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HPLC法同时测牛黄解毒片中大黄素与大黄酚含量-吴学军,邹荣华,李永杰

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第16卷 第6期 2014?年?6?月

辽宁中医药大学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

Vol. 16 No. 6 Jun .,2014

粉混合干燥、制粒,到压片包衣的全部过程。在中药制剂的水提取工艺中,加水量的考察是一个重要的因素,在不影响提取物得率的情况下,就不必要用大量的水提取,以降低生产成本。膏粉混合物的干燥温度会影响有效成分,为保证产品疗效,必须选择一个最佳温度。制粒[3]用溶剂一般为水或不同浓度的乙醇,要根据膏粉的性质、黏性大小等进行选择,本制剂浸膏多,需要用高浓度的乙醇制粒,用量也要进行考察。薄膜包衣是

近年来一种比较先进的生产工艺,具有使片剂更稳定、防止吸潮、美观等优点,所以对本产品最后进行了薄膜包衣。本文的研究为中药制剂的研究提供了参考。◆

参考文献

[ 1 ] 王俊香,张华.黄芪醇提研究[ J ] .辽宁中医药大学学报,

2012,14 ( 2 ):179.[ 2 ] 赵宏峰,解生旭,韩冬,等.康艾注射液中黄芪甲苷的含量测定

方法研究[ J ] .长春中医药大学学报,2008,24 ( 6 ):126-127.[ 3 ] 张兆旺.中药药剂学[ M ] .北京:中国中医药出版社,2003.

牛黄解毒片由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔

梗、冰片、甘草8味药材组成,具有清热解毒作用。用于火热内盛,咽喉肿痛,牙龈肿痛,口舌生疮,目

赤肿痛[1]

。为了更好地控制药品质量,本实验采用HPLC 法同时测定牛黄解毒片大黄素和大黄酚含量。

1

材料与仪器1.1?材料与试剂

大黄素和大黄酚(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号:0756-201016;0796-200912);供试品(市售);甲醇(色谱纯)、甲酸等均为分析纯。

1.2?实验主要仪器

Agilent1100高效液相色谱仪。

2 实验方法与结果

2.1?色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:KromasilC 18柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm);

流动相:0.1%甲酸-甲醇(20∶80);流速:1 mL/min;柱温:室温;检测波长:254 nm;进样量:10 μL。在此条件下,理论塔板数按大黄素和大黄酚与其它杂质峰的分离度良好。色谱图见图1。

HPLC法同时测牛黄解毒片中大黄素与大黄酚含量

吴学军1,邹荣华1,李永杰2

(1.沈阳东新药业有限公司,辽宁?沈阳?110300;2.大连医科大学附属第一医院,辽宁?大连?116011)

摘 要:

目的:测定牛黄解毒片大黄素和大黄酚的含量。方法:高效液相色谱法(HPLC),采用KromasilC 18柱(150?mm×4.6?mm,5?μm),流动相0.1%甲酸-甲醇(20∶80),流速为1?mL/min,检测波长:254?nm;柱温:室温。结果:大黄素在2~10?μg 范围内线性关系良好,r =09996;大黄酚进样量在8~40?μg 范围内线性关系良好,r =0.9990。大黄素的加样回收率平均为98.24%;大黄酚的加样回收率平均为97.93%。结论:HPLC 法简便、快速、灵敏度高,同时测定牛黄解毒片大黄素和大黄酚的含量,适合作为控制牛黄解毒片药品质量方法。

关键词:HPLC;牛黄解毒片;大黄素;大黄酚

中图分类号:R284.2 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2014) 06- 0066- 02

收稿日期:2013-12-11

作者简介:吴学军(1967-),男,辽宁沈阳人,药师,学士,研究方向:中药质量标准及新药研究。通讯作者:李永杰(1969-),男,辽宁大连人,副主任药师,硕士,研究方向:中药质量。

Simultaneously Determination of Emodin and Chrysopanol

in Nuhang Jiedu Tablets Using HPLC Method

WU Xuejun 1,ZOU Ronghua 1,LI Yongjie 2

(1. Dongxin Pharmaceutical Co.,Ltd.,Shenyang 110300,Liaoning,China;2. First Affiliated Hospital of Dalian Medical University,Dalian 116011,Liaoning,China)

Abstract:Objective :The purpose was to determine the contents of emodin and chrysophanol

in Nuhang Jiedu Tablets. Method :High performance liquid chromatography(HPLC),Kromasil C 18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm)was used with 0.1% FA-methanol(20∶80);flow rate:1 mL/min;detection wavelength:254 nm;column temperature:ambient temperature. Result :Linear range of emodin and chrysophanol were 4~25 μg,r =0.9996 and 11~58 μg,r =0.9990;mean recovery of emodin and chrysophanol were 98.24% and 97.93%,respectively. Conclusion :The simple,rapid and high sensitive HPLC method is applicable to simultaneously determine the contents of emodin and chrysophanol and to be the method controlling the quality of Niuhuang Jiedu Tablets.

