肿瘤医学
血管内皮细胞生长因子与恶性肿瘤侵袭转移关系的研究进展
雷正文
△※
(综述),
冯耀光,莫 靓(审校)
(南华大学附属第一医院心胸血管外科,湖南衡阳421001)
中图分类号:R736.4 文献标识码:A 文章编号:1006-2084(2012)10-1472-04
基金项目:湖南省衡阳市科技项目(2009KJ 38)
摘要:恶性肿瘤是导致人类发病和死亡的主要原因之一。恶性肿瘤的病因至今尚未完全明确,但是国内外众多的研究证实其与血管内皮细胞生长因子(VEGFs)家族有关,VEGFs 是从牛垂体滤泡星形细胞体外培养液中纯化出来的。在受到恶性肿瘤侵袭和转移的组织中,通过免疫组织化学方法可以检测到这些因子的表达,为恶性肿瘤的筛选、预测和诊疗提供了新的思路。
关键词:血管内皮细胞生长因子;恶性肿瘤;侵袭;转移
Research Advances of Vasc ular Endo thelial G ro wth Facto rs in M alignant Tumor Invasion and Me-tast asis LE I Zheng-w en,FENG Yao-guang,MO Liang.(Department of Cardiac-thoracic Vascular Surger y,the Firs t Affiliated Hospital of Univers ity of South China,Hengyang 421001,China)
Abst rac t:Cancer is a ma jor cause of mankind m orbidity and mortality.Although the etiology of cancer has not yet been fully clear ,a lot of studies in China and abroad confir med the cor relations between cancers a nd va scular endothelial g rowth factors(VE GFs)which is pur ified from bov ine pituita ry follicular stellate cells in vitro liquid.The family members ca n be detected in the malignant tumor s invasion and metastasis tissues by immunohistochemistry,which pr ovides a new way of thinking for selection,prediction and treatment of ma-lig nancies.
Key words :Vascular endothelial gr owth fa ctors;M alignancy;Inva sion;M etastasis
恶性肿瘤的基本特征是浸润和转移。临床上淋巴转移是常见的浸润和转移途径,即肿瘤细胞通过淋巴管转移至瘤内或瘤旁,最终导致局部和远处淋巴结转移。发病率仅次于心脑血管疾病,全球每年
约有700万人死于恶性肿瘤。最近的研究[1]
认为恶性肿瘤与血管内皮细胞生长因子(va scula r endotheli-al grow th fa ctors,VEGFs)家族有关,其家族成员包括VEGF-A 、VEGF-B 、VEGF-C 和VEGF-D 等。其中以VEGF-C 及VEGF-D 的高表达最为常见[2]
。VEG F-C 及VEGF-D 的高表达有诱导肿瘤淋巴管生成的作用,从而促进肿瘤的淋巴转移。然而,VEGFs 在恶性肿瘤中表达的具体机制还在进一步的探索中。最近
的资料[3]
显示,在晚期恶性肿瘤组织中,尤其是受到肿瘤侵袭和转移的组织中,检测到了这些因子的表达,且明显高于没有受到侵袭转移的组织,提示这些因子有增加恶性肿瘤侵袭转移的可能性。1 VEGFs 家族结构及生物学功能
随着近年来许多学者对VEGFs 家族的研究,其家族成员不断被发现。VEGFs 家族对恶性肿瘤的侵袭转移研究起到了极大的推动作用。VEGFs 是1989
年由Fer rara 等[1]
从垂体滤泡星形细胞体外培养液中首先纯化出来的,并发现其具有促血管内皮细胞有丝分裂的活性;VEG Fs 家族由VEG F-A 、VEGF-B 、
