脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识 脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。 大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。 目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。 1 脂肪组织采集 1.1 脂肪组织采集机构要求 脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。采集过程应在层流手术室内进行无菌操作，最大限度地减少污染和交叉感染的发生。 1.2 脂肪组织供者要求 对供者健康状况进行全面检查(如一般信息、既往病史和家族性遗传病等)及病原微生物的感染筛查和在危险疫区停留情况的调查。身体状态良好、有完整体检报告、无遗传性家族病史、无恶性肿瘤、无急慢性传染病及血液系统疾病；血常规及分类、肝肾功能正常；人源性特定病毒(包括但不仅限于HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV等)阴性、梅毒螺旋体阴性(提供脂肪组织的同时，另需提供不少于8ml外周血用于复检，ABO血型、HLA-Ⅰ类和Ⅱ类分型检查，以备追溯性查询)。若供者HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV检查结果为阳性，实验室应具有处理感染性样本的独立物理空间、独立的空调系统，能做到使用后的器具和相关物品可经过灭活处理后再移出该区域。感染性样本与非感染性样本的处理及制备不使用同一设备，方可进行脂肪组织的采集，但必须使供者知情，同时通知接收、制备、质控及医护人员等做好防护措施。当实验室不具备上述相对应病原体阳性制备/培养区时，不得采集上述阳性供者的脂肪组织。若供者HIV、梅毒螺旋体检查结果为阳性时，不得采集供者的脂肪组织。高度怀疑HIV感染或者考虑HIV感染窗口期的供者不予采集。 1.3 采集方式、采集部位和采集量 1.3.1 采集方式 用肿胀液(生理盐水250ml＋2%利多卡因10~15ml＋肾上腺素0.25mg)局部浸润麻醉供脂肪组织区域，以20ml注射器配备口径1.5~3.5mm、侧孔3.0~5.0mm的吸脂针，进入供区，形成负压，呈扇形手动均匀吸取脂肪组织，吸出3~5mm3脂肪组织颗粒，若脂肪组织颗粒
v-ing 形式作状语 v-ing 形式作状语时，用于修饰某动词或整个句子，所表示的动作与句子主语构成逻辑上的主谓关 系。v-ing形式作状语时，可以单独使用，也可以在其前加上when, while , after, if, unless, although , though 等连词，表示时间、原因、条件、让步、结果、伴随、方式等。 1.作时间状语 Hearing this news, she got frightened. 听到这个消息,她感到害怕。 Looking out of the window, I saw some children playing football. Turning around , he saw a tiger running up. 2.作结果状语 The boy ran even faster, reaching the school out of breath. 那个男孩跑得更快了,到达学校时累得上气不接下气了。 The child slipped and fell, hitting his head against the door. Her husband died, leaving her four children. They fired, killing many people in the street. 3.作伴随状语 He stood by the window, watching people passing by his window. He came running. She stood waiting for a bus. He sat there reading a book. The students ran out of the classroom, talking and laughing. 4.作原因状语 Being a student, I must study hard. 作为一名学生,我必须努力学习。 Seeing nobody at home, he left them a note. Not knowing his telephone number, I couldn 't get in touch with him. 5.作让步状语 Having lived here for four years, I am not familiar with my neighbors. 虽然我在这儿住了四年,我对邻居们都还不熟悉。 Working or reading, she always did her best. 不管是工作还是阅读,她总是竭尽全力。 Not being a rich man himself, he helped the poor generously. 尽管他自己不算富裕, 他却是慷慨的帮助穷人。 6.作条件状语 Heating water, we can change it into vapour. 把水加热,我们可以将其变为水蒸汽。 Working in his small room, he made three pairs of shoes every day. 在他的小房间里工作,每天做三双 鞋。 Using your head, you 'll find a good way. Working hard, you 'll surely succeed. 7. 作目的状语 He stayed up late into the night, attempting to pass the entrance exam. 他晚上睡得很晚,想通过考试。注意： 、V-ing 的时态和语态。
