相比较，具有发酵力强、营养丰富、使用简便等优点，无苦涩粘牙和需要用碱中和等缺点。 在酿酒行业，活性干酵母也得到了广泛地使用。 目前国内酒精厂、白酒厂都在使用酒精活性干酵母，其应用范围包括酒精、麸曲白酒、液态白酒、小曲酒和大曲酒及制曲，具有提高发酵的安全性和稳定性、提高出酒率、节能降耗等优点。酒用活性干酵母自问世以来累计创造社会效益达30亿元。 除此以外，活性干酵母在医药、饲料、化妆品等领域也大有用武之地。酵母成为目前世界上唯一年产量超过百万吨的微生物。 1.活性干酵母产品产量、产值稳步增长，生产规模不断扩大 活性干酵母行业处于快速发展期，全国的销售量每年基本上以10％-15 ％的速度递增。1998年国内高活性干酵母的总产量为1.8 万t ，2001年活性干酵母总产量达3.5 万t ，2002年的总产量在4.5 万t 左右，2003年国内高活性干酵母总产量可达4.8 万t ，活性干酵母生产企业也由1998年的3 家发展到目前规模不等的企业14家。 2.活性干酵母品种由单一化向多样化发展 按品种分，目前国产活性干酵母已问世正式推向市场的有家庭用小包装面包酵母、面包高活性面包酵母（低糖）、面包高活性面包酵母（高糖）、耐高温酒精活性干酵母、常温酒精高活性干酵母、生香酒用高活性干酵母、黄酒高活性干酵母、葡萄酒高活性干酵母、啤酒高活性干酵母等。 3.国产活性干酵母的发酵技术、生产工艺逐步提高，装备水平达到国际先进水平糖蜜处理、杂菌控制、发酵、离心、过滤、干燥、包装技术水平不断提高，生产线自动化程
酵母的发展和现状 一、活性酵母在国民经济中的作用 活性酵母: 是指以粮食、糖类等为原料，利用生物工程技术、发酵通风培养得到的、具有发酵活性的纯微生物制品。 1. 食用酵母 食用酵母一般是指用发酵法生产的供人类食用或食品加工用的活性酵母制品。产品含有丰富的蛋白质、B 族维生素、脂肪、核酸、固醇和多种酶类等物质，同时又具有将糖类发酵产生酒精和CO2的特性。 从酵母所含的蛋白质量来衡量，它高于大豆，为瘦猪肉、牛肉、鱼类鸡蛋的2 倍多。 2. 酵母抽提物 酵母抽提物（yeast extract ) ，又称为酵母浸出物。它是将具有活性的酵母细胞经过加工得到，是酵母细胞内物质的浓缩物，产品本身已不具备发酵活性。 国内酵母抽提物的商品名称有酵母精、酵母味素和酵母调味料等。 3. 药用酵母 一般是将酵母制成酵母片或酵母粉供人摄取。如在酵母培养过程中加人微量元素制成硒酵母、铬酵母等特种酵母制品，用于补充不同人群微量元素的不足，以预防一些特殊病症的发生。 如含硒酵母用于治疗克山病和大骨节病，并有一定的防止细胞衰老的作用；含铬酵母可用于治疗糖尿病等。 4 饲料酵母 饲料酵母是将培养的酵母，或从酿酒过程中回收的废酵母经过干燥制成的粉末状或颗粒状产品，一般不具备发酵活性。 它含有丰富的蛋白质（40 ％一48 % ）、B 族维生素、氨基酸等物质，广泛用作动物饲料的蛋白质补充剂。 二、活性酵母发展史 从酵母在人类历史的发展过程中的作用来看，可以分为3 个阶段: 1. 利用啤酒和酒精生产副产物―废酵母的阶段
