干旱胁迫对玉米幼苗生理生化指标的影响
XXX，云南昆明呈贡 650500
摘要对植物产生伤害的环境称为逆境，又称胁迫。常见的逆境有寒冷、干旱、高温、盐渍等。逆境会伤害植物，严重时会导致植物死亡。逆境对植物的伤害主要表现在细胞脱水、膜系统受破坏，酶活性受影响，从而导致细胞代谢紊乱。植物在长期的适应过程中形成了各种各样抵抗或适应逆境的本领，称为抗性。在生理上，以形成胁迫蛋白、增加渗透调节物质（如脯氨酸含量）、提高保护酶活性等方式提高细胞对各种逆境的抵抗能力。干旱、盐碱和低温是强烈限制作物产量的三大非生物因素,其中干旱造成的损失最大, 其损失超过其他逆境造成损失的总和。本实验以玉米幼苗为材料，设置对照组（未经过干旱处理），探究了干旱胁迫下脯氨酸（pro）、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、H2O2的含量变化以及抗氧化酶(POD、PPO)活性的变化。实验通过分光光度计分别在不同的波长中测出吸光率，间接计算出其含量及酶活性，进而通过对正常条件下的和逆境胁迫下一定量玉米苗体内以上各种物质含量的对比，从而了解玉米体内生理生化指标发生的变化。结果表明：在干旱胁迫下，脯氨酸（pro）、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、H2O2的含量相对于对照组均有较明显的上升趋势，POD和PPO活性也表现出较大水平的提高。也说明了玉米苗在干旱条件下既有对植物抗旱不利的物质增加，也有增强抗旱性和保水性的物质的含量增加以维持植物的生命力。
关键词玉米苗，干旱胁迫，抗逆性，紫外分光光度计吸光率，抗氧化酶
引言
干旱是自然界常见的逆境胁迫因素，干旱也是植物最容易受到的胁迫之一。干旱不仅制约植物的生长生理与产量的高低，也会引起植被结构与功能的空间变化。因此，植物对干旱胁迫的适应及机制一直是植物逆境适应策略研究的一个热点。植物对干旱胁迫的适应过程和受伤害程度与干旱胁迫的强度以及植物自身的抗性联系紧密，并从生理代谢、生理功能、形态适应、生长发育以及生物生产力等多种形式表现出来。土壤有效水分状况与植物之间的关系也是植物生理生态学研究领域的热点问题。大多数植物在短期或轻度土壤缺水情况下叶片水势下降，气孔关闭。限制CO2摄取和光合作用速率，长期严重干旱条件下可限制植物生长,引起形态结构发生变化（如萎焉，枯黄、干瘪等）。甚至导致植物死亡。
研究表明，游离的脯氨酸在植物细胞抵抗非生物胁迫过程中扮演着越来越重要的角色，许多新的生理功能也逐渐被发现，近几年来有关脯氨酸的研究倍受科学工作者的关注。脯氨酸作为水溶性最大的氮基酸，具有较强水合能力，是理想的渗透介质。作物遇旱时它的大量
积累有助于细胞或组织保水，防止脱水，维系生命，故可视为作物对干早环境的一种保护性适应。已经有科学家证明了在逆境条件下脯氨酸的积累用来抵抗植物对非生物胁迫的伤害，植物体内的抗氧化酶系统也能将伤害细胞的活性氧控制在可适应水平内，通过各种过氧化酶的协同作用，可以把细胞内产生的具有很强氧化活性的活性氧如氧负离子、H2O2等直接或间接地清除，防止了活性氧放大耦联作用，保证了细胞内生命活动的正常进行。丙二醛（MDA）和可溶性糖是由于植物器官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的，对干旱也具有抵抗作用。GSH是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，在生物体抵抗各种胁迫(冷害、干旱、重金属、真菌等)的过程中起着重要的作用，其含量水平的高低与植物对各种环境胁迫的忍耐程度密切相关。近些年来，它在高等植物代谢过程中的生理作用，尤其是在植物抵御活性氧伤害过程中的作用及其与植物抗逆性关系的研究进展很快。在正常生长情况下, 活性氧的产生和清除处于动态平衡状态。当植物在逆境条件下( 如干旱胁迫) 生长时, 这种平衡被打破, 体内负责清除活性氧的抗氧化系统能力下降, 从而造成活性氧的大量积累, 并引发或加剧膜脂过氧化作用, 导致生物膜系统受损。过氧化物酶( POD) 、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物GSH(谷胱甘肽)等能够有效地清除这些自由基, 也是酶促防御系统的重要组成成分。
玉米在干旱胁迫下具有独特的生存策略, 是一种公认抗逆性较强的作物, 本次实验我们利用干旱胁迫处理玉米幼苗, 测定其丙二醛( MDA) 含量、可溶性糖含量、GSH含量、脯氨酸含量、H2O2含量及 PPO、POD 活性变化, 除此之外我们还测量了玉米及小麦种子的生理活性。探讨干旱胁迫对玉米幼苗生理生化指标的影响, 为进一步明确和了解玉米抗旱的生理机理提供一定实验依据。
材料、方法和结果
１、材料、试剂和仪器
1.1 玉米种子发芽率及生理生化指标的测定的材料培养和处理
品种为晴3或鲁玉13的玉米种子（购于西山种子公司）→用0.1% HgCl2消毒10 min 后→用蒸馏水漂洗干净→用蒸馏水于26℃下吸涨12 h → 播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘（24cm×16cm）中→于26℃下暗萌发60 h →计算发芽率（注意与前面结果比较）
→选取长势一致的玉米幼苗做干旱、高温、盐渍或低温下处理（去除较矮或较高的玉米幼苗）。
1.2 试剂和仪器
主要试剂：
0.1% HgCl2，TTC，3%磺基水杨酸（SSA），冰乙酸，茚三酮，PBS(pH=7.8) ，0.6%TBA （用0.6% TCA配制），PBS (pH=6.8，内含1mMHA)，0.1%Ti(SO4)2[用20%(v/v) H2SO4配制]，PBS, （pH=5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP）， POD反应混合液（10 mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解），PPO反应混合液（20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）5%三氯乙酸，PBS (pH=7.7) ，4 mM DTNB (用0.1M pH=6.8PBS现配)。主要仪器：分光光度仪，离心机，试管，微量加样器，研钵等。
2、方法
2.1 种子发芽率的测定：
所采用的种子发芽率的测定方法是曙红染色法和TTC染色法。凡是有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种子胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH2或NADPH2）上的氢还原时，便由无色的TTC变为红色的TTF。用曙红染色的，凡是全部着色或胚已着色的种子表示失去了生活力,播后不能发芽，生活力强的种子是不会着色的,因为活细胞具有半透性膜,可防止染料分子通过而不着色，死亡细胞,其壁膜失去半透性,染料分子易进入,使原生质着色。各取50粒吸胀的玉米种子或小麦种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验：其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴 20 min）另50个半粒进行曙红染色（室温染色10 min）根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。公式如下：
