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生化实验思考题

生化实验思考题
生化实验思考题

1. 氨基酸的纸层析分离

1. 什么是纸层析技术

是利用混合物中各组分物理化学性质差异,使其以不同速度移动的一种物理分

离方法。

2. 什么是分配系数

分配系数是指溶质在固定相中的浓度和溶质在流动相中的浓度的比值。

3. 层析技术的种类

1 吸附层析

2 分配层析

3 离子交换层析

4 凝胶过滤层析

5 亲和层析

6 气象层析

7 固相层析

8 柱层析

9 纸层析

10 薄层层析

11 高效液相层析

4. 影响Rf值的因素有哪些

1 纸层析时纸层析时要在密闭仪器中加入平衡试剂使纸层析上吸附的溶剂达到

饱和.

2 滤纸要保持洁净,点样时要适量斑点不能过大.

3 样品物分子结构和极性

4 滤纸的厚薄和纤维松紧度不一样,结合的水量也不一样。

2. 酵母RNA的提取和分离

1. 试验中为什么选择干酵母做实验材料?

酵母中RNA含量较高(2.67%~10.0%),DNA含量少

2. 提取RNA的方法有几种?

稀碱法和浓盐法

3. 加入酸性乙醇的目的?

在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可使解聚的核糖核酸沉淀,由此得到RNA的粗制

品。

4. 如何鉴定RNA的组分?现象如何?

RNA中含有核糖,碱基,磷酸各组分。核糖与浓盐酸和苔黑酚共热产生绿色;嘌

呤碱与银铵络离子共热白色絮状嘌呤银化物沉淀;磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄

色的磷钼酸铵,加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。

3. 球蛋白提取及含量测定

1. 蛋白质沉淀方法有哪些?

分可逆沉淀法和不可逆沉淀法两种。其中可逆沉淀法有等电点沉淀,中性盐沉淀

法,有机溶剂沉淀法;不可逆沉淀法有加热沉淀,重金属盐沉淀,生物碱沉淀。

2. 蛋白质含量测定的方法

紫外分光光度计,可见光光度计,双缩脲法,福林酚法

3. 分光光度计的使用及注意事项

1 接电源,打开样品室暗箱盖,预热20min

2 调节所需波长

3 开盖放黑色比色皿,关盖,调T%为0%

4 放空白对照,放样品液到比色皿2/3到3/4处,用擦镜纸擦干表面,在对照组

处调T为100%

5 调节T%到ABS,分别测各样品分光光度值

4. 盐析原理

将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的

水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”,于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出.

盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好.由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲

水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐

浓度可使各种蛋白质分段沉淀.

4. 影响酶促反应速度的因素

1. 影响酶促反应速度的因素有哪些?

温度,pH,抑制剂,激活剂

2. 唾液淀粉酶的抑制剂,激活剂分别是?

激活剂:Cl-;抑制剂:Cu2+

3. NaOH对v反应实验,做碘反应实验前为何加盐酸

因为碘遇NaOH变NaI和NaIO3,而不能与淀粉发生反应,所以加入盐酸中和氢

氧化钠。

4. 温度如何影响酶活性?

一般来讲,每种酶的酶活性有最适温度,在此温度下,其活性最高,偏离此最适温度

时,温度越低,或者温度越高,其活性越小.而且,温度过高会导致酶失活以及变性.

5. 植物组织中丙酮酸含量的测定

1. 本实验中氢氧化钠的作用?

丙酮酸与2,4-二硝基苯肼发生反应,生成的丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性条件

下显红色,因此氢氧化钠作用是提供碱性环境。

2. 本实验中所加试剂为何不能颠倒?

因为本实验中所用的丙酮酸与三氯乙酸均为酸性,而2,4-二硝基苯肼与丙酮酸的

反应需要在碱性条件下显色;三氯乙酸的作用是除去蛋白质,使之沉淀,如果后

加,试验结果可能会被其他蛋白质干扰。

3. 制作丙酮酸标准曲线时为什么以8%三氯乙酸为空白对照?

因为本实验所用提取液是8%三氯乙酸溶液,所用丙酮酸均溶解于该溶液中。

4. 测定丙酮酸含量的基本原理

植物样品组织经三氯乙酸除去蛋白质后,所含丙酮酸与2,4-二硝基苯肼发生反应,

生成的丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显红色。测定样品吸光度,与丙酮

酸标准曲线相比较即可得丙酮酸含量。

06.DNA的提取及含量测定

1.DNA提取中各试剂中英文名称及作用

●SDS:十二烷基硫酸钠,使蛋白质变性及破坏脱氧核酸降解酶

●CHCl3:氯仿,使蛋白质沉淀被除去

●乙醇:使DNA呈纤维状沉淀出来

●Na2EDTA:乙二胺四乙酸二钠,抑制DNA酶活性,与Mg2+结合,保护

DNA

●NaCl:使蛋白质溶解

●CH3CHO:乙醛,提高反应灵敏度

2.加入氯仿后出现什么现象?

溶液分三层,上层为DNA溶液,中层为蛋白质沉淀,下成为有机层

3.DNP与RNP在盐溶液中溶解度有什么不同?

DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶

液中,几乎不溶解,如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低,仅为在水中溶解度

的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中的溶解度很大,

比纯水高2倍。

RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小,在0.14mol/L氯化钠中溶解度

较大。因此,在提取时,常用此法分离这两种核蛋白。

4.定糖法测定DNA含量的原理

DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成

ω-羟基-γ-酮基戊酸,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,其反应如下图。

蓝色化合物在595nm处有最大吸收,且DNA在40μg ~400μg范围内时,吸光

度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。

7.植物过氧化物同工酶聚丙烯酰氨凝胶电泳

1. 什么是电泳,同工酶,等电点?

● 在溶液中,蛋白质分子会由于氨基酸的解离而带电荷,电场中蛋白质带电粒

子会向与自身电荷相反的电极泳动,这就是电泳。

● 指生物体内催化相同反应但分子结构不同的一组酶

● 氨基酸分子静电荷为零时的PH

2. Acr,Bis,AP,TEMED各自中文名称及作用?

Acr:丙烯酰胺,作为单体;Bis:甲叉双丙烯酰胺,交联剂;AP:0.15%过硫酸铵,

化学聚合催化剂;TEMED:四甲基乙二胺,加速剂

3. 过氧化物酶的底物是什么?

H2O2

4. 溴酚蓝的作用?

指示电泳前沿:溴酚蓝分子带负电,比蛋白质小迁移速度快,总是位于蛋白质之

前。

5. 本实验使用的缓冲溶液是什么?写出各自的名称,PH

● 提取液缓冲液:PH=8.0

● 电极缓冲溶液:PH=8.3

● 上样缓冲溶液:PH=8.9

8.蔗糖酶米氏常数的测定

1. 为什么说Km是酶的特征常数?什么是Km?单位是什么?

一个酶对一个特定的底物有一个特定的Km与之对应;Km是酶促反应最大速度1/2

时的底物浓度;单位:mol/L、m mol/L

2. 双倒数作图法求Km值,横纵坐标分别是什么?

