生物多样性 2010, 18 (2): 195–200
Biodiversity Science http: //https://www.doczj.com/doc/3e11133498.html,
—————————————————— 收稿日期: 2009-9-15; 接受日期: 2009-12-16
基金项目: 国家“十一五”科技支撑计划课题“主要商品花卉优质高产新品种选育”之专题“优质高产热带兰新品种选育”(2006BAD01A18); “948”项目“花卉新品种创制技术引进与创新”(2009-4-C08); 河北省自然科学基金项目(C2009000180). 河北大学引进人才专项基金(2006-088); 海南省重大科技研发专项“热带花卉产业可持续发展关键技术研究”课题(080102)
* 共同通讯作者 Co-correspondence author. E-mail ：lilubin@https://www.doczj.com/doc/3e11133498.html,; sunlei1018@https://www.doczj.com/doc/3e11133498.html,
春兰根中可分泌吲哚乙酸的内生细菌多样性
刘 琳1 孙 磊1? 张瑞英1 姚 娜2 李潞滨2?
1 (河北大学生命科学学院, 河北省微生物多样性研究与应用实验室, 河北保定 071002)
2 (中国林业科学研究院林业研究所, 国家林业局林木培育重点实验室, 北京 100091)
摘要: 植物内生细菌可通过分泌吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid, IAA)等方式促进植物生长。本研究以温室盆栽春兰(Cymbidium goeringii )为材料, 采用分离培养方法对春兰根中可分泌IAA 的内生细菌多样性进行了研究。从春兰根组织中共分离纯化得到了256株内生细菌, 其中57株具有分泌IAA 的能力, 占总菌数的22.3%。根据ARDRA(amplified ribosomal DNA restriction analysis)及16S rDNA 系统发育分析结果, 将57株内生细菌划分为25个组, 分属于6大类群, 分别为变形菌门的α-变形菌纲(35.1%)、γ-变形菌纲(14.0%)和β-变形菌纲(8.8%)、厚壁菌门(33.3%)、放线菌门(7.0%)及拟杆菌门(1.8%)。其中变形菌门的α-变形菌纲和厚壁菌门为优势类群, 类芽孢杆菌属(Paenibacillus )为优势菌属, 且为高产IAA 的主体菌属。另外, 测序结果显示有4个菌株的序列与已知细菌的最高序列相似性低于97.0%, 可能为潜在的新种或新属。研究结果表明春兰根中分泌IAA 的内生细菌具有丰富的多样性。这一结果可为研究和开发植物促生细菌提供基础资料。 关键词: Cymbidium goeringii , 植物促生细菌, ARDRA, 16S rDNA
Diversity of IAA-producing endophytic bacteria isolated from the roots of Cymbidium goeringii
Lin Liu 1, Lei Sun 1?, Ruiying Zhang 1, Na Yao 2, Lubin Li 2?
1 College of Life Sciences, Hebei University, Key Laboratory of Microbial Diversity Research and Application of Hebei Province, Baoding, Hebei 071002
2 Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry; Key Laboratory of Tree Breeding and Cultivation, State Forestry Administration, Beijing 100091
Abstract: Endophytic bacteria can directly stimulate plant growth in several ways, including production of plant hormones such as indole-3-acetic acid (IAA). We investigated the diversity of IAA-producing endo-phytic bacteria in the roots of Cymbidium goeringii using culture-dependent approaches. A total of 57 IAA-producing strains were obtained from 256 strains isolated from the interior roots of C. goeringii . Based on amplified ribosomal DNA restriction analyses (ARDRA) and 16S rDNA sequences, these 57 strains were divided into 25 groups. The IAA-producing endophytic bacteria were grouped into six phyla, i.e., Alphapro-teobacteria (35.1%), Firmicutes (33.3%), Gammaproteobacteria (14.0%), Betaproteobacteria (8.8%), Acti-nobacteria (7.0%) and Bacteroidetes (1.8%). The dominant groups were Alphaproteobacteria and Firmicutes, and the dominant genus, Paenibacillus , produced relatively high levels of IAA. In addition, four potential novel taxonomic units were found. Our results revealed diverse and abundant communities of IAA-producing endophytic bacteria in the roots of C. goeringii and highlight the microbial resources represented by plant growth-promoting bacteria.
