1、乙肝表面抗原（HBsAg）阳性：代表被乙肝病毒感染。（病毒数量） 2、乙型肝炎表面抗体（HBsAb或抗-HBs）阳性：代表机体对乙肝病毒有抵抗力，能够杀灭乙肝病毒。（对病毒的抗体） 3、乙肝e抗原（HBeAg）阳性：代表乙肝病毒复制活跃，传染性强。（病毒复制性强弱） 4、乙肝e抗体(HBeAb或抗HBe)阳性：代表病毒复制相对减少，传染性弱。（同上） 5、乙肝核心抗体（HBcAb或抗HBc）阳性：代表感染了乙肝病毒或曾经感染过乙肝病毒已经痊愈。乙肝病毒血清标志物的临床意义（乙肝两对半） HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 意义 + - - - - 急性HBV感染潜伏期 + - + - - 急性肝炎早期，传染性强 + - + - + 急性或慢性感染传染性强 + - - + + 急性或慢性感染后期传染性低 + - - - + 急性或慢性乙型肝炎HBV携带者 + + + - + HBsAg免疫复合物，新的不同亚型感染 + + + + + ①一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见） ②血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见） - + - - + HBV感染，恢复期 - - - + + ①HBV感染已过 ②抗HBs出现前的窗口期 - + - + + HBV感染恢复期 - + - - - ①注射疫苗后
②遥远的过去感染 ③假阳性
乙肝“两对半”化验结果对照表 检查乙型肝炎病毒（HBV）感染最常用的血清学标志是乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(抗-HBe)及乙肝核心抗体(抗-HBc)共5项指标，故称“乙肝两对半”，其作用有三：1.判断有无HBV感染；2.判断HBV感染者传染性的大小；3.作为慢性乙肝患者抗病毒治疗及疗效判断的依据之一，以下是几种常见的结果及意义。 模式HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 诊断结果临床意义 1 ＋- + －+ “大三阳” 表明有HBV感染且病毒复制活跃，传染性较强 2 ＋- - + + “小三阳” 表明有HBV感染但病毒复制相对静止，传染性相对较弱 3 ＋- - - + 恢复初期表明有HBV感染但病毒复制相对静止，传染性相对较弱 4 - + - - + 恢复后期表明曾感染过HBV，但已产生保护性抗体，不具有传染性，也不需注射乙肝疫苗 5 - - - - + 恢复后期表明曾经感染过HBV 6 - + - - - 完全恢复表明注射乙肝疫苗后产生的保护性抗体，若未注射乙肝疫苗，则表明曾经感染过HBV，现已产生保护性抗体，不具有传染性，也不需要再注射乙肝疫苗。 说明：“乙肝两对半”仅反映HBV感染及复制情况并不能完全反映病情轻重，如“大三阳”病情不一定重，而“小三阳”病情不一轻。若要判断乙肝病情的轻重，除要检查“乙肝两对半”外，还应结合肝功能试验、肝纤维化指标及B超、CT表现才能准确判断当前病情。另外，若要更准确地判断HBV的复制状态及病人的传染性，还应做乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）的定量检查。 这个也可以看一下。
乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA） 1原理： 在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。2试剂： 2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 2.3包装规格：96Test/Kit 2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg 酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。 2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。 3样本采集： 取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。 4所需仪器
4.1全自动酶免分析仪 4.2新鲜蒸馏水或去离子水 4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm） 4.4微量移液器 4.5 37℃恒温箱或水浴箱 4.6洗板机或洗瓶 5检验方法 5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。 5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。 5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。 5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。 5.6温育：置37℃温育60min。 5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。 5.8温育：置37℃温育30min。 5.9洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。 5.10显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗置30min。 5.11终止：每孔加入终止液50ul，混匀。 5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm
