?７７８?肿瘤防治研究２００８年第３５卷第１１期
莪术油对鼻咽癌ＣＮＥ一２细胞的凋亡及放疗
增敏机制的影响
吴冬梅，杨荣宁．
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５３００２１。ＣｌＩｌｉｎａ
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Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅＺｅｄｏａｒｙｏｉｌ，Ｚｅｄｏａｒｙｏｉｌｊｏｉｎｔｙ－ｒａｙｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｏｎｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎ—
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ｆｅｃｔｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｃｙｃｌｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＮＰＣ；ＣＮＥ－２；Ｚｅｄｏａｒｙｏｉｌ；ｙ－ｒａｙ；Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
摘要：目的探讨莪术油、莪术油联合‘ｙ．射线照射对鼻咽低分化鳞癌细胞株ＣＮＥ－２的增殖抑制和诱
导凋亡作用；分析莪术油是否具有放疗增敏的作用，并研究其机制。方法体外培养ＣＮＥ－２细胞，莪术
油以体外直接加药的方式作用于ＣＮＥ－２细胞，采用ＭＴＴ、流式细胞术、电镜等分子生物学手段，检测莪
术油单用或联合ｒ射线对ＣＮＥ－２的诱导凋亡作用、放疗增敏作用。结果莪术油单独使用，对ＣＮＥ－２
细胞有确切的增殖抑制及诱导凋亡作用，并与常规化疗药物５－Ｆｕ有相近的抑制作用（Ｐ＞０．０５）。莪术
油的药物抑制作用呈现浓度依赖性，最低起效浓度为１０＃ｇ／ｍｌ，最佳作用时间为４８小时；５＃ｇ／ｍｌ、１００
｝ｔｇ／ｍｌ、３００ｐｇ／ｍｌ的莪术油联合１００ｅＧｙ的ｒ射线作用２天后凋亡率由０．５％、２．１５％、１０．２％显著提高
到８。６％、１４％和２６％，细胞的死亡率均在５％以下有明显的协同增效作用（Ｐ＜０．０１）｝联合作用９６ｈ后
试验组的细胞主要以死亡为主，凋亡较少；５００肛ｇ／ｍｌ的莪术油主要导致细胞死亡，有明显的细胞毒性。
流式细胞仪结果显示较高浓度时，莪术油使ＣＮＥ－２细胞阻滞在Ｇ１期。电子显微镜观察细胞凋亡的超微
收稿日期：２００８－０６—１６；修回日期：２００８－０９－０１
基金项目：广西科学基金（回国基金）资助项目（厅５９号）
作者单位：５３００２１南宁，广西医科大学附属肿瘤医院头颈外科
通倍作者：杨荣宁
作者简介：吴冬梅（１９８３－），女，硕士在读。主要从事头颈部肿瘤的研究结构可以看到凋亡小体。结论莪术油可以抑制鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２的增殖并诱导其凋亡；莪术油和１００ｅＧｙ的ｒ射线联合作用有明显的增敏作用；其作用机制与诱导肿瘤细胞发生凋亡及影响细胞生长周期有关。
关键词：鼻咽癌；ＣＮＥ－２；莪术油；ｙ－射
肿瘤防治研究２００８年第３５卷第１１期?７７９?
线；放疗增敏
中图分类号：Ｒ７３９．６３文献标识码：Ａ
文章编号：１０００－８５７８（２００８）１１－０７７８－０５
０引言
鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）是指生长在鼻咽部位的恶性肿瘤，系人类高发的头颈部恶性肿瘤之一，９５％以上为低分化鳞癌和未分化癌ｆ－１。，具有高转移和高复发性。ＮＰＣ病因尚未明确，可能与吸烟、ＥＢ病毒感染、进食腌制食品、居住环境受污染有关。
近年来在ＮＰＣ诊断和治疗方面，大量的基础和临床研究已经取得了一定的成果，但其预后仍然不理想，高转移和高复发性使该病的放射治疗存在着较高的治疗失败率Ｌ２?］，为此，肿瘤的放化疗联合治疗及基因靶向治疗等已成为本学科的研究方向Ｌ４５Ｉ。
目前，临床用于鼻咽癌诱导化疗的药物主要以５一Ｆｕ和铂类为主，其毒副作用较大；寻找可以起到减毒增效的药物成为临床治疗亟待解决的问题。我国传统医学采用天然药物治疗肿瘤有丰富的临床经验，中草药药性温和，毒副作用相对较少，不但可以与化疗药物同时应用，还可以联合放疗综合应用，起到放射增敏的作用。对于一些体质差，不能耐受大剂量放化疗的中晚期鼻咽癌患者，可以提高其生存质量、延长生存期。
莪术油为莪术根茎所含的挥发油，近年国内外通过药理学研究发现它是一个药理活性强、高效、安全的药物Ｌ６］，具有广谱的抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗凝血和抗氧化的活性［７］，其中抗肿瘤是莪术油最主要的药理作用。这一点已经在肝癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌中得到证实，但在鼻咽癌领域未见报道。
１材料与方法
１。１材料
ＣＮＥ－２细胞株（由中山大学附属肿瘤医院提供）；莪术油注射液（黑龙江瑞格制药有限公司生产）；ＲＰＭｌｌ６４０培养基、胰蛋白酶（ＧｉｂｃｏｌＢＲＬ公司）；新生牛血清（四季青）；其余主要试剂均为美国Ｓｉｇｍａ公司产品。凯基Ａｎｎｅｘｉｎ－ＦＩＴＣ细胞凋亡检测试剂盒（南京凯基）。
１．２主要仪器和设备
Ｃ０２培养箱、全自动酶标仪、流式细胞仪、透射电镜。
１．３实验方法
１．３．１实验分组本试验设置空白对照组、５－Ｆｕ对照组、实验组（稀释备用的各浓度莪术油）。１．３．２细胞培养将处于对数生长期，生长状态良好的ＣＮＥ－２细胞于３７℃消化，制成单细胞悬液；常规传代，在３７℃、５％Ｃ０２的恒温培养箱中培养过夜，第二天观察细胞形态并更换培养液。
１．３．３ｒ射线照射６‘’Ｃｏ机照射，加ｏ．５ｃｍ标准填充物，距皮源８０ｃｍ，根据试验需要照射剂量不同，照射后置培养箱内培养。