种子发芽率=有生命的种子/测试种子数X100﹪
2.2 脯氨酸含量的测定
用茚三酮法测定脯氨酸含量，在酸性条件下，茚三酮与脯氨酸反应生成红色化合物，在520nm下有最大吸收值。分别取0.1g实验组和对照组的胚芽鞘→加入 3mL3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2mL3%SSA洗研钵→5000rpm离心10min→上清液定容至5mL。上清液各2mL→分别加入2mL冰乙酸和2mL茚三酮试剂→煮沸15min→冷却后→5000rpm离心10min→分别测定A520。
Pro的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
测定：上清液各2 mL →分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂→煮沸15 min→冷却后→5000 rpm离心10 min →分别测定A520。计算公式如下：
2.3 可溶性糖和MDA含量测定
用硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量。分别取0.1g实验组和对照组→加入
3mL50mMPBS(pH=7.8)和少许石英砂→充分研磨→用2mLPBS洗研钵→5000rpm离心10min→上清液定容至5mL。测定：分别取上清液各2mL→加入0.6%TBA（用0.6%TCA配制）2mL→煮沸12min→冷却后→5000rpm离心10min →分别测定OD450和OD532. 计算公式：
OD450=C1×85.4
OD532= C1×7.4+155000×C2
求解方程得：
C1/（mmol/L）=11.71OD450
C2/（ mol/L）=6.45OD532－0.56OD450
式中，C1为可溶性糖的浓度，C2为MDA的浓度。
2.４ H2O2含量测定
H2O2提取：分别取0.1 g实验组和对照组→加入3 mL 50 mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)和少许石英砂→充分研磨→用2 mL PBS洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
测定：分别取上清液各3 mL →加入0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v) H2SO4配制] 1 mL→摇匀→ 5000 rpm离心10 min → OD410
2.5 抗氧化酶活性的测定
用愈创木酚法测定POD活性，用邻苯二酚法测定PPO活性。在有过氧化氢存在的条件下过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量其含量，进而计算POD的活性。多酚氧化酶能使邻苯二酚氧化生成醌，用比色法测量其产物的形成，进而计算出PPO的活性。计算公式如下：
POD测定：取POD反应混合液（10mmol/L愈创木酚，5mmol/LH2O2,用PBS溶解）3.00ml，加入酶液100ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应3 min时的A470。
PPO测定：取PPO反应混合液（20mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.8ml，加入酶液0.2ml （空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应2min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则计算公式如下：
2.6 GSH的含量测定
GSH的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 5% TCA洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
测定：上清液各1 mL → 分别加入1 mL0.1M PBS (pH=7.7) → 0.5 mL 4 mM DTNB (用0.1M pH6.8PBS现配，空白用此PBS代替) → 25 ℃5 min→测定A412。计算公式如下：
３、结果分析
3.1 种子发芽率的测定：
实验后的结果如下表：种子总数为玉米、小麦各50粒
根据公式：种子发芽率=有生命的种子/测试种子数X100﹪计算种子发芽率
ＴＴＣ法：
玉米：发芽率＝有生命的种子/测试种子数X100﹪
=33/50X100﹪=66%
小麦：发芽率＝有生命的种子/测试种子数X100﹪
=47/50X100﹪=94%
薯红法：
玉米：发芽率＝有生命的种子/测试种子数X100﹪
=34/50X100﹪=68%
小麦：发芽率＝有生命的种子/测试种子数X100﹪
=42/50X100﹪=84%
根据结果得到下图：
分析：根据上图数据显示，通过TTC法和薯红法得到的结果是：玉米的发芽率比较接近，且种子的活性高；小麦的发芽率差别较大，造成这种情况的原因主要是种子切好之后，没有把种子搅拌均匀的缘故。
3.2 脯氨酸含量的测定
实验后测得520nm下的紫外分光值如下：实验组为结果干旱处理的玉米苗；对照组为未结果干旱处理的玉米苗（下同）
根据公式计算结果：
?=3.24μmmol-1.cm-1 L=1cm W=0.1g V显=6mL V总=5mL V用=2mL
实验组：脯氨酸含量=29.21mmol.g-1FW
对照组：脯氨酸含量=7.54mmol.g-1FW
根据结果得下图表：
分析：根据上图显示，干旱玉米苗内的脯氨酸含量明显高于正常的玉米苗，并且是正常苗的4倍还多。其原因主要是：脯氨酸是水溶性较大的氨基酸，具有很强的水合能力，其水溶液具有很高的水势。脯氨酸的疏水端可与蛋白质结合，亲水端可与水分子结合，蛋白质可借助脯氨酸束缚更多的水，从而防止渗透胁迫条件下蛋白质的脱水变性。因此脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用，而且即使在含水量很低的细胞内，脯氨酸溶液仍能提供足够的自由水，以维持正常的生命活动。正常情况下，植物体内脯氨酸含量并不高，但遭受干旱等胁迫时体内的脯氨酸含量明显增加，它在一定程度上反映植物受环境干旱胁迫的情况，以及植物对水分和盐分胁迫的忍耐及抵抗能力。
3.3 可溶性糖和MDA含量测定
实验后测得450nm、532nm下的紫外分光值如下：
根据公式：
C1/（mmol/L）=11.71OD450
C2/（μmol/L）=6.45OD532－0.56OD450 C1为可溶性糖的浓度，C2为MDA的浓度。
求解得：
根据结果得到以下图表：
分析：根据上图的数据可以看出：在干旱的玉米苗内部，可溶性糖和MDA的含量明显高于正常的玉米苗，并且比正常苗的10倍还多。在干旱的条件下，植物往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终分解产物，从膜上产生的位置释放出后，与蛋白质、核酸起反应修饰其特征；使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害，它在一定程度上也反映了植物受环境干旱胁迫的情况。在干旱条件胁迫下，玉米苗内的可溶性糖的含量会增加，由于细胞内的糖的含量增加，致使细胞的渗透势降低，增强了植物的吸水和保水的能力，为植物抵抗干旱的胁迫奠定了基础。
3.4 H2O2含量测定