VEGF-C 、VEG F-D 和胎盘生长因子(placental grow th fac-tor,PLGF)组成。VEG Fs 家族是一个高度糖基化的碱性蛋白,属于含有六种不同糖蛋白的生长因子家族:VEG F-A(即VE G F)、VE G F-B 、VEGF-C 、VEGF-D 、VEGF-E 及PLGF [4]
。
VEGFs 在血管生成中扮演着至关重要的作用:
①VEGF 通过与VEGF 受体结合来调节血管的生成;
②VEGF 调节病理性血管生成;③具有血管和淋巴血管生成的功能。除此之外,VEG F 还具有其他一系列生物学上的功能,包括对器官血管的形成、软骨成骨的形成、组织再生、新生物的形成等都起到了重要的
作用[5]
。VEGFs 在血管和淋巴管的生成方面具有重要的作用,那么其家族成员在肿瘤的侵袭转移方面扮演着怎样的作用呢?2 VEGF 家族成员与肿瘤
2.1 VEGF-A 在肿瘤中的作用 VEGF-A 受到多种因素的调控,通过相关诱导因子的诱导,如诱导肿瘤血管的生成,从而发挥其在肿瘤中的作用。Ho 等
[4]
证实VEG F-A 的活性和表达受到缺氧、原癌基因、肿瘤抑制失调等机制的调控。Leli èvre 等[6]
研究表明,在机体处于缺氧状态时,VEGFs 、VEGF 受体(vascular endothelia l grow th factor receptor,VEGFR)-1和其他基因共同激活来调控血管生成、细胞增殖、细胞生存、细胞凋亡和细胞活动。Weidena ar 等[7]
证实,在VEGF-A165过度表达时,肿瘤的重量增加2倍,同时增加了血管的生成和增强了肿瘤细胞的增殖。VEGF-A 的过度表达有调控肿瘤血管生成的作用。2.2 VEGF-B 在肿瘤中的作用 VEG F-B 在肿瘤的作用与其他家族成员不同,可能具有抑制肿瘤生长
的作用。VEGF-B 是Olofsson 等[8]
1996年分离和鉴定出来的一个新的内皮细胞生长因子,其结构与
VEGFs类似。Zhang等[9]证实,VEGF-B是VEG Fs的同源因子,与生存率密切相关;VEG F-B的生存效应
不仅反映在血管内皮细胞,而且还表现在平滑肌细胞和血管干/祖细胞中;VEGF-B的抑制作用可能为新生血管疾病提供新的治疗机会。Albrecht等[10]证实,异位表达的VEGF-B在胰岛素的启动下减少了肿瘤的生长,而缺乏VEGF-B的小鼠出现了较大的肿瘤。目前,对VEGF-B的研究倾向于关注其在抑制肿瘤生长以及肿瘤治疗后生成率方面,其是否具有促进肿瘤的生长以及侵袭转移的作用目前还不是很清楚。
2.3 VEG F-C与肿瘤浸润转移的关系VEGF-C在恶性肿瘤中的作用主要表现在生成肿瘤血管和淋巴管方面。J oukov等[11]在人前列腺癌细胞PC-3的cD NA 文库中克隆并分离出VEGF-C,该基因位于人类染色体4q34上,编码产物为419个氨基酸残基的蛋白。Lohela等[12]认为VEGF-C是典型的淋巴管生成因子,它促进淋巴系统的发展以及在成人中通过激活VEGFR-3来刺激淋巴血管的生成。
Feng等[13]介导自分泌循环的VEGF-C与它们的同源受体和趋化因子受体是影响肿瘤进展的重要因子,以及RN A干扰介导的VEGF-C沉默代表了控制非小细胞肺癌(non-sm all cell lung ca ncer,NS CLC)生长和转移的一个有力的治疗方法。Zhang等[14] VEGF-C的高表达和淋巴内皮细胞的淋巴管生成作用的增加在肿瘤诱导淋巴管生成中起到至关重要的作用,这可能有助于肺腺癌淋巴管浸润。Chen等[15]对92例N
2
期N SCLC组织和30例良性肺组织检测VEGF-C的表达,证实VEGF-C的表达在N2期肺癌中显著增高,与术后早期复发有密切的关系,时常伴
有纵隔淋巴结、脑和肺转移。VEG F-C在NS CLC N
2期患者中可能是预测术后早期复发的一个预测因素,提示VEG F-C促进肿瘤的生长、血管和淋巴管生成及侵袭转移。