乙肝五项的检查及临床意义 乙肝两对半即乙肝五项，是确诊和了解乙肝(又称B型肝炎)病情的重要依据。包括：乙肝表面抗原HBsAg、乙肝表面抗体HBsAb、乙肝e抗原 HBeAg、乙肝e抗体HBeAb、乙肝核心抗体HbcAb。正常情况下五项指标全部阴性或乙肝表面抗体HbsAb阳性。其中乙肝两对半检查中的“乙肝大三阳、乙肝小三阳”是了解乙肝(又称B型肝炎)病情最为重要的综合性指标。 一、乙肝两对半（包括了乙肝大三阳、乙肝小三阳）的检查及临床意义 HBV（乙肝病毒）感染后病毒产生的蛋白释放入血导致相应的血清标志物，主要有三对，即即表面抗原（HBsAg）和表面抗体（抗HBs或HBsAb）、e 抗原（HBeAg）和e抗体（抗HBe或HBeAb）、核心抗原（HBcAg）和核心抗体（抗HBc 或HBcAb），但核心抗原在血清中一般不易检出，仅其余两对半在血液中可检测出。 1、乙肝两对半（乙肝五项）的简要临床意义 2、乙肝五项各指标的常见变化与简要临床意义：
以上简单罗列了感染乙肝（B型肝炎）病毒后两对半的常见的一些表现形式，针对个体，可能仍存在其它不同的表现组合，或在转归中。所以碰到不典型的组合，不必担心，建议过段时间再次复检，一般不典型的情况不会持续太久。 3、乙肝两对半检测中乙肝大三阳、小三阳以及部分指标的临床意义及对策
（１）乙肝大三阳（乙肝五项135阳性）--是指两对半检查中，表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核心抗体（HBcAb）为阳性。乙肝大三阳，说明乙型肝炎病毒在人体内复制活跃，传染性较强．这类患者体内的血液、唾液、精液、乳汁、宫颈分泌液都可有传染性，如果同时有转氨酶增高者，首先就应注意隔离，在家庭内患者的碗筷等餐具可单独与家人分开，定期消毒。 ★ 专家对策：患者应到专科医院就诊采用抗病毒，提高机体免疫力和对症降酶保肝措施。建议做肝功能和肝B超检查。如果都正常，不要乱治疗，定期每半年做一次肝功能和肝B超检查。可以服用中草药，比较安全有效，服用中草药调节肝脏免疫功能，促进肝细胞修复再生，增强肝的抵抗力，阻止肝脏纤维化。抗HBV-免疫疗法辩证治疗“大三阳”>>> （２）乙肝小三阳（乙肝五项145阳性）--是指在乙肝（又称B型肝炎）的“两对半”检查的五项指标中，表面抗原(HBsAg)、E抗体(HBeAb)和核心抗体(HBcAb)检测均是阳性。提示急性或慢性乙型肝炎，体内病毒复制，为乙型肝炎病毒复制状态。乙肝小三阳通常是由“乙肝大三阳”转变而来，是人体针对E 抗原产生了一定程度的免疫力。 ★ 专家对策：乙肝小三阳（乙肝五项145阳性）应检查HBV-DNA及肝功能，根据具体情况进行综合分析。如果HBV-DNA（+）且肝功能异常，说明病毒复制，传染性强，应该采取以抗病毒为主的综合治疗。如果HBV-DNA（-）且肝功能、B 超及AFP等均长期正常，则说明病毒已复制不活跃，传染性很低，所以已无需隔离与治疗。乙肝小三阳全面解析>>> （3）乙肝五项（2、5项为阳性），其余阴性。既往感染，急性HBV感染已恢复。其中第二项阳性说明已经产生抗体，不用打疫苗。第五项阳性只提示曾被乙肝病毒感染过，现已恢复。 ★ 专家对策：这种情况患者不需要治疗，只要保持好生活规律，劳逸结合，注意加强锻炼，增强体质，做好定期复查即可。 （4）乙肝五项（2、4、5项为阳性），其余阴性。2、4、5阳性表示的意思是：1、急性乙肝感染恢复期；2、既往感染过乙肝；3、注射乙肝疫苗等产生了表面抗体。第二项HBsAb、第五项HBcAb阳性是既往感染并产生抗体的证明，因第四项HBeAb可存在较长时间才被清除，固常可出现2、4、5阳性。 ★ 专家对策：此时是感染乙肝（B型肝炎）病毒以后的恢复期，虽然已经产生了乙肝表面抗体，对乙肝也已经有了免疫力，但是还是必须了解自身表面抗
PCR技术的种类及其应用 1PCR技术的基本原理 PCR技术是在模板DNA引物和四种dNTP等存在的条件下,依赖于DNA聚合酶(T aq酶)的酶促合成反应。其具体反应分三步：变性、退火、聚合。以上三步为一个循环，每一循环的产物DNA又可以作为下一个循环模板，数小时后，介于两个引物之间的目的DNA得到了大量的复制，经25?30次循环DN数量可达2X106~7拷贝数。 2PCR技术的种类 2.1反向PCR( Inverse PCR, IPCR技术 原理：反向PC是克隆已知序列旁侧序列的一种方法.主要原理是用一种在已知序列中无切点的限制性内切酶消化基因组I) NA?后酶切片段自身环化?以环化的DNA 作为模板，用一对与已知序列两端特异性结合的引物，扩增夹在中间的未知序列。该扩增产物是线性的DNA片段，大小取决于上述限制性内切酶在已知基闲侧翼DNA 序列内部的酶切位点分布情况。用不同的限制性内切酶消化，可以得到大小不同的模板DNA再通过反向PCR获得未知片段。 该方法的不足是：①需要从许多酶中选择限制酶，或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的DNA片段。这种选择不能在非酶切位点切断靶 DNA。②大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列，而在YAC或Cosmid 中的未知功能序列中有时也会有这些序列，这样，通过反向PCR得到的探针就 有可能与多个基因序列杂交。 2.2锚定PCR( Anchored PCR, APCR)技术 用酶法在一通用引物反转录cDNA3 '末端加上一段已知序列，然后以此序列为引物结合位点对该cDNA进行扩增，称为APCR。 应用：它可用于扩增未知或全知序列，如未知cDNA的制备及低丰度cDNA文库的构建。 2.3不对称PCR(asymmetric PCR)技术 两种引物浓度比例相差较大的PCR技术称不对称PCR在扩增循环中引入不同的引物浓度，常用50?100T比例。在最初的10?15个循环中主要产物还是双链DNA,但当低浓度引物被消耗尽后,高浓度引物介导的PCR反应就会产生大量单链DNA 应用：可制备单链DNA
