淫羊藿多糖硫酸化修饰条件的优化
卢 宇1,胡元亮1 ,孙峻岭1,黄小燕1,王德云1,赵晓娜1,王效田2
(1.南京农业大学中兽医学研究室,江苏南京 210095; 2.南京市浦口区兽医站,江苏南京 210095)
摘 要:目的 优化淫羊藿多糖硫酸化修饰的最佳条件。方法 采用氯磺酸-吡啶法。以硫酸基取代度和糖的质量分数为指标,采用L9(34)正交试验对反应温度、试剂配比和反应时间进行优选。结果 反应温度对修饰的影响最大,适宜的修饰条件为反应温度80℃,氯磺酸与吡啶的体积比在1∶8～1∶10,反应时间2～3h。结论 采用优化的条件对淫羊藿多糖进行硫酸化修饰可以获得理想的硫酸化淫羊藿多糖。
关键词:淫羊藿多糖;硫酸化修饰;氯磺酸-吡啶法;试剂配比
中图分类号:R286.1 文献标识码:A 文章编号:0253-2670(2008)03-0357-03
Optimization of sulfated modification conditions in epimedium polysaccharide LU Yu1,HU Yuan-liang1,SUN Jun-ling1,Huang Xiao-yan1,WANG De-yun1,
ZHAO Xiao-na1,WANG Xiao-tian2
(1.Institute o f T r aditio nal Chinese V eterina ry M edicine,N anjing A gr icultur al U niver sity,N anjing210095,China;
2.N anjing Pukou District Vet erinar y W or kstatio n,N anjing210095,China)
Abstract:Objective To optim ize the sulfated m odification co nditions of epim edium po lysaccharide (EPS).Methods EPS w as m odified by cholo rsulfonic acid-py ridine metho d.L9(34)Ortho gonal test w as used to o ptimize the r eaction tem perature,reagent fo rmula,and reaction time with the degree o f sulfate gr oup and carbohydrate content as index.Results The m ost im por tant affecting factor w as reaction tem-peratur e.The o ptimized modification conditio ns w ere the reactio n temperature o f80℃,the ratio o f chlo-sulfo nic acid to py ridine o f1∶8-1∶10,and the reactio n time of2-3h.Conclusion The better sulfated EPS could be obtained using optimized mo dification conditions.
Key words:epimedium polysaccharide(EPS);sulfated m odification;cholorsulfonic acid-pyr idine metho d;reagent for mula
硫酸化多糖也称硫酸酯多糖或多糖硫酸酯,是指糖羟基上带有硫酸根的多糖,其生物活性明显不同于或显著强于天然多糖。许多天然多糖原来不具有生物活性或生物活性很弱,经硫酸化修饰后获得或增强了活性[1],尤其是抗病毒、抗肿瘤、抗艾滋病、对免疫系统作用和抗凝等活性显著增强。淫羊藿多糖(epimedium polysaccharide,EPS)是淫羊藿的活性成分,具有增强免疫、抗病毒和调节内分泌系统等多种生物活性[2,3]。本研究室采用氯磺酸-吡啶法对EPS进行修饰,测定了硫酸化EPS对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的影响,结果表明修饰后的EPS抵抗IBDV感染CEF的活性显著增强[4]。由于硫酸化修饰受多种因素的影响,筛选出最佳修饰条件至关重要,因此本实验考察了淫羊藿多糖硫酸化修饰条件的优化过程。1 材料与仪器
淫羊藿购于南京大华中药房,由南京农业大学园艺学院中药学周立良副教授鉴定为箭叶淫羊藿。氯磺酸、吡啶、蒽酮(分析纯),上海凌峰试剂有限公司;ADS-7大孔树酯,安徽省蚌埠天星树脂有限公司;DEAE Sephadex TM A-25,Amersham Bioscien-ces;透析袋(截留相对分子质量1000),上海绿鸟科技发展有限公司。
色谱柱、恒流泵和密度色谱混合仪,上海青浦沪西仪器厂;99—2恒温磁力加热搅拌器,江苏金坛新一佳仪器厂制造;冷冻干燥机,Labconco;722光栅分光光度计,上海第三分析仪器厂。
2 方法与结果
2.1 EPS的制备:取箭叶淫羊藿2.0kg,加8倍水煎煮2次,合并滤液浓缩至2000mL,缓慢加入95%
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第39卷第3期2008年3月
收稿日期:2007-07-20
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30571360);江苏省普通高校研究生科研创新计划资助项目(2006)
作者简介:卢 宇(1978—),男,江苏睢宁人,博士研究生,主要从事兽医中药学与中药药理学研究。E-m ail:2005207022@https://www.doczj.com/doc/5b1758117.html, *通讯作者 胡元亮 Tel:(025)84395203 E-mail:ylhu@n https://www.doczj.com/doc/5b1758117.html,
乙醇至含醇量达70%,搅匀,静置24h,取沉淀,挥去乙醇,加蒸馏水溶解,重复醇沉1次。取沉淀冷冻干燥,得粗淫羊藿多糖42.77g。然后用三氯乙酸法除去蛋白,过ADS-7大孔树酯柱、DEAE Sephadex TM A-25色谱柱(0.05～1.0m ol/m L NaCl溶液洗脱),自来水流水透析48h,蒸馏水透析24h,冷冻干燥,即得纯化的EPS[5]。
2.2 修饰条件设计:由于反应温度、试剂配比、反应时间对多糖硫酸酯化的影响较大[6],在预试验的基础上,以修饰试剂的反应温度、氯磺酸与吡啶的体积比和反应时间为因素,按3因素3水平的正交试验L9 (34)设计9种修饰条件。
2.3 酯化试剂的制备:将带有搅拌(磁力搅拌)和冷凝装置的三颈烧瓶置冰盐水浴中,加入25mL无水吡啶,快速搅拌,充分冷却后,按表1设定的氯磺酸与吡啶的体积比,边搅拌边逐滴加氯磺酸,于40min内加完。反应结束后,撤去冰盐水浴和磁力搅拌装置。共制备9份酯化试剂。
2.4 修饰反应的操作:分别精确称取纯化的EPS 500.0mg,加入酯化试剂中,按表1设定的水浴温度和反应时间搅拌反应,反应结束后冷却至室温,反应液加入预冷的100mL冰水中,用15%氢氧化钠溶液中和至pH7.0,边摇边缓慢加入3倍体积的无水乙醇,静置24h,离心,取沉淀装入透析袋自来水流水透析48h、蒸馏水透析24h,冷冻干燥,得9种硫酸化淫羊藿多糖(sulfated EPS,sEPS)。
2.5 蒽酮-硫酸法测定糖的质量分数[7]
2.5.1 标准曲线的绘制:精确称取经105℃恒重的D-葡萄糖25.0mg定容于100mL量瓶,在6支带塞试管中分别加入葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m L,然后加蒸馏水至2.0m L,加0.2%蒽酮浓硫酸1.0mL,迅速垂直液面加入浓硫酸4.0mL,混匀后在沸水浴中加热6min,冷却后用分光光度仪在610nm处测定吸光度(以0管吸光度值为校正值),重复3次。以D-葡萄糖对照品溶液质量浓度对吸光度值绘制标准曲线,得回归方程Y=0.0306X +0.0023,r2=0.996。
2.5.2 样品测定:将待测样品经105℃恒重,精密称取2～5m g置于10mL量瓶中,加去离子水溶解并稀释至1.0m g/mL。吸取0.4m L于带塞试管中(n=4),按2.5.1法测定各样品吸光度,求平均数后代入回归方程,计算多糖的质量分数。