1781 年，荷兰人用离心机将上面发酵啤酒中的酵母除去酒花苦味、采用螺旋压榨机压干的块状产品，第一次在市场销售。产品被称为压榨酵母（compressed yeast ）或面包鲜酵母，这是最早出现的商品酵母。 2. 形成专业化商品活性酵母生产的阶段 从19 世纪末至20 世纪中期约50 年期间，压榨酵母的生产在欧洲得到了快速的发展，生产工艺和生产装备逐步完善，生产原料从粮食改为废糖蜜，使面包酵母的生产水平大幅度提高。 3 活性干酵母产业的发展 最早出现的活性干酵母（active dry yeast , ADY ）起源于19 世纪上半世纪。 20 世纪60 年代末，荷兰Gist 公司首先开发成功并生产出发酵活性高、保质期长、可直接与面粉混合制成面团的干酵母，产品被称为高活性干酵母（high active dry yeast 或instant active dry yeast ) ，发酵活性一般可以保持在1 一2 年。 三、酵母生长与生产 1 面包酵母的生长特性和要求 面包酵母(顾名思义是制造面包用的)和酿造酵母(造酒用的)在酵母分类中都划分在一种，即Sacchromyces cerevisiae。 酵母的自然的生境(habitat)大都是含糖丰富的，通气不良的中温场所。通常在花的蜜腺，水果，甘蔗表面等地方。它们以发酵的方式生活，即由糖产生乙醇和CO2，可以用下式表述： C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 由于酵母菌体是活性干酵母的生产原材料，因此活性干酵母工厂必须对酵母菌体的生产倍加注意。 酵母的耐干性或对制造活性干酵母时所施的烘干工艺的配套性和酵母细胞内所含的海藻糖的量呈正相关，因此菌种的选择至关重要，如中科院微生物所的X 8、美国ATCC的7752菌株都是可用的优良菌株，而且极易由商品自行分得。 2 酵母生长的动态 由酵母的生长曲线(图19-1)可以看到酵母的细胞增殖主要是在对数期完成的。而且酵母的培养工艺要求接种到生产罐的酵母立即进入对数增殖状态，即在生产罐以前就完成了迟缓期。
酵母细胞壁工艺流程及说明 徐州赛傅生物科技有限公司生产工艺流程 一、工艺流程 1、预处理工艺 酵母泥→过滤→加水稀释→过滤除杂→沉淀分离 2、酵母细胞壁的加工工艺 脱苦→除臭→离心分离→自溶→酶解→破碎→酶处理→灭酶灭菌→离心分离→浓缩→喷雾干燥→包装 二、工艺流程说明 1、对酵母泥进行简单过滤，除去一些较大杂质。 2、加水稀释：为了酵母泥筛分顺利进行，必须将酵母泥加水稀释，以减少筛分的阻力。 3、过筛除杂：将稀释的酵母泥充分搅拌均匀，用不同目数的两层滤网过滤，即可除去酵母泥中的全部可见杂质。 4、沉降分离：经过筛分后的酵母乳液，静止一定时间，使自动沉淀，倾出上清液，即得不含杂质的酵母。 5、脱苦、脱臭：在啤酒生产过程中，由于酒花的苦味物质及一些代谢产物吸附在酵母泥中，使酵母泥带有令人不愉快的苦味和气味，故要进行脱苦脱臭处理。其方法：将上述酵母用无菌水以与酵母量一定比例进行清洗数次，再用一定比例NaCl
溶液洗一次，即可达到脱苦脱臭的目的。 6、离心分离：经脱苦脱臭的酵母乳进行离心分离，即得脱苦脱臭的酵母泥。 7、自溶：将上述酵母泥和水按一定比例混合，搅拌均匀，使干酵母比例在一定范围，调pH值为M，并加入助溶剂，然后在A温度水浴放置几十分钟，再调温至B℃保持Q小时，注意每间隔一段时间开动搅拌一下。 8 、酶解：自溶结束后，调整pH值至中性，调整温度到合适指标，加入一定标准的蛋白酶，进行酶解一定时间， 9、破碎：酶解结束后，利用超声波设备对酵母细胞进行破碎 10、酶处理：破碎结束后，加入另外的一种复合酶进行进一步酶解，达到指定指标。 11、灭菌灭酶：在一定温度条件下加热H分钟，达到灭酶灭菌的效果。 12、离心分离: 把酵母细胞壁与抽取物分离出来。 13、浓缩:采用真空浓缩（一定压力），将其浓缩为一定比例。 14、喷雾干燥：采用离心喷雾干燥设备，对浓缩物进行喷雾干燥，至成品。 关键因素 1、自溶过程中的时间、温度、pH值、助溶剂成分组成及浓度等参数会影响到 破碎的效果 2、酶解过程中的酶制剂选择及参数的控制会影响到主要成分的含量 3、破碎设备参数的控制会影响到成品的纯度 4、酶处理过程处理的质量影响到主要成分活性功效。