测定乙肝抗体滴度的临床意义 乙肝抗体指的是乙肝保护性抗体，即乙肝表面抗体，而乙肝抗体滴度指的是乙肝表面抗体的浓度。当乙肝表面抗体浓度达到一定程度时才能够更有效的保护人体免受乙肝病毒的入侵。 产生乙肝表面抗体一般有两种途径： 1、曾经感染的乙肝病毒，但是由于自身的免疫功能强大，消灭了乙型肝炎病毒并且产生了乙肝表面抗体。 2、注射乙肝疫苗后产生的。所以在打完乙肝疫苗后检查乙肝抗体滴度主要是看其浓度，乙肝抗体滴度的值越大，那就说明患者抵御乙肝病毒的能力越强。 抗体滴度的正常值 一般情况下，乙肝抗体滴度的正常值为10mIU/ml，当乙肝抗体滴度大于这数值时，乙肝表面抗体便能够有效的保护人体。一旦乙肝抗体滴度小于此数值时，乙肝表面抗体的保护能力减弱，此时，一旦患者接触到含有乙肝病毒的血液，或者与携带乙肝病毒的患者亲密接触时，便有感染乙肝的可能。这个时候，最好还是要到医院注射一支乙肝疫苗加强针，以增强保护力。 测定抗体滴度注意事项 乙肝抗体滴度会随之时间的推移而逐渐下降的，乙肝抗体的维持时间，根据患者自身的免疫力来决定的，大多数患者的乙肝抗体能够维持长达5年之久，但有的患者仅能够维持2-3年，因此为了避免感染乙
肝，患者最好在2-3年后到医院做一个检查。 1、乙肝抗体滴度最高值仅为10～100mIU/ml，最好在6个月后复测1次； 2、乙肝抗体滴度最高值为101～1000mIU/ml时，应于第一次注射后1～2年内复测乙肝表面抗体； 3、乙肝抗体滴度在1001～10000mIU/ml时，应于2～4年内复测； 4、乙肝抗体滴度大于10000mIU/ml时，可以在4～6年内复测； 5、乙肝抗体滴度低于10mIU/ml时应复种，复种仍按初种的剂量和时段办法进行。 判断方法 乙肝抗体滴度可以通过乙肝标志物定量检测来获得，那么乙肝抗体滴度怎么看呢？在化验单上可以显示的是乙肝抗体滴度，通过查看滴度就可以判断滴度的大小。可以有效保护人体不受病毒感染的最小值是10mIU/mL，当检测结果显示乙肝抗体滴度小于10mIU/mL说明滴度比较低，还需要注射乙肝疫苗。如果大于10mIU/mL，说明可以有效的保护人体不受感染。 当注射乙肝疫苗后，大部分人都会产生乙肝抗体，并且滴度相对较高，但还有些人产生的滴度比较低，甚至不产生抗体。所以注射乙肝疫苗以后，不要万事大吉，要到医院检查乙肝抗体的滴度。但是滴度会随着时间的推移而降低，专家建议在注射乙肝疫苗3-5年内应到医院再注射一次乙肝疫苗，特别是新生儿。
乙型肝炎表面抗体定量检测 1．检验目的 检测HBsAb主要是用于监测乙型肝炎疫苗是否有效，HBsAb的出现表明机体具有针对乙肝病毒感染的免疫力和抵抗乙肝病毒的侵入，同时定量检测HBsAb还可以观察急性乙肝恢复的动态情况以及乙型肝炎的流行病学调查（以往是否暴露接触过乙肝病毒）。 2．方法原理 采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析（MEIA），即以rHBsAg包被微粒子（M-Ag）与标本中的HBsAb形成M-Ag-Ab 复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，加入生物素化HBsAg（Ag-B）形成M-Ag-Ab-Ag-B复合物，再与加入的碱性磷酸酶标记的抗生物素抗体结合，洗去未结合的游离物质，加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。 3．性能指标 MEIA定量检测HBsAb在0.00-1000mIU/ml的范围内呈线性关系，不精密度CVs为3-8%，检出限>0.1mIU/ml，灵敏度0.1mIU/ml。 4．标本收集 4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放臵于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。 4．4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管 4．5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。 4．6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。 5．分析系统 5．1分析仪器：为美国雅培公司提供的AXSYM全自动免疫分析仪，仪器校准请参见仪器操作规程。 5．2分析试剂：为美国雅培公司提供的配套的HBsA b试剂盒，规格为100test/盒，2-8℃贮存，有效期6个月；在效期内使用试剂。 5．3定标试剂：为美国雅培公司提供的配套的HBsAb试剂盒中所附带，2-8℃贮存，有效期6个月；每换一次不同批号试剂均应进行重新定标。 5．4质控试剂：为美国雅培公司提供的配套的质控品，分为高、低二个浓度，2-8℃贮存，有效期6个月；每天随常规工