横:1/【s】;纵:1/v。(【s】是底物浓度)

3. NaOH作用?

使酶失活,反应停止

4. 涉及化学反应:

蔗糖水解为葡萄糖;3,5﹣二硝基水杨酸与葡萄糖加热反应生成棕红色的3﹣氨基﹣5﹣硝基水杨酸

9.胰蛋白酶活性的测定

1. 酶活单位如何定义?

一个酶活力单位是指在最适条件下,在一分钟内能转化1μmol底物所需要的酶量

2. 紫外分光光度计使用方法

?设置波长:【Goto WL】键设置波长

?【T%/ABS】:按【T%/ABS】可在透光率(T%)和吸光度(ABS)之间切换。

?保存参数:可将当前参数保存在内存或数据包内。

?测量屏幕:确定参数后按【样品测定】或【START/STOP】键的同时进行第一次测量,每按一次得到一个数据。

?自动调零:当需要空白校正时,在测量前设置好空白样品,然后按【AUTO ZERO】键,此时的光度值设定为0ABS(100%)

3. BAEE,BA中文名

BAEE:N﹣苯甲酰﹣L﹣精氨酸乙酯

BA:N﹣苯甲酰﹣L﹣精氨酸

10.植物体内游离脯氨酸含量的测定

1. 植物体内游离脯氨酸有何意义?

● 植物在正常条件下,游离脯氨酸含量很低,但遇到干旱、盐碱、低温等逆境时,

游离脯氨酸便会大量积累,并且积累指数与植物的抗逆性有关。因此,脯氨酸可

作为植物抗逆性的一项生化指标。

● 脯氨酸是水溶性最大的氨基酸,具有很强的水和能力,其水溶液具有很高的水势。

其疏水端可与蛋白质结合,亲水端可与水分子结合,蛋白质可借脯氨酸束缚更多

的水,从而防止渗透胁迫条件下蛋白质脱水变性。因此脯氨酸在植物的渗透调节

中起重要作用。

2. 当改变萃取剂时比色应做哪些改变?如何选择最佳的萃取剂?

● 当萃取剂发生改变时,测定光密度的波长应当改变,具体如何改变,根据实验而

定。

● 萃取剂选用原则:a.萃取机和原溶剂互不相容b.萃取剂和溶质互不发生反应c.溶

质在萃取剂中溶解度远大于在原溶剂中溶解度。

11.植物基因组DNA的提取与纯度测定

1.CTAB的作用?

使核糖体解体,蛋白质和多糖沉淀,DNA溶解

2.CTAB溶液中组分有哪些?

●CTAB:十六烷基三甲基溴化铵

●Tris-HCl(pH=8.0):提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏

●EDTA螯合Mg2+和Mn2+:抑制DNA酶活性

●NaCl:提供高盐环境,使DNA充分溶解,存在于液相当中

●β-硫基乙醇:抗氧化剂,有效防止酚被氧化成醌,避免褐变,使酚容易去

除基因组DNA。

3.DNA提取方法有哪些?

CTAB法,玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法,异硫氰酸胍法,碱法,酶法

4.DNA纯度鉴定方法

OD260/OD280(紫外分光光度法)、电泳

5.OD260/OD280值大于1.8及小于1.8的原因

等于1.8时表示DNA纯度极高,大于时表示提取物混有RNA,小于时表示混

有蛋白质。

12.基因组DNA的酶切及琼脂糖凝胶电泳

1.什么是限制性内切酶?分为哪几种?

是可以识别特定核苷酸序列,并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷

酸二酯键进行切割的一类酶。

●能识别特定的核苷酸顺序,并在识别点附近进行切割,但切割的核苷酸

顺序无专一性,是随机的。

●能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割

●能识别的顺序是回文顺序,可切成粘性末端也可形成平末端。

2.酶切的原理,EcoRI的酶切位点

G 〡AATT C

C TTAA〡 G

限制性内切酶识别特定核苷酸序列,并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间

的磷酸二酯键进行切割

3.琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理

DNA在高于等电点PH的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷

酸骨架在结构上的重复性质相同数量的双链DNA几乎带等量的静电荷。因此

能以同样的速度向正极方向移动。在一定电场强度下,DNA迁移速度取决于

分子本身的大小与构型,相对分子质量不同的DNA泳动速率不同。

4.电泳点样时,加样孔在哪个电极附近,为什么?

负极。DNA在高于等电点PH的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。13.植物总RNA的提取与检测

1.常用RNA提取方法

苯酚法,阴离子去污剂法,Licl-尿素法,改良Gomez法,异硫氰酸

胍法,CTAB法,热硼酸法,Trizol试剂快速提取法

2.Trizol试剂提取RNA理论上有几条带?分别代表什么?

四条.5SrRNA,5.8SrRNA,18SrRNA,28SrRNA

3.Trizol试剂提取RNA原理

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂,其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能

迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。在破碎和溶解细胞时能保持RNA

的完整性,适用于从多种组织和细胞中快速分离总RNA。

4.植物RNA提取注意事项

1、取植物材料新鲜、幼嫩的部分

2、移液枪头,离心管等耗材和试剂需要经过严格的去RNA酶处理

或用DEPC 水配制。

3、叶片用足够液氮快速研磨。

4、100mg叶片对应1mlTRNzol

5、提取RNA后立即跑电泳,防止RNA被污染

6、跑电泳的槽子需要与RNA专用槽,或经过特殊处理。

14.SDS-PAGE电泳测定蛋白质分子量

1.什么是重组蛋白:应用重组DNA或重组RNA技术而获得的蛋白质

2.蛋白质分子量测定方法有几种?凝胶过滤层析法,SDS-PAGE电泳,色谱法,

质谱法,沉降法

3.SDS-PAGE电泳的染色剂:考马斯亮蓝G-250

4.什么是不连续电泳:不连续电泳是指使用不同孔径和不同缓冲系统的电泳。

由于浓缩胶的堆积作用,可使样品(即使是稀样品)在浓缩胶和分离胶的界

面上先浓缩成一窄带,然后在一定浓度(或一定浓度梯度)的凝胶上进行分

离。由于不同孔径凝胶的分子筛作用,使不连续电泳的分辨率大大高于连续

电泳。

生化习题及答案

一.选择题 1.唾液淀粉酶应属于下列那一类酶( D ); A 蛋白酶类 B 合成酶类 C 裂解酶类 D 水解酶类 2.酶活性部位上的基团一定是( A ); A 必需基团 B 结合基团 C 催化基团 D 非必需基团 3.实验上,丙二酸能抑制琥珀酸脱氢酶的活性,但可用增加底物浓度的方法来消除其抑制,这种抑制称为( C ); A 不可逆抑制 B 非竟争性抑制 C 竟争性抑制 D 非竟争性抑制的特殊形式 4.动物体肝脏内,若葡萄糖经糖酵解反应进行到3-磷酸甘油酸即停止了,则此过程可净生成( A )ATP; A 0 B -1 C 2 D 3 5.磷酸戊糖途径中,氢受体为( B ); A NAD+ B NADP+ C FA D D FMN 6.高等动物体内NADH呼吸链中,下列那一种化合物不是其电子传递体( D ); A 辅酶Q B 细胞色素b C 铁硫蛋白 D FAD 7.根据化学渗透假说理论,电子沿呼吸链传递时,在线粒体内产生了膜电势,其中下列正确的是( A ); A 内膜外侧为正,内侧为负 B 内膜外侧为负,内侧为正 C 外膜外侧为正,内侧为负 D 外膜外侧为负,内侧为正 8.动物体内,脂酰CoA经β-氧化作用脱氢,则这对氢原子可生成( B )分子ATP; A 3 B 2 C 4 D 1 9.高等动物体内,游离脂肪酸可通过下列那一种形式转运( C ); A 血浆脂蛋白 B 高密度脂蛋白 C 可溶性复合体 D 乳糜微粒 10.对于高等动物,下列属于必需氨基酸的是(B ); A 丙氨酸 B 苏氨酸 C 谷氨酰胺 D 脯氨酸 11.高等动物体内,谷丙转氨酶(GPT)最可能催化丙酮酸与下列那一种化合物反应( D );

生物化学实验思考题

生物化学实验思考题 Document number:BGCG-0857-BTDO-0089-2022

生物化学实验思考题 1.可用何种颜色反应鉴别酮糖的存在? 间苯二酚反应,在酸的作用下,酮糖脱水生成羟甲基糠醛,后者再与间苯二酚作用生成红色物质。 2.α—萘酚的反应原理是什么? 糖在浓的无机酸(硫酸、盐酸)作用下,脱水生成糠醛及其糠醛的衍生物,后者能与α—萘酚生成紫红色物质。 3.菲林试剂和本尼迪凯特氏法检验糖的原理是什么? O沉淀。它们都是含有Cu2+的碱性溶液,能使还原糖氧化而本身还原成红色或者黄色的Cu 2 4.何谓纸层析法? 用滤纸作为惰性支持物的的分层层析法。 5.何谓Rf值?影响Rf值的主要因素是什么? 纸层析法形成的纸层析图谱上,原点到层析点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值;影响Rf值的因素有:物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。 6.怎样制备扩展剂? 扩展剂是4份水饱和的和1份醋酸的混合物。将20ml和5ml冰醋酸放入中,与15ml水混合,充分振荡,静置后分层,放出下层水层,漏斗中的则为扩展剂。 7.层析缸中的平衡剂的作用是什么? 平衡剂起到使纸上吸附的溶剂达到饱和。使物质在展开剂和纸层析上吸附的溶剂中溶解度不同而进行分离。 8.通过蛋白质及氨基酸的呈色反应实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法?他们 的原理是什么?

四种:双缩脲反应;茚三酮反应;黄色反应;考马斯亮蓝反应。 (1)双缩脲在碱性环境中能与Cu2+ 生成紫红色化合物,蛋白质中有肽键,其结构与双缩脲相似,也能发生此反应。(2)除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外,所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应产生蓝紫色物质。(3)含有苯环结构的氨基酸,如酪氨酸、和色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黄色物质,该化合物在碱性溶液中进一步形成橙色的硝醌酸钠。(4)考马斯亮蓝G250有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游离态存在呈现棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。 9.什么是酶的最适温度及其应用的意义? 酶活性最高时的温度称为酶的最适温度。可以利用这一原理指导工农业生产,提高生产效益。 10.什么是酶反应的最适PH?对酶的活性有什么影响? 酶催化活性最高时反应体系的 pH 称为酶促反应的最适 PH。PH过高、过低都会使酶促反应的速率下降。 11.什么是酶的活化剂? 指能够与分子上的一些结合,使酶活力提高的物质。 12.什么是酶的抑制剂?与变性剂有何区别?本实验结果如何证明酶的专一性? 指与分子上的一些结合,使酶活力下降,甚至消失,但不使变性的物质。区别:酶的抑制剂不会使酶发生变性,而酶的变性剂会使酶的结构和性质发生改变。酶的专一性证明:实验结果表明通过在淀粉和蔗糖中分别加入有活性的淀粉酶和蔗糖酶后,两者均产生了还原性的糖,与本尼迪凯特试剂反应产生了砖红色沉淀,而其他的条件下均没有还原性糖的的产生,进而说明了酶的专一性。(答题时可以详尽的描述) 13.何谓碘值?有何意义?

(完整版)(整理)《生物化学》练习题及答案

《生物化学》练习题及答案 纵观近几年来生化自考的题型一般有四种:(一)最佳选择题,即平常所说的A型多选题,其基本结构是由一组题干和A、B、C、D、E 五个备选答案组成,其中只有一个是最佳答案,其余均为干扰答案。 (二)填充题,即填写某个问题的关键性词语。(三)名词解释,答题要做到准确全面,举个例来说,名解“糖异生”,单纯回答“非糖物质转变为糖的过程”这一句话显然是不够的,必需交待异生的场所、非糖物质有哪些等,诸如此类问题,往往容易疏忽。(四)问答题,要充分理解题意要求,分析综合,拟定答题方案。现就上述四种题型,编写了生物化学习题选,供大家参考。 一、最佳选择题:下列各题有A、B、C、D、E五个备选答案,请选择一个最佳答案。 1、蛋白质一级结构的主要化学键是( ) A、氢键 B、疏水键 C、盐键 D、二硫键 E、肽键 2、蛋白质变性后可出现下列哪种变化( ) A、一级结构发生改变 B、构型发生改变 C、分子量变小 D、构象发生改变 E、溶解度变大 3、下列没有高能键的化合物是( )

A、磷酸肌酸 B、谷氨酰胺 C、ADP D、1,3一二磷酸甘油酸 E、磷酸烯醇式丙酮酸 4、嘌呤核苷酸从头合成中,首先合成的是( ) A、IMP B、AMP C、GMP D、XMP E、ATP 5、脂肪酸氧化过程中,将脂酰~SCOA载入线粒体的是( ) A、ACP B、肉碱 C、柠檬酸 D、乙酰肉碱 E、乙酰辅酶A 6、体内氨基酸脱氨基最主要的方式是( ) A、氧化脱氨基作用 B、联合脱氨基作用 C、转氨基作用 D、非氧化脱氨基作用 E、脱水脱氨基作用 7、关于三羧酸循环,下列的叙述哪条不正确( ) A、产生NADH和FADH2 B、有GTP生成 C、氧化乙酰COA D、提供草酰乙酸净合成 E、在无氧条件下不能运转 8、胆固醇生物合成的限速酶是( ) A、HMG COA合成酶 B、HMG COA裂解酶 C、HMG COA还原酶 D、乙酰乙酰COA脱氢酶 E、硫激酶 9、下列何种酶是酵解过程中的限速酶( )