酿酒科技２００６年第８期（总第１４６期）?ｕＱｕ衄一ＭＡｌⅢ昭ｓ既ＢＮＣＥ＆砸纫矾饼０ＧＹ２００６№８（１Ｍ．１蛔葡萄酒活性干酵母的干燥工艺研究 陈毛清，赵华 （天津科技大学，天津３００２２２） 摘要：对葡萄酒活性干酵母的干燥工艺进行了研究，结果表明，干燥床进风温度以８０～９０℃ 为佳，乳化剂加量１．８％～２．Ｏ％，干燥后水分控制在４．５％～５．５％，活细胞率达到８０％左右。 关键词：葡萄酒活性干酵母；干燥；活细胞率；水分；温度 中图分类号：Ｔｓ２６１．１；ＴＳ２６２．６文献标识码：Ｂ文章编号：１００１—９２８６（２００６）０８—００８８—０３ ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＤｒｙｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆＡｃｔｉＶｅＤｒｙＹｅ嬲ｔｏｆＧｒａｐｅＷｉｎｅ Ｃ卸３ＮＭａｏ劬ｇａｎｄｍ～ＯＨｕａ 盯ｉ删ｉｌｌｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈ∞ｌｏ贸Ｕｎｉｖ懿咄Ｔｉ硼ｉｎ３００２２２，ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔ托ｃｔ：Ｔｈｅｄｒｙｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆａｃｔｉｖｅｄｒｙｙｅａｓｔｏｆ鲫ｅ池ｗｅ∞ｓｔＩｌｄｉｃｄ蛆ｄｍｅｒｅｓＩｌｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈｅ向Ｕｏ、椭唱咿ｔｊｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ａｉｒｍａｋｅｔ豇印嘣衄ｅｏｆｄ响ｇｂｅｄａｔ８０～９０℃，ａｄｄｉ：ｔｉｏｎｌｅｖｅｌ ０ｆ锨ｒｕｌ蛐ａｇｅｎｔ勰１．８％～２．Ｏ％， Ⅵ，ａｔｅｒｃ伽【ｔｅｎｔａ舭ｒ出灿ｇｃｏｎ缸Ｄｌｌｅｄｂｅ铆ｅｅｎ４．５％～５．５％，ａｎｄｌｉ、，ｉｎｇｃｅⅡｒａｔｅｒｅａｃｈｃｄａｂｏｕｔ８０％．（Ｔｒ趾．ｂｙＹｕＥＹａｎ曲Ｋｅｙ、和ｒｄｓ：ａｃｔｉＶｅｄ巧ｙｅａＳｔｏｆｇｒａｐｅｗｉｎｅ；ｄ晌ｇ；１ｉＶｉｎｇｃｅＵｒａｔｅ；ｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ；ｔ锄ｐ盯ａｔＩｌｒｃ 在酿酒行业中，葡萄酒活性干酵母的使用是最早的，２０世纪６０年代初，在欧美各国开始出现葡萄酒活性干酵母产品。目前，在世界各地的葡萄酒行业中已普遍使用葡萄酒活性干酵母。在我国，最早（１９８１年）使用葡萄酒活性干酵母的是中法合资的王朝葡萄酒厂；最早（１９８５年）研究葡萄酒活性干酵母的是天津轻工业学院；最早（１９８７年）工业化生产葡萄酒活性干酵母的是烟台酵母厂；而从２０世纪９０年代以来一直生产葡萄酒活性干酵母的只有安琪酵母股份有限公司。 本文在于燥床进风温度、乳化剂加量和干燥后水分等关键点进行控制，并对这些条件进行了优化，选择出既节约成本又能有效控制产品质量指标的葡萄酒活性干酵母干燥工艺。 １材料和方法 １．１菌株：安琪酵母股份有限公司的ＨＹ菌株。１．２设备：增强聚丙烯板框压滤机（删１２０，过滤面积１２０Ｉｎ２）； 造粒机（ＰＲ（）Ｃ饼啪ＲＣＰ＿Ａ砣／２５００）； 干燥床自制沸腾式干燥床。 ２试验方案 ２．１干燥工艺流程 酵母乳一添加乳化剂一过滤—造粒一干燥 收稿日期：２００６＿０６’２９２．２操作要点 ２．２．１乳化剂用８０～９０℃的热水配制，可按每１００Ｌ水里加１２．５ｋｇ配制，配好后保持６５～７０℃，在压滤之前加入酵母乳中（加入的百分比为酵母乳折干后的百分比），并保证混合均匀。 ２．２．２板框压滤后的酵母块水分在６５％以下。２．２．３进入干燥床的空气湿度小于６ｇ压唱。 ２．３成品质量指标 ２．３．１感官指标：淡黄至淡棕色；具有酵母的特殊气味，无腐败，无异臭味。 ２．３．２酵母活细胞率：大于７０％。 ２．３．３水分：小于６％。 ２．３．４细胞总数：小于１×１０５个儋。 ２．４测定方法 ２．４．１酵母活细胞率的测定 ２．４．１．１原理 取一定量的干酵母，用无菌生理盐水活化。然后作适当稀释，用显微镜、血球记数板所测得的酵母活细胞数和总酵母细胞数之比的百分数，即为该样品的活细胞率。 ２．４．１．２仪器 显微镜：放大倍数５００以上； 血球记数板：Ⅻ＿１０２５；
高活性干酵母生产的干燥设备和工艺介绍 梁国林1苗帅杨志刚张蕾 【摘要】采用流化床快速干燥工艺进行高活性干酵母的生产，产品水分含量从67%干燥到5%，参数控制准确，活性保持良好。系统配套CIP和自动化控制，减少人工干预，保证工艺稳定。 【关键词】高活性干酵母；流化床；干燥工艺 Introduce of drying equipment and processes of high active dry yeast LIANG Guolin1ZHANG Lei YANGZhigang Abstract：Use of fluidized bed drying process for production of high active dry yeast reduce the moisture content from 67% to 5%，parameters control accurately and activity keep well. The system is equipped with CIP and automation control to reduce human intervention and guarantee process stability. Key Words：high active dry yeast；Fluidized bed；Dried technoloy 采用流化床干燥技术及自动控制系统，鲜酵母可以制得高活性干酵母，它比普通干酵母具有活性高，发酵速度快，并且由于产品水分低，利于长期保存。流化床干燥技术是指自然空气经过净化、除湿、风机加压后由床体风室通过分风网板均匀布风后，与鲜酵母接触，使其脱水干燥，得到含水为5%左右产品。含水约70%鲜酵母在进入流化床前，已经通过挤条造粒机制成直径约0.5mm的颗粒。此过程中的空气处理、干燥过程控制以及设备加工都是保证产品质量的关键点。 0、生产流程综述 高活性干酵母干燥的工艺空气流程为： 自然空气——空气初中效过滤——风机加压——高效过滤——流化床——尾气处理——排空 高活性干酵母干燥的物料流程为： 0.5mm直径的鲜酵母——流化床——排料系统 生产过程的工艺流程图如图1：