Key words:HPLC;Niuhuang Jiedu Tablets;emodin;chrysophanol DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2014.06.025

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16卷 辽宁中医药大学学报

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A:

牛黄解毒片

B:大黄素和大黄酚对照品

图1 高效液相色谱图

2.2?对照品及供试品溶液制备

2.2.1?对照品溶液制备

精密称取大黄素和大黄酚对照品各10 mg,分别置50 mL 量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密量取大黄素溶液5 mL、大黄酚溶液10 mL,共置25 mL 量瓶中加甲醇至刻度,摇匀,即得大黄素和大黄酚混合对照品溶液(大黄素每毫升含40 μg,大黄酚每毫升含80 μg)。2.2.2?供试品溶液制备

取牛黄解毒片20片,去包衣,研细。取本品2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇50 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5 mL,置烧瓶中,挥去甲醇,加10%盐酸溶液10 mL,超声处理5 min,再加三氯甲烷10 mL,加热回流40 min,放冷,移置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液用三氯甲烷提取3次,每次约10 mL,合并三氯甲烷液,挥干,残渣加甲醇使溶解,转移至10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,测定。

2.3?方法学考察

2.3.1?线性范围

精密称取大黄素与大黄酚对照品适量,分别加甲醇溶解并均制成每毫升含0.2 mg 溶液,作为储备液。分别精密量取大黄素对照品储备溶液1、2、3、4、5 mL,大黄酚对照品储备溶液2、4、6、8、10 mL 共置于50 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10 μL,注入液相色谱仪,按正文所述色谱条件测定峰面积,以进样量(μg)为横坐标(X),峰面积(Y)为纵坐标,

绘制标准曲线,大黄素与大黄酚分别计算回归方程:Y=368225.510X + 11.6437,r =0.9996,结果表明大黄素进样量在2~10 μg 范围内呈良好的线性关系;Y= 5.21278466X+5.83404,r =0.9990。结果表明大黄酚进样量在8~40 μg 范围内呈良好的线性关系。

2.3.2?精密度试验

精密吸取大黄素和大黄酚混合对照品溶液10 μL,重复进样6次,测量峰面积,结果RSD 分别为 0.88%、0.40%,表明仪器精密度良好。2.3.3?稳定性试验

精密称取取同一批次的样品,按供试品溶液的制备方法处理,于0、2、4、6、8、10 h 进样分析。大黄素和大黄酚平均含量的RSD 分别为1.5%、1.2%,表明样品稳定性良好。2.3.4?重复性试验

取同一批次的样品,精密称取6份,按供试品溶液的制备方法处理,进样分析,大黄素和大黄酚平均含量的RSD 分别为1.7%、1.1%,表明方法重复性良好。

2.3.5?加样回收试验

精密称取已知含量的同一批样品1 g,精确加入一定量大黄素和大黄酚对照品,按供试品溶液的制备方法操作,测定其含量,并计算回收率,测定结果见表1。

表1 大黄素和大黄酚加样回收试验结果

编号样品中大黄素/大黄酚

含量(mg)加入大黄素/大黄酚量(mg)实测大黄素/大黄酚(mg)大黄素/大黄酚回收率(%)大黄素/大

黄酚平均回

收率(%)RSD

(%)

1 3.1/5.83/6 6.0/11.696.0/98.596.4/97.9 2.2/

1.42 3.4/6.33/6 6.3/1

2.094.6/96.03 2.9/6.03/6 5.9/11.894.8/97.24

3.2/5.83/6 6.1/11.598.0/99.7

5 3.0/5.63/

6 5.9/11.395.2/96.86 3.2/5.5

3/6 6.2/11.2100/98.9

样品测定:依上述方法制备供试品溶液,相同

色谱条件,以外标法计算含量,测定3批样品,结果见表2。

表2 大黄素与大黄酚含量测定结果(mg/g)成分20110323

20110410

20110625

大黄素 3.4 3.2 3.0大黄酚

5.8

6.0

5.8

3 讨 论

本实验采用不同浓度的盐酸进行水解,并对水

解的时间及酸的浓度进行详细的考察,通过一系列酸的浓度及水解时间的考察,本品以10%盐酸水解,效果最为理想。在高效液相色谱分析时,对甲酸浓度进行了考察,结果表明流动相中加入0.1%时,大黄素、大黄酚与其它杂质峰达到完全分离,色谱峰形良好。最终,选择0.1%甲酸-甲醇(20:80)为流动相。本研究建立的HPLC 法操作简便,精密度及重现性好,可以作为同时测定大黄素和大黄酚含量,可有效地控制牛黄解毒片质量。◆

参考文献

[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ M ] .北京:中

国医药科技出版社,2010:566.

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