2.6明胶法测定硫酸基取代度[7]
2.6.1100 g/mL硫酸钾对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4mL,加去离子水至0.4mL,再加入0.35mL三氯乙酸溶液和0.25mL氯化钡明胶溶液,混合。静置15～20 m in,在360nm波长下测定浊度。同法用0.25mL明胶溶液替代氯化钡明胶溶液测定360nm处的吸光度值。重复3次。用有氯化钡存在的平均吸光度值减去此溶液无氯化钡存在的平均吸光度值为最终吸光度值。以SO42-质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程Y=37.156X-0.0811,r2=0.995。
2.6.2 样品测定:称取样品(1～3m g)放入盛有1.0mol/mL HCl的试管中,密封,于100℃水解6 h,冷却后开启试管,内容物于40℃减压旋转蒸干,残渣用1.0mL蒸馏水溶解。同2.6.1项下方法测定有、无氯化钡吸光度的差值(n=4),然后根据回归方程和公式[取代度DS=162×(SO42-%)/100-(96/ 98×SO42-%)]计算样品的硫酸基取代度。
2.7 试验结果分析:见表1。以DS为指标,反应温度的影响最大,其次是反应时间,试剂配比的影响作用最小,最佳组合为A2B3C3;以糖质量分数为指标,也是反应温度的影响最大,试剂配比次之,反应时间影响最小,最佳组合为A2B2C1。两个指标中A因素即温度的效应是可靠的。进一步进行方差分析,各因素影响硫酸基取代度和糖质量分数的差异不显著(P> 0.05)。根据本结果和从实际生产考虑,反应温度为80℃,氯磺酸与吡啶的体积比应在1∶8～1∶10,时间2～3h为宜。
2.8 验证试验:进一步重复80℃时3种条件,并将反应原料(酯化试剂和淫羊藿多糖)数量增加1倍,其他条件不变进行硫酸化反应,得到的相应多糖硫酸酯的糖质量分数和DS,分别为48.526%、0.773%,70.148%、0.699%,30.632%、0.841%。与原来无显著性差异,重复性好。笔者对9种硫酸化淫羊藿多糖的体外抗病毒活性比较也证明,在80℃下,氯磺酸与吡啶的体积比为1∶8,反应3h获得的sEPS5的活性最好[4]。
3 讨论
多糖硫酸酯化的方法很多,一般吡喃型多糖采用Wolfrom法,常用的方法有浓硫酸法、三氧化硫-吡啶法和氯磺酸-吡啶法[8]。淫羊藿多糖为吡喃型多糖,采用氯磺酸-吡啶法修饰具有反应条件相对简单、硫酸基取代率高、产物回收方便和收率较高等优点[9],为大多数研究者采用。一般认为,升高温度可以提高产物的硫酸基取代度。但本实验发现,当温度
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?中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第39卷第3期2008年3月
表1 L 9(34)正交试验结果
Table 1 Results of L 9(34)orthogonal test
试验号 多 糖A 反应温度/℃B 氯磺酸与吡啶的体积比C 反应时间/h D (误差) DS /%糖质量分数/%
1sEPS 1 60 1∶6
1 10.09731.843 2sEPS 2601∶8
220.48462.474 3sEPS 3601∶1033 1.12050.949 4sEPS 4801∶6320.77249.938 5sEPS 5801∶8130.69672.380 6sEPS 6801∶10210.83428.049 7sEPS 7951∶6230.35121.027 8sEPS 8951∶8310.07427.699 9sEPS 995
1∶101
2
0.089
36.190
DS
K 10.5670.4070.2940.335K 20.7670.4180.5560.448K 30.1710.6810.6550.722R 0.5960.2740.3610.387糖质量分数
K 148.22234.26946.80429.197K 250.12254.18437.18349.534K 328.30538.39642.72947.967R
21.817
19.915
9.621
20.337
升高到95℃时,硫酸基的取代度和糖质量分数明显降低,可能是淫羊藿多糖的结构被破坏,因此反应温度宜控制在80℃。也有认为,提高氯磺酸的比例有利于酯化反应,但实际操作中氯磺酸比例高,会出现板结,搅拌困难,以致反应不均[6～8]。
参考文献:
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超滤和纳滤分离技术提取纯化地黄低聚糖的研究
董 艳1,高瑞昶1
,潘 勤2,阎晓楠2
(1.天津大学化工学院,天津 300072; 2.天津中新药业集团股份有限公司技术中心,天津 300457)摘 要:目的 通过不同截留相对分子质量的超滤膜对地黄多糖分离纯化,再利用纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化。方法 采用不同截留相对分子质量超滤再纳滤的工艺流程。结果 两次超滤得到低聚糖,最佳操作条件为:料液质量浓度为13～132m g/mL ,操作压力为0.25～0.275M P a,温度20～40℃。然后采用纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化,适宜工艺条件为:料温为20～40℃,操作压力0.59～0.79M P a ,浓缩倍数可达3倍。应用超滤-纳滤技术,低聚糖得率为46.63%,质量分数达到93.3%,凝胶过滤法验证低聚糖制品的相对分子质量低于6000。结论 该工艺能有效分离纯化地黄低聚糖,简单可行,操作简便。关键词:地黄低聚糖;超滤;纳滤;分离;纯化
中图分类号:R 286.1 文献标识码:A 文章编号:0253-2670(2008)03-0359-05
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359?中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第39卷第3期2008年3月
收稿日期:2007-09-29
作者简介:董 艳(1981—),女,河北沧州人,硕士,研究方向为膜分离技术与化学工程。E -mail:yan yan-422@https://www.doczj.com/doc/5b1758117.html, *通讯作者 高瑞昶 E-mail:gaoruichang@https://www.doczj.com/doc/5b1758117.html,
总糖的含量的测定（蒽酮法） 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。 三、实验器材 1.吸管 2.试管 3.分光光度计 4.水浴锅 5.电炉 6.电子分析天平 四、实验试剂 1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。 2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。 3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。 五、实验操作 1.制作标准曲线 取干净试管7支，按下表进行操作。 表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作 2.样品的处理（见实验四） 取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。 测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算： w —糖的质量分数（%）； C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）； m —样品的质量（mg ）。 ｗ＝ CV ｍ ×100%