实验后测得410nm下的紫外分光值如下：
根据公式：
?=0.28μmol-1.cm-1 L=1cm W=0.1g V显=4mL V总=6mL V用=3mL
计算得：
实验组：H2O2含量=171.7mmol.g-1FW
对照组：H2O2含量=141.14mmol.g-1FW
根据实验结果得到下图;
分析：经过干旱胁迫之后，玉米苗细胞内的H2O2含量明显增加，比正常苗细胞内的含量高出1.5倍左右。过氧化氢是植物代谢中产生的一种产物，其积累对细胞具有氧化破坏作用，过氧化氢的含量增高可以使植物细胞组织的破坏加速。在实验中，可根据其值的变化，来了解组织的破坏程度。因此，过氧化氢的含量也是植物逆境的一项指标。
3.5抗氧化酶活性的测定
经过实验后得到以下结果：
POD活性测定（过氧化物酶）：
PPO活性测定（多酚氧化酶）：
根据公式：
?=26.6mmol-1.cm-1 L=1cm W=0.1g V显=3mL V总=5mL V用(POD)=0.1ml V用(PPO)=0.2mL
计算得到：
根据结果得到下图：
分析：根据上图数据可以得出，在干旱胁迫下，会造成PPO和POD的活性增强。抗氧化酶的主要作用是消除ROS对植物的伤害，使抗氧化酶与ROS处于一个动态平衡。在干旱胁迫下，抗氧化酶总体增加，说明，动态平衡体系被打破，使植物不能消除ROS对自身的伤害，因而，干旱逆境下的植物生长不好，会出现萎焉现象。
3.6 GSH的含量测定
经过实验后得到以下结果：
根据公式：
?=13.6mmol-1.cm-1 L=1cm W=0.1g V显=2.5mL V总=5mL V用=1mL
通过计算得：
实验组：GSH含量=13.33mmol.g-1FW
对照组：GSH含量=7.58mmol.g-1FW
根据计算结果得到下图：
分析：在干旱逆境中，干旱玉米苗的GSH含量也明显增加，是正常苗的两倍左右。在干旱胁迫下也一定程度上造成了GSH的积累。GSH是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质。GSH含量的增加，在一定程度上，反应了玉米苗在干旱逆境中，也能合成一些产物，增加其抗旱性，以便植物能在干旱逆境中生长。
3.7 实验总结
本次实验通过测量了玉米种子和小麦种子的活性、测定了玉米干旱苗和正常苗的脯氨酸含量、过氧化氢的含量、PPO和POD的含量、GSH的含量及细胞内的可溶性糖和MDA的含量。通过干旱胁迫下的苗和正常苗的各种物质含量的对比和分析，说明玉米苗在干旱的条件下，细胞内的POD和PPO的活性增强和H2O2的含量明显增加，致使玉米苗细胞内的ROS动态平衡破坏，使其不能消除ROS对自身的伤害；H2O2的含量增加，细胞的组织会受到破坏，所以玉米苗会表现出萎焉，枯卷，干黄等现象。但是在玉米细胞受到伤害的同时，细胞内的脯氨酸、GSH、可溶性糖和MDA的含量也会增加，它们的含量增加能增强细胞的保水能力，维持植物的生命，增强植物的抗旱性，便于植物在干旱条件下生长。
在自然界中，不仅仅是玉米在干旱条件下会发生这一系列的变化，其他的植物也会在干旱条件下发生POD、PPO、GSH和MDA等物质的含量增加，增强保水性和抗旱性。除此之外，植物在其他的逆境中细胞内的相应物质也会发生变化，以便于其在逆境中维持生命，增加抗性。
讨论
通过本次对干旱逆境胁迫对玉米幼苗生理生化指标的影响的实验，从结果中可以看出，一方面，玉米为了适应干旱胁迫的逆境，机体内发生了一些列的生理生化反应，试验中脯氨酸(Pro)的积累说明植物正常的生理机能已经被干旱胁迫所破坏。脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用，而且即使在含水量很低的细胞内，脯氨酸溶液仍能提供足够的自由水，以维持正常的生命活动。实验中可溶性糖和MDA的含量明显高于正常的玉米苗，干旱条件下，植物往往发生膜脂过氧化作用，积累大量的丙二醛（MDA）使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成，对膜和细胞造成一定的伤害。干旱胁迫下，玉米苗内的可溶性糖的含量增加，细胞内的糖的含量增加，细胞的渗透势降低，植物的吸水和保水的能力增强，增强了植物的抗旱性。在干旱逆境中，玉米苗的GSH含量也明显增加，是正常苗的两倍左右。GSH是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质维系玉米苗的生命。另一方面，干旱胁迫之下，玉米苗细胞内的H2O2含量明显增加，过氧化氢是植物代谢中产生的一种产物，其积累对细胞具有氧化破坏作用，过氧化氢的含量增高可以使植物细胞组织的破坏加速。干旱胁迫下， PPO和POD的活性也是明显增强。抗氧化酶的主要作用是消除ROS对植物的伤害，使抗氧化酶与ROS处于一个动态平衡。干旱胁迫下，抗氧化酶总体增加，说明，动态平衡体系被打破，使植物不能消除ROS对自身的伤害，因而，干旱逆境下的植物生长不好，会出现萎焉现象。
在干旱逆境胁迫下，玉米苗的脯氨酸含量、可溶性糖、MDA含量和GSH含量的增加增强了玉米苗的抗旱性，增强了吸水能力和维系了植物生命。但是玉米苗的H2O2含量增加和POD 和PPO的活性增强。致使细胞膜和组织受到破坏，使细胞不消除ROS造成的伤害。从而使植物萎焉，枯卷、变黄甚至死亡。总的来说，干旱胁迫下植物的生理生化指标变化不仅仅会增强植物的抗逆性，也会加深对植物的损伤。此次实验的不足之处在于实验数值不准确，导致实验结果会有差异，得到实验结果后，不能以一种很明显的形式表现出来，所以做出来的科技论文有许多的不足之处。
逆境会伤害植物，严重时会导致植物死亡。逆境对植物的伤害主要表现在细胞脱水、膜系统受破坏，酶活性受影响，从而导致细胞代谢紊乱。对抗逆研究植物干旱胁迫条件下其发芽率、抗氧化酶、脯氨酸、谷胱甘肽、过氧化氢、可溶性糖、丙二醛等生理生化指标含量的变化，并初步探讨小麦的抗逆机理，能够应用于农业生产实践中，为干旱农业生产提供理论依据。植物逆境胁迫对于农业生产有着重要的研究意义，对于植物逆境胁迫还有许许多多的研究方向，从科研意义和应用方面都有潜在的研究价值。
参考文献
[1]于景华，王丽娟，唐中华，等.植物对干旱胁迫的生理和分子反应[J].代化农业.2006.12：1-4.
[2]杨帆，苗灵凤，胥晓，等.植物对干旱胁迫的响应研究进展[J].应用与环境生物学
报.2007,13(4)：586-592.
[3]鲁萍，桑卫国，马克平.外来入侵种飞机草在不同环境胁迫下抗氧化酶系统的变化[J].生态学报.2006,26(11)：3578-3585.
[4]王红梅，包维楷，李芳兰.不同干旱胁迫强度下白刺花幼苗叶片的生理生化反应[J].应用与环境生物学报.2008,14(6)：757-762.
[5] Mittler R.Oxidative stress,antioxidants and stress tolerance[J],Trends Plant Sci,2002, 7(9):405-410.
[6] 李芳兰，包维楷，吴宁.白刺花幼苗对不同干旱胁迫的形态与生理响应[J] .生态
学.2009,29(10)：5406-5416.
[7]王晓琴.玉米幼苗对水分胁迫的生理反应及其与品种抗旱性的关系研究[D];四川农业大学;2002年.
[8]史建伟;张育平;王国昌.环境胁迫对植物体内非结构性碳水化合物的影响[J];安徽农业科学;2007年09期.
[9]李忠光；龚明.植物生理学综合性和设计性实验教程；华中科技大学出版社，2013.12.
[10]潘瑞炽；王小箐；李娘辉.植物生理学；高等教育出版社，2012.12.