脂肪干细胞治疗E D Prepared on 22 November 2020
EBioMedicine 前列腺癌根治术后勃起功能障碍患者海绵体内注射自体脂肪干细胞的安全 性和潜在功能性研究：一个开放的I期临床试验 Martha Kirstine Haahr a,e,f,1, Charlotte Harken Jensen b,e,1, Navid Mohamadpour Toyserkani c,e,f, Ditte Caroline Andersen b,e,f, Per Damkier b,f, Jens Ahm Srensen c,e,f, Lars Lund a,e,f, Sren Paludan Sheikh b,d,e, 摘要 背景：前列腺癌是男性最常见的癌症，而前列腺癌根治术（RP）通常会导致勃起功能障碍 （ED），严重影响患者术后的生活质量。当前的干预，主要包括PDE-5抑制剂，但治疗效果 乏善可陈。有文献指出，利用脂肪干细胞来治疗ED得到了潜在的满意结果。本研究中我们 使用自体吸脂后新鲜分离的脂肪来源的再生细胞（ADRCs）进行了一个前瞻性的一期的单 臂临床试验。 方法：17名前列腺癌根治术后的ED患者，使用传统疗法，无法得到满意的效果。本研究为 前瞻性的一期的单臂临床试验。所有受试者在入组之前进行5-18个月都经历了前列腺癌根 治术，随访到海绵体内注射6个月后。ADRCs根据其干细胞表面标记物进行分选。主要终 点是细胞治疗的安全性和耐受性，而次要结果是勃起功能的改善。记录任何不良事件，而 勃起功能使用IIEF-5评分。本研究注册账号为：NCT02240823。 研究结果：在为期一个月的评估中，海绵体内注射ADRCs的耐受性良好，只有使用脂肪提 取液引起的不良反应，而在其后的研究随访中均未见效果报道。在研究期间，总体而言， 8人恢复了勃起功能并能完成性交。进行分层分析之后，非尿失禁患者（平均IIEF= 7 （95％ CI 5-12），11人中的8人恢复勃起功能（IIEF6个月= 17（6-23）），（P = ）。相 比之下，失禁患者没有恢复勃起功能（中位IIEF1/3/6 个月= 5（95％CI 5-6）; 平均差1 （95％CI ），P ＞）。 解释：新鲜分离的自体ADRCs海绵体内注射是一种安全的手术。并且具有改善IIEF评分 和勃起功能的作用。具有良好的应用前景 资金：丹麦医学研究理事会，欧登塞大学医院和丹麦癌症协会。 1.介绍 很多基础研究对于干细胞治疗效果的前景进行了报道，并已吸引了 非常广泛的研究瞩目。在临床实践中，然而，这类研究大部分仍停留在 实验室阶段，除了骨髓移植和化疗期间的干细胞治疗。而临床使用干细 胞治疗勃起功能障碍（ED）是一种可行的临床实践方案。
收稿日期：2009-05-22 作者简介：韩铮(1982-)，硕士，E-mail:allenhz520@https://www.doczj.com/doc/47312399.html, 脂肪来源干细胞免疫原性和免疫调节作用的实验研究 韩铮，姜平，高建华，鲁峰，付冰川，陈晓炜（南方医科大学南方医院整形外科，广东广州510515） 摘要：目的探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)在体外的免疫原性，以及ADSCs 在家兔同种异体皮片移植中的免疫调节作用。方法将家兔淋巴细胞分别与自体和异体ADSCs 混合培养48h 后加入CCK-8试剂，并用酶标仪检测OD 值；在家兔同种异体移植皮片下注射自体ADSCs ，观察移植皮片的坏死时间，并于术后第7日切取移植皮片的周边组织进行组织学观察。结果家兔淋巴细胞与自体、异体ADSCs 混合培养后用酶标仪检测OD 值分别为（1.527±0.402）和（1.615±0.351），两组OD 值差异无统计学意义；家兔同种异体移植皮片下注射ADSCs 的移植皮片的坏死时间为（7.170±1.472）d ，未注射ADSCs 的对照组移植皮片的坏死时间为（5.830±1.169）d ，两组皮片坏死时间差异具有统计学意义；术后第7日组织学观察见实验组皮下浸润的炎症细胞较少，皮下组织结构完整、清晰；对照组皮下浸润的炎症细胞较多。结论脂肪来源干细胞在体外的免疫原性低，对家兔同种异体皮片移植有免疫调节作用。关键词：脂肪来源干细胞；免疫原性；免疫调节；组织工程中图分类号：Q813 文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2009)10-2144-03 脂肪来源干细胞(ADSCs)是成体干细胞的一种，自Zuk 等［1］报道以来，以其来源广泛、取材简便的特点和可多向分化的潜能，成为干细胞及组织工程研究领域的热点［2］。近年来有关ADSCs 的研究主要集中于其多向分化潜能［3-6］，而对其免疫学特性仍未展开较深入的研究。本实验以家兔作为动物模型，对家兔 ADSCs 的体外免疫原性及体内的免疫调节作用开展 初步探讨，试为扩充组织工程种子细胞的来源及拓展ADSCs 的应用领域提供实验基础。1材料和方法 1.1实验动物与试剂 健康新西兰大白兔10只，雌雄兼有，体质量 2.0~2.5kg ，由南方医科大学SPF 级动物实验中心提供并饲养。DMEM 高糖培养基，RPMI 1640培养基， 胰酶，FBS （Hyclone ），Ⅰ型胶原酶，CCK-8试剂盒， Percoll 淋巴细胞分离液，PHA （植物凝集素）。