《生化分离工程》思考题与答案

第一章绪论 1、何为生化分离技术?其主要研究那些容?生化分离技术是指从动植物组织培养液和微生物发酵液中分离、纯化生物产品的过程中所采用的方法和手段的总称。 2、生化分离的一般步骤包括哪些环节及技术?一般说来,生化分离过程主要包括4 个方面:①原料液的预处理和固液分离,常用加热、调PH、凝聚和絮凝等方法;②初步纯化(提取),常用沉淀、吸附、萃取、超滤等单元操作;③高度纯化(精制),常选用色谱分离技术;④成品加工,有浓缩、结晶和干燥等技术。 3、生化分离工程有那些特点,及其重要性? 特点:1、目的产物在初始物料(发酵液)中的含量低;2、培养液是多组分的混合物,除少量产物外,还有大量的细胞及碎片、其他代物(几百上千种)、培养基成分、无机盐等;3、生化产物的稳定性低,易变质、易失活、易变性,对温度、pH 值、重金属离子、有机溶剂、剪切力、表面力等非常敏感;4、对最终产品的质量要求高重要性:生物技术产品一般存在于一个复杂的多相体系中。唯有经过分离和纯化等下游加工过程,才能制得符合使用要求的产品。因此产品的分离纯化是生物技术工业化的必需手段。在生物产品的开发研究中,分离过程的费用占全部研究费用的50 %以上;在产品的成本构成中,分离与纯化部分占总成本的40~ 80 %;精细、药用产品的比例更高达70 ~90 %。显然开发新的分离和纯化工艺是提高经济效益或减少投资的重要途径。

4、生物技术下游工程与上游工程之间是否有联系? 它们之间有联系。①生物工程作为一个整体,上游工程和下游工程要相互配合, 为了利于目的产物的分离与纯化,上游的工艺设计应尽量为下游的分离纯化创造条件,例如,对于发酵工程产品,在加工过程中如果采用液体培养基,不用酵母膏、玉米浆等有色物质为原料,会使下游加工工程更方便、经济;②通常生物技术上游工程与下游工程相耦合。发酵- 分离耦合过程的优点是可以解除终产物的反馈抑制效应,同时简化产物提取过程,缩短生产周期,收到一举数得的效果。 5、为何生物技术领域中往往出现“丰产不丰收”的现象? 第二章预处理、过滤和细胞破碎 1、发酵液预处理的目的是什么?主要有那几种方法? 目的:改变发酵液的物理性质,加快悬浮液中固形物沉降的速率;出去大部分可溶性杂质,并尽可能使产物转入便于以后处理的相中(多数是液相),以便于固液分离及后提取工序的顺利进行。 方法:①加热法。升高温度可有效降低液体粘度,从而提高过滤速率,常用于粘度随温度变化较大的流体。控制适当温度和受热时间,能使蛋白质凝聚形成较大颗粒,进一步改善发酵液的过滤特性。使用加热法时必须注意加热温度必须控制在不影响目的产物活性的围,对于发酵液,温度过高或时间过长可能造成细胞溶解,胞物质外溢,而增加发酵液的复杂性,影响其后的产物分离与纯化;②调节悬浮液的pH 值,pH 直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质,适当调节pH 可以改善其过滤特性;③凝聚和絮凝;④使用惰性助滤剂。

生物化学实验理论考试题答案

生物化学实验理论考试题答案 1.醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端,为什么? 答;电泳时点样端应靠近负极,因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电,根据同性相吸,异性相斥原理,点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2.用分光光度计测定物质含量时,设置空白对照管的作用,为什么? 答;空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度,但是作为溶剂也能吸收,反射和透射一部分的光,因此必须以相同的溶剂设置对照,排除溶剂对吸光度的影响。 3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理? 答;血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动,而各种蛋白质等电点不同,且在PH为8.6时所带电荷不同,分子大小不等,形状各有差异,所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4.何谓Rf值?影响Rf值的因素? 答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构,性质,溶剂系统,层析滤纸的质量和层析温度有关,对同一种物质来讲Rf是一个常量。 5.什么是盐析?盐析会引起蛋白质的变性吗?一般用什么试剂? 答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时,蛋白质的溶解度下降,当中性盐的浓度达到一定程度的时候,蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性,因为蛋白质的结构并未发生改变,去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解;一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析 6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理? 答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸,而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比,用分光光度计测出溶液的吸光度,通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度,从而得出还原糖的浓度。 7.影响蛋白质沉淀的因素是什么?沉淀和变性有什么联系? 答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶

生物化学课后答案_张丽萍

1 绪论 1.生物化学研究的对象和内容是什么? 解答:生物化学主要研究: (1)生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能; (2)生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化; (3)生物遗传信息的储存、传递和表达; (4)生物体新陈代谢的调节与控制。 2.你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。 提示:生物化学是生命科学的基础学科,注意从不同的角度,去理解并运用生物化学的知识。 3.说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。 解答:生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、硫等6种是蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质,即碳原子最外层的4个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共价三键,碳还可与氮、氧和氢原子形成共价键。碳与被键合原子形成4个共价键的性质,使得碳骨架可形成线性、分支以及环状的多种多性的化合物。特殊的成键性质适应了生物大分子多样性的需要。氮、氧、硫、 磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基(—NH2)、羟基(—OH )、羰基(C O )、羧基(—COOH )、巯基(—SH )、磷酸基(—PO4 )等功能基团。这些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负性而与生命物质的许多关键作用密切相关。 生物大分子在结构上也有着共同的规律性。生物大分子均由相同类型的构件通过一定的共价键聚合成链状,其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件是20种基本氨基酸。氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性(N 端→C 端),蛋白质主链骨架呈“肽单位”重复;核酸的构件是核苷酸,核苷酸通过3′, 5′-磷酸二酯键相连,核酸链也具有方向性(5′、→3′ ),核酸的主链骨架呈“磷酸-核糖(或脱氧核糖)”重复;构成脂质的构件是甘油、脂肪酸和胆碱,其非极性烃长链也是一种重复结构;构成多糖的构件是单糖,单糖间通过糖苷键相连,淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。 2 蛋白质化学 1.用于测定蛋白质多肽链N 端、C 端的常用方法有哪些?基本原理是什么? 解答:(1) N-末端测定法:常采用2,4―二硝基氟苯法、Edman 降解法、丹磺酰氯法。 ①2,4―二硝基氟苯(DNFB 或FDNB)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与2,4―二硝基氟苯(2,4―DNFB )反应(Sanger 反应),生成DNP ―多肽或DNP ―蛋白质。由于DNFB 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此DNP ―多肽经酸水解后,只有N ―末端氨基酸为黄色DNP ―氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。 ② 丹磺酰氯(DNS)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯(DNS ―Cl )反应生成DNS ―多肽或DNS ―蛋白质。由于DNS 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此DNS ―多肽经酸水解后,只有N ―末端氨基酸为强烈的荧光物质DNS ―氨基酸,其余的都是游离氨基酸。 ③ 苯异硫氰酸脂(PITC 或Edman 降解)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯(PITC )反应(Edman 反应),生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时,N ―末端的PTC ―氨基酸发生环化,生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,除去N ―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 ④ 氨肽酶法:氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链的N 端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量,按反应时间和残基释放量作动力学曲线,就能知道该蛋白质的N 端残基序列。 (2)C ―末端测定法:常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。 肼解法:蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解,反应中除C 端氨基酸以游离形式存 在外,其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。