Key words: Cymbidium goeringii , plant growth-promoting bacteria, ARDRA, 16S rDNA
植物内生细菌是指生活在植物组织内部, 没有对宿主造成实质性损害, 或者对其有益的细菌
(Kado, 1991), 具有促进植物生长、防治病虫害、增强宿主植物抗逆性等作用(Lodewyckx et al ., 2002)。
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产生植物激素是植物内生细菌与宿主植物相互作用的主要机制之一(Kamneva& Muronets, 1999)。植物内生细菌可通过分泌吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid, IAA)促进植物生长(Mendes et al., 2007)。IAA 可增加植物根的大小及分布, 有利于根从土壤中吸收更多的营养物质(Kuklinsky-Sobral et al., 2004; Li et al., 2008)。对具有分泌IAA能力的内生细菌进行研究有利于将植物促生细菌应用于农业生产。
兰科植物为典型的菌根植物(Currah et al., 1997), 菌根真菌与兰科植物之间的相互关系已有较深入的研究(Rasmussen, 2002)。然而, Tsavkelova 等(2005, 2007)在对卷萼兜兰(Paphiopedilum apple-tonianum)和节茎石仙桃(Pholidota articulata)的相关细菌进行研究时发现, 部分兰科植物的相关细菌具有不同程度的分泌IAA的能力并能促进植物种子萌发, 且这种促进作用不依赖于任何植物生长促进剂或菌根真菌的存在。这一发现提醒我们, 兰科植物与其微生态系统中的细菌之间存在着密切关系。
为初步了解兰科植物分泌IAA的内生细菌多样性及其产生IAA的能力, 我们选用中国兰属代表植物春兰(Cymbidium goeringii)为实验材料, 采用16S rDNA扩增片段限制性酶切分析(amplified ribosomal DNA restriction analysis, ARDRA)及16S rDNA系统发育分析, 对春兰根中分泌IAA的内生细菌多样性进行了研究, 以期为进一步开发利用内生细菌提供基础资料。
1 材料与方法
1.1 植物材料
植物材料于2008年10月取自中国林业科学研究院温室。随机选取5株5年生健康春兰, 每株取根1.0 g, 样品混合后用于内生细菌的分离。
1.2内生细菌的分离
分离培养选用R2A培养基(Kawai et al., 2002)。
将用自来水冲洗干净的春兰根进行表面灭菌, 条件为: 75%乙醇浸泡3 min, 3%次氯酸钠溶液处理2 min, 75%乙醇浸泡30 s, 最后用无菌水冲洗。取最后一次冲洗水涂布于R2A平板并将处理后的根组织于R2A平板上轻压涂抹, 28℃暗培养, 以检测表面灭菌效果。同时, 将表面灭菌后的根组织研磨, 研磨液经梯度稀释后涂布于R2A平板, 28℃暗培养6 d。如表面灭菌检测平板6 d内无菌落生成则表示表面灭菌合格, 挑取相应分离培养平板上具有不同形态的菌落, 纯化后于4℃保藏备用。
1.3 可分泌IAA的内生细菌的筛选
采用含有L-色氨酸(200 mg/L)的R2A液体培养基。
将分离纯化后的春兰根内生细菌接种于筛选培养基, 28℃, 180 rpm摇床培养4 d。取50 μL菌悬液滴于白色陶瓷板上, 同时加50 μL Salkowski比色液(50 mL 35% HClO4 + 1 mL 0.5 M FeCl3)(Libbert & Risch, 1969)。将加入50 μL 50 mg/L IAA的比色液作为阳性对照。白色陶瓷板于室温避光放置30 min后观察, 颜色变红者表示能够分泌IAA。
对初筛获得的分泌IAA的内生细菌进行定量测定, 培养条件同上。首先用分光光度法测定菌悬液的OD600值, 然后将菌悬液10,000 rpm离心10 min, 取上清液加入等体积Salkowski比色液, 避光静置30 min, 测定其OD530值(Glickmann & Dessaux, 1995)。计算菌浓度OD600值为1时, 单位体积发酵液中IAA 的含量。每株菌的实验设置3个平行, 相对标准偏差的计算公式为RSD = S/X, 其中S(标准偏差) = Sqr[Σ(X n–X) 2/ (n–1) ], X n为第n次测量结果, X为测量结果的平均值(杜荣骞, 1999)。标准曲线的绘制采用分析纯的IAA梯度稀释制备。
1.4 16S rDNA的PCR扩增
菌落裂解法制备PCR模板。采用细菌16S rDNA 通用引物27f (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') (Edwards et al., 1989)和1492r (5'-GGTTACCTTGT- TACGACTT-3')(Lane, 1991)对春兰根中分泌IAA的内生细菌进行16S rDNA的PCR扩增。引物由上海英俊生物技术有限公司合成。