2.4 VEGF-D与肿瘤浸润转移的关系相对于VEGF-C来讲,VEGF-D在肿瘤中的作用主要表现在对肿瘤淋巴管的生成作用,即促进肿瘤淋巴管的生成和淋巴转移。Koch等[16]外源性VEGF-D在肿瘤患者中有刺激淋巴管生成的作用;内源性VEGF-D 在胚胎、产后、成人生理和某种病理条件下淋巴管的生成作用是不可或缺的,但是显著有助于淋巴转移。K opfstein等[17]VEG F-D不仅具有诱导肿瘤淋巴管的生成和淋巴结的转移作用,而且促进其转移到肺和促进白细胞聚集到肿瘤周边。M ing等[18]在对100例NS CLC进行分析后证实,在肺癌中,白细胞介素7 (interleukin7,IL-7)和I L-7受体通过c-Fos/c-J un通路诱导VEG F-D的上调和促进淋巴管的形成。Cong 等[19]研究表明,VEGF-D的高表达与肺腺癌的淋巴管生成和淋巴结转移密切相关,而与血管生成无关。Kopfstein等[17]证实,淋巴管VEGF-D的表达与淋巴管和区域淋巴结转移的上调相关。Zha ng等[20]证实,VEGF-D的低表达和脱氧葡萄糖高摄取组合,可能是肺腺癌患者淋巴结转移和术后复发的一个生物指标。但VEG F-D的表达在恶性肿瘤的早期筛查阶段和预后判断方面还值得进一步研究。
2.5 VEGF-C、VEGF-D在肿瘤中的共同表达及意义
两者在肿瘤中的共同表达一直是研究人员关注的重点,众多的研究证实了两者在人类许多肿瘤中存在表达,表现在促进肿瘤血管和淋巴管的生成,促进肿瘤的侵袭转移;尤其体现在对预后的评估作用。J ia ng等[21]证实,VEG F-C和VEG F-D可能通过诱导淋巴管生成来促进食管鳞状细胞癌的淋巴转移。So-phia等[22]证实在乳腺癌中,诱导淋巴管生成的是VEGFR-3,并通过VEGF-C和VEGF-D来启动。J iang 等[23]认为,VEG F-C和VEGF-D参与肿瘤淋巴管和血管的生成,促进胆囊癌的淋巴结转移;在评估淋巴结转移潜能和预后中具有重要的意义。Feng等[24]实验证实,VEG F-C、VEGF-D在侵犯边缘的表达与NS CLC患者的淋巴结转移或者淋巴侵犯有密切的关系;在N S CLC中,VEG F-C、VEG F-D可能参与淋巴管生成和淋巴结转移。Bo等[25]证实,VEG F-C和VE GF-D 在肺腺癌淋巴管生成和淋巴结转移方面发挥着重要的作用。K o等[26]发现,VEGF-C、VEG F-D和它们的共同表达与NS CLC晚期的区域淋巴结转移密切相关。虽然两者在肿瘤中的共同作用提示了与预后等有关,但是VEGF-C、VEGF-D在肿瘤中的共同表达对临床分期、预后的评估是否较VEGF-C或VEGF-D单独表达意义更大呢?能否通过某一种检测方式将其作为肿瘤患者早期诊断和判断其预后的依据,并对患者早期进行对症支持治疗来改善预后呢?值得进一步研究。
2.6 VEGF受体与恶性肿瘤的关系受体是细胞膜或细胞内的一类特异性化学分子,受体与相应的配基(如激素)有高度的亲和力,并同它发生特异性结合。其具有的特性是:①特异性。受体只存在于某些特殊的细胞中。②亲和性。受体与其相应的配体具有高度的亲和性。③饱和性。④有效性。受体与配体结合后一定要引起某种效应。当然VEGFR也不例外,在恶性肿瘤中的作用尤以VEGFR-3明显。Ka ipa inen等[27]证实,VEG FR-3是第一个被发现的淋巴内皮细胞标志物。Aprelikova等[28]认为,VEG FR-3是细胞表面酪氨酸激酶受体,由人类白血病细胞系
和人胎盘克隆而来,其配体VEG F-C和VEGF-D是淋巴内皮细胞重要的生长因子,VEGFR-3的基因位于5q35.3,相对分子质量接近18×104。D um ont等[29]研究发现,在机体处于肿瘤病理条件下,肿瘤血管内皮细胞也可表达VEGFR-3,其重新激活血管内皮细胞并伴VEGF-C、VEGF-D的高表达。
W ery ska等[30]证实,VEG F-C、VE G F-D和VE G F R-3的活性增加了肿瘤细胞的活动和侵袭,促进肺癌等进展。在NS CLC中,VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3之间存在正相关。VEGF-C、VEGF-D作为最主要的VEGF,与VEGFR-3结合而形成信号传递途径,提示VEGFR-3在肿瘤淋巴管生成及淋巴结转移中起作用,促进肿瘤的侵袭转移。