医学检验生物化学考试复习题

2012年上半年生化考试复习题 一:单选题 1.琼脂糖凝胶电泳用pH8.6的巴比妥缓冲液可以把血清蛋白质分成五条区带,由正极向负极数起它们的顺序是:( B ) A.白蛋白、β-球蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、γ-球蛋白 B.白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白 C.白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、γ-球蛋白、β-球蛋白 D.α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白、白蛋白 E.白蛋白、β-球蛋白、α1-球蛋白、γ-球蛋白、α2-球蛋白 2.已经确定的稳定而均一的物质,它的数值已由决定性方法确定,所含杂质也已经定量,该物质为:(A ) A.一级标准品 B.二级标准品 C.校准品 D.控制物 E.参考物 3.从结构上看能较好的避免交叉污染的自动生化分析仪是:( B ) A.流动式 B.分立式 C.离心式 D.单通道式 E.多通道式 4.临床生物化学检验中应用最广泛的一类分析技术是:(C ) A.发射光谱分析法 B.散射光谱分析法 C.吸收光谱分析法 D.荧光分光光度法 E.原子吸收分光光度法 5.离心机砖头的旋转速度为20000γ/min的离心为:( C ) A.低速离心 B.平衡离心 C.高速离心 D.超速离心 E.等密度离心 6.反映神经系统疾病最好的测定标本是:( C ) A.血清 B.全血 C.脑脊液 D.尿液 E.溶血血清 7.由实验室自己配置或为商品,其中有关物质的量由参考方法定值的标准品为( B )A.一级标准品

B.二级标准品 C.控制物 D.参考物 E.原级参考物 8.经过详细的研究,没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法为( A )A.决定性方法 B.推荐方法 C.参考方法 D.常规方法 E.对比方法 9.影响电泳的因素包括:(D ) A.电场强度 B.电泳缓冲液的PH值 C.电泳缓冲液的离子强度 D.以上都是 E.以上均不是 10.干化学自动生化分析仪的光学系统是:( B ) A.分光光度计 B.反射光分析仪 C.比色计 D.浊度计 E.原子吸收光谱仪 11.下列哪项不属于NCCLS所规定的纯水等级标准的特性指标:( C ) A.微生物含量 B.电阻率 C.钙离子 D.PH值 E.硅 12.有关比浊测定法的描述哪项是错误的:( D ) A.比浊法不是比色分析 B.比浊法分为化学比浊法和免疫比浊法 C.免疫比浊法分为透射比浊法和散射比浊法 D.分立式自动生化分析仪不能做散射比浊分析 E.干片式生化分析仪不能做比浊分析 13.临床生化实验室用水一般采用:( B ) A.一级水 B.二级水 C.三级水 D.次级水 E.自来水 14. 生化质控目的是:(E ) A.使随机误差逐渐缩小 B.消灭随机误差 C.使随机误差得到监测和及时发现

生物化学实验题目

实验一胆固醇的提取2012-11-15 16:20:00 生物师范班题目 1.比色法测定样品的理论基础是什么? 被测样品必须要有颜色。 2. 胆固醇含量在多少范围时,与值呈良好的线性关系? 在400mg/ml范围内。 3.在提取胆固醇的过程中,为什么要加无水乙醇? 促使蛋白质沉淀。 4.在试管中加入1ml磷硫铁试剂,会产生什么现象?(至少写2点) 产生紫红色化合物。产生热量。 5.在无水乙醇中加磷硫铁试剂时,正确的加法是什么?将产生什么现象?请准确描述 该现象。 沿管壁慢慢加入。溶液分层。上层是无水乙醇,下层是磷硫铁试剂。 1. 胆固醇提取过程中,无水乙醇为什么要分两次加入? 目的是使蛋白质以分散很细的沉淀颗粒析出。 2.我们用比色法测定胆固醇含量的仪器名称是什么? 分光光度计 3. P-S-Fe试剂配置时,能用稀硫酸吗?为什么? 不能。因为FeCl3本身是亲水性物质,稀硫酸中含有水,会降低P-S-Fe试剂的浓度,从而导致反应不能发生。 4.请简述移液枪的使用步骤。 根据所要吸取的溶液的体积选定合适量程的移液枪。 调好量程。 插枪头。 吸取液体。 将移液枪的量程调至最大。 5. 请简述0.08mg/ml胆固醇标准溶液的配置方法。 准确称取胆固醇80mg,溶于无水乙醇,定容至100ml 将贮液用无水乙醇准确稀释10倍既得。

实验二总糖和还原糖测定2012-11-15 16:20:00 生物师范班 1. 请写出还愿糖与非还原糖结构的不同之处 拥有自由的醛基和酮基 2. 对没有还原性的糖,用什么方法进行糖含量的测定? 酸水解的方法将非还原性的糖降解呈还原糖。 3. DNS之所以能和还原糖反应,是因为其结构中含有__________? 硝基 4. 如果将DNS和其与还原糖反应的产物同时进行比色,谁的A值更大?为什么? 产物的更大,因为产物生成棕红色,颜色越深,吸光度越高。 5. 还原糖提取过程中,为什么要离心两次? 因为这样可以更好地将还原糖全部提取出来。第二次洗涤沉淀。 海洋技术班 1.单糖都是还原糖吗?为什么? 是的,因为有自由醛基和酮基 2.为什么能用比色法测定还原糖的量? 因为还原糖的量与光吸收值呈线性关系。 3.DNS的全称是? 3,5-二硝基水杨酸 4.总糖提取过程中,碘液的作用是什么? 确认淀粉水解完全。 5.请简述标准曲线的作用。 通过标准曲线来算出未知样品的浓度。

生物化学测试题与答案

生物化学第一章蛋白质化学测试题 一、单项选择题 1.测得某一蛋白质样品的氮含量为0.40g,此样品约含蛋白质多少?B(每克样品*6.25) A.2.00g B.2.50g C.6.40g D.3.00g E .6.25g 2.下列含有两个羧基的氨基酸是: E A.精氨酸B.赖氨酸C.甘氨酸D.色氨酸 E .谷氨酸 3.维持蛋白质二级结构的主要化学键是: D A.盐键 B .疏水键 C .肽键D.氢键E.二硫键( 三级结构) 4.关于蛋白质分子三级结构的描述,其中错误的是: B A.天然蛋白质分子均有的这种结构 B.具有三级结构的多肽链都具有生物学活性 C.三级结构的稳定性主要是次级键维系 D.亲水基团聚集在三级结构的表面 E.决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基 5.具有四级结构的蛋白质特征是: E A.分子中必定含有辅基 B.在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上,肽链进一步折叠,盘曲形成 C.每条多肽链都具有独立的生物学活性 D.依赖肽键维系四级结构的稳定性 E.由两条或两条以上具在三级结构的多肽链组成 6.蛋白质所形成的胶体颗粒,在下列哪种条件下不稳定: C A.溶液pH值大于pI B.溶液pH值小于pI C.溶液pH值等于pI D.溶液pH值等于7.4 E.在水溶液中 7.蛋白质变性是由于: D A.氨基酸排列顺序的改变B.氨基酸组成的改变C.肽键的断裂D.蛋白质空间构象的破坏E.蛋白质的水解 8.变性蛋白质的主要特点是: D A.粘度下降B.溶解度增加C.不易被蛋白酶水解 D.生物学活性丧失E.容易被盐析出现沉淀