1、谷丙转氨酶（ALT）正常参考值0-40IU/L 增高：常见于急慢性肝炎，药物性肝损伤，脂肪肝，肝硬化，心梗，胆道疾病等。 2、谷草转氨酶（AST）正常参考值0-40I/L 增高：常见于心梗，急慢性肝炎，中毒性肝炎，心功能不全，皮肌炎等。 3、转肽酶（GGT）正常参考值0-40IU/L 增高：常见于原发性或转移性肝癌，急性肝炎，慢性肝炎活动期，肝硬化，急性胰腺炎及心力衰竭等。 4、碱性磷酸酶（ALP）正常参考值30-115IU/L 增高：常见于肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸，急慢性黄疸型肝炎，骨细胞瘤，骨折及少年儿童。 5、乳酸脱氢酶（LDH）正常参考值90-245U/L 增高：急性心肌梗塞发作后12-48 小时开始升高，2-4 天可达高峰，8-9 天恢复正常。另外，肝脏疾病恶性肿瘤可引起LDH 增高 6、总胆红素（TBIL）正常参考值4.00-17.39umol/L 增高：原发生胆汁性肝硬化急性黄疸型肝炎，慢性活动期肝炎，病毒性肝炎。肝硬化，溶血性黄疸，新生儿黄疸，胆石症等 7、直接胆红素（DBIL）正常参考值0.00-6.00umol/L 增高：常见于阻塞性黄疸，肝癌，胰头癌，胆石症等。 8、游离胆红素（IBIL）正常参考值0.00-17.39umol/L 增高：见于溶血性黄疸，新生儿黄疸，血型不符的输血反应 9、总蛋白（TP）正常参考值55.00-85.00g/L 增高：常见于高度脱水症（如腹泄、沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤。降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合症，烧伤，失血。 10、白蛋白（ALB）正常参考值35.00-55.00g/L 增高：常见于严重失水而导致血浆浓缩，使白蛋白浓度上升。降低：基本与总蛋白相同，特别是肝脏，肾脏疾病更为明显，见于慢性肝炎、肝硬化、肝癌、肾炎等。如白蛋白30g/L,则预后较差。 11、球蛋白(GLO) 正常参考值15-35g/L 增高：常见于肝脏疾病（如慢性肝炎、肝硬化、肝癌、肾炎等），网状内皮系统疾病，如多发性骨髓瘤，单核细胞性白血病，慢性感染，如化脓性感染、梅毒、麻风、结缔组织病。 12、白/球比值(A/G) 正常参考值1.00-2.50。 减低：增高：常见于肝脏疾病（如慢性肝炎、肝硬化、肝癌、肾炎等）。如治疗后白蛋白提高至正常或接近正常，A/G 比值接近正常，表示肝功能有改善。故检测血清白蛋白、球蛋白及其比值，可估计肝脏疾病的病情核预后。 13、血糖(GLU) 正常参考值3.4-6.2 mmol/L 增高：某些生理因素（情绪紧张，饭后1-2 小时）及注射肾上腺素后，病理性增高见于各种糖尿病，慢性胰腺炎，心梗，甲亢，垂体前叶嗜酸性细胞瘤，颅内出血，颅外伤等。 14、前白蛋白(PAB) 正常参考值170-420mg/L 可作为肝功能早期损害的指标和检测机体营养不良的指标。增高：甲状腺机能亢进，各种胶原病、肾变病等。降低：急性肝炎、肝硬化、恶性肿瘤、蛋白吸收不足等。 15、羟丁酸脱氢酶(HBDH) 正常参考值90-250IU/L 增高：作为急性心梗诊断的一个指标，与LDH 大致相同，在急性心梗时此酶在血液中维持高值，可达2 周左右。
小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。 株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。 主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。 叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定 样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。 总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。 丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)
血液生化检查各项指标临床意义 一、肝功全项 （一）白蛋白／球蛋白的比例 A/G 1—2.5 用于衡量肝脏疾病的严重程度。A/G比值＜1提示有慢性肝实质性损害。动态观察A/G比值可提示病情的发展和估计预后，病情恶化时白蛋白逐渐减少，A/G比值下降，A/G比值持续倒置表示预后较差。（二）球蛋白 1、增高 (1)、多发性骨髓瘤及原发性巨球蛋白血症。 (2)、肝硬化。 (3)、结缔组织病、血吸虫病、疟疾、红斑狼疮。 (4)、慢性感染、黑热病、慢性肾炎等。 2、降低 1、生理性低蛋白血症，见于3岁以内的婴幼儿。 2、低Y-球蛋白血症或先天性无Y-球蛋白血症。 3、肾上腺皮质功能亢进和使用免疫抑制药等常使免疫球蛋白合成减少，引起球蛋白降低。 （三）间接胆红素IBIL 1.5-18.0umol/L 增高常见于溶血性黄疽、先天性黄疽、肝细胞性（肝炎）或混合性黄疽，也见于阻塞性黄疽。 注：总胆红素，直接胆红素、间接胆红素的辩证关系： 1、三者均高，属肝细胞性黄疽、如急性重症肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、中毒性肝炎、肝癌等。 2、总胆红素和直接胆红素升高，属阻塞性黄疽，如胆道结石、胆道阻塞、肝癌、胰头癌等。 3、总胆红素和间接胆红素升高，属于溶血性黄疸，如溶血性盆血、血型不合输血、恶性症疾、新生儿黄疽等。 （四）总胆红素TBIL 5.1－20.0cmol／2 1、增高见于 （1）肝细胞性疾病：如急性黄疽性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化、肝坏死等。 （2）阻塞性疾病：如胆石症、胰头癌等。 （3）其他：如新生儿黄疽、败血症、溶血性贫血、严重大面积烧伤、溶血等。 2、减低无临床意义 （五）直接胆红素DBIL 1.7-6.8umol/L 增高常见于阻塞性黄疽、肝癌、胰头癌、胆石症等。 减少：无临床意义 （六）丙氨酸转氨酶ALT 0-40u／L 增高： 1、肝胆疾病:传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆石症、胆管炎、胆囊炎。 2、心血重疾病：心肌梗死、心肌炎、心功能不全的肝淤血、脑出血等。 3、骨骼肌病：多发性肌炎、肌营养不良等。 4、其他：某些药物和毒物引起ALT活性升高，如氨丙嗪、异烟肼、水杨酸制剂、乙醇、铅、汞、四氯化碳或有机磷等。 减少：无临床意义 （七）天冬氨酸转氨酶AST 0-40u/L 增高：
1、氧化酶巴氏杆菌 1、原理： 氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。 2、试剂 盐酸二甲基对苯撑二胺(或四甲基对苯撑二胺)1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中贮存。 3、方法 在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1%水溶液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿，用金丝接种环(不可用镍铬丝)取18~24 h的菌苔，涂沫在湿润的滤纸上，在10 s内涂抹的菌苔现红色者为阳性，（四甲基对苯撑二胺为蓝色）10~60 s现红色者为延迟反应，60 s以上现红色者不计，按阴性处理。 4、注意事项： a.盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。 b.铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。 c.在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。 2、苯丙氨酸脱氨酶变形杆菌 1、原理： 某些细菌（如变形杆菌）具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。本试验用于肠肝菌科和某些芽孢杆菌属的鉴定。 2、培养基 酵母膏3g NaCl 5g Na2HPO4 1g DL-苯丙氨酸2g (或L-苯丙氨酸) 1g 蒸馏水1000 ml pH为7.0，分装试管，121℃蒸气灭菌10min,摆成长斜面。