乙肝抗原抗体检查是什么 我们要想知道自己是否感染乙肝，就要去医院进行乙肝抗原抗体检查，那么到底乙肝抗原抗体检查是什么呢？对此，云南新华肝病医院青光枝主任作出了详细解答。 云南新华肝病医院青主任指出，临床上运用最广泛的乙肝抗原抗体检查，就是我们常听说的乙肝两对半检查，是我国最常用的乙肝血清标志物检查。具体乙肝抗原抗体检查有五项：乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体和乙肝核心抗体，以下对其检查意义进行分别介绍： 一、乙肝表面抗原：是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它常伴随乙肝病毒而存在，因此是感染乙肝的标志。 二、乙肝表面抗体：它可以和表面抗原特异地结合，在体内与人体的其他免疫功能共同作用下，可把病毒清除掉，保护人体不再受乙肝病毒感染。通常乙肝表面抗体作为中和性抗体标志，判断是否康复或是否有抵抗力。 三、乙肝e抗原：是可溶性蛋白，核心抗原的亚成分，当核心抗原裂解时，乙肝e抗原就溶于血清中，存在于血液循环中，临床检查意义为病毒复制标志，持续阳性3个月以上则有慢性化倾向。 四、乙肝e抗体：由e抗原刺激人体免疫系统产生出来的特异性抗体是，是病毒复制停止标志，病毒复制减少，传染性较弱，但需注意e抗体不是保护性抗体，不代表患者有了免疫力。 五、乙肝核心抗体：检测乙肝核心抗体可以了解人体是否有过核
心抗原的刺激，也就是说是否有过乙肝病毒的感染，因此作为病毒感染的标志之一。 以上就是肝病专家青主任对“乙肝抗原抗体检查”的详细解答，最后青主任提醒，在进行乙肝抗原抗体检查的时候，一定要到正规的肝病医院，才能保证检查结果的准确性，云南新华肝病医院位于昆明市北市区金实小区南门小庄立交桥旁，是云南省重点三甲肝病医院，已有20多年的专业治肝历史，医院拥有先进的诊疗设备和专业的专家团队，能保证每一位到诊的患者，都得到有效的治疗，是检查和治疗的首选！
资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除只供学习与交流 1、乙肝表面抗原（HBsAg ）阳性：代表被乙肝病毒感染。（病毒数量） 2、乙型肝炎表面抗体（HBsAb或抗-HBs ）阳性：代表机体对乙肝病毒有抵抗力，能够杀灭乙肝病毒。（对病毒的抗体） 3、乙肝e抗原（HBeAg ）阳性：代表乙肝病毒复制活跃，传染性强。（病毒复制性强弱） 4、乙肝e抗体（HBeAb或抗HBe）阳性：代表病毒复制相对减少，传染性弱。（同上） 5、乙肝核心抗体（HBcAb或抗HBC阳性：代表感染了乙肝病毒或曾经感染过乙肝病毒已经痊愈。乙肝病毒血清标志物的临床意义（乙肝两对半） HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 意义 + ——急性HBV感染潜伏期 + - + - - 急性肝炎早期，传染性强 + - + - + 急性或慢性感染传染性强 + - - + + 急性或慢性感染后期传染性低 + - - - + 急性或慢性乙型肝炎HBV 携带者 + + + - + HBsAg 免疫复合物，新的不同亚型感染 + + + + +①一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs （常见） ②血清从HBsAg 转化为抗HBs 的过程（少见） - + - - + HBV 感染，恢复期 ---+ +①HBV感染已过 ②抗HBs 出现前的窗口期 - + - + + HBV 感染恢复期
- + - - - ①注射疫苗后 资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除只供学习与交流 ②遥远的过去感染 ③假阳性
资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除只供学习与交流 乙肝“两对半”化验结果对照表 检查乙型肝炎病毒（HBV）感染最常用的血清学标志是乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗-HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（抗-HBe）及乙肝核心抗体（抗-HBc）共5项指标，故称乙肝两对半”其作用有三：1.判断有无HBV 感染；2.判断HBV 感染者传染性的大小；3.作为慢性乙肝患者抗病毒治疗及疗效判断的依据之一，以下是几种常见的结果及意义。 模式HBsAg抗-HBs HBeAg 抗-HBe抗-HBc诊断结果临床意义 1 + - + - +大三阳”表明有HBV感染且病毒复制活跃，传染性较强 2 + - - + +小三阳”表明有HBV感染但病毒复制相对静止，传染性相对较弱 3 + - - - +恢复初期表明有HBV感染但病毒复制相对静止，传染性相对较弱 4 - + - - +恢复后期表明曾感染过HBV，但已产生保护性抗体，不具有传染性，也不需注射乙肝疫苗 5 - - - - + 恢复后期表明曾经感染过HBV 6 - + - - - 完全恢复表明注射乙肝疫苗后产生的保护性抗体，若未注射乙肝疫苗，则表明曾经感染过HBV，现已产生保护性抗体，不具有传染性，也不需要再注射乙肝疫苗。 说明：乙肝两对半”仅反映HBV感染及复制情况并不能完全反映病情轻重，如“大三阳”病情不一定重，而“小三阳”病情不一轻。若要判断乙肝病情的轻重，除要检查乙肝两对半”外，还应结合肝功能试验、肝纤维化指标及B超、CT表现才能准确判断当前病情。另外，若要更准确地判断HBV 的复制状态及病人的传染性，还应做乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA ）的定量检查。这个也可以看一下。