１．３．４ＭＴＴ法测定莪术油对ＣＮＥ－２细胞的增殖抑制取对数生长期细胞以１×１０４／ｍｌ的浓度接种于６块不同的９６孔细胞培养板中，每孔１００Ｖ．１，留调零孔，并防止边缘效应。常规孵育，２４ｈ细胞单层铺满孔底（９６孔平底板），换液；设置空白对照组、５一Ｆｕ对照组和实验组，每组设６个复孔，继续置于恒温箱分别培养１－－－６天；每天取一个９６孔板，在相应孔中加入２０弘ｌＭＴＴ，继续培养４ｈ后终止培养，吸出上清，每孔加相同批次的ＤＭＳＯ１００肚ｌ，置摇床上低速振荡；用全自动酶标仪在波长４９２ｎｍ处比色，测定各孔ＯＤ值，取平均数值，按照以下公式计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率＝（对照组吸光度值一试验组吸光度值）／（对照组吸光度值一空白组吸光度值）×１００％。
１．３．５流式细胞术分析细胞周期常规收集、处理细胞后，过滤细胞悬液，除去粘连的细胞群，低速离心５ｍｉｎ；去上清，每管加人ＰＩ染液１ｍｌ，４℃，避光３０ｍｉｎ，置流式细胞仪检测、收集数据，用ＭｕｌｔｉＣｙ—ｃｌｅ分析软件进行细胞周期分析。
１．３．６流式细胞术分析细胞凋亡率、死亡率常规收集各组作用４８小时后的ＣＮＥ＿２细胞，严格按照凯基ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ细胞凋亡检测试剂盒说明操作，处理后的细胞用ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ流式细胞仪进行检测。用相应软件分析建立ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ伽ＰＩ双参数点图。
１．３．７透射电镜检测收集莪术油半数抑制浓度ｊｃ５。和对照组培养液作用４８小时后的ＣＮＥ－２细胞，按常规方法固定、脱水、包埋、修块、制片后，醋酸铅铀染色，透射电镜观察。
１．４统计学方法
所有试验结果取３次的平均值，应用ＳＰＳＳｌ３．０统计学软件进行方差分析、析因分析，ＰｄＯ．０５或ＰｄＯ．０１为差异有统计学意义。
２结果
２．１Ｍ１ｖｒ法检测莪术油对ＣＮＥ－２细胞的增殖抑制情况
莪术油在较低浓度时（５ｐｇ／ｍ１），对体外鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２生长有促进作用，且其促进生长作用与
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各浓度和对照组之间差异有统计学意义（Ｐ＝０．０００）；在较高浓度时对鼻咽癌细胞生长有抑制作用，并随浓度的增高，抑制作用增强；与对照组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；检测６天范围之内以４８ｈ的抑制率均数最高（４８．７８％）；且各个实验组随时间的延伸抑制率变化无明显规律；６天内两两比较差异均无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见图１；各实验组的莪术油与相应浓度的５－Ｆｕ对ＣＮＥ－２细胞的增殖抑制差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。在此仅分析作用４８ｈ的曲线，见图２。
图１不同浓度的莪术油对ＣＮＥ－２细胞
增殖抑制的曲线
ＦｉｇｌＤｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｚｅｄｔｍｒｙ
ｏｉｌｏｎＣＮＥｒ２
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅ
图２莪术油与５一Ｆｌｌ对ＣＮＥ－２细胞
作用４８ｈ时的增殖抑制
Ｆｉｇ２ｚｅｄ晚ｒｙｏｉｌ，５－Ｆｕｉｎ４８ｈｗｈｅｎｔｈｅＣＮＥ－２
ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃｏｍｐａｒｅｄｈｉｓｔ０霉韧吡
２．２莪术油诱导ＣＮＥ－２细胞４８小时后的凋亡率、死亡率
莪术油对ＣＮＥ－２细胞的生长抑制有明显的浓度依赖性，以作用４８ｈ为最大的药物抑制时间，５弘ｇ／ｍｌ、１０／ｌｇ／ｍｌ组对细胞的生长抑制与对照组比较差异无统计学意义，３００ｔ＿ｔｇ／ｍｌ组作用４８ｈ后出现明显抑制作用并诱导细胞凋亡（Ｐ＜０．０１），５００ｐｇ／ｍｌ组以上细胞死亡率大于凋亡率，具有明显的细胞毒性，见表１。
２．３莪术油和。ｙ＿射线联合后ＣＮＥ－２细胞的凋亡率、死亡率
２．３．１５ｐｇ／ｍｌ、１００肛ｇ／ｍｌ、３００弘ｇ／ｍｌ的莪术油分别联合５０ｃＧｙ的ｒ射线作用１、２、４天后，无明显的放疗增效作用。
２．３．２５／ｔｇ／ｍｌ、１００／．ｔｇ／ｍｌ、３００／ｔｇ／ｍｌ的莪术油
表１莪术油诱导ＣＮＥ－２细胞４８ｈ后的凋亡率、死亡率Ｔａｂ１Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ。ｍｏｒｔａＩｉｔｙｒａｔｅｏｆ
Ｚｅｄｏａｒｙｏｉｌ－ｉｎｄｕｃｅｄＣＮＥ－２ｃｅｌｌｓｉｎ４８ｈｏｕｒｓ
分别联合１００ｃＧｙ的ｒ射线作用１天对细胞无明显作用，２天后联合作用组的凋亡率由０．５％、２．１５％、１０．２％显著提高到８．６％、１４％和２６％，见图３。细胞的死亡率均在５％以下，联合作用４天后细胞主要以死亡为主而凋亡较少。
图３莪术油、１００ｃＧｙ的中射线、莪术油＋１００ｃＧｙ的
ｔ射线对ＣＮＥ－２细胞的诱导凋亡比较
Ｆｉｇ３Ｚｅｄｏａｒｙｏｉｌ，１００ｃＧｙＴ－ｒａＹ，ｚｅｄｏａｒｙｏｉｌ＋１００
ｅＧｙｐ哪７ｏｎｔｈｅＣＮＥ－２ｃｅｌｌｓ
ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｏｍｐａｒｅｄｈｉｓｔｏｇｒａｍ２．３．３５ｐｇ／ｍｌ、１００／ｚｇ／ｍｌ、３００／１９／ｍｌ的莪术油分别联合２００ｃＧｙ的ｒ射线作用１、２、４天后，对肿瘤的抑制作用主要表现为死亡，细胞的凋亡率明显下降。２．４流式细胞仪分析细胞周期的结果