3、试剂 10%(W/V)的FeCl3溶液 4、方法 适当浓度接种，37℃培养4h或8~24h测定。将试剂4~5滴滴到生长菌的斜面上，当斜面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明己形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。 3、H2S(TSI) 变形杆菌鸡白痢沙门氏 1、原理： 有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。 2、培养基： 牛肉膏7.5g 蛋白胨10g NaCl 5g 明胶100~120g(或琼脂15g) 10%FeCl2 (培养基灭菌后无菌加入) 5 ml 蒸馏水1000 ml pH 7.0，112℃灭菌20min 在明胶培养基尚未凝固时，加入新制备的过滤灭菌的FeCl2，用无菌试管分装，培养基高度约为4~5 cm，立即置冷水冷却凝固。 3、方法 用穿刺法接种，30℃培养，1、3、7天，观察，变黑者为阳性，不变为阴性。 4、注意事项 ①此方法适用于肠杆菌科细菌鉴定 ②在实验过程中可用硫酸亚铁代替氯化亚铁 ③可同时测定明胶液化，20℃培养 4、DNA酶金黄色葡萄球菌 1、培养基 酪朊水解物15g 大豆蛋白胨5g NaCl 5g DNA 2g 甲苯胺蓝0.1g 琼脂15g 蒸馏水1000 ml
小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。 株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。 主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。 叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定 样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。 总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug
血液生化检查各指标及对应正常值列表 ALT （谷丙转氨酶）0～4O IU/L CO2Cp （二氧化碳结合力）2O～30 mmol/L AST （谷草转氨酶）0～45 IU/L CO （一氧化碳定性）（-） TP （总蛋白）60～80 g/L HBDH （a羟丁酸脱氨酶）90～22O IU/L ALB （白蛋白）35～55 g/L CPK （磷酸肌酶激酶）25～170 mmol/L ALP （碱性磷酸酶）40～160 IU/L LDW （乳酸脱氢酶）40～100 mmol/L GGT （丫.谷氨酪转肽酶）0～50 IU/L CPK-MB （激肌酸激酶同功酶）0～16 TBIL （总胆红素）1.7～17.1μmol/L A/G （血清白/球蛋白）3.5～5.5/2-3g DBIt （直接胆红素）0～6.0 μmol/L HDL （高密度脂蛋白〕1.14～1.91 mmol/L Crea （肌酐）44～133 µmol/L VLDL （低密度低蛋白）0.11～0.34 mmol/L Ua （尿酸）90～360 µmol/L LDL （极低密度脂蛋白）1～3 mmol/L UREA （尿素氮）1.8～7.1 mmol/L CRP （C反应蛋白）（-） GLU （血糖）3.61～6.11 mmol/L IgA （免疫球蛋白）0.9～4.5 mg/ml TG （甘油三脂）0.56～1.7 mmol/L IgG （免疫球蛋白）9～23 mg/ml GHO （胆固醇）2.84～5.68 mmol/L IgM （免疫球蛋白）0.8～2.2 ml Mg （血清镁）0.8～1.2 mmol/L SF （铁蛋白）20～200 ng/ml K （血清钾）3.5～5.5 mmol/L α（蛋白电脉）3～4.9 % Na （血清钠）135～145 mmol/L β（蛋白电脉）3.1～9.6 % Cl（血清氯）96～108 mmol/L γ（蛋白电脉）6.6～13.7 % Ca （血清钙）2.2~2.7 mmol/L δ（蛋白电脉）9.5～20.3 % P （血清磷）0.97～1.61 mmol/L Fdg （纤维蛋白原）2～4g/L
菌落圆形，污白色，全缘，微凹，光滑 实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验 一、实验目的： 1）了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定lopat实验方法 二、实验材料： 猕猴桃溃疡病病原菌（分类地位薄壁菌门Gracilicutes，Proteobacteria纲假单胞菌科Pseudomonadaceae假单胞杆菌属Pseudomonas）、SPA培养基：蔗糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml 对照SPA培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml Thornley培养基配方：蛋白胨1g，精氨酸10g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g，酚红0.01g，琼脂6g，蒸馏水1000ml 1%二甲基对苯二胺盐酸盐，3×108 /ml的菌液（病原菌），烟草，马铃薯； 灭菌培养皿及培养基（平板）110套、未灭菌培养皿110套，接种针15个，试管110支，接种针55把，滤纸55张，试剂瓶55个，胶头滴管55支，喷壶55个 三、试验方法： 果聚糖试验（Levan formation）： 用细菌悬浮液，在SPA培养基上，再用葡萄糖代替蔗糖培养基平板上分别划线。在25℃条件下培养3–7 d，形成白色、粘稠、圆顶、隆起而有闪光的菌落为阳性反应。 在此条件下，在SPA培养基上可形成前述菌落，果聚糖试验为阳性；而在用葡萄糖代替蔗糖培养基上，不形成前述菌落。 氧化酶试验（oxidase reaction）： 在培养皿内放一张滤纸，滤纸上加3–4滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐，使其湿润。用玻棒挑取生长24 h的菌苔涂在滤纸上，若菌苔在10 s内变成紫色，为阳性反应；在60 s以后变色或一直不变色，为阴性反应。 在此条件下，菌苔的氧化酶试验为阴性反应 氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶 马铃薯软腐试验（potato erroring capacity）： 在马铃薯上做刺伤伤口，将细菌接到伤口上，几天后观察，是否出现软腐。 精氨酸双水解酶检验（argine reaction）： 配制Thornley培养基。每试管装3–4 ml培养基灭菌，冷却，针刺接种细菌至培养基底部，立即用凡士林封管，在27℃条件下培养7 d。 在此条件下，精氨酸双水解酶为阴性，颜色不变。 细菌的精氨酸双水解作用是将精氨酸经过两步水解，生成有机胺和无机氨。鉴定细菌的精氨酸试验，无论发酵菌还是非发酵菌，革兰阳性菌还是革兰阴性菌，测的都是精氨酸双水解酶，使用脱羧酶试验培养基。所以，赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶用同一种基础培养基，为Moeller配方或Falkow配方，均须加盖石蜡油。对于发酵菌，细菌生长后，培养基变黄为阴性，变紫为阳性；对非发酵菌，培养基颜色不变为阴性，变黄为阳性。另有一种精氨酸双水解酶专用培养基，其中使用的是酚红指示剂。这种配方目前已不使用。细菌生化反应表中的精氨酸双水解酶的阳性百分率也不是在这种培养基上做的，所以，该配方实际已淘汰。 烟草过敏性反应（tobacoo hypersensitivity）：
常见生化指标临床意 义