乙肝表面抗体弱阳性 我国是乙肝大国，有一亿多乙肝患者，相信无论是谁都是闻肝色变，虽然在媒体的大力宣传之下和乙肝疫苗普及的今天，我国乙肝的状况已经得到了控制，并发生了逆转，但是那一亿多乙肝患者的事实是短期内无法改变的，而且有很多人根本不了解乙肝，只是知道这是一项很厉害的传染疾病，还有些人根本不知道乙肝是可以通过注射乙肝疫苗进行防护的，广东肝病医院（广东省肝病治疗中心）的肝病专家赵丽惠主任指出，在普通人的认知里，认为乙肝五项检查应该全阴才是好事，其实不然，乙肝第二项就是乙肝病毒的表面抗体，它为阳性才是最好的状况，因为它可以使您抵御乙肝病毒的感染。 什么是乙肝表面抗体 乙肝表面抗体是乙肝五项当中的抗体之一，而且是一种保护性抗体，当乙肝表面抗体阳性的时候，可以预防机体感染乙肝病毒，而如果呈阴性，那么说明机体对乙肝病毒没有免疫能力，是很容易感染乙肝病毒的。此时则需要积极的注射乙肝疫苗，增强自身免疫能力才行。 乙肝表面抗体参考值是多少 一、在乙肝五项中，乙肝表面抗体的参考值是2.1，小于2.1为阴性，大于等于 2.1为阳性。 二、在疫苗检查中，参考值是10，一般来说滴度值大于等于10为阳性，此时才具有很好的保护能力，才能够有效的预防乙肝病毒侵袭集团。 三、若乙肝病毒的滴度值在4-10单位之间，则称为弱阳性，此时保护能力不强，并不能有效的预防乙肝病毒侵袭机体。应当积极的再次注射乙肝疫苗。 乙肝表面抗体弱阳性是怎么回事 一般来说，当机体内的表面抗体滴度值大于10个单位的时候，我们称表面抗体阳性，当表面抗体滴度值检测不到的时候为阴性，当体内表面抗体在4-10个单位之间的时候，由于对机体的保护能力很弱，因此这种情况下我们称表面抗体弱阳性，此时是需要积极的注射乙肝疫苗，增强机体免疫能力的。 当表面抗体出现弱阳性的时候，由于对机体的保护能力较差，因此是比较容易感染乙肝病毒的，应当再次注射乙肝疫苗加强针，增强免疫能力，这样才能有效的
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP） 测定标准操作程序 编写者：宿金涛 日期：2012年3月1日 一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。 HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。 测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则测试区内（T ）将没有紫红色带。无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。 测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。 测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBeAg抗体反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBeAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。这条带是HBeAg抗体-HBeAg-HBeAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。无论HBeAg抗体是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。质控区内（C）所显现的 紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。 HBeAb,HBcAb检测试剂才有竞争抑制法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。 测试时，血清或血浆标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标 本中含有相应的抗体，贝U同膜上测试区（T）的抗体竞争与预包被在金标粒子的相应抗体反
PCR技术的发展及应用 平骏 14112822276摘要：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是1985年由美国PE- Cetus 公司的科学家Kary Banks Mullis发明的一种可在体外快速扩增特定基因或DNA序列的技术。经历了近30年的技术发展，现如今PCR技术在生命科学研究以及相关的很多领域都得到广泛的应用。本文主要对PCR的基本原理、反应组份作简要的介绍；同时也对在PCR基础上发展起来的相关技术作简要综述。 关键词：PCR技术；PCR原理；PCR新技术 对核酸的研究己有100多年的历史，20世纪70年代初人们就致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想，该设想在1985年被Mullis等人实现，他们发明了具有划时代意义的聚合酶链反应[6]。这项新技术是根据生物体内DNA序列能进行快速复制的特点，实现在体外对特定DNA序列进行快速扩增，可在短时间内从试管中获得数百万个特异DNA序列拷贝。PCR技术操作简便、结果可靠，被世界各国广泛应用于医学、农业、考古学等各个领域的基因研究和分析，对分子生物学的发展产生了深远的影响[18]。发明人Kary Banks Mulis也因此荣获了1994年的诺贝尔化学奖。 