9.若用重金属沉淀pI 为8 的蛋白质时,该溶液的pH值应为: B A.8 B.>8 C.<8 D.≤8 E.≥8 10.蛋白质分子组成中不含有下列哪种氨基酸?E A.半胱氨酸 B .蛋氨酸C.胱氨酸D.丝氨酸 E .瓜氨酸题 选择 二、多项 1.含硫氨基酸包括:AD A.蛋氨酸B.苏氨酸C.组氨酸D.半胖氨酸2.下列哪些是碱性氨基酸:ACD A.组氨酸B.蛋氨酸C.精氨酸D.赖氨酸 3.芳香族氨基酸是:ABD A.苯丙氨酸 B .酪氨酸C.色氨酸D.脯氨酸 4.关于α- 螺旋正确的是:ABD A.螺旋中每3.6 个氨基酸残基为一周 B.为右手螺旋结构 C.两螺旋之间借二硫键维持其稳定(氢键) D.氨基酸侧链R基团分布在螺旋外侧 5.蛋白质的二级结构包括:ABCD A.α- 螺旋 B .β- 片层C.β-转角D.无规卷曲 6.下列关于β- 片层结构的论述哪些是正确的:ABC A.是一种伸展的肽链结构 B.肽键平面折叠成锯齿状 C.也可由两条以上多肽链顺向或逆向平行排列而成 D.两链间形成离子键以使结构稳定(氢键) 7.维持蛋白质三级结构的主要键是:BCD A.肽键B.疏水键C.离子键D.范德华引力 8.下列哪种蛋白质在pH5 的溶液中带正电荷?BCD(>5) A.pI 为4.5 的蛋白质B.pI 为7.4 的蛋白质 C.pI 为7 的蛋白质D.pI 为6.5 的蛋白质 9.使蛋白质沉淀但不变性的方法有:AC A.中性盐沉淀蛋白 B .鞣酸沉淀蛋白 C.低温乙醇沉淀蛋白D.重金属盐沉淀蛋白 10.变性蛋白质的特性有:ABC

生物化学实验习题及参考答案完整版

生物化学实验习题及参 考答案 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

生物化学实验习题及解答 一、名词解释 1、pI; 2、层析; 3、透析; 4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳; 5、蛋白质变性; 6、复性; 7、Tm 值; 8、同工酶; 9、Km值; 10、DNA变性;11、退火;12、增色效应 二、基础理论单项选择题 1、用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键( ) A、双缩脲反应 B、凯氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法 2、下列哪组反应是错误的() A、葡萄糖——Molish反应 B、胆固醇——Libermann-Burchard反应 C、色氨酸——坂口(Sakaguchi)反应 D、氨基酸——茚三酮反应 3、Sanger试剂是() A、苯异硫氰酸 B、2,4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、-巯基乙醇 4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收() A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm 5、下列蛋白质组分中,哪一种在280nm具有最大的光吸收() A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 C、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子 6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质() A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同 7、蛋白质用硫酸铵沉淀后,可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净,你选用下列哪一种试剂检查() A、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、Folin-酚试剂 8、蛋白质变性是由于() A、一级结构改变 B、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落 9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有() A、胶体性 B、粘性 C、变性作用 D、沉淀作用 10、有关变性的错误描述为()

生化实验思考题参考答案[1].

生化实验讲义思考题参考答案 实验一淀粉的提取和水解 1、实验材料的选择依据是什么? 答:生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。从科研工作的角度选材,还应当注意具体的情况,如植物的季节性、地理位置和生长环境等,动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等,微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。 2、材料的破碎方法有哪些? 答:(1) 机械的方法:包括研磨法、组织捣碎法; (2) 物理法:包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等; (3) 化学与生物化学方法:包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。 实验二总糖与还原糖的测定 1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定?两种滴定方法各有何优缺点? 答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。间接法的优点是操作简便、反应条件温和,缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差;直接法的优点是反应原理直观易懂,缺点是操作较复杂,条件剧烈,不易控制。 实验五粗脂肪的定量测定─索氏提取法 (1)本实验制备得到的是粗脂肪,若要制备单一组分的脂类成分,可用什么方法进一步处理? 答:硅胶柱层析,高效液相色谱,气相色谱等。 (2)本实验样品制备时烘干为什么要避免过热? 答:防止脂质被氧化。 实验六蛋白质等电点测定 1、在等电点时蛋白质溶解度为什么最低? 请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。

蛋白质是两性电解质,在等电点时分子所带净电荷为零,分子间因碰撞而聚沉倾向增加,溶液的粘度、渗透压减到最低,溶解度最低。结果中pH约为4.9时,溶液最浑浊,达到等电点。 答: 2、在分离蛋白质的时候,等电点有何实际应用价值? 答: 在等电点时,蛋白质分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加,所以处于等电点的蛋白质最容易沉淀。在分离蛋白质的时候,可以根据待分离的蛋白质的等电点,有目的地调节溶液的pH使该蛋白质沉淀下来,从而与其他处于溶液状态的杂质蛋白质分离。 实验七氨基酸的分离鉴定-纸层析法 1、如何用纸层析对氨基酸进行定性和定量的测定? 答: 将标准的已知氨基酸与待测的未知氨基酸在同一张层析纸上进行纸层析,显色后根据斑点的Rf值,就可以对氨基酸进行初步的定性,因为同一个物质在同一条件下有相同的Rf 值;将点样的未知氨基酸溶液和标准氨基酸溶液的体积恒定,根据显色后的氨基酸斑点的面积与点样的氨基酸质量成正比的原理,通过计算斑点的面积可以对氨基酸溶液进行定量测定。 3、纸层析、柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点? 答:

生物化学实验练习题及参考答案[1]