常见生化血液指标临床意义: 1.血清丙氨酸氨基转移酶（ALT或GPT）测定的临床意义： 升高：常见于急慢性肝炎、药物性肝损害、脂肪肝、肝硬化、心肌梗塞、心肌炎及胆道疾病等。 2.血清天冬氨酸氨基转移酶（AST或GOT）测定的临床意义： 升高：常见于心肌梗塞发病期、急慢性肝炎、中毒性肝炎、心功能不全、皮肌炎等。 3.血清总蛋白STP测定的临床意义： 增高：常见于高度脱水症（如腹泻，呕吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤。 降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，营养及吸收障碍，肝硬化、肾病综合征，溃疡性结肠炎，烧伤，失血等。 4.血清白蛋白ALB测定的临床意义： 增高：常见于严重失水导致血浆浓缩，使白蛋白浓度上升。 降低：基本与总蛋白相同，特别是肝脏病，肾脏疾病更为明显。 5.血清碱性磷酸酶（ALP）测定的临床意义： 升高：常见于肝癌、肝硬化、阻塞性黄疸、急慢性黄疸型肝炎、骨细胞瘤、骨转移癌、骨折恢复期。另外，少年儿童在生长发育期骨胳系统活跃，可使ALP 增高。 注意：使用不同绶冲液，结果可出现明显差异。 6.血清r-谷氨酰基转移酶（GGT或r－GT）测定的临床意义： 升高：常见于原发性或转移性肝癌、急性肝炎、慢性肝炎活动期肝硬化、急性胰腺炎及心力衰竭等。 7.血清总胆红素TBIL测定的临床意义： 增高： 肝脏疾病肝外疾病 原发性胆汁性肝硬化溶血性黄疸急性黄疸性肝炎新生儿黄疸慢性活动期肝炎闭塞性黄疸 病毒性肝炎胆石症阻塞性黄疸胰头癌肝硬化输血错误 8.血清直接胆红素DBIL测定临床意义: 增高：常见于阻塞性黄疸，肝癌，胰头癌，胆石症等。 9.血清葡萄糖（GLU）测定的临床意义： 高血糖：某些生理因素（如情绪紧张，饭后 1－2小时）及静注射肾上腺素后可引起血糖增高。病理性增高常见于各种粮糖尿病、慢性胰腺炎、心肌梗塞、肢端巨大症，某些内分泌疾病，如甲状腺机能亢进、垂体前叶嗜酸性细胞腺瘤、垂体前叶嗜碱性细胞机能亢进症、肾上腺机能亢进症等。颅内出血，颅外伤等也引起血糖增高。 低血糖：糖代谢异常、胰岛细胞瘤、胰腺瘤、严重肝病、新生儿低血糖症、妊娠、哺乳等都可造成低血糖。 10.血清尿素（UREA）测定的临床意义： 升高：大致可分为三个阶段。浓度在 8.2-17.9mmol/L时，常见于UREA产生过剩（如高蛋白饮食、糖尿病、重症肝病、高热等），或UREA排泻障碍（如轻度肾功能低下、高血压、痛风、多发性骨髓瘤、尿路闭塞、术后乏尿等）。浓
血液生化检查各指标及对应正常值列表
临床意义正常时，谷-丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所以血清中此酶活力很低。当肝脏、心肌病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内各种酶释放出来，使血清中此酶活性升高。所以测定血清中此酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的依据。 项目尿素 临床意义血中尿素氮主要经肾小球滤过，从小便中排出体外，当肾小球受损时滤过率降低，血中BUN升高。所以BUN是反映肾小球滤过功能的重要指标。 项目血肌酐 临床意义血中的肌酐由外源性和内源性两类组成，主要由肾小球滤过，肾小管基本不重吸收。内源性肌酐由肌肉代谢产生，每天生成量相当衡定，在外源性肌酐摄入量稳定的情况下，血液中肌酐的浓度取决于肾小球的滤过功能。当肾实质受损时血中肌酐浓度升高，这是检测肾小球滤过功能的重要指标。 项目血尿酸 临床意义 "此项指标有助于较早期的诊断肾脏的病变。 尿酸含量升高： （1）痛风症，尿酸含量可升高。 （2）急慢性肾小球肾炎，一般伴有血清尿酸增高。 （3）血白病，多发性骨髓瘤，红细胞增多症或其它恶性肿瘤也可导致血尿酸升高。 （4）氯仿，四氯化碳及铅中毒等均可使血尿酸增高。 " 项目胆固醇 临床意义总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激紊、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。国内外专家推荐成人理想胆固醇值为 山东大学实验报告2017年12月4日 ___________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物鉴定常用的生理生化试验姓名：丁志康 一、目的要求 1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的 酶系统。 2.掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5.了解IMViC反应的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、基本原理 1、生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶只要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实；淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘测定不在产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变成深红色，说明胞外存在着脂肪酶。 2、糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳的等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 3、IMViC反应是吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验和柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。这四个实验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌检查。 （1）吲哚试验：某些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚（靛基质），吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。 （2）甲基红试验：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂可呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在5.4以上，加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用，因为前者呈阳性的细菌，后者通常为阴性。 （3）伏-普（二乙酰）试验：某些细菌能发生如下转换：葡萄糖→丙酮酸（脱羧）→乙酰甲基甲醇→2，3—丁烯二醇，在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用产生粉 常规生化检验项目各项指标参考范围及临床意义 注：以下各项所述临床意义，仅是表明患某些疾病的可能性，并不表示一定患有某病。请勿随便对号入座！如有疑问请至医院由专业医生结合体格检查等后确诊！！！ 肝功能 检验项目谷丙转氨酶 英文缩写 ALT 正常参考值 0-40IU/L 临床意义增高：常见于急慢性肝炎，药物性肝损伤，脂肪肝，肝硬化，心梗，胆道疾病等。 检验项目谷草转氨酶 英文缩写 AST 正常参考值 0-40I/L 临床意义增高：常见于心梗，急慢性肝炎，中毒性肝炎，心功能不全，皮肌炎等。 检验项目转肽酶 英文缩写 GGT 正常参考值 0-40IU/L 临床意义增高：常见于原发性或转移性肝癌，急性肝炎，慢性肝炎活动期，肝硬化，急性胰腺炎及心力衰竭等。 检验项目碱性磷酸酶 英文缩写 ALP 正常参考值 30-115IU/L 临床意义增高：常见于肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸，急慢性黄疸型肝炎，骨细胞瘤，骨折及少年儿童。 检验项目总胆红素 英文缩写 TBIL 正常参考值 4.00-17.39umol/L 临床意义增高：原发生胆汁性肝硬化急性黄疸型肝炎，慢性活动期肝炎，病毒性肝炎。