1、PCR 技术的原理[1,2] PCR技术是模拟细胞内DNA的天然复制过程，DNA 聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA 来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA 模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA 聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3，- OH 末端，并以此为起始点，沿模板5，→3，方向延伸，合成一条新的DNA互补链。简言之，其基本原理包括3个基本反应过程：变性→退火→延伸。PCR 反应的基本成分包括：模板DNA( 待扩增DNA )、引物、4种脱氧核苷酸( dNTPs)、DNA 聚合酶和适宜的缓冲液。每一循环中所合成的新链，又都可作为下一循环中的模板。PCR 合成的特定的DNA序列产量随着循环次数呈指数增加，每完成一次循环需2-4min，2-3h就能将目的基因扩增，从而达到迅速大量扩增的目的。 2、PCR技术的反应组份 2.1 模板DNA PCR反应的模板可以是单链DNA也可以是双链DNA，可以是基因组DNA 或cDNA，
乙肝五项指标 表面抗原(HBsAg)--------------------------- 表示体内是否存在乙肝病毒表面抗体(抗HBs或HBsAb)----------------------- 说明体内是否产生抗体e抗原(HBeAg)-------------------------- 说明病毒是否复制及具有传染性e抗体(抗HBe或HBeAb)--------------------- 说明病毒复制是否受到抑制核心抗体(抗HBc或HBcAb)--------------------- 说明是否感染过乙肝病毒 （注：核心抗原(HBcAg)一般检查不出来，所以只能看到五项检查结果。） 9种常见模式 1 - - - - - 过去和现在未感染过HBV。 2 - - - - + (1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出现；(3)无症状HBsAg携带着。 3 - - - + + (1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期； (3)少数标本仍有传染性。①HBV 感染已过；②抗HBs出现前的窗口期。HBeAg在乙型肝炎潜伏期的后期出现，略晚于HBsAg的出现，而消失较早，与HBV-DNA密切相关。其临床意义为：(1)可作为急性乙肝辅助诊断和预后指标，急性乙肝进入恢复期常随HBsAg的消失而消失。如果急性乙肝发病后3-4个月，HBeAg由阳转阴，抗-HBE出现，表示预后良好.起病3-6个月，仍HBeAg(+)，可能是急性肝炎转为慢性的最早证据。(2)有助于判断乙肝患者或HBV携带者的传染性强弱。HBeAg存在于HBsAg阳性者血清中，说明血液中有Dane颗粒，多数HBV-DNA阳性，三者消长基本呈平行关系。所以HBeAg(+)者具有很强的传染性。抗-HBe(+)者一般传染性较低。但若血清HBV-DNA(+)，可能有HBV变异株存在，仍有一定的传染性；(3)HBeAg阳性提示HBV在体内复制。HBeAg消失前后出现抗-HBe，此时期称为血清转换期，即由HBV复制期转为非复制期。出现抗-HBe常提示HBV增殖减弱或终止。但如果HBV基因的前C区核苷酸序列改变阻止了HBeAg的形成，血循环中仍有HBV存在，肝病可能继续发展，并逐步演变成肝硬化；(4)在出现原发性肝癌时，HBeAg检出率下降，而抗-HBe,a-FP增高.故在HBsAg(+)的肝硬化病人中，抗-HBe(+)，a-FP增高，提示早期肝癌的可能； (5)母婴传播中，孕妇分娩时HBeAg(+)可能扩大母婴之间的传播率。 4 - + - - - (1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性。 5 - + - + + 急性HBV感后康复。
教你看懂乙肝检验单 又到一年毕业季，很多学生离开校门走进社会中，伴随着层层的笔试面试竞争，最终争取到一份理想的工作。但是却有些人被拦在入职体检这一个问题上。一位机关干部电话咨询：单位组织我们二十余人到贵医院体检，今天拿乙肝化验单，发现结果各不一样，有的全部阴性，有的一项阳性，有的两项或三项阳性。我的化验单数据为：HBsAg阴性、HBsAb阴性、HBeAg阴性、HBeAb阴性、HBcAb阳性。看完之后我很是担心，其中一项指标为阳性，希望你能告诉我这是什么回事，是否被乙肝病毒感染，有无传染性。 虽然现在大多单位都已经规定入职体检不能进行乙肝的检查，但是很多企业会以职工免费体检等等为名检查的，在医院如果遇到要开刀手术的情况也是要我们进行乙肝的检查，因此我们大多数人都做过“乙肝两对半”的检测，也都看到过这种乙肝标志物检验单，这种检测的直接目的就是检查一个人是否感染了乙肝病毒，是否有抗体。 但事实上，很多人并不会看这种检验单，很多人看到有一个阳性就觉得很害怕，其实不然，里面也有事保护我们免受乙肝病毒的抗体。所以不能完全明白各种检测指标所代表的含义对我们自身就不能有明确的了解，到底该如何看化验单呢。 首先，我们先了解乙型肝炎病毒的结构。我们可以把它想像成一个鸡蛋，乙肝病毒的最外面是一层外膜，称为表面抗原，这一层就相当于鸡蛋的蛋壳；再往内就是病毒的内膜，内膜主要是核心蛋白，这一部分就相当于鸡蛋的蛋白部分，称为核心抗原；正常情况下并不能在血液内检测到核心抗原，只能检测到它可以溶解的成分，称为e抗原。人感染乙肝病毒后，免疫细胞对上述3种产生对应的抗体，即表面抗体、核心抗体和e抗体，这样就构成了三对抗原和抗体，但因为血清中不能检出核心抗原，所以临床检查时乙肝病毒标志物主要包括乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)及乙肝病毒核心抗体(HBcAb)检查，这就是我们常说的“乙肝两对半”检查。 