在NS CLC中,VEG Fs及VEG FRs与N SCLC患者的预后有着密切的关系。Ca rrillo等[31]研究的结果证实,目前VEGFs和VEGFRs的高表达体现在对N SCLC预后的评估方面。Donnem等[32]发现不同家族的血管生成因子在肿瘤的不同阶段刺激血管的生成,在NS CLC中VEG Fs和VEG FRs对预后的影响在某种程度上取决于肿瘤的大小。由此可以看出, VEGFs及VEG FRs在评估NS CLC患者的预后方面具有重要的作用,那么能否寻找到一个重要的治疗靶点来阻断VEG Fs和VEGFRs的信号转导,来阻断肿瘤淋巴管的生成和淋巴结转移从而提高患者的生存率,值得进一步研究。
3 展望
VEGFs的家族成员都涉及恶性肿瘤的淋巴管的生成、肿瘤浸润和肿瘤转移等。VEGFs在恶性肿瘤患者的肿瘤病灶、癌旁正常组织和淋巴结组织中是否存在共同表达,还有待进一步研究。寻找一个有用的预测因子,将早期的、具有潜在转移可能的患者筛选出来,尽早地予以抗肿瘤治疗是目前肿瘤研究的热点,也是提高肿瘤患者远期生存率的一个关键因素;同时研究这些因子在恶性肿瘤浸润和转移的机制不仅对恶性肿瘤的临床分期有帮助,而且对判断预后及选择治疗措施方面具有重要意义。希望通过对这些因子在恶性肿瘤中的共同表达的研究为日后恶性肿瘤的治疗方面选择新的治疗靶点,以及为将来此类患者术前术后血清学的检测指出方向。
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收稿日期:2011-12-16 修回日期:2012-02-20 编辑:潘雪
氟尿植入剂治疗恶性肿瘤的研究进展
马晓聪
1△
(综述),
李 弘2,颜丽萍
2※
(审校)
(1.桂林医学院,广西桂林541001; 2.桂林市第二人民医院消化内科,广西桂林541001)中图分类号:R541.4 文献标识码:A 文章编号:1006-2084(2012)10-1475-03
基金项目:桂林市科学研究与技术开发项目(20110119-5)
摘要:氟尿植入剂是一种新型的植入用缓释制剂,主要有效成分为氟尿。该药是国家食
品药品监督管理局批准的第一个抗肿瘤控释植入剂,对肿瘤具有特异性杀伤作用。治疗药物限制在肿瘤部位发挥作用,提高局部药物浓度而不影响正常细胞,从而提高疗效,延长有效药物浓度时间,降低全身不良反应,实现靶向治疗肿瘤。现就氟尿
植入剂治疗肿瘤的原理及研究进展予以综述。
关键词:氟尿
缓释剂;靶向治疗;恶性肿瘤
Research Pro gres s of Fluoro uracil Implants Therapy for Malignant Tumors MA Xiao-cong 1,L I H ong 2,YAN Li-ping 2.(1.Guilin Medical C ollege,Guilin 541001,China;2.Department of Gastroenterology,the Second People ′s H ospital of Guilin,Guilin 541001,China)
Abst rac t:The fluorouracil implants is a new type of sustained-r elease impla nt prepa ration,the ma in ef-fective component of which is fluorouracil.The drug is the fir st State Food and Drug Administr ation approved contr olled-release antitumor implants,with specific killing effect to tumor s.The dr ug is limited to function in tumor,w hich im prov es the local drug concentration and sha ll not affect the nor mal cells,so a s to impr ove the cura tiv e effect,extend effectiv e dr ug concentra tion time,r educe the whole body side with,and realize the tar-geted cancer therapy.Her e is to make a review on the principle and r esearch progr ess of fluor our acil implants tumor therapy.