肝硬化，溶血性黄疸，新生儿黄疸，胆石症等 检验项目直接胆红素 英文缩写 DBIL 正常参考值 0.00-6.00umol/L 临床意义增高：常见于阻塞性黄疸，肝癌，胰头癌，胆石症等。 检验项目游离胆红素 英文缩写 IBIL 正常参考值 0.00-17.39umol/L 临床意义增高：见于溶血性黄疸，新生儿黄疸，血型不符的输血反应 检验项目总蛋白 英文缩写 TP 正常参考值 55.00-85.00g/L 临床意义增高：常见于高度脱水症（如腹泄、沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤。降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合症，烧伤，失血。 检验项目白蛋白 英文缩写 ALB 正常参考值 35.00-55.00g/L 临床意义增高：常见于严重失水而导致血浆浓缩，使白蛋白浓度上升。降低：基本与总蛋白相同，特别是肝脏，肾脏疾病更为明显，见于慢性肝炎、肝硬化、肝癌、肾炎等。如白蛋白30g/L,则预后较差。 检验项目球蛋白 英文缩写 GLO 正常参考值 15-35g/L 临床意义增高：常见于肝脏疾病（如慢性肝炎、肝硬化、肝癌、肾炎等），网状内皮系统疾病，如多发性骨髓瘤，单核细胞性白血病，慢性感染，如化脓性感染、梅毒、麻风、结缔组织病。 检验项目白/球比值 血常规 1．红细胞（RBC或BLC）参考值：3.8~5.1*10^12 生理功能：（附1） 1、运输氧、二氧化碳、电解质、葡萄糖以及人体排出来的废物新陈代谢所必须的物 质；酸碱平衡功能（血红蛋白Fe2+） 2、吞噬细胞样的功能，在其细胞膜表面具有过氧化物酶，该酶是典型的溶酶体酶， 它可起着巨噬细胞样的杀伤作用。 3、免疫粘附功能：抗原-抗体复合物与补体C3b结合后，可粘附于灵长目或非灵长 目的红细胞与血小板上（C3b受体）；清除免疫复合物的特性是白细胞和淋巴细胞 所不及的。 4、防御感染：细胞与细菌、病毒等微生物免疫粘附后，不仅可以通过过氧化物酶对 它们产生直接的杀伤作用，而且还可以促进吞噬细胞对它们的吞噬作用。因此，红细胞的免疫功能可以看作是机体抗感染免疫的因素之一。 5、免疫功能：识别携带抗原；清除循环中免疫复合物；增强T细胞依赖反应；效应 细胞（B/T）样作用 增多：分为相对增多（呕吐、腹泻、多汗、多尿、大面积灼伤等所致绝对增多（真性红细胞增多症等），继发性：代偿性增多（缺氧等），非代偿性增多（肝细胞癌、卵巢癌、子宫肌瘤等肿瘤相关及肾盂积水、多囊肾、肾癌等肾脏相关）。 减少：生理性：≤15岁儿童、部分老年人、妊娠中晚期等；病理性：常见于缺铁性、溶血性、再生障碍性贫血及急、慢性失血等（生成过多、破坏过多、丢失过多）。 2．血红蛋白（HB或HGB）参考值：115~150g/L 生理功能：运输氧、二氧化碳、电解质、葡萄糖以及人体排出来的废物新陈代谢所必须的物质；酸碱平衡功能（血红蛋白Fe2+） 增多： 相对增多（呕吐、腹泻、多汗、多尿、大面积灼伤等所致）；绝对增多（真性红细胞增多症等）：生理性增多：见于高原居民、胎儿和新生儿、剧烈劳动、恐惧等；病理性增多：由于促红细胞生成素代偿性增多所致，见于严重的先天性及后天性心肺疾病和血管畸形，如法洛四联症、紫绀型先天性心脏病、阻塞性肺气肿、肺源性心脏病、肺动-静脉瘘以及携氧能力低的异常血红蛋白病等；某些肿瘤或肾脏疾病，如肾癌、肝细胞癌、肾胚胎瘤以及肾盂积水、多囊肾等 减少：轻度：血红蛋白<90g/L、中度：血红蛋白90～60g/L、重度：血红蛋白 60～30g/L、极重度：血红蛋白＜30g/L 生理性：≤15岁儿童、部分老年人、妊娠中晚期等；病理性：常见于缺铁性、溶血性、再生障碍性贫血及急、慢性失血等（生成过多、破坏过多、丢失过多） （1）红细胞压积（HCT）：参考值：0.35~0.45L/L一定量的抗凝全血经离心沉淀后，测得下沉的红细胞占全血的容积比。 增多：血液浓缩；其他同红细胞 降低：同红细胞 （2）平均红细胞体积（MCV）：参考值：82~100fL （3）平均红细胞血红蛋白量（MCH）参考值：27~34pg （4）平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）参考值：316~354g/L 平均红细胞血红蛋白浓度除了使用血红蛋白这个指标判断贫血外，还要参考红细胞数量，如二者比例失调，则需进一步参考平均红细胞体积，平均红细胞血红蛋白量及平均红细胞血红蛋白浓度及红细胞体积分布宽度，因不同病因引起的贫血，可使红细胞产生形态的变化，检查红细胞形态特点可协助临床寻找病因。 贫血形态学类型MCV(fl) MCH(pg) MCHC 病因举例 正常细胞性贫血82～95 27～31 320～360 急性失血，溶血，造血功能低下，白血病 10临床康复-生化期末复习要点 第三章蛋白质 1、在二十种标准氨基酸中，含硫氨基酸有：甲硫氨酸、半胱氨酸；含羟基的氨基酸：丝氨 酸、苏氨酸、酪氨酸。 2、维持蛋白质分子的化学键：疏水作用、氢键、离子键、范德华力、二硫键。 3、蛋白质的二级结构有：肽单位、α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲、超二级结构、结 构域；其中主要形式有螺旋、折叠，稳定其结构的主要化学键是氢键。 4、影响蛋白质亲水胶体的因素：水化膜和表面带同种电荷。 5、等电点：蛋白质在某一pH值条件下，其解离成阳离子和阴离子的趋势和程度相同，溶 液中蛋白质的净电荷为零，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。 6、蛋白质各级结构主要的化学键： 一级结构：以肽键来维持其结构的稳定。 二级结构：氢键是维持其主要的化学键。 三级结构：主要是离子键、氢键、疏水键、范德华力。 第四章核酸 1、核酸分子结构的化学键：氢键、磷酸二酯键、磷酸酐键。 2、维持DNA二级结构稳定的因素主要为氢键、碱基堆积力。 3、tRNA的二级结构为三叶草形。三环：T G、反密码子环、D环；四臂：T G臂、反 密码子臂、D臂、氨基酸臂。 4、碱基配对：A-T, C-G, A-U。 5、核小体：是构成染色体的基本结构单位，由DNA和组蛋白构成，其中组蛋白H2A、H2B、 H3、H4各两个亚基构成八聚体核心，再由146bp缠绕组蛋白八聚体约1.75圈，其余15~55bp与组蛋白H1结合共同构成核小体。其组成：DNA和组蛋白两种成分。 6、tRNA的一级结构特点：含10~20%稀有碱基，如DHU,3’末端为——CCA—OH,5’末端 大多数为G。 tRNA的二级结构特点：三叶草形，为三环四臂。 tRNA的三级结构特点：倒L形。 mRNA的结构特点：5’末端帽子结构，3’末端有一个多聚腺苷酸结构。 7、简述三种主要的RNA的生物功能。 mRAN：合成蛋白质的直接模板。 tRAN：携带转运氨基酸。 rRAN：与蛋白质组成核糖体，提供合成蛋白质的场所。 8、DAN的变性：指DNA双螺旋解旋、解链，形成无规则线性结构，从而发生性质改变（如 粘度下降、沉降速度加快、紫外线吸收增加等）。 第五章维生素与微量元素 1、维生素：指机体维持正常功能所必需，但在体内不能合成，或合成量很少，必须由食物 供给的一组低分子量的有机物质。 2、简述维生素A的生化功能及缺乏病。 生化功能：构成视觉细胞内感光物质的成分；促进生长发育和维持上皮组织结构的完整性；有一定的抗癌、防癌作用。 缺乏病：夜盲症，干眼病。 常规生化检验项目各项指标参考范围及临床意义(1) 注：以下各项所述临床意义，仅是表明患某些疾病的可能性，并不表示一定患有某病。请勿随便对号入座！如有疑问请至医院由专业医生结合体格检查等后确诊！！！ 检验项目谷丙转氨酶 英文缩写ALT 正常参考值0-40IU/L 临床意义增高：常见于急慢性肝炎，药物性肝损伤，脂肪肝，肝硬化，心梗，胆道疾病等。 检验项目谷草转氨酶 英文缩写AST 正常参考值0-40I/L 临床意义增高：常见于心梗，急慢性肝炎，中毒性肝炎，心功能不全，皮肌炎等。 检验项目转肽酶 英文缩写GGT 正常参考值0-40IU/L 临床意义增高：常见于原发性或转移性肝癌，急性肝炎，慢性肝炎活动期，肝硬化，急性胰腺炎及心力衰竭等。 检验项目碱性磷酸酶 英文缩写ALP 正常参考值30-115IU/L 临床意义增高：常见于肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸，急慢性黄疸型肝炎，骨细胞瘤，骨折及少年儿童。 