第一项“乙肝表面抗原(HBsAg)”如果是阳性，就表明被检测人感染了乙肝病毒。如果是阴性，就表示被检测人目前没有感染乙肝病毒。 第二项“乙肝表面抗体(HBsAb)”如果是阳性，表明被检测人对乙肝病毒产生了抗体，一般不会被传染和感染。如果是阴性，则表明被检测人没有抗体。” 第三项“乙肝e抗原(HBeAg)”如果是阳性，就表明被检测人身体内的乙肝病毒正在复制期，也是就是传染期。 第四项“乙肝e抗体(HBeAb)”如果是阳性，表明被检测人感染过乙肝病毒。 第五项“乙肝核心抗体(HBcAb)”如果是阳性，而其他各项全部是阴性，或者只有第二项是阳性，就表明被检测人曾经感染过乙肝病毒，但现在已经产生抗体了；与HBsAg同时阳性表示现在有乙肝病毒感染。实际上成年人百分之六七十都感染过乙肝病毒，多数可以自己恢复。
正确理解乙肝实验室检测结果 乙型肝炎病毒(HBV)感染的实验室检测是目前国内最为常用的检验项目，也是医患纠纷产生较多的领域之一。正确理解和解释乙肝实验室检验项目的临床意义，对于这些检验项目的实际应用有重要价值。下面就几个方面重点谈一谈。 一、乙肝“两对半”检查的意义 国内人群中，二十世纪八十年代中期以前出生的，乙肝病毒的感染率超过了10%，因而时至今日，乙肝“两对半”仍是目前国内医院最常用的乙肝病毒感染检测的血清标志物，也是医生和患者经常挂在嘴上的检验项目。在很多时候，甚至是体检，都会用到这些检验项目。乙肝“两对半”顾名思义，就是有五项判断乙肝感染的乙肝病毒抗原及其抗体的检验指标，即乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体（抗HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（抗HBe）和乙肝核心抗体（抗HBc）等。尽管这五项指标使用得非常多，但对其真正的含义，由于认识过程的原因，仍有不少误解。 1．HBsAg HBsAg于1963年由Blumberg在澳大利亚土著人血中发现，称为澳大利亚抗原(即以前所谓的“澳抗”)，后又称为肝炎相关抗原(HAA)，1974年正式定名为乙型肝炎表面抗原(简称为HBsAg)，存在于HBV的外壳部分。HBsAg有一个特异的共同抗原决定簇“a”和至少两个亚型决定簇“d／y”和“w／r”，最常见的血清型为adw、adr和ayw。我国绝大多数地区以adr为主，adw次之(于长江以南诸省与adr混存)；新疆、西藏、内蒙古自治区的本地民族几乎全为ayw。血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2—8周，至恢复期HBsAg滴度逐步降低乃至消失，抗HBs出现。但有部分患者HBsAg在血清中可持续存在，原因可能是编码HBsAg的HBV的s区段和肝细胞DNA整合。在这种情况下，即使HBV已从人体内消除，肝细胞仍能不断地复制HBsAg。 HBV感染后，大部分人没有临床表现，但在血中可检出HBsAg，这类人通常称为HBsAg携带者。在我国这类人超过1亿，其中大部分将持续携带HBsAg数年、数十年乃至终身而无临床症状；小部分人在平衡被打破后，可发展为急性或慢性乙型肝炎，甚至肝硬化、肝癌。 HBV感染后绝大多数感染者外周血中可出现HBsAg，含量在5ng～600μg/ml之间。据文献报道，到目前为止在献血员中所发现的HBsAg 携带者最低含量为0.2 ng/ml。含量高者可达2000μg/ml以上。但有少部分HBV感染者血清HBsAg测定为阴性，如暴发性乙型肝炎、HBV的S基因发生变异等。急性重症乙型肝炎，肝细胞中以合成HBcAg为主，很少或不合成HBsAg，从而使外周血中无HBsAg。HBV的前S/S基因编码HBsAg，构成病毒外膜，根据所带亚型决定簇的不同分为adw、adr、ayw和ayr。a决定簇具有很高的免疫原性，在HBV的自然感染或注射HBsAg 疫苗可引起抗HBs应答。如S基因145密码子变异使得其原来的甘氨酸被精氨酸替代时，可致a决定簇的抗原性发生改变，使机体产生的抗体对变异株无作用，且可引起HBV感染患者血清中同时出现HBsAg和抗HBs。同时乙肝疫苗接种也不能有效预防此类变异病毒的感染。乙型肝炎病毒S基因的变异有自然变异和逃避免疫变异，变异可发生在多个部位，而且几处突变可同时存在，这些变异有助于病毒携带状态的持续存在。近来，有研究表明，前S1区丢失突变（氨基酸58～118）是引起HBsAg阴性的HBV感染的重要原因，S启动子位于前S1，是合成HBsAg的调节元件，前S1的丢失突变则会影响S启动子的功能，进而影响HBsAg的合成。 HBsAg不仅存在于血液中，而且还存在于许多体液和分泌物中，如唾液、尿液、乳汁、精液等。 目前国内最常用的HBsAg免疫测定方法为酶联免疫吸附试验(ELISA)，其次是放射免疫试验(RIA)。ELISA简单、方便、快速，测定下限进口试剂盒可达0.2 ng/ml，国产试剂盒目前也能达到0.5 ng/ml。 RIA因其试剂半衰期短、废物难于处理等，使用已很受局限。血清HBsAg仅为HBV感染的标志。由于其在血液中多为不含病毒颗粒的空壳，故而不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。 2．抗HBs 急性乙型肝炎病人处于恢复期后，随着HBsAg的逐步消失，血清中出现抗HBs。抗HBs是一种中和抗体，其能在体内存在相当长的时间。以HBsAg作为疫苗免疫机体产生的抗HBs，对HBV的感染具有保护性免疫作用。