Key words :Fluor our acil sustained-release agent;Targeted therapy;Ma lig nant tumor
近年来通过对缓释制剂的研究,发展了缓释给药系统。通过将缓释型抗肿瘤药物植入/注入实体肿瘤内,使肿瘤组织长时间与高浓度的抗肿瘤药物接触,避免全身化疗的不便。同时,局部给药且新型高分子材料药物制剂对肿瘤组织具有高亲和性,使全身正常细胞药物负荷少,全身血药浓度低,从而在提高抗癌药物的局部浓度及对癌细胞的选择性,减少全身不良反应。植入缓释氟尿(商品名:中人氟安)是长效缓释抗肿瘤制剂,其运用实现了疗效强、不良反应小的目标。
1 氟尿植入剂治疗肿
瘤的原理
缓释给药的理论基础来源于物理药剂学中药物的基质扩散原理和生物药剂学中对剂型释放吸收的研究成果。新型高分子材料为缓释型药物的诞生提供了物质基础。靶向给药系统是指药物
载体通过局部或全身血液循
环使药物选择性地浓集定位于靶组织、靶器官、靶细胞或
细胞内结构并在该靶部位发挥治疗作用的给药系统,靶向制剂可以提高药物的溶出度和稳定性,增加药物对靶细胞的指向性,降低对正常细胞的毒性,使药物具有药理活性的专一性,减少剂量,提高药物制
剂的生物利用度,适于临床运用[1]
。近年来,提高抗癌药物的局部浓度及对癌细胞的选择性减少了全身
的不良反应[2]
。
2 氟尿植入剂药动学
氟尿缓释剂是将氟尿用辅料制成微囊,再将微囊与另一部分氟尿药物用辅料制成植入剂颗粒,其释放方式是应用高分子骨架及膜层技术来控释氟尿,植入体内后,体液逐层渗入药
在进行新生物制品产品开发时，首先要做的一项工作是建立理化对照品及活性标准品。理化对照品主要用于产品肽图、等电点、相对分子质量、纯度等理化性质的检测；活性参考品主要用于产品生物学活性的检测［1］。进行理化对照品质量标准及质量方法的研究既便于检测和跟踪产品质量的一致性和稳定性，也是产品进一步走向临床和市场的必然要求，《中国药典》三部（2015版）也对其提出了明确规定［2-3］。 重组人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抑制剂是有VEGF阻断作用的重组蛋白，由2种不同的人VEGF受体VEGFR1和VEGFR2的细胞外区域，融合到人免疫球蛋白IgG1的Fc部分组成，是一种二聚体糖蛋白，其蛋白质相对 重组人血管内皮生长因子抑制剂理化对照品 质控方法及质量标准的建立 毕华，陶磊，韩春梅，秦玺，范文红，杨靖清，丁有学，饶春明 中国食品药品检定研究院重组药物室，北京100050 摘要：目的建立重组人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）抑制剂理化对照品质控方法及质量标准。方法利用HEK293细胞增殖抑制法测定重组人VEGF抑制剂理化对照品生物学活性；紫外分光光度法测定蛋白含量；质谱法进行相对分子质量测定、液质肽图及糖基化位点分析、二硫键分析、N-寡糖糖型及比例分析； SDS-PAGE及SEC-HPLC法分析纯度；等点聚焦法进行电荷异质性分析；Edman降解法进行N-末端氨基酸序列分析。结果重组人VEGF抑制剂理化对照品各项检定指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部（2015版）相关要求。结论建立的质控方法和质量标准符合理化对照品的相关规定，具有保证该理化对照品结构正确、质量可控的特点。检定合格的理化对照品可用于该类产品的常规检定。 关键词：血管内皮生长因子抑制剂；理化对照品；质量控制 中图分类号：R979.1+9R392-33文献标识码：A文章编号：1004-5503（2017）08-0833-05 Establishment of methods and standard for quality control of physicochemical reference substance for recombinant human vascular endothelial growth factor inhibitor BI Hua,TAO Lei,HAN Chun-mei,QIN Xi,FAN Wen-hong,YANG Jing-qing,DING You-xue,RAO Chun-ming National Institutes for Food and Drug Control,Beijing100050,China Corresponding author:RAO Chun-ming,E-mail:raocm@https://www.doczj.com/doc/3f15900581.html,； DING You-xue,E-mail:dingyouxue@https://www.doczj.com/doc/3f15900581.html, Abstract：Objective To establish the methods and standard for quality control of the physicochemical reference sub-stance for recombinant human vascular endothelial growth factor inhibitor（rhVEGF inhibitor）.Methods The biological activity of reference substance for rhVEGF inhibitor was determined by HEK293cell proliferation inhibition test,while the protein content by ultraviolet（UV）spectrophotometry.The relative molecular mass,liquid