1.2方法 1.2.1家兔ADSCs 的分离及体外培养取家兔腹股 沟皮下脂肪5ml ，PBS 缓冲液反复冲洗后剪成约1 mm 3大小的脂肪颗粒，0.1%胶原酶在37℃条件下消化30min 左右。使用等量完全培养基（含10%FBS 的DMEM 高糖培养基）中和，离心（1200r/min ）5min 后 去除上清，沉淀混悬后尼龙网过滤并接种于细胞培养瓶中，于37℃、5%CO 2孵箱培养。于24h 后更换培养液，此后每3d 换液1次。观察细胞生长情况，待 6~7d 细胞生长融合达80%~90%后，0.1%胰酶消化后按1∶3进行传代培养。1.2.2体外实验 1.2.2.1家兔淋巴细胞的刺激增殖实验取家兔耳缘静脉血5ml ，用Percoll 淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法分离出外周血淋巴细胞，计数后与PHA 混 合培养于96孔培养板，具体实验分组如下，实验组：家兔淋巴细胞（1×104/孔）和PHA （100μg/ml ，20μl/孔）混合培养；对照组：单独家兔淋巴细胞培养组（1× 104/孔）。实验组与对照组各培养孔均培养48h 后加入CCK-8试剂（10μl/孔），继续混合培养4h 后用酶 标仪检测培养板上各孔的OD 值。 1.2.2.2家兔ADSCs 体外免疫原性检测实验通过前 述方法分离出家兔淋巴细胞，将其分别与自体 ADSCs 和同种异体ADSCs 混合培养于96孔培养 板，具体实验分组如下，对照组：家兔淋巴细胞（1× 104/孔）和自体家兔的ADSCs （3×103/孔）混合培养；实验组：家兔淋巴细胞（1×104/孔）和同种异体家兔的ADSCs （3×103/孔）混合培养。实验组与对照组各培养孔均培养48h 后加入CCK-8试剂（10μl/孔），继续 混合培养4h 后用酶标仪检测培养板上各孔的OD 值。 1.2.3体内实验家兔10只，随机分成5组（记为A 、B 、C 、D 、E 组），每组2只互为同种异体皮片移植对象。在每只家兔的两侧臀部设计直径为3cm 的圆形 皮片，切取后组内、同侧之间交互移植。实验组（左侧臀部）：皮片移植的同时在皮片下注射含自体ADSCs （1×106/kg ）的完全培养基2ml ；对照组（右侧臀部）：皮片移植的同时在皮片下注射不含自体ADSCs 的完全培养基2ml 。术后每天观察各组家兔臀部移植皮片的存活情况并记录移植皮片的坏死时间（移植皮片红润，质地柔软，视为皮片存活良好；若皮片变为暗褐色且质地坚硬的面积>2/3，视为皮片坏死），于术后第7日将C 组和E 组两组家兔的实验组及对照组移 南方医科大学学报(J South Med Univ)2009;29(10) 2144··
Ving形式作定语 分词短语作定语时，放在被修饰的名词之后；单个分词作定语时，放在被修饰的名词之前。例如： The man standing by the window is our teacher. Many frightened people rushed out of the burning building. Ving作定语主要表示动作和用途。 1. 表示动作（主动的、进行的动作）。 a waiting car = the car that is waiting a sleeping child 熟睡的孩子 The girl standing there is my sister. 站在那儿的女孩是我的姐妹。 [注意]现在分词作定语时，它表示的动作是正在进行或与谓语动词所表示的动作几乎同时发生，如果两个动作有先有后，一般不能用现在分词作定语，而要用定语从句。例如：The teacher criticized the student who had broken the window. 老师批评了打破窗户的学生。 2. 表示用途： the waiting room = the room for waiting 候车室 a working method 工作方法 He has a reading room. 他有一个书房。 【比较】 过去分词作定语： 及物动词的过去分词表示被动，不及物动词的过去分词表示动作完成。 例如： That is the book written by Lu Xun. 那是鲁迅写的书。 He is a returned student. 他是一个归国的留学生。
?专科小词典? 脂肪干细胞 脂肪干细胞（ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣｓ）是一种从脂肪组织中分离提取出的能够贴壁生长、具有可塑性、黏附性和多向分化潜能的中胚层来源的成体干细胞。 ２００１年，Ｚｕｋ等通过脂肪抽吸术，在吸出的人体脂肪悬液中第一次分离得到了多向分化的干细胞。传代后培养的ＡＤＳＣｓ，多角细胞逐渐减少，传代至第三代时基本消失，大多为梭形细胞，胞浆核仁十分丰富，与骨髓间充质细胞基本没有区别，多次传代后细胞生长速度也无减慢趋势，显示出ＡＤＳＣｓ具有易获得、易扩增、不易衰老的明显优势。ＡＤＳＣｓ表面的免疫标识会随传代的次数而发生改变，其中ＣＤ１６６、ＣＤ１０６、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ６３、ＣＤ４４、Ｃ２９在最初表达量较低，随传代次数的增加而显著增加；与干细胞相关的表面标志ＣＤ３４一直持续较高的表达水平。ＡＤＳＣｓ一般不表达ＣＤ６２、ＣＤ５６等。ＡＤＳＣｓ可以分化为源于中胚层的多种细胞类型，包括骨骼肌、心肌、软骨、脂肪、成骨等，向心肌细胞分化能力是最低的。此外还可以分化为源于外胚层的神经细胞和源于内胚层的胰腺细胞。ＡＤＳＣｓ还可能有助于血管和造血细胞的生成。 由于脂肪组织在人体大量存在，取材容易，少量组织即可获取大量干细胞，能够在体外稳定增殖且衰亡率低，适宜大规模培养，对被采集者身体健康影响小，加上真空负压抽脂术已是成熟的整形技术。因此ＡＤＳＣｓ显示出了其他干细胞所不能及的应用前景。 （广州医科大学附属第一医院骨科严广斌整理）?８５３?中华关节外科杂志（电子版）２０１６年６月第１０卷第３期 ＣｈｉｎＪＪｏｉｎｔＳｕｒｇ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ｊｕｎｅ２０１６，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．３