安琪干酵母使用方法 【应用范围】面团含糖量为7%以下的馒头、面包等面制品。 【使用方法】 用量：按照面粉重量的0.5%左右添加; 温度：用35°C左右的温水溶解酵母加入面粉置于温暖处(温度35°C左右，空气湿度为80%左右)发酵; 时间：馒头需发酵40-60分钟，面包需发酵90-120分钟，面坯内出现蜂窝状即可上笼屉蒸或烤箱烤制。 【注意事项】 通常情况下，气温较低时可适当增加酵母添加比例，较高时则应适当减少; 制作馒头建议使用中低筋面粉，包子、面包使用高筋面粉。 【在家要蒸大馒头，酵母发面有绝招】 1、发面首选安琪酵母，用前需“活化”。常用的发酵剂主要有三种：“老面”、泡打粉和酵母。其中安琪酵母是首选，因为其不仅自身含有丰富的
维生素和矿物质，还对面粉中的维生素还有保护作用，能增加面团中的B族维生素。 安琪酵母使用前，先要使酵母菌“活化”。先将安琪酵母加入温水和至溶化，静置3—5分钟，再放入面粉中搅拌，这样才能保证和好的面团充分发酵。 2、和面时，加糖、蜂蜜、酸奶，发酵更快。和面时，除了加入安琪酵母，再添一小勺白糖，或是蜂蜜、酸奶，都可以提高酵母菌活性，加速发酵。这样，发面的时间大约可节省1/3，同时还能使蒸出的馒头更加松软香甜。 3、发面时，温度30℃—35℃最适宜。面发得是否充分，适宜的温度和湿度也是关键。这里教您一个能使面团保持在30℃—35℃的方法：在蒸锅中加60℃—70℃的水，放入面盆，盖上锅盖即可。需要注意的是，面盆要放在支架上，不可与热水直接接触。 【酵母使用小知识】 1、如何挑选酵母? 选用酵母要注意以下几个方面：一是查看生产日期，应选用在保质期之内的酵母;二是选用包装
1.资讯--学习情境工作页（学习情境3）
三、绘出机械搅拌通风发酵罐的结构简图，注明各部名称，并简要说明各部分的作用。 答：1.机械密封也就是轴封，安装在旋转轴与设备之间的 部件，使罐顶或罐底与轴之间的缝隙加以密封，防止工作 介质沿转动轴渗出设备之外泄露和污染杂菌。2.人孔：便 于工作人员进入发酵罐维修与检查。3.视镜：工作人员观 察发酵罐里面的情况。 4.电动机：用于动力发生，引擎。 5.进气口：通入氧气或者其他其他的入口处。 6. 搅拌器: 打碎气泡，使空气与溶液均匀接触，使氧溶解于发酵液中。 7挡板：改变液流的方向，由径向流改为轴向流，促使液 体剧烈翻动，增加溶解氧。8.消泡器：将泡沫打破。9.温 度计：监控温度的变化。10.pH电极口：测定pH值。11. 搅拌机：使发酵罐里面的培养液搅拌均匀。 五、判断下面为何种发酵罐，它怎样工作的？ 答：气升式外循环可冷却发酵罐；工作原理：环流管底置有空 气喷嘴，由于喷射作用，气泡被分散于液体中，借助与环流管内气流 混合物的密度与反应主体之间的密度差，使管内气液混合物连续循环 流动。 六、整理相关知识，写一篇有关目前酵母菌发酵生产的几种工艺概况，并进行比较分析。 答：1、面包酵母在饼干生产的应用：面粉、水、酵母等原料"第一次调制面团"第一次发酵"第二次调制面团（面粉、水、盐、蛋、油、乳粉、乳化剂等原料"第二次发酵"包油酥（面粉、油脂、盐等）"辊轧成片"冲印成形"焙烤"冷却"包装"成品 2、安琪葡萄酒高活性干酵母发酵桑果酒的工艺：桑果"清洗"榨汁"原汁"成分调整"主发酵（加已活化好的酵母）"换桶"后发酵"澄清"过滤"陈酿"桑果酒。 七、根据本学习内容，请你自行编制几道题，并附上答案。 答：题目一：通风发酵罐设备应具备什么特点？ 答：应具备良好传质和传热性能，结构严密，防杂菌污染，培养基流动与混合良好，良好的监测与控制，设备较简单，方便维护检修，能耗低等特点。 题目二：发酵罐的冷却设备有哪些？ 答：冷却设备有：喷淋冷却器，套管冷却器，板式冷却器，螺旋板换热器等。 题目三：通风发酵罐中，径向搅拌器有哪几种？各种搅拌程度如何？ 答：径向搅拌器有平叶式，弯叶式，箭叶式三种; 搅拌程度分别为，平叶式﹤弯叶式﹤箭叶式。