非对称性、少数关节或单关节及下肢大关节的关节炎。 类经 云:骨痹者,病在阴分也,真阴不足则邪气得留于其间。至虚之处,乃是留邪之所。!正所谓邪因虚生!、虚处藏奸!。痰瘀,湿浊着于督脉,阻于经络,流经脊柱,充塞关节,深入骨骱脊髓,由浅入深,从轻到重,终致脊柱强直,驼背以成。因此,中医药学认为肾虚督空是本病发生之根本,正气虚损,风寒湿热等外邪乘虚侵入肌体,着于筋骨、闭阻经络、气血不畅为本病的基本病理变化。其病因病机特点为:?素体肾虚,风寒湿之邪深侵入肾,殃及督脉;#冬季寒盛,寒与肾同气相感,最易深入肾督为病;?过于劳累房劳过度而伤肾,寒湿之深侵,督脉失养,阳气不化,骨髓不充,致骨质受损,督阳被伤,经脉痹阻,母病累子,肝不荣筋,导致筋挛节缩,从而使脊柱弯曲变形,不能直立而腰弯、项垂、脊突,导致残疾。由于腰为肾之府,肾生髓主骨,若肾虚髓减,骨骼失养,易感受外邪,邪侵督脉,久病入络、血瘀作痛,从而形成本病。肾亏精虚是本,邪痹肢节是标。 强直性脊柱炎确诊后,应抓紧时间积极治疗,控制炎症,减轻或缓解症状,维持正常姿势和最佳功能位置,防止畸形发生。要达到此目的,关键在于早期积极的采取综合措施,按病程采取正规的治疗。到目前为止,西医学主张早期联合治疗,用非甾体类抗炎药物控制炎症以治标,用慢性作用药物抑制免疫以治本,但疗效不太理想,不良反应也较多。但中晚期患者,对药物耐受性下降,疗效更不理想。为了达到标本兼治的效果,中医药学认为治疗应从益肾强督着手,佐以活血通督之品,通过补肾以坚骨,使骨坚则邪痹可祛。鉴于肝肾同源,益肾亦能养肝荣筋,肾气旺精血足,则髓生骨健,筋脉得以荣养,阳足自可驱邪外出,又可御邪不致再侵。据临床观察与研究表明,补肾药具有较强的抗炎镇痛作用和提高机体的免疫力与结缔组织代谢,特别是对结缔组织有软化作用,可扩张血管口径,加速血流,血流量增加而改善血循环和微循环,降低血液黏滞性。增加氧运,消除水肿,出血消收,渗出物消除改善疼痛等作用。强督治偻汤!方中以熟地补肾填精;淫羊藿温壮肾阳、除冷风劳气;金毛狗脊坚肾益血,强督脉为君药。制附片温肾助阳逐风寒湿,并治脊强拘挛;鹿角胶(或片或霜)益肾生精,壮督强腰;杜仲补肝肾,使骨健筋强;骨碎补坚骨壮骨、行血补伤;补骨脂补肾阳、暖丹田;羌活散风祛湿,治督脉为病、脊强而厥共为臣药。独活搜肾经伏风;桂枝温太阳经而通血脉;川断补肝肾、强筋骨;赤芍散血滞;白芍和血脉、缓筋急;知母润肾滋阴以防桂附之燥热;地鳖虫搜剔血积,接骨疗伤;防风祛风胜湿,善治脊痛项强;麻黄解表散寒;干姜逐寒温经为佐药。川怀牛膝活瘀益肾,引药入肾治腰膝骨痛;炙山甲散瘀、通经、活络、引药直达病所为使药。经过多年临床观察,该方案标本兼治,疗效显著,安全且无明显的毒副作用,望广大同行推广使用。 参考文献 1%娄玉钤.中国痹病大全.中国科学技术出版社,1993. 2%娄玉钤.中国风湿病学.人民卫生出版社,2001. 3%闫小萍.强直性脊柱炎.中国医药科技出版社,2004. 4%紫瑞霞,姜仕华.全国中医诊疗技术标准规范与中医院工作政策法规全书.重庆大学出版社,1995. 5%孟济明.风湿病临床指南.中国医药科技出版社,1996:212 218. 牛蒡子与伪品大鳍蓟的鉴别比较 沈云士%王黎芳 &摘要?%目的%保证牛蒡子的药材质量,杜绝伪品。方法%采用性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别的方法,对牛蒡子及其伪品大鳍蓟进行鉴别比较。结果%通过对牛蒡子大鳍蓟的鉴别比较可以区分他们的真伪。结论%性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别方法简便、可靠,为保证牛蒡子药材质量提供了有效的鉴别方法。 &关键词?%牛蒡子;大鳍蓟;鉴别 %%牛蒡子为菊科植物牛蒡A rcti u m L appa L.的干燥成熟果实,又名牛子、大力子、鼠粘子。具有疏散风热、宣疹、解毒利咽的功能,用于风热感冒,咽喉肿痛、咳嗽、麻疹、寻麻疹、腮腺炎、痈肿、疮毒等病证,是常用中药之一。近来,市场上屡有发现同科植物大鳍蓟的干燥成熟果实来冒用牛蒡子,笔者对二者进行了鉴别实验,以供探讨。 1%仪器与药材 1 1%仪器%紫外光灯(365nm)6w220v50hZ武汉药科新技术开发有限公司。双目生物显微镜泉州万达实验试剂仪器设备。微量点样毛细管(日本岛津公司)。超声波清洗仪(CQ 250型,上海必能信超声有限公司)。 1 2%试剂%实验用硅胶为青岛海洋化工厂产品所用试剂均为分析纯,由汕头西陇化工厂生产。1 3%药材%正品:中国药品生物制品鉴定所购的牛蒡子对照药材;伪品:苏州药检所抽检的样品。 2%方法与结果 2 1%性状鉴别%正品为瘦果,呈长倒卵形,略扁平,稍弯曲,长0 5~0 7c m,宽0 2~0 3c m,表面灰褐色,有多数紫黑色小斑点,并有数条纵棱线,通常中间1~2条较明显,顶端钝圆,稍宽,顶面有一圆形,中央具点状花柱残迹,基部略窄,有圆形果柄痕,果皮较硬,子叶2片,淡黄白色,富油性,气无,味苦后微辛而稍麻舌。 伪品呈长倒卵形,略扁不弯曲的种子,长0 4~0 6c m,宽0 2~0 3c m,表面灰白色至灰棕色,具稀疏的黑色斑点,有数条不明显的纵棱,以中间一条最明显,棱间有隆起的波状横纹,顶端钝尖,有一类圆形或类方形的环,中间有点状花
艾叶的药理研究进展及开发应用 作者：佚名科研信息来源：本站原创点击数：184 更新时间：2002-7-12 [关键词]：药理作用,制剂开发,临床应用 健康网讯： 艾叶为菊科多年生草本植物艾Artemisia argyi Levi．et Vant的叶。全国大部分地区均产，具有浓烈香气，以湖北蕲州产者为佳，称蕲艾。春夏间花未开时采摘，晒干生用或炒炭用，捣绒为艾绒。苦辛温，归肝脾肾经。艾叶药用历史悠久，最早记载于《中医别录》。传统药性理论认为艾叶有理气血，逐寒湿，温经血，安胎，杀虫止痒等作用，用于虚寒出血，尤宜于崩瞩。本文就艾叶的药理作用、制剂开发与临床应用等方面研究作如下综述。 药理作用的研究 抗菌抗病毒作用大量的药理研究表明艾叶水浸剂，艾叶烟熏和艾叶油有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗支原体作用。叶春枚等观察了艾烟熏的抑菌作用，发现艾烟熏20 min后可抑制金黄色葡球菌和乙型溶血型链球菌，熏30min 可抑制大肠杆菌，熏50min可抑制绿脓杆菌。曹仁烈等观察到艾叶水混浸剂（1：4）在试管内对堇立包毛癣菌、革兰氏黄癣菌、羊毛状小芽孢所菌、红色表皮癣菌等皮肤真菌均有不同程度的抑制作用。 平喘、镇咳、祛痰作用药理实验证明艾叶有较好的平喘、镇咳、祛痰作用，其中尤以平喘作用量为显著。有研究表明艾叶油能直接松驰豚鼠气管平滑肌，且随剂量加大，作用亦增强。0.5mg／ml的作用强度与异丙肾上腺素0.125mg／ ml相当；也能对抗乙酰胆碱，氯化钡和组胶引起的气管收缩现象，并增加豚鼠肺灌流量。艾叶油不论灌胃，肌肉注射或气雾剂对豚鼠由组胺，乙酰胆碱，引起的药物性哮喘均有平喘作用。 止血与抗凝作用张学兰等人研究了炮制对艾叶主要成分及止血作用的影响，结果表明：艾叶加热地制后挥发性成分含量明显降低。炒炭或烘制后对小鼠的凝血及出血时间有显
[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42. 1. 2 试剂 0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL. 蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中，加入蒸馏水25 mL, ，缓慢加入98% 质量分数）浓硫酸75 mL, ，边加边搅（于冰水浴中完成），直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用（临用新配）。 浓盐酸、浓硫酸、NaOH ，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。 1. 3 方法 1. 3. 1 显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ，并加入蒸馏水至1m L, ，分别加入不同量的显色剂显色测定，以0. 1 mL, 蒸馏水为空 白对照。 1.3.2 显色时间选择。向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ，在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。 1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量，再分别加入9mL 显色剂，进行显色测定。 1.3.4 正交试验确定提取条件。采用正交试验，考查 4 个影响因素（料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问）对实验的影响，因素水平见表 1.