观察莪术油、莪术油＋１００ｃＧｙ的ｒ射线对ＣＮＥ－２细胞分别作用２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ三个时间点的细胞周期变化情况，均发现细胞阻滞在Ｇ．期，而Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期细胞比例均有下降；尤其以作用４８ｈ时，细胞大量堆积阻滞在Ｇ，期，Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期细胞比例均明显下降，在此仅详述４８ｈ结果，见表２。
表２药物作用４８ｈ对ＣＮＥ－２细胞周期的影响
Ｔａｂ２ＴｈｅＣＮＥ－２ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｃｈａｎｇｅｄｆｒｏｍＺｅｄｏａｒｙｏｉｌｉｎ４８ｈＣｅｌｌｃｙｃｌｅＧ１（％）Ｓ（％）（五％
Ｂｌａｎｋｇｒｏｕｐ３５．５±０．７４４．６±１．５１９．９±０．９恐嚣。‰，６９．４＋０．９１８．６＋０．５１２．０＋０．６Ｔｅｓｔｇｒｏｕｐ
（ｚｅｄｏａｒｙｏｉｌ３００弘ｇ／ｍｌ７３．８±０．９１８．７±０．５７．５土０．６
＋１００ｃＧｙＴ－ｒａｙ）
ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｂｌａｎｋｇｒｏｕｐＰ＜０．０５。ｔｅｓｔｇｒｏｕｐａｎｄｂｌａｎｋｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ
３
肿瘤防治研究２００８年第３５卷第１１期?７８１?
图４莪术油对照组ＣＮＥ－２细胞株电镜下的细胞形态
（ＴＥＭｘ３８００）图５莪术油＋?ｒ射线对ＣＮＥ－２细胞电镜下的细胞形态
（ＴＥＭｘ４８００）
２．５透射电镜的检测结果
对照组可见细胞核大，核膜完整，核浆比例失调，核仁较清楚，胞质中细胞器较完整，细胞表面有微绒毛，可见明显的细胞分裂现象。实验组可见细胞微绒毛减少，细胞核固缩，染色质致密、边集，可以见到大量凋亡小体形成，见图４～６。
３讨论
在莪术油抗肿瘤的研究中，有实验证实睁１１］：莪术油有显著的抗肿瘤作用，这种作用的机制在一定程度上是诱导细胞凋亡；也有报道指出莪术油有直接细胞毒作用，可致肿瘤细胞变性坏死；我们通过构建ＮＰＣ体外模型，通过Ａｎｎｅｘｉｎ与ＰＩ双染及细胞周期［１２］的研究，初步探讨莪术油对鼻咽低分化鳞癌ＣＮＥ－２细胞的抑制作用，也得到上述结论。莪术油抗ＣＮＥ－２细胞呈现浓度依赖性，在３００肛ｇ／ｍｌ作用４８ｈ后出现明显抑制作用并诱导细胞凋亡（Ｐ＜０．０１），５００ｐｇ／ｍｌ以上细胞死亡率大于凋亡率，具有明显的细胞毒性；各浓度和相应浓度的５－Ｆｕ组对ＣＮＥ－２细胞的抑制作用差异无统计学意义（Ｐ＞０．０Ｇ）；并且，各实验组随时间的延伸抑制率变化无明显规律，以作用４８ｈ抑制率最高，说明莪术油对ＣＮＥ－２的抗癌作用，其剂量依赖性较时间依赖性在实际应用中更有参考价值，这一点与盛、赵、谭、吴、赵等Ｅｌ｝１７］的在肺癌、胃癌、肝癌、人子宫内膜癌中的报道一致。沈洪等［１８］在研究中发现，莪术是通过抑制ＣＯＸ一２及其下游ＰＯＥ２表达，使ＶＥＧＦ表达下调而抑制肿瘤的。我们的实验显示：莪术油诱导ＣＮＥ－２细胞产生最高凋亡率的时间点为４８ｈ，且动态观察莪术油、莪术油＋１００ｅＧｙ的ｒ射线对ＣＮＥ－２细胞作用２４、４８、９６ｈ三个时间点的细胞周期变化情况，均发现细胞堆积阻滞在Ｇ，期，而Ｓ期、Ｏ：／Ｍ期细胞比例均明显下降，尤其以作用４８ｈ时，细胞大量阻滞在Ｇ，期，这就表明莪术油可以阻断癌细胞
图６莪术油实验组ＣＮＥ－２
细胞株电镜下的细胞形态
（ＴＥＭｘ３８００）
由Ｇｏ／Ｇ，期向Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期的移行过渡。因此，我们认为：诱导细胞周期阻滞、抑制肿瘤细胞ＤＮＡ合成及增殖活性可能是莪术油抗鼻咽癌机制的一个重要方面。
莪术油和７－射线联合作用显示：５弘ｇ／ｍｌ、１００ｐｇ／ｍｌ、３００弘ｇ／ｍｌ的莪术油联合１００ｃＧｙ的７一射线作用２天后凋亡率由０．５％、２．１５％、１０．２％显著提高Ｎ８．６％、１４％和２６％，细胞的死亡率均在５％以下；说明莪术油与小剂量丫一射线联合作用对ＣＮＥ－２细胞有明屁的放疗增敏作用［１９］（Ｐ＜ｏ．０１）；糜福Ｊｉｂｅ２０］在肺癌中的研究也证实了莪术油能够起到放射增敏的这一特点。但在头颈肿瘤领域未见相关报道。目前具有增敏作用的中药多为活血化瘀药，其增敏机制不明了，可能与其降低血液黏滞度、扩张周围血管、改善瘤床血供、提高肿瘤局部氧含量、诱发端粒酶活性等，增进瘤细胞对放射线的敏感性有关Ｌ２１－“］，尚待进一步研究。
另外，有实验证实［２５｜，莪术可明显提高小鼠的免疫功能，莪术水煎对受３００ｃＯｙ照射小鼠的造血、免疫及微循环功能具有保护作用；给动物预注莪术油，可增强动物抗射线照射能力；用１％莪术油膏外涂可预防射线对皮肤的照射损伤。同时，莪术还可以明显降低人癌细胞ＶＥＧＦ、ＰＧＥ的含量，降低癌细胞的转移率。
电镜结果显示：实验组可见细胞微绒毛减少，细胞核固缩，染色质致密、边集，可以见到大量凋亡小体形成；而对照组癌细胞的电镜超微结构可见细胞发育良好，核大，核膜完整，核浆比例大，仁较清楚，胞质中细胞器较完整，细胞表面微绒毛丰富，明湿核分裂象。肿瘤细胞发生凋亡以后自然会失去其恶性增殖的活性Ｅ２６］。这一点在我们的实验中也得到再次证实。
综上所述，我们可以明确的看到，莪术油可以抑制并诱导鼻咽低分化鳞癌ＣＮＥ－２细胞凋亡，其抑制
作用与传统化疗药物５－Ｆｕ比较差异无统计学意义，
?７８２?肿瘤防治研究２００８年第３５卷第１１期
并能够增加射线对鼻咽癌细胞的放疗敏感性，提高放射线对肿瘤细胞的杀伤率，显著增强放疗效果。这说明莪术油可能成为一种低毒、高效、可提高肿瘤患者机体免疫力的、新的化疗或化疗辅助药物；同时也是对放射治疗有一定机体保护作用的、有前途的放疗增敏剂，并对转移性复发性鼻咽癌的治疗存在良好的前景，但其抗肿瘤作用的深层次研究还需要进一步开展，如基因芯片检测ｃＤＮＡ中的凋亡相关基因、细胞周期调控基冈的表达变化，明确莪术油抗ＮＰＣ的机制，为基因药物的研制和开发打下理论基础。同时，还可以从莪术油诱发免疫保护效应的方面人手，深入研究瘤苗主动免疫的机制，研制出ＮＰＣ的特异性杀伤性疫苗——莪术油疫苗。
参考文献：
［１］郭颖，方妃燕．鼻咽癌遗传学研究进展口］．癌症，１９９８，１７（４）：３１６—３１８．