?综 述? 人脂肪组织来源的干细胞在骨组织工程中的应用 冯 林综述 张锡庆审校 中图分类号 R687 文献标识码 A 文章编号 1005-8478(2005)08-0620-02 作者单位:苏州大学附属儿童医院骨科, 215003 作者简介:冯林,女,河南郑州人,在读博士。研究方向:小儿矫形。 1987年,美国国家科学基金会(NSF )在加利福尼亚举行的专家讨论会上,首次提出了“组织工程”的概念,其定义为[1]:组织工程就是运用工程学和生命科学的原则和方法,研究哺乳类动物正常和病理组织的结构与功能的相互关系,并发展可恢复、保留或改善组织功能的生物替代品。骨组织工程是组织工程的一个重要分支,并且被认为是目前最具有前途和可行性的一个领域。骨组织工程学的研究中种子细胞、支架材料和细胞与材料的相互作用是研究重点。其中种子细胞是组织工程研究中最基本也是首要的环节。 脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一群多能干细胞,具有向多种组织分化的潜能。2001年,Zuk 等[2]从人抽脂术中抽取的脂肪组织悬液中第一次分离取得了多向分化干细胞,命名为Pr ocessed L i poas p irate (P LA )。研究发现这些P LA 细胞可以在体外稳定的增殖且衰亡率低。免疫荧光和流式细胞仪检测表明P LA 细胞中的大部分来源于中胚层或间质。因为脂肪组织取材容易,因此虽然发现较晚,但研究非常迅速深入,目前已证实脂肪组织来源的干细胞能向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞及心肌细胞定向转化,可作为组织工程的种子细胞,有很重要的研究价值。 1 人脂肪组织来源干细胞的多向分化能力1.1 向成骨细胞的定向分化 Zuk 等 [2] 通过实验发现:在向成骨方向诱导4d 后,P LA 细胞的结构开始发生变化,由一个狭长的类成纤维细胞形态转变为一种圆形、立体的形状。7d 后,这些细胞开始分泌出岛状的细胞外基质。2周后内源性碱性磷酸酶染色阳性并形成矿化结节。从第2～4周,培养孔中钙化的细胞外基质的量明显增加,具有统计学意义。而且,P LA 细胞向成骨细胞分化的能力可以维持相当长的时间,其表达碱性磷酸酶活性最迟可达培养的175d 。研究证明了P LA 细胞向成骨细胞分化的能力。 1.2 向软骨方向诱导 Huang 、Zuk [3] 等应用组织学和分子生物学的方法证实在 高密度的培养条件下,培养基中加入TGF 2 β、胰岛素、干扰素和抗坏血酸,48h 内可以诱导P LA 细胞形成明显的软骨结节并表达软骨特异性标记Ⅱ型胶原,硫酸软骨素-4和硫酸角质素。逆转录多聚酶链反应分析也确认了Ⅱ型胶原和软骨 特异性蛋白聚糖—聚集蛋白聚糖的表达。因此认为这种多能干细胞确实具有向软骨方向转化的能力。尽管P LA 细胞不是真正的软骨细胞,但是它们所显示出来的原始软骨组织的特征使得其有望成为软骨组织工程的种子细胞。国内的余方圆等[4]从新西兰大白兔体内切取的脂肪组织进行一系列处理后,将获得的脂肪组织干细胞向软骨方向进行了诱导分化,结果发现细胞逐渐变圆,并聚集形成软骨样结节,Ⅱ型胶原呈强阳性、聚集蛋白聚糖表达阳性、番红0、阿利新蓝染色阳性,也说明了干细胞向软骨的定向分化。 1.3 向肌肉方向诱导 M izuno 等 [5] 将P LA 细胞置于肌源性诱导条件下6周后通 过结构学、组织学和逆转录多聚酶链反映观察到肌源性标记 MyoD1和肌球蛋白重链的表达。研究者发现,诱导3周后,P LA 细胞形成多核巨细胞并提示有肌管形成。另外;MyoD1 和肌球蛋白重链表达的时间不同,在P LA 细胞分化的过程中 MyoD1的表达先于肌球蛋白重链。研究结果揭示:大约有15%的P LA 细胞在诱导6周后向肌肉方向分化。目前,骨骼 肌组织工程主要用来治疗原发性的骨骼肌病变和因创伤和缺血继发的骨骼肌的丧失。对于这些疾病现今尚无有效的治疗,尽管P LA 细胞向肌肉方向分化与其向脂肪组织和成骨方向分化的水平相比较低,但通过应用一些外源性的因素进行干扰以及改善培养条件有希望提高P LA 的分化水平,提高其临床应用价值。 1.4 向非中胚层组织的分化 P LA 细胞为多能干细胞,它可以分化成为多种中胚层来 源的组织,如骨、软骨、脂肪和肌肉。A shjian 等[6]则通过研究发现P LA 细胞可以诱导分化为外胚层来源的早期神经祖细胞。未分化的P LA 细胞本身就表达一些特征性的神经细胞标记,如神经原特异性烯醇化酶(NSE )、波形蛋白和神经原特异性核蛋白(Neu N )。在用异丁基甲基黄嘌呤(I B MX )吲哚美辛和胰岛素诱导2周后,大约20%～25%的P LA 分化形成具有典型神经细胞形态特征的细胞;同时伴随着NSE 、波形蛋白和神经生长因子受体tr12A 表达增加。但是,诱导后的 P LA 细胞并没有表达成熟神经原标记MAP 或成熟星型细胞标 记GF AP 。而且向神经原方向诱导的P LA 细胞出现了一个延迟的整流器即K +电流(一种早期发育的离子通道),同时伴有形态学的改变和神经原特异性标记表达的增加。研究结果揭示,尽管向神经原方向诱导的P LA 细胞并未表现出成熟神经原细胞和神经胶质的特异性标记,但其表现出的早期神经