1.3.5 水溶性总搪的提取。取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中，加入30 mL, 蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中，加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ，冷却后，滴加一滴酚酞，用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。 1. 3. 6 水溶性总搪的测定。取提取液 1 mL 于10mL 试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn ，冷却后放置30min 测定吸光度。从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。 2 结果与分析 2. 1 吸收曲线 用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描，结果发现在625 nm 处有最大吸收，故本实验采用625 nm 为测定波长。 2. 2 显色剂用量 由图 1 可以看出，当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大，故实验采用显色剂用量为9 m l。
艾草精油 艾草精油 - 简介 艾草精油是从艾草的叶子、茎的提取物，挤压法和溶剂提取法提炼萃取的挥发 性芳香物质。艾草精油未经稀释一般最好不要直接使用。精油的挥发性很强， 一旦接触空气就会很快挥发，也基于这个原因，精油必须用可以密封的瓶子储存，一旦开瓶使用，也要尽快盖回盖子。 艾草精油 - 功效 温灸养生在身体方面六大功效：温肌散寒、疏风解表；温经通络、活血散瘀； 温中活里、强脏壮腑；温阴补虚、回阳固脱；行气活血、消火化淤；平衡阴阳、保健防病。 面部皮肤方面：使老化细胞代谢，新细胞再生加强，淡化色斑，减少皱纹，使 肤色红润，延缓衰老。 眼部方面：可改善眼袋、黑眼圈、眼睑下垂、皱纹、延缓眼部的松弛老化现象，使眼部恢复光彩。 面部温灸次序：额头--太阳穴--眼部(瞳子胶、承泣、四白)--脸颊--鼻翼--嘴周--颌 尖--颈部--耳周 温灸方试：以下向上打圈，上有力下无力。面部时间10分钟!眼部时间3分钟 身体方面：可疏通经络、和谐肝脏、平衡阴阳、调整生理机能、增强人体的免 疫力、强身健体。 腹部用精油按摩完之后进行温灸。温灸方式：用温灸棒在腹部来回滚动，再点 脐周穴点，(归来、气海、关元)；时间：15分钟 艾草精油 - 适用范围 颈椎病,风湿类关节炎,肩周炎,骨质增生等痹症。 艾草精油 - 使用方法 打开瓶盖，即可使滚珠在疼痛的部位来回滚动，既起来按摩作用，活备效果更好。然后反复揉搓至吸收，揉擦二至三遍，配合艾灸，效果更好。 艾草精油 艾草精油的主治功效，理气血，温经脉，祛寒湿，止痛，抗菌，消炎，激励消 化腺，镇咳化痰，促循环，补气，提升免疫力 痛经：取本品5滴左右调和10ML植物油在下腹部进行按摩，可以温经脉促进 腹部血液循环，具有很好的通经效果，缓解由于宫寒引起的经痛问题(可在经期
实验一 硫酸－苯酚法测多糖含量 1．目的要求 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量 2．方法原理 糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3．主要实验仪器及材料 浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。 ４．掌握要点 硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。 ５．试剂配制 1）葡萄糖标准液的配制 准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。2）90%苯酚液的配制 准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存 3）6%苯酚液的配制 将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤 管号0 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 2）待测样品多糖的测定与计算 将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
淫羊藿药理作用的研究现状及展望 淫羊藿始载于《神农本草经》，别名仙灵脾，为小檗科植物淫羊藿、朝鲜淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿的干燥地上部分，为我国传统补益中药。《本草纲目》记载：茎、叶入药，辛温无毒，有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等作用。近年来关于淫羊藿的药理研究表明，淫羊藿具有多种药效功能，主要集中在免疫、内分泌、蛋白质合成和核酸代谢、心脑血管系统及抗肿瘤等方面，综述如下。 1 淫羊藿属植物的化学成分 淫羊藿属植物的化学成分目前报道有74 种，主要为黄酮类，如淫羊藿苷、去氧甲基淫羊藿苷、β-去氢甲基淫羊藿素，其次为多糖、木脂素类、酚苷类、紫罗酮类、倍半萜类、苯乙醇苷类、生物碱类。另外还发现了胡罗卜苷、对羟基苯甲酸、异甘草素、甘草素、黄芪苷、山柰素、木樨草素、大黄素以及挥发油、蜡醇三十一烷、植物甾醇、棕榈酸、硬脂酸、亚麻酸、银杏醇、葡萄糖和果糖等。 2 药理作用研究 2.1 对免疫功能的影响：淫羊藿能增强机体非特异性免疫功能和细胞免疫功能，调节体液免疫功能，有效成分主要为淫羊藿苷和淫羊藿多糖。葛林阜等[1]研究了淫羊霍苷对小鼠的免疫调节作用，结果表明用药组的胸腺、脾脏重量明显高于用药前和对照组，且该组小鼠巨噬细胞吞噬能力显著增强，小鼠红细胞C3b、细胞免疫复合物花环形成百分率和血清肿瘤坏死因子a水平也明显增加，由此提示淫羊藿苷可增加小鼠免疫功能。李晓冰[2]证实淫羊藿苷对受辐射小鼠免疫功能恢复具有明显促进作用，灌注3天可明显促进小鼠脾脏淋巴细胞转化功能和促进自然杀伤细胞活性，第六天后可提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数作用。 2.2 对内分泌的作用：淫羊藿可明显促进幼年小老鼠附睾及精囊的发育，对离体培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮的基础分泌和环磷酸腺苷（cAMP）的生成也有促进作用，表现为性激素样作用。由此提示淫羊藿补肾壮阳作用可能与其直接刺激靶腺分泌激素有关。付杰等[3]应用125l放射免疫法，观察不同浓度的淫羊藿对家兔阴茎海绵体组织中环磷鸟苷（cGMP）水平的影响，结果显示：淫羊藿