peptide map,glycosylation site, disulfide bond,type and proportion of N-oligosaccharide of the reference substance were analyzed by mass spectrometry, while the purity by SDS-PAGE and SEC-HPLC,the charge heterogeneity by isoelectric focusing,and the N-terminal amino acid sequence by Edman degradation method.Results All the indexes of rhVEGF inhibitor met the requirements in Guideline for Quality Control of Recombinant DNA Products for Human Use and Chinese Pharmacopoeia（Volume III, 2015edition）.Conclusion The established methods and standard met the requirements for the relevant physical and chemical reference substances,which may assure that the structure of the reference substance is correct and the quality is controllable.The qualified reference substance may be used for the routine quality control of products of the same kind. Key words：Vascular endothelial growth factor（VEGF）inhibitor;Physicochemical reference substance;Quality control ·治疗性制剂· 通讯作者：饶春明，E-mail：raocm@https://www.doczj.com/doc/3f15900581.html,； 丁有学，E-mail：dingyouxue@https://www.doczj.com/doc/3f15900581.html, DOI:10.13200/https://www.doczj.com/doc/3f15900581.html,ki.cjb.001845
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
本文极具参考价值，如若有用请打赏支持我们！不胜感激！ 血管内皮生长因子(专业知识值得参考借鉴) 一概述血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF），又称血管通透因子（vascularpermeabilityfactor，VPF）是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。血管内皮生长因子有5种不同的亚型，根据氨基酸的数目命名为：VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189、VEGF206，其中VEGF165为VEGF主要存在形式。 二家族及受体1.家族 血管内皮生长因子是一个家族，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子（PGF）。通常VEGF即VEGF-A。VEGF-A可促进新生血管形成和使血管通透性增加，VEGF-B在非新生血管形成的肿瘤中起作用，VEGF-C和VEGF-D在癌组织的新生血管和新生淋巴管的形成过程中起作用，VEGF-E也是一种潜在的新生血管形成因子，PGF促进新生血管形成，使血管通透性增加，在实验性脉络膜新生血管中PGF的表达明显增高。 2.受体 与血管内皮生长因子进行特异性结合的高亲和力受体称为血管内皮生长因子受体（vascularendothelialgrowthfactorreceptor，VEGFR），主要分为3类VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。VEGFR-1和VEGFR-2主要分布在肿瘤血管内皮表面，调节肿瘤血管的生成；VEGFR-3主要分布在淋巴内皮表面，调节肿瘤淋巴管的生成。 三生物学功能1.促进内皮细胞增生VEGF是一种血管内皮细胞的特异性有丝分裂原，在体外可促进血管内皮细胞的生长，在体内可诱导血管增生。尤其是在低氧环境下，VEGF与内皮细胞膜上VEGF 受体结合，引起受体的自身磷酸化，从而激活有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK），实现VEGF的有丝分裂原特性，诱导内皮细胞增生。 2.促进血管增生在低氧环境下，VEGF通过提高血浆酶原活化因子（PA）和血浆酶原活化因子抑制因子-l（PAI-1）的mRNA表达，来提高血浆酶原活化因子的活性，促进细胞外蛋白水解，进而促进新生毛细血管的形成。 3.增加血管通透性VEGF是最强的可增加血管通透性的物质之一，是通过细胞小囊泡器来实现的。其特点是作用迅速、持续时间短。