［２］ＣｈａｎＡＴ，ＨｓｕＭＭ，ＧｏｈＢＣ，ｅｔａｌ，Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，ｐｈａｓｅⅡｓｔｕｄｙｏｆｃｅｔｕｘｉｍａｂｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎｉｎ
ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｗｉｔｈｒｅｃｕｒｒｅｎｔｏｆｍｅｔａｓｔａｔｉｃｒｍｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＪｃｌｉｎＯｎｃｏｌ，２００５，２３（１５）：３５６８－３５７６．
［３］ＢｏｎｎｅｒＪａ，ＨａｒａｒｉＰＭ，ＧｉｒａｌｔＪ，ｅｔａｌ，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙｐｌｕｓｃｅｔｕｘ－ｉｍａｂｆｏｒｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｏｆｔｈｅｈａｎｄａｎｄｎｅｃｋ口］．‘ＮｅｗＥｎｇｌＪＭｅｄ，２００６，３４５（６）：５６７—５７８．
［４］ＴａｋｕｙａＦ，ＹｕｔａｋａＭ，ＦｒａｎｃｅｓＭ，ｅｔａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｃａｎ—ｅｅｒ－ｔａｒｇｅｔｅｄｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｍｏｔｅｒｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅ－ｓｅａｒｃｈ，２００４。６４（１）：３６３－３６９．
［５］ＳａｓｓａＹ，ＨａｔａＹ，ＡｉｅｌｌｏＬＰ，ｅｔａ１．Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｇａｍｍａｌｉｎＫＤＲｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｍｅｄｉａｔｅｄｖｉａｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ
ｗｉｔｈｂｏｔｈＳｐｌａｎｄＳｐ３［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００４，５３（５）：１２２２—１２２９．
Ｆ６］胡延维。韩蓉．莪术油注射液的安全性试验研究［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００６，２６（７）：９０４—９０５．
［７］王茂盛．中药学［Ｍ］．北京：科学出版社。２００１：２６３—２６４．
［８］韩铭钧．油性中药抗痈剂ＯＣＣ肝动脉栓塞治疗肝癌８４例３年随访报告［Ｊ］．临床放射学杂志，１９９８，１７（２）：１１２－１１４．
［９－１汪伟民，王波，刘荣玉，等．中药莪术油对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌抑制作用的实验研究［Ｊ］．中国巾医药科技，２００３，１０（６）：３５３—３５４．［１ＩＪ］张瑾峰，王晶．刘欣。等．莪术、二三棱和白介素１１．－６对人乳腺
癌细胞凋亡的诱导作用［Ｊ］．首都医科大学学报，２００６，２７（４）：４９２—４９３．
［１１］徐立春，边可君。许祥裕，等，莪术醇修饰的肿瘤疫苗抗ＭＦＣ效应的研究［Ｊ］．现代肿瘤医学。２００６，１４（１１）：１３５７—１３５９．
［１２］ＲａｆａｅｌＮｕｎｅｚ．流式细胞术原理与科研应用简明手册［Ｍ－１．北京：化学工业出版社。２００５：２８—３０．
［１３］盛辉。苑春莉，王医术．莪术油对肺癌ｓＰｃ—Ａ４细胞株的体外抑制作用口］．江西中医学院学报，２（Ｘ）６，１８（５）：５１—５２．
［，，１４－１赵婷秀。陈振发。邱幸凡，等．ＭＴＴ法分析含药血清对体外培养肺癌细胞增殖的影响［Ｊ－１．数理医药杂志，２００６，１９（３）：２３９－２４１．
［１５］谭敏，宾晓农．莪术油对小鼠肝癌细胞原位凋亡的影响［Ｊ］．中西医结合肝病杂志，２００２，１２（５）：２９０—２９１．
［１６］吴万垠，罗云坚。程剑华，等．莪术油对小鼠肝癌细胞ＤＮＡ作用的图像分析［Ｊ］．中西医结合肝病杂志。１９９９，９（１）：１．
ＦｌＹ］赵华，汤为学．莪术油对人子官内膜癌细胞株ＲＬ－９５—２抑制作用的体外研究［Ｊ］．实用妇产科杂志，２００６，２２（３）：１５８—１６０．
［１８］沈洪，刘增巍，朱营萱，等．莪术对ＳＧＣ７９０１胃癌细胞ＣＯＸ．１，ＣＯＸ－２，ＶＥＧＦ和ＰＧＥ２表达的影响［Ｊ］．世界华人消化杂志，２００６，１４（１６）：１５５１－１５５４．
［１９］沈瑜。董秀珥．肿瘤放射增敏荆的相关知识［Ｊ］．中华放射肿瘤学杂志，２００５，１４（２）：１４８．
Ｉ－２０］糜福顺．莪术油对肺腺癌（ＬＡ一７９５）的放射增敏作用［Ｊ］．中华放射医学与防护杂志，１９９２，１２（６）；４０５－４１）７．
［２１］ＰｅｒｅｚＭＲ，ＤｕｂｎｅｒＤ，ＭｉｃｈｅｌｉｎＳ，ｅｔａＬＲａｄｉａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｕＤ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｎＫＧｌａｃｅｌｌｓｉｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｄｏｓｅｒａｔｅａｎｄｒａｄｉａｔｉｏｎｑｕａｌｉｔｙ［Ｊ］．ＩｎｔＪＲａｄｉａｔＢｉｏｌ，２００２，７８（１２）：１１７５—１１８３．
［２２］ＮａａｓａｎｉＩ，０ｈ－ＨａｓｈｉＦ，Ｏｈ－ｈａｒａＴ。ｅｔａＬＢｌｏｃｋｉｎｇｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｂｙｄｉｅｔａｒｙｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｉｓａｍａｊｏｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｌｉｍｉｔｉｎｇｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆ
ｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００３，６３（４）：８２４—８３０．
［２３－Ｉ周翔，冯建国．放疗增敏剂研究趋势［Ｊ］．国际肿瘤学杂志，２００６，３３（８）：５７８－５８２．
［＇２４－１ＳｓｈｕｅｋＡ，ＰｏｒｅｍｂａＣ，ＬａｎｖｅｒＣ，ｅｔａＬＲａｄｉａｔｉｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄｃｈａｎ－ｇｅｓｏｆｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎａｈｕｍａｎＥｗｉｎｇｘｅｎｏｇｒａｆｔｔｕｍｏｒ［Ｊ］．ＳｔｒａｈｌｅｎｔｈｅｒＯｎｋｏｌ，２００２，１７８（１２）：７０１—７（１８．
［２５］李法庆，邸大琳．莪术对小鼠免疫功能影响的研究ｉ－ｉ－Ｉ．时珍国医国药。２００６，１７（８）：１４８２—１４８３．
［２６］凌诒萍。俞彰．细胞超微结构与电镜技术一分子细胞生物学基础［Ｍ］．２版．上海：上海医科大学出版社，２０００：５６．
，［编辑校对：刘红武］
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《少见肿瘤病理读片精选》简介
本书是一部以少见肿瘤病理图谱为主的专辑。全书共１１章，汇集了呼吸系统、消化系统、泌尿系统、中枢神经系统、女性生殖系统和乳腺、甲状腺、皮肤、淋巴结、软组织与其他组织的疑难及少见肿瘤或瘤样病变近２００例，不同放大倍数的显微镜下照片千余张。本书以病理读片的形式，从肿瘤的临床特征、组织形态、诊断意见、鉴别诊断、临床预后等方面系统进行讨论和介绍，以使读者拓宽视野、开阔思路和积累诊断经验。本书所引用的资料翔实完整、图片精致清晰、具有较强的实用价值，可以作为病理科医师及相关临床工作人员的参考用书。本书附光盘一张，内容为配合《少见肿瘤病理读片精选》的图谱专辑，按照书中的章节将具有代表性的病理照片以ＣＤ—ＲＯＭ形式再现，便于读者更清晰地观看、分析。本书目前已由人民军医出版社出版发行，各大新华书店以及专业医学书店均有销售。
莪术油对鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡及放疗增敏机制的影响
作者：吴冬梅， 杨荣宁， WU Dong-mei， YANG Rong-ning
作者单位：广西医科大学附属肿瘤医院头颈外科,南宁,530021
刊名：
肿瘤防治研究
英文刊名：CANCER RESEARCH ON PREVENTION AND TREATMENT
年，卷(期)：2008，35(11)
被引用次数：2次
参考文献(26条)
1.郭颖.方妃燕鼻咽癌遗传学研究进展 1998(04)
2.Chan AT.Hsu MM.Goh BC Multicenter,phase Ⅱ study of cetuximab in combination with carboplatin in patients with recurrent of metastaticnasopharyngeal carcinoma 2005(15)
3.Bonner Ja.Harari PM.Giralt J Radiotherapy plus cetuximab for squamous cell carcinoma of the hand and neck 2006(06)
4.Takuya F.Yutaka M.Frances M Development of acancer-targeted tissue-specific promoter system
2004(01)
5.Sassa Y.Hata Y.Aiello LP Bifunctional properties of peroxisome proliferators-activated receptor gammal in KDR gene regulation mediated via interaction with both Sp1 and Sp3 2004(05)
6.胡延维.韩蓉莪术油注射液的安全性试验研究[期刊论文]-中国医院药学杂志 2006(07)
7.王茂盛中药学 2001
8.韩铭钧油性中药抗癌剂OCC肝动脉栓塞治疗肝癌84例3年随访报告[期刊论文]-临床放射学杂志 1998(02)
9.汪伟民.王波.刘荣玉中药莪术油对小鼠Lewis肺癌抑制作用的实验研究[期刊论文]-中国中医药科技 2003(06)
10.张瑾峰.王喆.刘欣莪术、三棱和白介素IL-6对人乳腺癌细胞凋亡的诱导作用[期刊论文]-首都医科大学学报2006(04)
11.徐立春.边可君.许祥裕莪术醇修饰的肿瘤疫苗抗MFC效应的研究[期刊论文]-现代肿瘤医学 2006(11)
12.Rafael Nunez流式细胞术原理与科研应用简明手册 2005
13.盛辉.苑春莉.王医术莪术油对肺癌SPC-A4细胞株的体外抑制作用[期刊论文]-江西中医学院学报 2006(05)
14.赵婷秀.陈振发.邱幸凡MTT法分析含药血清对体外培养肺癌细胞增殖的影响[期刊论文]-数理医药学杂志
2006(03)
15.谭敏.宾晓农莪术油对小鼠肝癌细胞原位凋亡的影响[期刊论文]-中西医结合肝病杂志 2002(05)
16.吴万垠.罗云坚.程剑华莪术油对小鼠肝癌细胞DNA作用的图像分析 1999(01)
17.赵华.汤为学莪术油对人子官内膜癌细胞株RL-95-2抑制作用的体外研究[期刊论文]-实用妇产科杂志 2006(03)
18.沈洪.刘增巍.朱营萱莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响[期刊论文]-世界华人消化杂志 2006(16)
19.沈瑜.董秀玥肿瘤放射增敏剂的相关知识[期刊论文]-中华放射肿瘤学杂志 2005(02)
20.糜福顺莪术油对肺腺癌(LA-795)的放射增敏作用 1992(06)