生物化学实验 一、名词解释: 分配层析法电泳同工酶酶活性分光光度法层析技术比活力 二、填空题: 1. 测定蛋白质含量的方法有,,和。 2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2,其活性大小以来表示,当CAT与H2O2反应结束,再用测定未分解的H2O2。 3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以作为载体的一种区带电泳,这种凝胶是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备_____________胶,其自由基的引发剂是,催化剂是______________;光聚合法适于制备大孔径的_________________胶,催化剂是______________。 4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类,可分成以下几种:_______________,_______________,_______________,_______________和________________。 5. 使用离心机离心样品前,必须使离心管__________且对称放入离心机。 6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力,Km愈小,表示E对S的亲合力愈,Km愈大,表示E对S 的亲合力愈。 7. 分光光度计在使用之前必须预热,注意预热及样品槽空时必须_________(打开、合上)样品池翻盖。 8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一,其活性高低与植物的密切相关。 9. 纸层析实验中,____________形成固定相,____________流动相。 10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的,在具有自由基团体系时,两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种:和。11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类,可分成以下几种:_______________,_______________,_______________和________________。 三、问答题: 1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。 2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。 3、试分析影响电泳的主要因素有哪些? 参考答案: 生物化学实验 一、名词解释: 1、电泳:指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 2、同工酶:指催化同一种化学反应,但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。 3、分配层析法:用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同,而达到分离目的的一种实验方法。

生物化学实验复习题

生物化学实验复习题 生物化学实验复习题 一、生物化学的基本操作 1、判断玻璃仪器洗涤干净的标准时什么? 2、若容器内附有油污,应该怎样洗涤? 3、玻璃仪器的一般洗涤方法 4、玻璃仪器干燥时,若不急用应怎样干燥,若急用应怎么办?容量玻璃仪器(如容量瓶、吸量管、滴定管)以及烧结、结构复杂的玻璃仪器,能否烧烤?若不能,该怎么干燥? 5、请准确量取一定量液体从一个器皿转移至另一器皿中(操作) a刻度吸管b奥氏吸管c微量加样器 6、使用奥氏吸管的原则是什么? 7、电动离心机的使用方法(配平、离心机使用的检查、调试) 8、分光光度计的使用方法及注意事项(比色皿选择、洗涤、保护) 二、血清r-球蛋白的提纯 1、盐析、分段盐析法德基本原理 2、凝胶过滤法德基本原理 3、沉淀r-球蛋白所需硫酸铵的最小浓度时多少? 4、不同型号交联葡聚糖凝胶“G”表示,请问G后面的数字表示什

么含义? 5、影响凝胶层析分离效果的因素有哪些? 6、如何检测蛋白质或铵根离子是否流出? 7、透析法脱盐的原理 三、酚试剂发测定蛋白质 1、酚试剂测定的原理 2、为什么设计空白对照管? 3、在本实验条件下对蛋白溶液进行比色,选择的波长是多少? 4、本实验蛋白质浓度在什么浓度范围内呈正相关线形关系? 5、比色反应最好在什么时间内比色? 6、制作标准曲线时,有哪些基本要求? 四、血浆脂蛋白蛋白琼脂糖凝胶电泳 1、血脂的组成 2、脂蛋白的组成及分类 3、电泳的一般原理 4、影响带电颗粒泳动速度的因素主要有哪些? 5、电泳图谱出现形状不规则的原因是什么? 6、超速离心法和电泳法分离血浆脂蛋白的主要原理是什么? 7、有A.B.C.D四种不同的蛋白质,pI分别为4.0、5.0、6.0、7.0.,请设计3中实验方法将它们彼此分开。(电泳、凝胶过滤。盐析) 8、采用不损伤蛋白质结构和功能的物理方法分离纯化蛋白质时,常用技术有哪些?(有:非变性电泳、层析、超速离心、盐析)

生化课后题目及答案

2 蛋白质化学 2.测得一种血红蛋白含铁0.426%,计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算含亮氨酸1.65%和异亮氨酸2.48%,问其最低相对分子质量是多少? 解答: (1)血红蛋白: 55.8100100131000.426??=铁的相对原子质量最低相对分子质量==铁的百分含量 (2)酶: 因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等,所以亮氨酸和异亮氨酸的残基数之比为: 1.65%: 2.48%=2:3,因此,该酶分子中至少含有2个亮氨酸,3个异亮氨酸。 ()r 2131.11100159001.65M ??=≈最低 ()r 3131.11100159002.48M ??=≈最低 3.指出下面pH 条件下,各蛋白质在电场中向哪个方向移动,即正极,负极,还是保持原点? (1)胃蛋白酶(pI 1.0),在pH 5.0; (2)血清清蛋白(pI 4.9),在pH 6.0; (3)α-脂蛋白(pI 5.8),在pH 5.0和pH 9.0; 解答:(1)胃蛋白酶pI 1.0<环境pH 5.0,带负电荷,向正极移动; (2)血清清蛋白pI 4.9<环境pH 6.0,带负电荷,向正极移动; (3)α-脂蛋白pI 5.8>环境pH 5.0,带正电荷,向负极移动; α-脂蛋白pI 5.8<环境pH 9.0,带负电荷,向正极移动。 6.由下列信息求八肽的序列。 (1)酸水解得 Ala ,Arg ,Leu ,Met ,Phe ,Thr ,2Val 。 (2)Sanger 试剂处理得DNP -Ala 。 (3)胰蛋白酶处理得Ala ,Arg ,Thr 和 Leu ,Met ,Phe ,2Val 。当以Sanger 试剂处理时分别得到DNP -Ala 和DNP -Val 。 (4)溴化氰处理得 Ala ,Arg ,高丝氨酸内酯,Thr ,2Val ,和 Leu ,Phe ,当用Sanger 试剂处理时,分别得DNP -Ala 和DNP -Leu 。 解答:由(2)推出N 末端为Ala ;由(3)推出Val 位于N 端第四,Arg 为第三,而Thr 为第二;溴化氰裂解,得出N 端第六位是Met ,由于第七位是Leu ,所以Phe 为第八;由(4),第五为Val 。所以八肽为:Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe 。 7.一个α螺旋片段含有180个氨基酸残基,该片段中有多少圈螺旋?计算该α-螺旋片段的轴长。 解答:180/3.6=50圈,50×0.54=27nm ,该片段中含有50圈螺旋,其轴长为27nm 。 8.当一种四肽与FDNB 反应后,用5.7mol/LHCl 水解得到DNP-Val 及其他3种氨基酸;