动词-ing形式作表语定语，宾补及状语的用法 一、动词-ing形式作表语 1.表示主语的内容,可以转换到句首作主语 Her job is keeping the lecture hall as clean as possible. (= keeping the lecture hall as clean as possible is her job) 她的工作是尽量使报告厅保持干净。 2.表示主语具有的特征、性质和状态(动词ing相当一个形容词） The problem is quite puzzling. 这个问题很令困惑。 3.常用来作表语的现在分词有astonishing, amusing, confusing, disappointing, boring, encouraging, inspiring, moving, tiring, interesting, surprising等。 全析提示：动词-ing形式作表语时，其逻辑主语往往是句子中的主语，但用作表语的-ing形式也可带有自己的逻辑主语。 What worries me most is her staying too late every night. (staying too late every night的逻辑主语是her) 二、动词-ing形式作定语 1单个的动词-ing形式可以作前置定语，一般具有两种含义。 ①说明被修饰名词的用途和性能。 a reading room = a room which is used for reading 阅览室 running shoes =shoes for running 跑鞋 a working method =a method for working 工作方法 ②表示所修饰的人或物的动作或状态，在意思上接近一个定语从句，可以表示正在进行的动作，也可表示经常性动作或当时的状态。 developing countries = countries that are developing 发展中国家 an ordinary-looking house = a house that looks ordinary 看起来很普通的房子 a puzzling problem = a problem that puzzles somebody 困扰人的问题 2作定语的动词-ing形式如是一个短语，则应放在被修饰词的后面,做后置定语，相当于一个定语从句。 They lived in a house facing south.(=which is facing south) 他们住在一所朝南的房子里。 Do you know the boy playing basket?（=Who is playing basket) 你认识在打篮球的那个小男孩吗？ The man visiting Japan (=the man who is visiting Japan ) is my uncle 正在访问日本的那个男人是我的叔叔。 三、动词-ing形式作宾补 1、动词-ing形式作宾语补足语常放在宾语后 面，表示一个正在进行的主动性的动作，强调一个过程或一种状态。 When we returned, we found a stranger standing in front of the house. 2、当主句转换为被动结构时,原来作宾语补足语 的动词-ing形式便转换为主语补足语。
A D S C s的分离与纯化关于ADSCs的获取方法很多，但不管哪种方法所得到的并非单一的脂肪干细胞，是一组具有干细胞特性的细胞群。目前应用最广泛的分离方法是酶胶原消化法。首先将无菌条件下切取的脂肪组织块剪成细小的颗粒，PBS液冲洗干净后，用0．1％的胶原酶在37℃下振荡消化4O～90min，再用含10％胎牛血清的等体积DMEM培养基终止。1200r ／min离心5～10min，弃上清液及悬浮的脂肪组织，重悬细胞后经过细胞筛过滤，所得细胞按2—4×105／cm接种于50ml培养瓶内。37℃条件5％的CO饱和湿度培养箱内培养，2d后首次换液，以后3d换液一次，至细胞达70％～8O％融合时用0．25％胰酶消化，并传代。经过提取获得的以脂肪干细胞为主的细胞群接种后数小时即开始贴壁生长，24h内完成贴壁。细胞的形状与成纤维细胞相似，体积较小，核浆比较大，随后细胞体积渐增大，克隆形成。经传代后，细胞的形态及排列才趋于一致。由于目前尚未发现脂肪干细胞表面存在特异性的分子标记物，因此无法利用分子表型来分离纯化。然而可通过纯化脂肪组织块来间接达到纯化脂肪干细胞的目的。流式细胞仪检测显示：传至第3代时，可达95％以上的细胞纯度。 ADSCs的生物学特性 1.ADSCs的鉴定
在ADSCs鉴定上，现阶段尚无特异性鉴定方法。用免疫荧光法和流式细胞术检测结果均显示ADSCs表达特异性分子CD44，OCT一4，E—eadherin，流式细胞术检测细胞周期显示绝大多数细胞是处于静止期的干细胞，传代后生长迅速，随机挑选来源标本，对细胞进行染色体核型分析显示ADSCs具有遗传稳定性。 ADSCs分泌多种生长因子 在生理功能方面，脂肪干细胞能分泌相当数量的细胞因子，包括肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PGF)、转化生长因子一B(TGF—B)、成纤维细胞生长因子(FGF一2)等，低表达的因子有Ang一2C。 2.ADSCs的多向分化能力 与骨髓间充质干细胞相比，脂肪干细胞具有储量丰富、取材容易、扩增迅速、不宜衰老、排斥反应低等优点。在特定培养基和特异的诱导剂作用下可分化为特定的体细胞，在组织修复、细胞移植、基因治疗等领域有着潜在价值。 向脂肪细胞分化：在特定培养基中加入一定浓度地塞米松、胰岛素、吲哚美辛及1一甲基一3～异丁基一黄嘌呤，3周后发现ADSCs向脂肪细胞分化，可检测出ADSCs表达许多脂肪细胞的特异性标记：脂蛋白脂肪酶、脂肪酸结合蛋白aP2、PPAR—r2、leptin(瘦素)、Glut4(葡