海参（Holothurians，sea cucumbers）属于棘皮动物门海参纲，不但营养丰富，而且还是一种海洋动物性药材，清代《本草纲目拾遗》中将其列为补益药物。近年来，随着对海参的生物活性物质研究的不断深入，人们从海参体壁中提取分离得到了海参多糖。研究表明，海参多糖具有抗凝血、抗肿瘤、免疫调节、延缓衰老、降血脂等多种生物学活性[1-3]。山东省是我国海参的主产区，目前年产海参已达3万t，在海参加工过程中，大量内脏抛弃处理，造成极大的资源浪费和环境污染。目前对于海参脏器多糖的研究鲜见报道,本文研究了从海参脏器中提取多糖的适宜方法，以期为海参脏器资源的开发提供参考，提高海参的附加值，促进海参养殖产业的发展。 1材料与方法 1.1材料与试剂 海参脏器：威海金源海参养殖场提供，洗去内容物及泥沙，室温晾干，粉碎机粉碎至20目过筛，浸泡于丙酮中4℃过夜脱脂，晾干备用；木瓜蛋白酶：sigma公司，酶活力为25U/mg；硫酸、苯酚、乙醇、丙酮、氢氧化钠、盐酸等所有试剂均为分析纯。 1.2仪器与设备 FW100高速万能粉碎机：上海胜启仪器有限公司；TDL-60低速离心机：上海安亭科学仪器厂；FD-1D 冷冻真空干燥机：上海精密仪器仪表有限公司；UV-2000紫外-可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；HH-4数显恒温水浴锅：常州华普达教学仪器有限公司。 1.3提取方法 称取一定量干燥的海参脏器粉，加入蒸馏水匀浆，用1mol/L的NaOH和1mol/L的HCl调节pH值，加入木瓜蛋白酶[4]，以酶解温度、酶解时间、pH值、料液比、加酶量为可变因素，在不同条件下酶解进行提取。酶解后迅速加热至90℃10min灭酶活，4000r/min离心5min，取上清，加入3倍体积的95%乙醇4℃静置过夜，取出，4000r/min离心5min，弃上清，先后以丙酮和无水乙醇洗涤沉淀，真空冷冻干燥得海参脏器多 酶法提取海参脏器多糖条件优化研究 许静1,2，周凤梅1，彭芳1，王怀卉1，傅风华1,* （1.烟台大学药学院，山东烟台264003；2.哈尔滨工业大学（威海）海洋学院，山东威海264209） 摘要：利用木瓜蛋白酶酶解海参脏器提取多糖，探讨酶解温度、酶解时间、pH值、料液比、加酶量等对海参脏器多糖得率的影响，确定最适提取条件为：酶解温度55℃，pH8.0，加酶量3.0%，料液比1∶30（g/mL），酶解时间4h，在此条件下，海参脏器多糖的得率为14.76%。 关键词：海参脏器；酶解；多糖 Study on the Extracrion of Polysaccharide from Holothurian Harslet by Enzyme Method XU Jing1,2,ZHOU Feng-mei1,PENG Fang1,WANG Huai-hui1，FU Feng-hua1,* （1.School of Pharmacy,Yantai University,Yantai264003,Shandong,China;2.School of Ocean,Harbin Institute of Technology at Weihai,Weihai264209，Shandong,China） Abstract:Papain was used to extract the polysaccharide from the holothurian harslet.The optimal extracting conditions obtained by the orthogonal experiment design were as follows:pH8.0,the ration of stuff to solvent was 1∶30（g/mL）,55℃,4h and3.0%of papain.With these conditions,the extraction rate of polysaccharides reached to14.76%. Key words:holothurian harslet;enzyme method;polysaccharide 作者简介：许静（1973—），女（汉），工程师，硕士研究生，研究方向：天 然产物分离纯化。 *通信作者
淫羊藿提取物 西安金绿生物工程技术有限公司 +86-0 29 - 8 13 214 95 [产品名称-KinGreen]: 淫羊藿提取物 [英文名称-KinGreen]: Epimedium Herb Extract [拉丁名称-KinGreen]: Epimedium davidii Franch [原料别名-KinGreen]: 刚前、仙灵脾、仙灵毗、黄连祖、放杖草、弃杖草、三叉风、桂鱼风、铁铧口、铁耙头、鲫鱼风、羊藿叶、羊角风、三角莲、乏力草、千两金、干鸡筋、鸡爪莲、三枝九叶草、牛角花、铜丝草、铁打杵、三叉骨、肺经草、铁菱角。 [产品来源-KinGreen]: 淫羊藿提取物来源为为小檗科植物淫羊藿（Epimedium brevicornum Maxim.）、箭叶淫羊藿（Epimedium sagittatumMaxim.）、柔毛淫羊藿（Epimedium pubescens Maxim.）、或朝鲜淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai）的干燥叶。 [原料形态-KinGreen]: 多年生草本，高30～40厘米。根茎长，横走，质硬，须根多数。叶为2回3出复叶，小叶9片，有长柄，小叶片薄革质，卵形至长卵圆形，长4.5～9厘米，宽3.5～7.5厘米，先端尖，边缘有细锯齿，锯齿先端成刺状毛，基部深心形，侧生小叶基部斜形，上面幼时有疏毛，开花后毛渐脱落，下面有长柔毛。花4～6朵成总状花序，
花序轴无毛或偶有毛，花梗长约1厘米；基部有苞片，卵状披针形，膜质；花大，直径约2厘米，黄白色或乳白色；花萼8片，卵状披针形，2轮，外面4片小，不同形，内面4片较大，同形；花瓣4，近圆形，具长距；雄蕊4；雌蕊1，花柱长。蓇葖果纺锤形，成熟时2裂。花期4～5月。果期5～6月。 [原料分布-KinGreen]: 生长于多荫蔽的树林及灌丛中。分布黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏、江西、湖南、广西、四川、贵州、陕西、甘肃。 [ Product—Brand ]: 西安金绿-Xi’an KinGreen [化学成分-KinGreen]: 淫羊藿苷、藿羊淫次苷、藿羊淫新苷、淫羊藿黄酮，有机酸、脂肪酸、生物碱、挥发油等成分 [供应厂家-KinGreen]: 西安金绿生物工程技术有限公司[药理作用-KinGreen]: 1．对性机能的影响淫羊藿能增强下丘脑－垂体－性腺轴及肾上腺皮质轴，胸腺轴等内分泌系统的分泌功能．淫羊藿煮提液1ml/100g 体重用于雌性大鼠，5天后能提高垂体对黄体生成释放激素的反应性及卵巢黄体生成素的反应性；明显增加正常大鼠垂体前叶、卵巢、子宫重量．淫羊藿有催淫作用，这种作用是由于精液分泌亢进，精囊充满后，刺激感觉神经而间接兴奋性欲．淫羊藿流浸膏有促进犬精液分泌的作用，其叶和根部的作用最强，果实次之，茎部最弱；以前列腺、精囊、提肛肌增