活性干酵母在畜禽生产中的应用 活性干酵母（ADY）是一种益生菌类微生态制剂，是饲料行业中最常见的实用型酵母产品，动物不会产生耐受性，其通过改善肠胃微生物区系来稳定胃肠道环境，调控胃肠发酵，提高pH稳定性，为厌氧性有益菌群的增殖提供有益环境，提高胃肠对饲料营养物质的分解、消化、吸收和利用，提高畜禽生产性能。本文综述了活性干酵母在畜禽生产中的应用效果。 1活性干酵母的有效成分和特点 活性干酵母制剂的主要成分为活性酵母菌菌体（含量≧90％），同时还含有少量的乳化剂。依据质量标准的不同，产品中的活菌数有所差异。一般高等级产品的活菌数不低于2× 1011cfu?g-l,而普通产品的活菌数不低于1.5 × 1011cfu?g-l.为了便于保存和使用，活性干酵母一般都制成颗粒，水分含量在6％以下。美国饲料监督部门（AFCO）对活性干酵母产品的要求为经某种方式干燥并保留了其大部分的发酵能力，不含任何谷物或其他填充物。每克活性干酵母产品必须含有不少于1.5 ×1011个活酵母细胞。 活性干酵母是以固体形式存在而又不失活性的酵母细胞产品，常温下长期贮存不失去活性。休眠的活性干酵母进人畜禽肠道后，能快速复活，进而生长繁殖活性干酵母还具有含水量低、复水快、贮藏时间长、使用方便等优占 2活性干酵母的繁殖方式 活性干酵母的生产是采用液体培养生物反应装置或有氧发酵罐来完成的。使用这些装置和工艺控制的目的 是向酵母菌提供所需的营养（如氧气、氮气和碳水化合物等），并且允许其进行繁殖和形成新一代的酵母细胞。在这个有氧发酵的过程中，酵母采用“发芽'的方式进行繁殖，而在这个“发芽"过程中，在由母细胞进化 出子细胞的地方形成一个芽，当子细胞发育成熟时，两个都再进行繁殖复制。因此，酵母菌的繁殖复制是按照 指数递增的方式进行的。 3活性干酵母的作用机理 酵母属于兼性厌氧菌，在消化道内代谢耗氧，创造厌氧环境，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌群的生 长繁殖，促进双歧杆菌、乳酸菌等有益菌的繁殖。酵母代谢产生有机酸，降低胃肠道pH,可提高饲料消化率。 酵母菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，可促进饲料中营养素的消化吸收。 4活性干酵母在畜禽生产中的应用 4·1在猪生产中的应用 活性干酵母能够增强食欲，提高采食量；促进消化吸收，进而促进生长，提高母猪泌乳力，降低饲料系数；促 进后肠发酵，减少母猪便秘；减少粪便排泄量，改善粪便成形度，降低粪便中病原菌数量，改善养殖环境；减 少发病率，提高抗应激能力，预防仔猪腹泻。有研究表明，活性酵母有助于提高早期断奶仔猪生产性能，降低 腹泻率，提高机体细胞免疫水平，降低肠道内容物pH的趋势。这与李顺等和Heugten等的研究结果一致。活性干酵母可提高生长肥育猪生长速度，降低料重比，减少粪便排泄量，改善粪便成形度，减少粪便中未消化颗 粒的出现。王学东等在生产母猪日粮中添加活性干酵母，显著提高了21日龄断奶前仔猪的平均日增重和仔猪断奶率，增加了哺乳母猪采食量，增加了母猪胃内双歧杆菌和厌氧菌的数量，改善了母猪胃内菌群结构[。李彪等 和郭雁君等也得到了相似结论。此外，活性干酵母能有效缓解妊娠母猪便秘和哺乳仔猪腹泻。 4·2在鸡生产中的应用 活性干酵母可增加采食量，促进消化吸收，提高肉鸡日增重，降低料肉比，提高蛋鸡产蛋率，改善肠胃微生物区系，降低粪便中病原菌数量，改善养殖环境。王学东等在肉鸡日粮中添加活性酵母，显著提高