21.Perez MR.Dubner D.Michelin S Radiation-induced upregulation of telomerase in KGla cells is influenced by doserate and radiation quality 2002(12)
22.Naasani I.Oh-Hashi F.Oh-hara T Blocking telomerase by dietary polyphenols is a major mechanism
for limiting the growth of human cancer cells in vitro and in vivo 2003(04)
23.周翔.冯建国放疗增敏剂研究趋势[期刊论文]-国际肿瘤学杂志 2006(08)
24.Sshuck A.Poremba https://www.doczj.com/doc/3412680078.html,nver C Radiation-induced changes of telomerase activity in a human Ewing xenograft tumor 2002(12)
25.李法庆.邸大琳莪术对小鼠免疫功能影响的研究[期刊论文]-时珍国医国药 2006(08)
26.凌诒萍.俞彰细胞超微结构与电镜技术-分子细胞生物学基础 2000
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1.期刊论文韦世秀.刘成军.李牡艳.宋慧.李佳荃.WEI Shi-xiu.LIU Cheng-jun.LI Mu-yan.SONG Hui.LI Jia-quan
眼镜蛇毒神经生长因子诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用的研究-中国医院药学杂志2008,28(22)
目的:研究广西眼镜蛇毒神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡.方法:应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定不同质量浓度(0.0125,0.025,0.05,0.1,0.2 g·L)NGF处理24,48,72,96 h对人鼻咽癌CNE-2生长的抑制率;Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞的形态;琼脂糖凝胶电泳测定DNA断裂状况;流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率.结果:不同浓度的NGF能抑制CNE-2细胞增殖,并呈浓度-时间效应关系,作用24,48,72,96 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.213,0.095,0.048,0.033 g·L-1;经NGF(0.1 g·L-1)处理细胞48 h后,荧光染色呈现典型的细胞凋亡形态学特征;DNA凝胶电泳可见凋亡细胞特有的DNA片段;0.05.0.1,0.2 g·L-1NGF作用48 h后,CNE-2细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(28.2±2.0)%、(39.9±1.9)%、(50.3±1.3)%.结论:NGF通过诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡而产生抗鼻咽癌活性.
2.期刊论文杜友红.张艳红.DU You-hong.ZHANG Yan-hong塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响-临
床肿瘤学杂志2010,15(8)
目的 研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制.方法 用塞来昔布作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTY)测定细胞增殖活力的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western
blot检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况.结果 MTT结果显示不同浓度塞来昔布(25～100μmol/L)均能抑制鼻咽癌CNE-2细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式细胞术结果显示塞来昔布(25～75μmol/L)浓度范围内能诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性.Western blot结果显示塞来昔布作用于鼻咽癌CNE-2细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调和Bax蛋白表达上调呈浓度依赖方式.结论 塞来昔布具有抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关.
3.期刊论文何晓松.易世江.范才文.凌月福.HE Xiao-song.YI Shi-jiang.FAN Cai-wen.LING Yue-fu EGCG对鼻咽
癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响及机制-山东医药2010,50(3)
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)治疗鼻咽癌的作用机制.方法 体外培养鼻咽癌CNE-2细胞并以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)表达变化.结果 EGCG处理后,CNE-2细胞增殖明显受到抑制,且呈时间和剂量依赖性;CNE-2细胞凋亡率显著升高,且呈量效关系;MnSOD表达明显上调,且随EGCG作用时间延长有升高趋势.结论 EGCG能抑制CNE-2细胞增殖、促进其凋亡,可能机制为上调MnSOD表达;此为EGCG在鼻咽癌防治中的应用提供了理论依据.