10mIU/m1抗HBs为对HBV具有免疫力的临界水平。低于此值，说明免疫失败。乙肝疫苗接种者，体内血循环中除了抗HBs外，不应出现其它乙肝病毒感染血清免疫学标志物，如抗HBe、抗HBc等。一旦出现除抗HBs以外的标志物，则应视为既往HBV感染。 一般情况下，血清中抗HBs和HBsAg不同时存在，若同时检出，可能为抗HBs产生的早期，或属于不同亚型的HBV感染，或由HBV的S基因变异所致。 3．HBeAg HBeAg为HBcAg的可溶性成份，两者约有75％共同的氨基酸序列，但二级结构不同，各有特异的抗原决定簇，因而在细胞水平其体液免疫应答是不同的。其在血清中的出现时间稍后于HBsAg，一般血清HBeAg阳性者，HBsAg亦为阳性。有研究表明，当乙肝病毒的前核心区发生点突变时，可使得HBeAg无法表达，表现为血清HBeAg或抗HBe测定持续为阴性，但血清HBsAg或HBV DNA可
乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 1原理 在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗原（HbsAg），配以酶标记抗体（HbsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。 2试剂： 2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 2.3包装规格：96Test/Kit 2.4试剂盒组成：HbsAg预包被微孔板（包被HbsAg），HbsAb 酶标抗体（含HRP标记HbsAg）, HbsAb阳性对照（含HbsAbde 阳性血清），HbsAb阴性对照血清（正常人血清），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含2M H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。 2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。 3样本采集： 取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器 4.1全自动酶免分析仪 4.2新鲜蒸馏水或去离子水 4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm） 4.4微量移液器 4.5 37℃恒温箱或水浴箱 4.6洗板机或洗瓶 5检验方法 5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。 5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。 5.4加样：分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清或待测样本。 5.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul；轻拍混匀。 5.6温育：置37℃温育25min。 5.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。 5.8显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗置15min。 5.9终止：每孔加入终止液50ul，混匀。
PCR 技术的种类及其应用 1PCR 技术的基本原理 PCR技术是在模板DNA、引物和四种dNTP等存在的条件下, 依赖于DNA聚合酶(T aq酶)的酶促合成反应。其具体反应分三步：变性、退火、聚合。以上三步为一个循环，每一循环的产物DNA又可以作为下一个循环模板，数小时后，介于两个引物之间的目的DNA得到了大量的复制，经25～30次循环DNA数量可达2×106～7拷贝数。2PCR技术的种类 2.1反向PCR( Inverse PCR, IPCR)技术 原理：反向PCR是克隆已知序列旁侧序列的一种方法．主要原理是用一种在已知序列中无切点的限制性内切酶消化基因组I)NA．后酶切片段自身环化．以环化的DNA 作为模板，用一对与已知序列两端特异性结合的引物，扩增夹在中间的未知序列。该扩增产物是线性的DNA片段，大小取决于上述限制性内切酶在已知基闲侧翼DNA 序列内部的酶切位点分布情况。用不同的限制性内切酶消化，可以得到大小不同的模板DNA，再通过反向PCR获得未知片段。 该方法的不足是：①需要从许多酶中选择限制酶，或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的DNA片段。这种选择不能在非酶切位点切断靶DNA。②大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列，而在YAC或Cosmid 中的未知功能序列中有时也会有这些序列，这样，通过反向PCR得到的探针就有可能与多个基因序列杂交。 2.2锚定PCR(Anchored PCR, APCR)技术 用酶法在一通用引物反转录cDNA3’-末端加上一段已知序列, 然后以此序列为引物结合位点对该cDNA进行扩增, 称为APCR。 应用：它可用于扩增未知或全知序列, 如未知cDNA的制备及低丰度cDNA文库的构建。 2.3不对称PCR(asymmetric PCR)技术 两种引物浓度比例相差较大的PCR技术称不对称PCR。在扩增循环中引入不同的引物浓度, 常用50～100÷1比例。在最初的10～15个循环中主要产物还是双链DNA, 但