检验项目乳酸脱氢酶 英文缩写LDH 正常参考值90-245U/L 临床意义增高：急性心肌梗塞发作后12-48小时开始升高，2-4天可达高峰，8-9天恢复正常。另外，肝脏疾病恶性肿瘤可引起LDH增高 检验项目总胆红素 英文缩写TBIL 正常参考值 4.00-17.39umol/L 临床意义增高：原发生胆汁性肝硬化急性黄疸型肝炎，慢性活动期肝炎，病毒性肝炎。肝硬化，溶血性黄疸，新生儿黄疸，胆石症等 检验项目直接胆红素 英文缩写DBIL 正常参考值0.00-6.00umol/L 临床意义增高：常见于阻塞性黄疸，肝癌，胰头癌，胆石症等。 检验项目游离胆红素 英文缩写IBIL 正常参考值0.00-17.39umol/L 临床意义增高：见于溶血性黄疸，新生儿黄疸，血型不符的输血反应 检验项目总蛋白 英文缩写TP 正常参考值55.00-85.00g/L 临床意义增高：常见于高度脱水症（如腹泄、沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤。降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合症，烧伤，失血。 检验项目白蛋白 英文缩写ALB 干旱胁迫对植物生理生化指标的影响 摘要：水是生命之源，地球上任何生物的生存都离不开水。并且，很多生物在出现缺水时都表现出一系列相应的症状，特别是植物最明显。植物常常遭受的有害影响因素之一就是缺水，当植物消耗的水分无法从外界得到补充时，就会使植物体内的一些生理生化指标发生变化，如脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、过氧化氢 (H 2O 2 )、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽(GSH)等的含量。实验通 过分光光度计分别在不同的波长中测出吸光率，间接计算出其含量，我们通过测定这些指标含量的变化就可以知道干旱对植物的损伤有多严重。植物经常遭受干旱胁迫的危害，全世界干旱、半干旱地区的面积占总面积的43%，而中国更为严重，约占51.9%，因而研究植物的抗旱性尤为重要。由实验数据可知，当小麦受 到干旱胁迫时，小麦幼苗的脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H 2O 2 )、多酚 氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽(GSH)的含量均升高。 关键词：干旱、脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H 2O 2 )、多酚氧化酶(PPO)、 过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽(GSH) 1.引言 1.1干旱及干旱对植物的影响 干旱化已成为世界性的问题，中国干旱半干旱地区面积为256．6×104km2，占国土面积的26.73％。在我国各干旱省份中，云南又属于干旱的省份之一。对植物影响的诸多自然因素中，干旱占首位。因此研究干旱对植物的影响就尤为重要，以利于应用于农作物上。在农业上可以采取植物的各种抗旱机制来抵抗干旱对农作物的损伤，才不致使庄稼减产，利于丰收。那么，究竟什么算干旱呢？就让我们来看看它的定义吧！ 当植物耗水大于吸水时，就会使组织内水分亏损，简而言之，过度水分亏缺的现象，称为干旱。干旱可分为大气干旱和土壤干旱。土壤干旱时，植物生长困难或完全停止，受害情况比大气严重。我国农业每年受旱灾面积达2500多万km2。[1] 水分在植物的生命活动中起着极大的作用,全世界由于水分亏缺导致的减产 血液生化检查各指标及对应正常值列表 （二氧化碳结合力） 2O～30 mmol/L （一氧化碳定性）（—） （a羟丁酸脱氨酶） 90～22O IU/L （磷酸肌酶激酶） 25～170 mmol/L （乳酸脱氢酶） 40～100 mmol/L （激肌酸激酶同功酶） 0～16 （血清白/球蛋白） 3.5～5.5/23g （高密度脂蛋白〕 1.14～1.91 mmol/L （低密度低蛋白） 0.11～0.34 mmol/L （极低密度脂蛋白） 1～3 mmol/L （C反应蛋白）（—） （免疫球蛋白） 0.9～4.5 mg/ml （免疫球蛋白） 9～23 mg/ml （免疫球蛋白） 0.8～2.2 ml （铁蛋白） 20～200 ng/ml （蛋白电脉） 3～4.9 % （蛋白电脉） 3.1～9.6 % （蛋白电脉） 6.6～13.7 % （蛋白电脉） 9.5～20.3 % （纤维蛋白原） 2～4g/L （血肌酐） 44～133 µmol/L （肌酐清除率） 80～120 ml/分 （血糖） 3.9～6.1 mmol/L Y （血淀粉酶） 40～160 U （补体） 0.65～1.5/L （抗链O） 1:400以下 （类风湿因子）（—） （肥达氏反应）（—） （外裴氏反应）（—） （癌胚抗原）＜5mg 编辑本段血生化 项目结果参考值 谷丙转氨酶ALT 0 ～ 40 U 尿素 2.5 ～ 7 mmol/L 血肌酐 40 ～ 130 umol/L 血尿酸 180 ～ 410 umol/L 胆固醇 2.8 ～ 5.85 mmol/L 甘油三脂 0.34 ～ 2.03 mmol/L 葡萄糖 4.4 ～ 6.6 mmol/L 总胆红素 3 ～ 24 umol/L 项目谷丙转氨酶ALT 临床意义正常时，谷丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所 实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应 16111202班史政伟1120122681 一、实验目的 1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。 3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 二、实验原理 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 1.糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。 2.甲基红试验（M.R试验） 甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。 3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验） 伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。 4.靛基质试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。 5.硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。 6.明胶液化实验 明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4 度仍能保持液化状态。 7.柠檬酸盐利用试验 有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂 pH6.0(黄)～7.6(蓝)，由绿色变为深蓝色。 8.淀粉水解实验 细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。 三、实验仪器、材料和用具 实验仪器：32度恒温培养箱、4度冰箱； 微生物材料：大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌、待鉴定的未知菌的平板单菌落；微生物鉴定常用的生理生化试验实验报告
常规生化检验项目各项指标参考范围及临床意义
血常规生化指标与临床意义
生化期末复习要点
常规生化检验项目各项指标参考范围和临床意义
干旱胁迫对植物生理生化指标的影响
血液生化检查各指标及对应正常值列表之欧阳歌谷创作
细菌鉴定中常见的生理生化反应
相关主题
文本预览