生物化学实验思考题

生物化学实验思考题

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生物化学实验考试试题

细胞破碎 1 常用的细胞破碎的方法有哪些? 机械法:研磨,高速捣碎机;物理法:反复冻溶,超声波破碎,压榨法;化学与生物化学法:自溶,溶胀法,酶解法,有机溶剂处理。 2 有机溶剂法破碎细胞原理,常用的有机溶剂有哪些? 有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等 3酶法破碎细胞原理:酶分解作用 4反复冻融法破碎细胞原理:通过反复将细胞放在低温下突然冷却和室温下融化达到破壁作用 层析技术 1.什么叫层析技术? 层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别(分子亲和力、吸附力、分子的形状和大小、分配系数等),使各组分以不同程度分布在两个相,其中一个是固定相,另一个是流动相,从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法。 2、按层析过程的机理,层析法分哪几类?按操作形式不同又分哪三类? 根据分离的原理不同分类,层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 3.指出常用层析技术的应用范围。 凝胶层析法:⑴脱盐;⑵用于分离提纯;⑶测定高分子物质的分子量;⑷高分子溶液的浓缩离子交换层析法:主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质,也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子 高效液相层析法:⑴液-固吸附层析;⑵液-液分配层析;⑶离子交换层析 4.SephadexG-100凝胶柱层析分离蛋白质原理是什么? 大小不同的分子经过的路线长短不同而达到分离作用。 5.用SephadexG25脱盐时蛋白质和盐哪个先出峰?蛋白质 6.相对分子量为8万和10万的蛋白质能否在SephadexG-75柱中分开?为什么?不能,分子量差距太小。 7.将分子量分别为a(90000)、b(45000)、c(110 000)的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析,正常情况下,将它们按被洗脱下来的先后排序。c、a、b 8.离子交换层析与凝胶过滤哪种分辨率高?离子交换层析较高。 9.如果样品中只有Ala和His(Ala pI=6.0,His pI=7.6),在pH4条件下,这两种氨基酸那一种与CM(阳离子交换剂)结合的紧密?如果用pH4-7的洗脱液梯度洗脱,那种氨基酸先洗脱出来?Ala 10. 柱层析时湿装柱的注意事项有哪些? 用水灌注、不能有气泡。 11.说说离子交换层析中洗脱液的选择原则

生物化学思考题

《生物化学》思考题 蛋白质 一、名词: 氨基酸及蛋白质等电点;蛋白质一级、二级、三级及四级结构;电泳;蛋白质分子病;别构效应;蛋白质变性作用;肽与肽键;N-端与-端;AA殘基; 二、简答题 1、中性、酸性及碱性氨基酸有哪些? 答:20种氨基酸中的精氨酸、赖氨酸和组氨酸为3种碱性氨基酸;酸性氨基酸为天冬氨酸和谷氨酸2种;其他15种为中性氨基酸。 2、稳定蛋白质空间结构的作用力有哪些? 答:氢键、盐键、疏水作用、范德华引力等是稳定空间结构的作用力;一级结构中的化学键有肽键和二硫键。 3、蛋白质在非等电点时不易形成凝集沉淀的的原理; 答:一是水化层,蛋白质表面带有亲水基团,形成水化层,使蛋白质颗粒相互隔开,不易碰撞成大颗粒;二是蛋白质在非等电时带有同种电荷,使蛋白质之间相互排斥,保持一定距离,不致相互凝集沉淀 4、指出下面pH条件下,各蛋白质在电场中向哪个方向移动,即正极,负极,还是保持原点?(1)胃蛋白酶(pI 1.0),在pH 5.0;(2)血清清蛋白(pI 4.9),在pH 6.0;(3)α-脂蛋白(pI 5.8),在pH 5.0和pH 9.0; 答:(1)胃蛋白酶pI 1.0<环境pH 5.0,带负电荷,向正极移动; (2)血清清蛋白pI 4.9<环境pH 6.0,带负电荷,向正极移动; (3)α-脂蛋白pI 5.8>环境pH 5.0,带正电荷,向负极移动; α-脂蛋白pI 5.8<环境pH 9.0,带负电荷,向正极移动。 三、何谓蛋白质的变性与沉淀?二者在本质上有何区别? 答:蛋白质变性的概念:天然蛋白质受物理或化学因素的影响后,使其失去原有的生物活性,并伴随着物理化学性质的改变,这种作用称为蛋白质的变性。 变性的本质:分子中各种次级键断裂,使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态,一级结构不破坏。 蛋白质变性后的表现:①?生物学活性消失;②?理化性质改变:溶解度下降,黏度增加,紫外吸收增加,侧链反应增强,对酶的作用敏感,易被水解。 蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂,破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷,则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀机理:破坏蛋白质的水化膜,中和表面的净电荷。 蛋白质的沉淀可以分为两类: (1)可逆的沉淀:蛋白质的结构未发生显著的变化,除去引起沉淀的因素,蛋白质仍能溶于原来的溶剂中,并保持天然性质。如盐析或低温下的乙醇(或丙酮)短时间作用蛋白质。 (2)不可逆沉淀:蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质变性而沉淀,不再能溶

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【最新整理,下载后即可编辑】 生物化学 练习一 1、以下哪一种氨基酸不具备不对称碳原子A A、甘氨酸 B、丝氨酸 C、半胱氨酸 D、苏氨酸 2、侧链是环状结构的氨基酸是( B ) A、Lys B、Tyr C、Val D、Ile E、Asp 3、天然蛋白质中不存在的氨基酸是[ B ] A、半胱氧酸 B、瓜氨酸 C、蛋氨酸 D、丝氨酸 3、分离鉴定氨基酸的纸层析属于( D )。 A、亲和层析 B、吸附层析 C、离子交换层析 D、分配层析 4、有一混合蛋白质溶液,各种蛋白质的pI分别为4.6、5.0、5.3、6.7、7.3。电泳时欲使其中4种泳向正极,缓冲液的pH应该是:(D ) A、5.0 B、4.0 C、6.0 D、7.0 E、8.0 5、某蛋白质PI为7.5,在PH=6.0的缓冲液中进行自由界面电泳,其泳动方向为( C ) A、原点不动 B、向正极泳动 C、向负极泳动 6、某一氨基酸混合液含有四种氨基酸,成分如下,在PH=6.0时最容易析出氨基酸的是( B ) A、谷氨酸(PI=3.22) B、丙氨酸(PI=6.0) C、赖氨酸(PI=9.74) D、脯氨酸(PI=6.30)

7、下列( D )侧链基团的pKa 值最接近于生理pH 值。 A 、半胱氨酸 B 、谷氨酸 C 、谷氨酰胺 D 、组氨酸 8、某一种蛋白质在pH5.0时,向阴极移动,则其等电点是 ( A ) A 、>5.0 B 、=5.0 C 、<5.0 D 、不确定 9、甘氨酸的34.2=COOH pK ,60.92 =NH pK ,故它的pI 为C A 、11.94 B 、7.26 C 、5.97 D 、3.63 E 、2.34 10.赖氨酸的pK1为2.18,pK2为8.95,pK3为10.53,其pI 是 [ A ] A. 9.74 B. 8.35 C. 6.34 D. 5.54 E. 5.27 11. 蛋白质的等电点是 [ E ] A. 蛋白质溶液的pH 等于7时溶液的pH B. 蛋白质溶液的pH 等于7.4时溶液的pH C. 蛋白质分子呈负离子状态时溶液的pH D. 蛋白质分子呈正离子状态时溶液的pH E. 蛋白质的正电荷与负电荷相等时溶液的pH 12、有一混合蛋白质溶液,各种蛋白质的pI 分别为4.6、5.0、5.3、 6.7、 7.3。电泳时欲使其中4种泳向正极,缓冲液的pH 应该是: ( D ) A 、5.0 B 、4.0 C 、6.0 D 、7.0 E 、8.0 13、蛋白质多肽链具有的方向性是( D ) A 、从3’端到5’端 B 、从5’端到3’端 C 、从C 端到

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