中国组织工程研究与临床康复第14卷第36期 2010–09–03出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research September 3, 2010 Vol.14, No.36 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 6685 1Department of Plastic Surgery, Sichuan Academy of Medical Sciences, Sichuan Provincial People’s Hospital, Chengdu 610072, Sichuan Province, China; 2Seventh Department of Plastic Surgery, Plastic Surgery Hospital, Peking Union Medical College, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100144, China Cai Zhen☆, Doctor, Attending physician, Department of Plastic Surgery, Sichuan Academy of Medical Sciences, Sichuan Provincial People’s Hospital, Chengdu 610072, Sichuan Province, China caizhen1976@126. com Correspondence to: Jiang Hai-yue, Professor, Doctoral supervisor, Seventh Department of Plastic Surgery, Plastic Surgery Hospital, Peking Union Medical College, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100144, China jianghaiyue@sohu. com Received:2010-05-28 Accepted:2010-06-24 脂肪来源干细胞的生物学特性及细胞表型☆ 蔡震1，潘博2，林琳2，蒋海越2，庄洪兴2 Biological characteristics and phenotypes of adipose tissue-derived stem cells Cai Zhen1, Pan Bo2, Lin Lin2, Jiang Hai-yue2, Zhuang Hong-xing2 Abstract BACKGROUND: Adipose-derived stem cells (ADSCs) are capable of multi-directional differentiation and exist in human processed lipoaspirate. However, no in-depth studies have addressed biological characteristics of adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) in vitro, and there are some disputes on the results from phenotype studies. OBJECTIVE: To investigate biological characteristics and phenotypes of human ADSCs. METHODS: Human adipose tissue was collected from persons undergoing fat extraction. The ADSCs were digested with collagenase, cultured and subcultured in vitro. Cell morphology was observed and growth curves were drawn. The phenotypes of ADSCs were identified by immunohistochemistry and flow cytometry. RESULTS AND CONCLUSION: ADSCs grew well, presented fibroblast-like growth. No significant change in cell morphology was detected within passage 15. The results from immunohistochemistry showed that cells were positive for CD29, CD44, CD105, but negative for CD34, CD45. Flow cytometry results have shown that cells were positive for CD29, CD44, CD105, MHC-Ⅰ, but negative for CD3, CD14, CD19, CD31, CD33, CD34, CD45, CD106, CD117, CD184. Results have suggested that ADSCs can be abundantly harvested and have stable proliferation in poorly differentiated status in vitro. Stem cell-related antigens were highly expressed in ADSCs. Cai Z, Pan B, Lin L, Jiang HY, Zhuang HX. Biological characteristics and phenotypes of adipose tissue-derived stem cells. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2010;14(36): 6685-6688. [https://www.doczj.com/doc/47312399.html, https://www.doczj.com/doc/47312399.html,] 摘要 背景：研究证实脂肪组织提取物中存在脂肪来源的干细胞，并表现出多向分化的潜能，但是关于其体外的生物学特性研究不够深入，其细胞表型的研究结果存在一定争议。 目的：观察脂肪来源的干细胞的生物学特性与细胞免疫表型。 方法：取吸脂手术中废弃的人脂肪组织，胶原酶消化法获得脂肪来源的干细胞，体外传代培养，并进行细胞形态学观察，细胞生长曲线测定，免疫组织化学及流式细胞仪检测其细胞表型。 结果与结论：脂肪来源的干细胞生长旺盛，呈成纤维细胞样生长，15代以内细胞形态未见明显变化；免疫组织化学染色显示，细胞表面标记CD29，CD44，CD105表达阳性，CD34，CD45表达阴性；流式细胞仪检测显示，CD29，CD44，CD105，MHC-Ⅰ为阳性，CD3，CD14，CD19，CD31，CD33，CD34，CD45，CD106，CD117，CD184为阴性。结果说明脂肪来源的干细胞体外生长能力旺盛，高表达干细胞相关抗原，可长期传代且保持低分化状态。 关键词：表型；脂肪来源的干细胞；流式细胞仪；生物学特性；干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.36.008 蔡震，潘博，林琳，蒋海越，庄洪兴.脂肪来源干细胞的生物学特性及细胞表型[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(36):6685-6688. [https://www.doczj.com/doc/47312399.html, https://www.doczj.com/doc/47312399.html,] 0 引言 间充质干细胞是一群存在于身体各个组织内较原始的细胞，具有自我更新及多向分化潜能[1]，基于这些能力，间充质干细胞在其临床应用上有很大的潜力。自2001年Zuk证实了经吸脂术获得的脂肪组织中存在具有多向分化潜能的细胞群后[2]，脂肪来源的干细胞(adipose tissue-derived stem cells, ADSCs)的概念得以明确，ADSCs因为其取材容易也被广泛研究。有研究表明ADSCs在体外培养中能迅速增长，累积细胞倍增数在第13代时仍无明显的下降趋势；更为重要的是细胞传至第10代时，仅有5%的细胞进入了细胞衰老期。因此ADSCs可以作为组织工程的种子细胞，成为具有广阔治疗应用前景。关于ADSCs的细胞表型研究，目前的研究结果没有得到统一的认定。本课题通过对ADSCs进行体外培养及对其体外生长的生物学性状及其细胞免疫表型做初步研究，为以后深入进行细胞组织工程的应用研究奠定了实验室基础。 1 材料和方法 设计：细胞体外培养与鉴定。 时间及地点：于2008-01/2008-06在中国医学科学院整形外科医院中心实验室完成。 材料： 实验标本：来自中国医学科学院整形外科医
V-ing作定语和状语 Ⅰ. V-ing 作定语 单个的V-ing作定语，常放在被修饰的名词前面作前置定语；V-ing短语作定语，则放在被修饰名词的后面，作后置定语。 1．V-ing作定语，说明被修饰词的性质、特征或用途。 He may be in the reading room . (read) 他可能在阅览室里。 They set up an _______________ table. (operate) 他们搭起一个手术台。 2．V-ing 作定语，表示其与被修饰词之间为主动关系，并且表示动作正在进行。 There are about 200 students studying in this school. 大约有200个学生在这个学校学习。 Who is the woman_________________our English teacher?( talk) 正在和我们英语老师谈话的那个女人是谁？ 3．有些V-ing已经转化成了形容词，常用作定语修饰物，表示“令人……”：exciting, shocking, puzzling, confusing, disappointing, discouraging, boring, tiring, moving, touching, interesting, satisfying, frightening, amazing等。 ①That must be a ______________experience. (terrify) 那肯定是一次可怕的经历。 ②The experiment was____________________________. (amaze) 那实验是一个惊人的成功。 Ⅱ. V-ing作状语 V-ing （短语）可以在句子中作状语来修饰谓语动词或整个句子，表示动作发生的时间、原因、条件、结果、方式、让步或伴随状况。现在分词一般不用作表目的的状语（通常用不定式表目的状语）。