4.学位论文姚东方维生素E琥珀酸酯对人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡杀伤作用的研究2010
目的：目前国内外关于维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)对鼻咽癌细胞系的作用尚未见报道，本试验以人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE-2为研究对象，了解VES对鼻咽癌细胞系CNE-2的生长抑制作用；观察VES作用于鼻咽癌细胞系CNE-2后细胞的形态变化；了解VES对鼻咽癌细胞系CNE-2的凋亡诱导作用；了解VES作用于鼻咽癌细胞系CNE-2后对细胞周期的调控作用，为VES应用于鼻咽癌的临床治疗提供前期的理论依据。
方法：体外培养CNE-2细胞并传代，采用四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazodium bromide,MTT)比色法观察不同浓度的VES(5、10、20、40μg/ml)在不同的作用时间(24、48、72h)对CNE-2细胞的生长抑制作用。采用倒置显微镜和透射电子显微镜观察VES作用与CNE-
2细胞后的形态改变。用流式细胞仪检测VES对鼻咽癌细胞作用后的细胞凋亡率和VES对鼻咽癌细胞的细胞周期调控作用。采用SPSS13.0统计软件处理数据，细胞生长抑制试验采用重复测量的方差分析，细胞凋亡率和细胞周期的数据统计学分析采用卡方检验，取α=0.05为显著性检验水准。
结果：VES作用于人鼻咽癌细胞CNE-2后，对细胞有明显的抑制作用，这种抑制作用与药物浓度和作用时间有关。5μg/ml处理组24h和阴性对照组相比差异无统计学意义(P=0.5822)，其余各组与对照组相比，差异均有统计学意义(P＜0.01)。生长曲线显示：同一作用时间，与对照组相比，VES浓度越高
，抑制率越高；药物浓度相同，随着作用时间的延长，与对照组相比，其抑制率越高。光镜和透射电镜下可观察到VES作用于鼻咽癌细胞系CNE-2细胞后发生形态学变化，可找到典型的凋亡细胞。流式细胞仪检测不同浓度VES作用于鼻咽癌细胞系CNE-2后发现：药物浓度越高，其凋亡率越高，经卡方检验，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)。流式细胞仪检测不同浓度VES作用于鼻咽癌细胞系CNE-2后可见G0/G1期细胞增多，经卡方检验结果有统计学意义，提示VES对鼻咽癌细胞系CNE-2细胞周期有调控作用(P＜0.01)。
结论：本实验研究证实维生素E琥珀酸酯对鼻咽癌细胞系CNE-2的生长有明显的抑制作用，其抑制效应与药物的剂量和时间有关。维生素E琥珀酸酯对鼻咽癌细胞系CNE-2作用后，能引起细胞形态的变化。维生素E琥珀酸酯能够诱导鼻咽癌细胞系CNE-2的凋亡。维生素E琥珀酸酯对鼻咽癌细胞系CNE-2具有细胞周期调控作用，细胞凋亡峰出现在G0/G1期。
5.期刊论文李金高.叶建明.陈文学.王小平2 Gy多分割不同顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞生物效应的研究-实用癌
症杂志2009,24(2)
目的 探讨总剂量为2 Gy时部分分割和顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤效应的差异.方法 采用克隆形成法和四唑盐(MTT)比色法,检测2 Gy剂量照射后鼻咽癌CNE-2细胞的细胞生存率和具有代谢活性细胞比例.结果 在多个等分割照射中,较小分割(≤0.5 Gy)多次照射的细胞存活率均明显低于单次照射组(2 Gy),差异有统计学意义(P＜0.05),而较大分割(1 Gy)照射与单次照射组细胞生存率差异无统计学意义;在2个部分分割和3个部分分割照射中,随着S分割剂量的增大,各S-L和S-S-L照射组细胞生存率呈逐渐下降趋势,至S分割为0.4 Gy(S-L)或者0.5 Gy(S-S-L)组时细胞生存率最低;大部分S-L照射组细胞生存率明显低于L-S照射组,大部分S-S-L照射组细胞生存率和相对细胞生存率明显低于L-S-S照射组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 总剂量为2
Gy照射时,分割剂量大小和照射顺序是影响鼻咽癌CNE-2细胞放射治疗生物效应的重要因素.