艾叶提取物的作用和临床应用 李平前言 艾叶为菊科植物艾( Art emisia ar gyi Livl. et vant ) 的干燥叶, 其性味辛、苦、温, 归肝、脾、肾经。艾叶具有温经止血、散寒止痛、调经安胎、除湿止痒、通经活络等功效【1】。临床上用以治疗少腹冷痛, 经寒不调, 宫冷不孕, 吐血, 衄血, 崩漏经多, 妊娠下血、消化道肿瘤、肺癌、甲状腺肿瘤、胰腺癌、外治皮肤瘙痒。该药用植物虽然在民间习用已有几千年历史, 但对艾蒿的药用成份进行科学分析和利用, 则始于近代。艾叶的药用功能来源于其中所含化学物质, 经研究艾蒿的化学成分主要有挥发油、黄酮、桉叶烷、三萜类及微量化学元素等。【2】本文仅就艾叶提取物在药理作用及其临床应用方面的研究状况综述如下。 主体 1化学成分研究 1.1 挥发油艾叶含挥发油(0.45-1.00) % ,从中鉴定出2 - 甲基丁醇、2- 己烯醛、三环萜、α-侧柏烯等60 种成分。从山东崂山产野生艾叶的挥发油中鉴定出34 种成分,其中含量较高的有柠檬烯、α- 侧柏酮、α- 水芹烯和香茅醇等。又从全株的挥发油中分得水合樟烯、1 ,4 - 桉叶素、蒿属酮、辣薄荷酮和羽毛柏烯等32 个成分。1.2黄酮类成分 5 ,7 - 二羟基- 6 ,3′,4′- 三甲氧基黄酮、5 - 羟基- 6 ,7 ,3′4′- 四甲氧基黄酮、槲皮素和柚皮素等。
1.3 桉叶烷类成分柳杉二醇,魁蒿内酯,1 - 氧- 4β- 乙酰氧基桉叶- 2 ,11 (13) - 二烯- 12 ,8β内酯、1氧- 4α- 乙酰氧基桉叶- 2 ,11 (13) - 二烯- 12 ,8β- 内酯 1.4 三萜类成分α - 及β - 香树脂醇、无羁萜、α- 及β- 香树脂醇的乙酸酯、羽扇烯酮、粘霉烯酮、羊齿烯酮、24 -亚甲基环木菠萝烷酮、西米杜鹃醇和3β- 甲氧基- 9β,19 - 环羊毛甾- 23 ( E) 烯—25 ,26 -二醇。 1.5其它成分β- 谷甾醇、豆甾醇,棕榈酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯和反式的苯亚甲基丁二酸等。 2 药理作用研究 2.1 抗菌、抗病毒 艾蒿在体外对炭疽杆菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、白喉杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等均有抑制作用。艾叶的水浸剂对常见致病性皮肤真菌有抑制作用。艾叶烟熏患处有明显抗菌作用, 使空气中菌落数减少, 完全抑制化脓菌的生长。艾叶烟熏对腺病毒、鼻病毒、疮疹病毒、流感病毒和腮腺炎病毒均有抑制作用【3】，刘巍等【4】将艾叶用水提取，用其水提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌的体外抗菌效果进行试验研究，结果证明艾叶水煎液对这5种致病菌均有明显的抗菌作用。 2.2 抗肿瘤 刘延庆等【5】采用MTT法观察艾叶的各种提取物对多种人癌细
即食海参是熟的吗 如果去大连出差可以在大连火车站的候车室中看到很多卖海参的店铺，大多卖的都是以即食海参，因为即食海参很方便人们食用。很多人对即食海参并不了解，一般都会咨询店员即食海参是熟的吗?即食海参是工厂已经加工好的，人们可以直接食用，也可以再通过短暂的加工后食用。 一、即食海参是什么 即食海参是由干参泡发后再加工制成的，而非用鲜参加工成。这是因为鲜参被打捞上来后会迅速自溶，必须尽快处理，所以没办法直接加工成即食海参。 即食海参分为高压即食海参和冻干即食海参两种。高压即食海参是将干参泡发后，再经过蒸煮加工的海参，可直接食用。高压即食海参的多糖不流失，还能被人体充分吸收利用。冻干即食海参则是采用FD宇航冻干技术加工而成的海参成品。然而，尽管保留了活性成分，冻干即食海参中的多糖等物质仍很难吸收利用，而且泡发过程中也会遇到流失营养的状况。 二、海参性温，有养胎利产、补肾益精、滋阴健阳、调经祛劳等阴阳双补功效。一般人群都能食用。而比较适合食用的人群则如下： 1、阳痿遗精、肾阳不足、小便频数之人可食用; 2、营养不良、气血不足、病后产后体虚之人可食用; 3、高血压病、冠心病、高脂血症、动脉硬化之人可食用;
4、癌症病人及放疗、化疗、手术后的病人可食用; 5、肾炎、肝炎、糖尿病患者及肝硬化腹水和神经衰弱者可食用; 6、血友病患者及易于出血之人可食用。 三、即食海参的做法 即食海参，顾名思义是可以开袋即食，不过，即食海参可不止一种吃法，要吃到好吃的海参，又能保持海参的营养价值，就来学学即食海参的做法吧! 1、海参小米粥 食材准备：即食海参、小米、排骨、调味品 制作步骤： 1)、将即食海参开袋，用水冲洗后，再切成小块备用。 2)、将小米洗净备用。 3)、将排骨洗净，切成小块摆入盘子里备用。 4)、将小米与海参、排骨一起放入清水锅内，武火煮滚。 5)、将武火改文火继续煮，并根据个人口味放盐调味即可。 2、凉拌海参 食材准备：海参、蒜泥、香菜、调味品 制作步骤： 1)、将煮后的水发海参用凉水洗透，切成薄片或切成碎丁备用。 2)、在海参碎末上加入适量盐、糖、醋、味精、蒜泥和香菜拌匀即可。 3、海参羊肉汤
蒽酮-硫酸法测残糖含量 （1）原理 糖类与浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收，显色与多糖含量有线性关系。 （2）试剂 ①蒽酮试剂。溶解0.2g蒽酮于浓硫酸（A.R.95.5%）100ml中，当日配制试用。具体实验 过程中，应视样品分数多少来准备蒽酮试剂的配置量。比如实测样品有50份，为了保证结果的可靠性，安排个份样品试验重复数为3。因为每个试验点实测需要4ml蒽酮试剂，所以至少应配置的体积为4×3×50＝600ml。此时还应考虑预实验和实验差错所消耗蒽酮试剂量。 ②标准糖试剂。葡聚糖溶液（可加数滴甲苯防腐） （3）操作及其注意事项 分别取0.1g/l的葡萄糖溶液0.05，0.10，0.20,0.30,0.40,0.60,0.80ml，用蒸馏水补到1.00ml，分别加入4.00ml蒽酮试剂，迅速进入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸开始计时，准确煮沸10min，冷却后进行比色。以光密度为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，制作标准曲线。或使用计算器进行一元回归得出计算式，以便于计算使用。 （4）样品含量测定 取糖浓度为50μg/ml左右的样品溶液1.00ml，一式3份分别置于不同试管中，对照加入1.0ml 蒸馏水，然后给各管加入蒽酮试剂，以标准曲线方法进行比色测定。根据标准曲线和样品浓度计算含量。 色氨酸含量较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰。此外，试管在加入蒽酮试剂过程中，移液管尖端在试管中所停留的高度对于加入蒽酮试剂的速度影响较大，而且对反应产生颜色的深浅都会产生一定的影响。因此，实验操作应该注意。