V-ing作状语，其逻辑主语必须与句子的主语________，且分词必须和句中的主语是逻辑上的__________关系。 1. 作时间状语 _________________________, he jumped with joy.(hear) 当听到这个好消息时，他高兴地跳了起来。 2. 作结果状语 The boy ran even faster，reaching the school out of breath. 那个男孩跑得更快了，到达学校时累得上气不接下气了。 The song is sung all over the country, ________________________ song.( make) 全国到处在传唱这首歌曲，使它成了一首最受欢迎的歌曲。 3. 作伴随状语与谓语所表示的动作同时发生。 He stood by the window, watching people passing by his window.他站在窗前，望着来来往往的人们。_____________________, they went into the room .( talk) 他们有说有笑地走进房间。 4. 作原因状语 Being a student, I must study hard. 作为一名学生，我必须努力学习。___________________, he didn?t go to school.(be) 由于生病，他没有上学。 注意：表示原因的V-ing 形式一般位于句首，相当于一个原因状语从句。其否定式直接在句首加not . ______________________her address, , we couldn?t get in touch with her. ( know) 由于不知道她地址，我们无法和她联系。 5. 作让步状语 Being young，the little boy knows a lot about computer.尽管这个小男孩很小，但是他懂得很多电脑知识。 _________________ here for four years, I am not familiar with my neighbors. （live） 虽然我在这儿住了四年，我对邻居们都还不熟悉。 6. 作条件状语 Heating water, we can change it into vapor. 把水加热，我们可以将其变为水蒸汽。 _____________ahead, you will see a white house.( walk) 一直往前走，你就会看到一座白色的房子。 7. 作方式状语 ____________________, we visited many places. (travel) 我们乘车游览了许多地方。 注意： 1.当v-ing所表示的动作发生在谓语动词之前时，应使用__________式：_________________ ①After he finished his homework, he rushed out to play basketball. =___________________his homework, he rushed out to play basketball.他完成作业后冲出去打篮球。 ②After he closed the windows, he went out of the classroom. =____________________the windows, he went out of the classroom. 关上窗户后,他走出教室。 2.当v-ing与句子的主语之间存在着逻辑上的动宾关系时，应该使用________式：_________. The tall building ___________________ now is our new school.( build) 正在被修建的那栋大楼是我们的新学校。 3. V-ing作状语时，它的逻辑主语必须与句子的主语_______________。 ①Rushing into the dining-room, I found super was waiting for. （） ②Rushing into the dining-room, supper was waiting for me. （） Ⅲ. 连词+ V-ing V-ing作状语时，相当于省略的状语从句。由when / while / after / before / if /though / unless/as if等引导的状语从句的主语与主句的主语一致时,如果从句的谓语动词是主动语态,则可以省略从句的主语,而保留原连词,形成"连词+现在分词"的结构形式。 1.Though they lacked(缺少)money, his parents managed to send him to university. =______________________ money, his parents managed to send him to university. 2.When I was walking in the street, I came across an old friend of mine. =_____________________________, I came across an old friend of mine. 3.Unless I was invited, I wouldn?t go to the party. =_____________________, I wouldn?t go to the party. 4.As I am a student, I must study hard. = _________________a student, I must study hard.