6.学位论文刘昱竹CpG ODNs增加人鼻咽癌CNE-2细胞对X、β射线放射敏感性的实验研究2008
目的：鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤之一，95％以上属于低分化癌和未分化癌类型，恶性程度高、生长快，容易出现淋巴结或血道转移。目前放射治疗是治疗鼻咽癌的主要手段⑴。鼻咽癌病人早期(Ⅰ，Ⅱ期)的5年生存率达76％～90％，但中晚期(Ⅲ，Ⅳ期)鼻咽癌单纯放射治疗的5年生存率多年来一直徘徊中20％～50％左右。大部分患者来就诊时已是中晚期，治疗上采用放射治疗为主、化疗为辅的方式。虽然近期治疗效果有一定提高，但对总生存率未见明显提高，重要原因之一是鼻咽癌细胞对射线产生了的不同程度的耐受。
20世纪60年代，英国科学家Adams提出了著名的亲电子理论，开始对放射增敏剂进行研究。至今为止放射增敏剂在国内外研究引人注目，放射治疗增敏剂的应用己经成为肿瘤治疗的一部分，并已建立起一整体的筛选方法。虽然国内外对一些增敏效应明显的化学物质进行了大量的研究，但目前在国际
本研究以我室前期设计的CpGODNs为研究对象，筛选对CNE-2细胞具有放射增敏作用的CpGODN，并对CpGODN的增敏作用机制进行初步研究，为寻找高效、低毒的放射增敏药物奠定实验基础。
方法：应用不同序列的CpGODNs处理人鼻咽癌细胞系CNE-2，然后分别经X、B射线照射，①采用MTT法检测细胞的增殖情况；②采用体外培养集落形成率观察细胞的集落形成，③采用细胞划痕法观察细胞迁移能力，④采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况，以明确CpGODN的放射增敏作用及其可能机制。
结果：①CpGODN104、106可显著增加CNE-2经X射线照射后的放射敏感性，CpGODN109、201、211可增加CNE-2经X射线照射后的放射敏感性
；②CpGODN106可抑制CNE-2细胞增殖，并呈一定量效关系；CpGODN106联合X射线可增强抑制对CNE-2细胞的增殖作用，其中以30μg/mlCpGODN106的作用最强；③CpGODN106(30μg/ml)能抑制CNE-2细胞增殖和迁移；CpGODN106在联合X射线照射后细胞周期被阻止在G0/G1期，细胞凋亡显著增加
；④CpGODN101-109、201、208、210、211可增加CNE-2经β射线照射后的放射敏感性；⑤CpGODN107(30μg/ml)能抑制CNE-2细胞增殖和迁移
；CpGODN106在联合β射线照射后细胞周期被阻止在G0/G1期，细胞凋亡显著增加。
结论：CpGODN106、CpGODN107对CNE-2细胞有明显的放射增敏作用，该作用与其将CNE-2细胞阻止在G0/G1期、诱导CNE-2细胞凋亡有关。
7.学位论文张海霞iNOS抑制剂对鼻咽癌CNE-2细胞作用的探讨2008
目的：
观察诱导性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂SMT是否对鼻咽癌细胞株CNE-2有抑制细胞增殖能力和促进凋亡的能力，探讨SMT对顺铂的抗CNE-2细胞作用是否存在增敏效应及分子机制，为摸索治疗晚期鼻咽癌合理的药物组合提供实验依据。
方法：
1.选用鼻咽癌细胞株CNE-2作为研究对象，以A549作为对照，RT-PCR测试CNE-2是否表达iNOS。
2.用不同浓度的SMT、顺铂、二者合用作用于CNE-2细胞，干预CNE-2细胞后，MTT试验观察其对细胞活力的影响。
3.Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学变化。
4.流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡指数、凋亡的水平。
5.硝酸还原酶法测NO的含量。
结果：
1.以iNOS高表达的肺癌细胞株A549为阳性对照，CNE-2细胞证实为iNOS阳性表达。
2.SMT以浓度依赖性方式有效地抑制CNE-2细胞增殖。
3.0.5umol/mL的SMT与6μg/ml的顺铂共同干预CNE-2细胞，较之单用SMT或顺铂抑制CNE-2细胞的凋亡形态学改变明显，凋亡小体以及核固缩现象增多。
4. 0.5umol/mL的SMT与6μg/ml的顺铂共同干预CNE-2细胞，较之单用顺铂抑制CNE-2细胞诱导细胞凋亡的早期凋亡率分别为(22.26±1.37)％和(38.8±1.25)％，P值<0.05。
5.0.5umol/mL的SMT与6μg/ml的顺铂共同干预CNE-2细胞，与正常组相比，两组NO的量分别为(9.05±0.02)umol/lVS(14.79±0.03)umol/l，有统计学差异。
结论：
1.SMT能够有效地呈浓度依赖性抑制CNE-2细胞的增殖。
2.SMT对顺铂的抗CNE-2细胞作用具有化疗增敏效应，其机制可能与NO的量有关，但具体增敏机制还有待进一步研究。
8.期刊论文操隆辉.周建华.谭红鹰.曾维安.林文前.CAO Long-hui.ZHOU Jian-hua.TAN Hong-ying.ZENG Wei-an.
LIN Wen-qian吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响-中华生物医学工程杂志2010,16(2)
目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后
,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.
9.学位论文袁渊体外条件下奥沙利铂对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长抑制和凋亡作用的研究2008
目的:鼻咽癌是头颈部常见的恶性肿瘤，而浸润和转移是鼻咽癌致死的主要原因。本实验目的就是观察奥沙利铂对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的生长抑制和凋亡作用，为其临床应用提供理论依据。
方法：将浓度为0、10、20、40、80μm/ml的奥沙利铂与CNE-2细胞作用24、36、48h，用SRB法检测奥沙利铂对CNE-2细胞的生长抑制率，流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率，荧光显微镜观察细胞形态学变化。
结果：奥沙利铂对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大。流式细胞仪分析显示奥沙利铂主要将CNE-2细胞阻滞于G2/M期。奥沙利铂浓度为80μg/ml作用48小时，CNE-2细胞生长抑制率为(97.46±1.76)％，CNE-2细胞的早期凋亡率为(4.48±1.23)％、晚期凋亡和继发坏死率为(9.48±2.30)％。荧光显微镜下观察用药组有凋亡细胞存在。
结论：奥沙利铂能够抑制人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的增殖，能使CNE-2细胞阻滞于G2/M期，可诱导CNE-2细胞发生一定的凋亡。
10.期刊论文刘然义.罗慧玲.彭吉林.蔡体育.张昌卿.潘伟光.吴沛宏.黄文林.曾益新E1B缺陷腺病毒对鼻咽癌CNE-
2细胞杀伤作用及其机理研究-中国肿瘤生物治疗杂志2002,9(1)
目的:研究E1B缺陷腺病毒dl1520对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤作用及其作用机理.方法:用MTT法和细胞病变试验(CPE)测量dl1520在体外对CNE-2细胞的抑制和杀伤作用,并通过测定病毒在CNE-2细胞中的复制产量和DAPI染色试验探讨其杀伤机理;瘤内注射dl1520,观察其对CNE-2裸鼠移植瘤的治疗效果,用免疫织化方法检测肿瘤组织中病毒的复制.结果:体外实验结果显示:dl1520能在CNE-2细胞中复制,导致明显的细胞病变,显著抑制CNE-2细胞的生长,在病变细胞中可见明显的核膨胀;瘤内注射dl1520能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,在肿瘤组织中可检测到病毒复制.结论:d11520能在CNE-2细胞中复制并使之裂解,从而在体内外有效地抑制和杀伤CNE-2细胞.
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