传统中药材淫羊藿的治病机理 药理实验研究表明，传统中药淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。 淫羊藿苷能显著增加家兔和狗脑血流量，降低脑血管阻力，保护脑缺血损伤。其增加脑血流量的作用主要是直接扩张脑血管的结果，其次与其钙通道的阻滞作用有关。淫羊藿总黄酮也能显著增加脑血流量，降低脑血管阻力，并可选择性阻断离体及整体动物心肌β1受体，但对气管β2受体和血管平滑肌α受体无阻断作用。 淫羊藿灌胃可抑制家兔体外血栓形成，其抑制血栓形成的主要因素可能和降低红细胞聚集性及降低全血粘度有关。淫羊藿总黄酮体外给药可显著抑制血小板聚集反应，可延长凝血酶原时间。 淫羊藿苷可促进小鼠脾淋巴细胞产生CSF样活性。CSF是促进人体或动物骨髓细胞增殖、分化、成熟及存活的一类糖蛋白，可促进机体造血并具有刺激诱导成熟细胞的功能，对机体造血功能具有重要作用。淫羊藿苷还可协同诱生IL-3和IL-6，而IL-3则可作用于骨髓多能干细胞，促进多种血细胞的分化增殖，IL-6亦可协同IL-3支持多能干细胞的增殖，因而可促进造血的功能。 淫羊藿多糖可使胸腺缩小，促进胸腺释放成熟细胞，增强机体细胞免疫功能。淫羊藿多糖皮下注射可提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，灌胃同样有效。淫羊藿苷也可显著激活巨噬细胞，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进IL-2和TNF（肿瘤坏死因子）的产生。淫羊藿多糖能促进小鼠T细胞增殖，对Ｂ细胞也有刺激增殖的作用。此外，淫羊藿多糖尚能使小鼠胸腺和脾脏细胞合成IL-2增多，诱生IFN，还有可能诱生γ干扰素。 淫羊藿苷能使小鼠附睾及精囊腺增重。淫羊藿可以使氢化考的松所致睾丸酮及雌二醇水平明显降低的模型动物睾丸酮的含量有所增加，改善雄性动物性腺的损伤。淫羊藿对垂体-性腺系统的功能也有促进作用。淫羊藿的补肾助阳作用可能与其直接刺激靶腺分泌激素有关。 淫羊藿苷在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，尚能影响细胞周期各时相分布的改变，凋亡率增高与Ｓ期细胞减少和Ｇ0/Ｇ1期细胞增多相关。淫羊藿苷能增强抗癌效应细胞（NK，LNK）的作用。淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能和红细胞免疫功能具有一定的恢复作用，在一定程度上可抑制肿瘤细胞的生长。 淫羊藿可抑制骨细胞功能，特别是使钙化骨形成增加，有“补骨”作用，对骨质疏松可能有防治效果。淫羊藿制剂可以从不同方面影响衰老机制，如影响细胞传代，延长生长期，调节免疫和分泌系统，改善机体代谢和各器官功能。此外，淫羊藿具有抗氧化作用，且对自然衰老动物下丘脑神经递质老年性变化有明显的延缓作用。
福州大学研究生 《知识产权》 课程报告 姓名： 学号： 学院：化学学院 专业：制药工程 年级：2017 级 2017 年 10 月17 日
一、前言 海参属于棘皮动物门海参纲，其生存已有5000万年之久。我国自古就有吃海参食补的传统，《食物本草》(公元1550年)中记载海参味咸，性温补，入肾经，生百脉血，补肾，益精，壮阳疗痿，除劳祛痰，滋阴利水，补正软坚，通肠润燥。《五杂俎》(公元1616年)中记载海参辽东之滨有之，其性温补足敌人参故名海参。 海参多糖是海参体壁的一类重要成分，其含量可占干参总有机物的6%以上。海参体壁多糖主要有两种：一种为海参糖胺聚糖或黏多糖(holothuria glycosaminoglycan，HG)，是由D-N-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L岩藻糖组成的分支杂多糖，其相对分子质量在40000—50000；另一种为海参岩藻多糖(holothurian fucan，HF)，是由L岩藻糖构成的直链匀多糖，相对分子质量在80000—100000。两者的组成糖基虽不同，但它们糖链上都有部分羟基发生硫酸酯化并且硫酸酯基占多糖含量均在32%左右。此外，有人从叶瓜参中分离获得硫酸低聚糖，其组成糖基与上述海参多糖HG或HF迥异。值得注意的是，该寡糖不论从组成糖基及其构型还是从各糖苷键连接方式看，皆类似海参皂苷的寡糖链。HG和HF的结构特殊，都为海参所特有。 糖胺聚糖的结构
d-( )-岩藻糖的结构 1,2,3,4-四-o-苯甲酰基-l-吡喃岩藻糖海参味美可口，营养丰富，具有较高的食疗价值，在我国一向被视为佐膳珍品。由于食用方法不对，海参的药用价值并没有得到广泛利用。现代药理研究表明：海参体壁真皮结缔组织、体腔、内腺管及内脏均含有海参多糖，海参多糖主要为海参糖胺聚糖或粘多糖（Holothurian Glycosaminoglycan, HG）其在组织中的含量之高和多糖的硫酸化程度之大在动物类中极为罕见，与传统中药补胶阿胶、鹿角胶、龟板胶和鳖甲胶中的总硫酸多糖含量仅占0.2％相比，海参高达6%。其药理作用综述如下。 1、抗凝血、抗血栓 HG具有抗血栓的作用，在体外有明显的抑制血小板解聚作用，由于它使血小板聚集体不能通过脏器和组织中的毛细血管而被扣下出现血小板减少。药理研究表明，家兔注射HG后，血循环中血小板数量明显减少，而血小板数量减少是由于HG聚集性增高，导致血小板聚集体增多所致。由于血小板的粘附聚集在早期凝血过程中的重要作用，所以血循环中血小板数量的大量消耗造成动物早期凝血功能异常。主要是影响血液凝结的内在通路，粘多糖在抗血栓的作用是依靠加速血纤维蛋白酶的活力，以防止单位血纤维蛋白的聚合，并改变血纤维蛋白的构筑。HG对血小板的凝集作用并不引起血小板的活化和代谢，也不发生形态上的变化和功能，从而达到抗凝血和抗血栓的目的。 2、抗肿瘤作用 刺海参中的HG能显著提高机体的免疫力，抑制癌细胞的生长，HG对抗多种实验动物肿瘤的生长，对MA－737乳腺癌和T795肺癌生长抑制率分别高达79％和60％以上，同时还能抑制M737乳腺癌的人工肺转移和Lewis肺自然转移这种粘多糖可促进骨髓造血机制，增加癌瘤细胞的血流量，提高药物在癌瘤组织中的
四肢厥冷话热厥 ——四肢厥冷，似寒非寒；阳郁厥逆，热深厥深临床时经常可以见到一些周身发凉，手足厥冷的病人，屡治不效。时值秋深气凉，许多人尤其是中青年女性随着天气的日渐寒凉，手足不温的症状开始加重，更有甚者有四肢厥冷的临床表现。从常理上讲，周身发凉，手足厥冷的病症就是寒大，治疗时遵照“寒者热之“的原则，选用温热祛寒、壮阳补气的中药治疗即可。大多数病人也认为此厥冷为寒邪伤人，自行服用温热祛寒的姜汤、麻辣类食物，结果非但没有改善其上述症状，反而出现口干舌燥，胸胁满闷，坐卧不宁，情绪急躁，目赤流泪等上火症状。让很多患者费解，难道这是陈寒痼冷，难以清除。还是如电视养生类节目经常所说的，真的阳虚、气虚了，得慢慢进补才行。关于四肢厥冷之症，2000年前的汉代中医经典著作《伤寒论》就早有描述，如“凡阴阳之气不相顺接便为厥；厥者，手足逆冷是也”。简单理解阴阳之气不相顺接，实际就是内脏之气与四肢之气不相顺接，导致人身的阳气不能顺利达到四肢末梢，既而出现的手足厥冷的病症。临床一般可以分为两类情况：①一类是人体真正的阳气虚衰，寒邪內生，出现的一系列如四肢厥冷、恶寒畏风、神疲蜷卧、少气懒言等生理机能衰退的症状；中医临床诊断为寒厥；治疗当用补法、温法；方药用四逆汤加减。②另一
类是人体的阴阳逆乱，内脏之气与四肢之气不相顺接，日久气机郁滞化热，热邪郁闭于内，阳气不达四末，出现的一系列如四肢厥冷，或脘腹疼痛，或口干心烦，或泄利下重等生理机能紊乱的症状；中医临床诊断为热厥（或称阳厥）；治疗当用调和疏通之法；方药用四逆散加减（方药歌诀：四逆散中用柴胡，芍药枳实甘草需，此是阳邪成厥逆，敛阴泄热平剂服）。临床论治之时，如为阳衰真寒之证，当以回阳救逆、温经散寒的四逆汤类方剂治之；中药治疗多用干姜、附子，肉桂、川椒、胡椒、人参、黄芪等温热补益之品，可收良效。但是也有许多这样手足厥冷的病人，经过系统、长期、大剂量温热药的治疗，厥冷病症不见好转，，反而日见加重，或兼脘腹疼痛，口干心烦等症。则大多数可能都是热邪郁闭于内的“热厥”误治所致。越用热药祛寒，内热郁闭越甚，阴阳之气越加不相顺接畅通，手足越觉厥冷，此即“热深厥深”是也。这类病人越治越痛苦，医师越治越挠头的顽疾，详究其因，还是论治之时背离了中医辨证论治的基本原则，被疾病的表浅假象蒙蔽，屡屡误治所致。关于如何辨别寒热真假，《伤寒论》早有记载：“病人身大热，反欲得衣者，热在皮肤，寒在骨髓也; 身大寒，反不欲得衣者，寒在皮肤，热在骨髓也”。前者“寒极似热”，后者“热极似寒”。在这种疑似的现象下，医生一定要透过现象看本质，才不致为表面的假象所迷惑。我于临床所治一些周身发凉，手足厥冷的病人，真寒者