双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF的浓度 VEGF简介： VEGF属于PDGF因子家族，是A、B、C、D四种亚类的一类因子的总称，它们在血管发生过程中起重要作用。其中在血管再生和内皮细胞的再生过程中，VEGF-A扮演重要的角色。现已发现VEGF-A有许多种因切割后氨基酸数不同的亚型，其中含有的肝磷脂接合区域，能与胞外基质内的肝磷脂结合，以VEGF165量最多。VEGF-A可由多种细胞分泌的分子量为45kDa的糖蛋白。 VEGF的功能主要表现在伤口的愈合和女性生殖周期循环上。在病理组织中，VEGF能提升血管通透性。这就是肿瘤的转移和肿瘤复发的基础。在胚胎期，VEGF的作用表现为调控胚胎细胞的增殖、转移和提高内皮细胞的存活力上，通过成骨细胞和成软骨细胞的蓦集作用提升骨形成的效率。VEGF-A的功能还表现在一些如血管再生和血管通透相关联的生理过程中。肿瘤释放的细胞因子和生长因子能刺激骨髓中的巨核细胞分裂为血小板，这样就间接增加了VEGF-A 向肿瘤的迁移。 骨组织、心肌、肝实质、成骨细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、角化细胞、棕色脂肪组织、CD34+干细胞、内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞等细胞和组织均可表达 VEGF。 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF 的浓度。VEGF 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的VEGF 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人VEGF 抗体后，抗人VEGF 抗体与VEGF 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在VEGF 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，VEGF 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中VEGF 浓度。 实验过程需自备的材料： 1.不同规格的加样枪及相应的枪头； 2.酶标仪； 3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水； 注意事项: 1.试剂盒请保存在2～8℃。 2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。 3.若标准品复溶后，请在三天内用完。 4.底物请勿接触氧化剂和金属。 5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。 6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。 7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。 8.室温反应，请严格控制在25～28℃。 9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。 10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。 11.加样过程中避免气泡的产生。 12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。 标本收集: 1.标本的收集请按下列流程进行操作： A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可； B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液； C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；
乳腺癌患者血清血管内皮生长因子的检测和 意义 【摘要】目的探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌诊疗中的意义。方法采用ELISA方法检测33例初治乳腺癌、36例复发乳腺癌、35例定期随访者及30例正常人血清VEGF浓度。结果复治组的血清VEGF水平明显高于初治组、随访组及对照组(P均<0.01)。结论血清VEGF的检测对乳腺癌的疾病进展及预后估计有一定的临床意义。 【关键词】乳腺肿瘤;血清血管内皮生长因子 目前研究表明，血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤的形成和生长以及转移中有极为重要的作用，多数实体瘤均过度表达VEGF，且常伴有血清VEGF的增高。笔者通过对104例乳腺癌患者血清浓度的检测，探讨血清VEGF在乳腺癌诊断、预后估计和病情监测的意义。 1 资料与方法 1.1 一般资料 2005年10月～2007年3月在我院化疗科治疗的乳腺癌患者69例，其中乳腺癌术后巩固化疗患者33例(初治组)，复发转移乳腺癌36例(复治组)。后期乳腺癌术后0.5～3年定期复查
者35例(随访组)。初治组年龄28～59岁，复治组年龄32～67岁，随访组31～60岁，所有患者均经过病理学确诊，其中单纯癌22例，浸润性导管癌50例，髓样癌7例，乳头状癌16例，浸润性小叶癌9例。正常对照组30例，为门诊健康体检者，年龄20～57岁。
1.2 检测方法清晨空腹抽取静脉血3ml，1500r/min，离心15min，分离血清，置于-20℃冰箱保存。血清VEGF定量试剂由晶美生物工程(北京)有限公司提供，用ELISA方法按试剂盒测试步骤进行，VEGF水平范围6 2.5～250ng/L。 1.3 统计学方法计量数据用(±s)表示，两组间均数比较采用t检验。 2 结果 各组血清VEGF检测结果，见表1。复治组血清VEGF明显高于初治组、随访组及对照组，差异均有高度显著性(P<0.01)。表1 各组血清VEGF的检测结果 3 讨论 研究表明[1,2]，新的血管生成是肿瘤生长、转移和转移灶生长的必要条件，而VEGF是调节新的血管生成的最重要的细胞因子。VEGF通过促进肿瘤新生血管形成来促进肿瘤的生长，另一方面通过促进血管的渗透性来加速肿瘤细胞进出血管，因而加速肿瘤的转移。到目前为止，在乳腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、前腺癌等多种肿瘤组织中均检测到VEGF的表达。由于VEGF具有血管通透性，肿瘤细胞合成的VEGF进入血循环，测定血清VEGF对判断肿瘤的预后的意义[3，4]，
人血管内皮细胞生长因子A（VEGF-A）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中VEGF-A含量。 实验原理 用纯化的VEGF-A抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的VEGF-A抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的VEGF-A呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制 1、酶标板：一块（96孔） 2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2,000pg/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成2,000pg/ml，1,000pg/ml，500 pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。如配制1,000pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）2,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3、样品稀释液：1×20ml。 4、检测稀释液A：1×10ml。 5、检测稀释液B：1×10ml。 6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
血管内皮生长因子在肝癌中的作用 [关键词] 血管内皮生长因子;肝癌;血管生成;文献综述 肝细胞肝癌(HCC)属于多血管性实体瘤,实体瘤若没有血管生成提供足够的血供,其直径不会超过2 mm,肿瘤不能持续生长并发生坏死。因此,血管生成在肿瘤的发生发展中起至关重要的作用,肿瘤的血管生成由多种血管生长因子调控,其中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与其受体(vascular endothelial growth factor receptors,VEGFR)在肿瘤血管生成中起最重要的作用。作者就肝癌中VEGF与VEGFR的研究进展进行简要综述。 1 VEGF结构和作用 VEGF是1989年由Ferrara发现的,是最重要的血管生成调节因子。VEGF家族属于血小板源性生长因子(PDGF)/VEGF超家族成员,有同源二聚体结构,在单体肽链上含有8个半胱氨酸残基。VEGF家族至少包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、胎盘生长因子(PIGF)以及T.f. svVEGF等7个成员,其中T.f. svVEGF是最近在蛇毒中发现的[1]。 人VEGF基因位于染色体6P21.3,全长28 kb,由8个外显子和7个内含子组成,其cDNA基因长14 kb,编码相对分子质量为34~45 000的同源二聚体糖蛋白。亚基之间通过二硫键相连,如果二硫键断裂,则丧失所有生物学活性。VEGF基因经过转录水平的剪切可产生5种不同的转录子,人类至少有5种VEGF,分别由121、145、165、259和206个氨基酸组成。其中VEGF206含有全部8个外显子序列,VEGF189和VEGF165分别缺失部分或全部第6外显子,VEGF121缺失第6、7外显子,VEGF145则保留了第1、8外显子,VEGF165的表达有某种优势。VEGF 的N端含有26个疏水性氨基酸组成的信号肽,主要由基因结构中的第1外显子编码。除VEGF121和VEGF145外,其余的VEGF均部分或全部与细胞表面含肝素的蛋白聚糖结合。VEGF165是发挥生物学效应的主要成分,通过与VEGFR结合而发挥生物学作用。 VEGF是一种高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,其生理学上主要功能有:(1)选择性增强血管内皮细胞有丝分裂,刺激内皮细胞增殖并促进血管形成;(2)增强血管尤其是微小血管的渗透性,使血浆蛋白等大分子外渗沉积在血管外的基质中,为新生毛细血管网的建立提供营养。VEGF对肿瘤的影响机制可能有[2]:(1)促进肿瘤血管形成,这与VEGF能增加血管通透性、促进血管内皮细胞增殖、促进血管支持物生长有关。VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-1、VEGFR-2等均参与此机制。(2)促进肿瘤淋巴管生长,参与此功能的主要为VEGF-C、VEGF-D及受体VEGFR-3,与肿瘤生长和淋巴管转移密切相关。 (3)对肿瘤细胞的细胞动力影响。目前VEGF对肿瘤细胞增殖的影响还存在着争论,但对抑制肿瘤细胞凋亡的作用已获得一定的共识,VEGF可诱导抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,直接抑制肿瘤细胞的凋亡。(4)增强肿瘤细胞对放疗的耐受性及影响免疫功能。VEGF降低癌细胞对放射线的敏感性,可能与血管的形成相关。而对