JTCM. Dec. 2009, V ol. 50, Supplement 258 [5] 杨君利，杨洪梅.参芪五味子片治疗自汗与盗汗疗效分析[J].现代中医药杂志，2005，25（4）：25. [6] 徐晴姣，刘甲东.参芪五味子片治疗原发性肾病综合征临床观察[J].中国中医药信息杂志,2007,1((3):62. [7] 孙国剑，赵瑞英，章岩，等.参芪五味子片配合牵引治疗交感型颈椎病的临床观察[J].现代医药卫生，2007，23（9）：1373-1374. [8] 刘涛.参芪五味子片治疗功能性消化不良125 例临床观察[J].中国中医药信息杂志，2006,13(12):68. [9] 孙华，张云先，张晋云，等.参芪五味子片合化疗对恶性肿瘤术后患者的影响[J].中国中医药信息杂志,2003，10（12）：49－50. ﹡山东省潍坊市益都中心医院神经内科 淫羊藿苷抗肿瘤作用的研究进展 吕祥1 吴金峰2 淫羊藿来源于小檗科（Berberidaceae）淫羊藿属（Epimdium）植物，其主要活性成分为黄酮和多糖，黄酮类有效成分主要是淫羊藿苷（icariin, ICA）。现代药理研究表明，淫羊藿黄酮类成分具有抗肿瘤作用，先就其主要成分ICA抗肿瘤功效的研究做一综述。 1 ICA对呼吸系统肿瘤作用 毛海婷等[1-3]研究表明，ICA对PG（高转移肺癌细胞）细胞的增殖有明显抑制作用，该作用可能与cAMP/cGMP比值升高有关；发现ICA可降低PG细胞表面黏附分子CD44V6、层黏连蛋白受体（LN-R）及胞浆内角蛋白18（CK18）的表达，从而降低PG细胞对胞外基质的黏附性、侵袭及运动能力，同时ICA可以下调侵袭诱导基因c-myc、Tiam-1的mRNA表达，上调转移抑制基因nm23-H1的mRNA表达，进而抑制肿瘤细胞发生转移；采用流式细胞术和荧光探针标记技术，发现ICA可以提高PG细胞膜流动性，从而增强膜表面抗原MHC-Ⅰ（HLA-ABC抗原）的表达，从而增强PG细胞免疫原性，肿瘤细胞进而易逃离机体的免疫监视，最终导致肿瘤的扩散和转移。李晓燕等[4]研究证明，ICA可抑制PG细胞中TGFβ2的mRNA 和蛋白表达，能够逆转受TGFβ2抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性，并能部分恢复受TGFβ2抑制的LAK细胞表面IL-2Rα表达、CD3AK细胞内穿孔素mRNA的表达、CD3AK细胞的增殖活性。 2 ICA对消化系统肿瘤作用 王谦等[5]观察发现中药ICA能有效地抑制HepG2.2.15细胞增殖，并有一定时间依赖效应；ICA可下调FasL的表达，上调细胞表面Fas的表达，对HepG2.2.15细胞诱导的T淋巴细胞凋亡作用有一定阻断，逆转肿瘤细胞的免疫逃逸作用；ICA显著增强HepG2.2.15细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性。唐菁等[6]探讨了ICA、黄芩苷（baicali, BA）联合化疗药多柔比星（doxorubicin, ADM）抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体（proliferation-inducing ligand, APRL）的表达，研究表明，ICA、BA联合ADM抑制HepG2细胞APRL、bcl-2mRNA的表达，进而抑制肿瘤细胞增殖；同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性，逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。李翠玲等[7]观察了ICA对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用，实验表明，ICA有显著的抑瘤作用，可能是通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。 3 ICA对血液系统肿瘤作用 ICA作用于HL-60细胞和原代APL细胞72 h后，G0/G1期明显增加，S期细胞明显减少，从而诱导细胞周期阻滞，进而抑制HL-60细胞及原代APL细胞的增殖[8]。李贵新等[9]采用透射电镜、流式细胞术、DNA ladder等检测方法，发现ICA 可诱导HL-60细胞凋亡，呈现典型的凋亡形态学和生化特征，具有时间和剂量依赖性。葛林阜等[10]研究证实，ICA可明显诱导HL-60细胞和全反式维甲酸（ATRA）耐药HL-60细胞凋亡，其凋亡诱导作用机制可能与下调bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达有关。硝基四氮唑蓝（NBT）还原实验表明[8]，ICA可显著诱导HL-60细胞和原代APL细胞分化；ICA作用于HL-60细胞、ATRA耐药细胞HL-60细胞48 h或96 h后，两组细胞表面分化抗原CD11b、CD15、HLA-DR阳性表达增强[10]；上述结果显示，ICA可诱导HL-60细胞分化，其机制可能与ICA升高HL-60细胞内cAMP/cGMP比值，增加环磷酸腺苷相对含量有关。c-myc基因在端粒酶活性调节中起重要作用，ICA可下调c-myc基因mRNA和蛋白表达，HL-60细胞端粒酶活性的抑制也可能与c-myc基因有关[11]。郭铁军等[12]实验研究表明，p42MAPK和STAT3与ICA诱导HL-60细胞分化有关，而p42MAPK和STAT3则与ICA诱导HL-60细胞分化无关。谢超等[13]研究了曲古霉素A和ICA诱导急性非淋巴细胞白血病HL-60细胞株分化过程中nm23基因的表达变化，结果表明，HL-60细胞分化过程中c-myc基因的表达下调，G-CSF基因表达上调与下调nm23基因的表达有关。狄凯军等[14]报道，经Giemsa染色、Hoechst 33342/PI荧光双染色及电镜观察， ICA 对K562细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用。 4 ICA对其他肿瘤作用 4.1 ICA对乳腺癌作用 整体药理研究结果显示，淫羊藿或淫羊藿提取物可能具有雌激素活性[15-16]。流行病学研究和体内外实验研究表明，植物雌激素具有抗乳腺癌作用[17]。ICA具有与雌二醇相似的结构，表现出对乳腺癌细胞具有增殖抑制作用。叶海涌等[18]发现，ICA 浓度为10-5mol/L时可显著抑制T47D细胞增殖，其作用机制尚未见报道。 4.2 ICA对前列腺癌作用 流行病学和体内外实验研究表明，植物雌激素具有抗前列腺癌作用[19]。ICA及其衍生物ICT具有与雌二醇相似的结构，也表现出对前列腺癌细胞具有增殖抑制作用。HUANG等[20]考察了ICA、ICT对前列腺癌PC-3细胞的作用，ICA对PC-3细胞的抑制作用较ICT弱。 4.3 ICA对黑素瘤Cloudman S91作用