PCR反应程序: 94℃预变性4 min; 94℃变性45 s, 54℃退火45 s, 72℃延伸45 s, 30个循环; 72℃延伸10 min。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。1.5核糖体DNA扩增片段限制性酶切分析(ARDRA)
用Hae III和RsaⅠ(TaKaRa)两种限制性内切酶对PCR产物分别酶切(37℃, 4 h), 酶切产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳后进行酶切带型的分析。
1.6 16S rDNA系统发育分析
根据ARDRA酶切图谱的差异分析聚类, 将菌株划分为不同的组。每组随机选取一株细菌进行16S rDNA序列测定。序列测定结果利用BLAST软
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件(https://www.doczj.com/doc/3e11133498.html,/blast/Blast.cgi)与Ge- nBank 数据库中的序列进行比对分析, 选取同源性较高的相关序列用MEGA4.1软件(http://www. https://www.doczj.com/doc/3e11133498.html,/mega4.1.html)分析, 用邻接法(neighbor-joining method)构建系统发育树(Tamura et al., 2007), 自展数(bootstrap)为1,000。
2 结果
2.1 分泌IAA 的内生细菌筛选
从春兰根组织中共分离到内生细菌256株, 其中57株具有分泌IAA 的能力, 占分离总菌数的22.3%。定量测定结果显示(表1), 内生细菌的IAA 产量介于0.5–114.8 μg·mL –1 · (OD 600)–1之间。产量高于50 μg · mL –1 · (OD 600)–1的内生细菌为9株(15.8%), 产量介于20–50 μg·mL –1 · (OD 600)–1的内生细菌为14株(24.6%), 其余34株(59.7%)产量低于20 μg · mL –1 ·
(OD 600)–1。
2.2 ARDRA 分析
采用Hae III 和Rsa I两种限制性内切酶消化16S rDNA 的PCR 扩增产物, 将酶切图谱一致的菌株划分为一个组, 57株春兰根中分泌IAA 的内生细菌划分为25个组(表1)。随机选取每组中的一个菌株进行序列分析。将测定的序列登录GenBank, 登录号为GQ476802–476826。 2.3 16S rDNA 系统发育分析
将所得序列在GenBank 数据库中作比对分析, 结果显示(表1, 图1), 25组内生细菌分属于6大类群的18个已知属和2个潜在的新属。
由表1可知，9个组的20株细菌属于变形菌门α-变形菌纲, 占总菌数的35.1%, 为最优势类群。除1个组的代表菌株R224-3与已知菌Skermanella aer-olata DSM 18479T 的相似性仅为90.1%, 可能为潜在的新属外, 其余8个组中的16株细菌归属于6个已知属, 分别为根瘤菌属(Rhizobium )、Sphingopyxis 、
表1 分泌IAA 的春兰根内生细菌的16S rDNA 序列相似性分析
Table 1 Identity analysis of the 16S rDNA partial sequences of IAA-producing endophytic bacteria from Cymbidium goeringii roots
类群 Group
分型测序菌株
Isolate
菌株数 No.of strains IAA 分泌量
IAA production (mg·L –1 · (OD 600)–1)最相近菌种(登录号)
Nearest strain (accession no.)
序列相似性Similarity (%) R209 7 1.0#–26.3# Rhizobium miluonense (EF061096) 100.0 R128-2 1 5.8# R. huautlense (AF025852) 97.1 R141 1 3.6# R. giardinii (U86344)
97.3 R224-3 4 10.0#–43.1# Skermanella aerolata (DQ672568) 90.1 R120 2 23.9*–47.1# Devosia insulae (EF012357)
97.8 R90 2 0.5*–1.7# Sphingopyxis macrogoltabida (AB372254) 99.8 R83-1 1 2.3# Altererythrobacter epoxidivorans (DQ304436) 96.3 R178 1 14.9# Mesorhizobium opportunistum (AY601515) 97.5 α-变形菌纲
Alphaproteobacteria (35.1%)
R191 1 25.8* Agrobacterium tumefaciens (EU445236) 100.0 R94 2 0.7#–5.3# Variovorax paradoxus (AJ420329) 99.0 R199 1 1.9# V. soli (DQ432053)
98.4 R163 1 18.9# Burkholderia caribensis (Y17009)
99.1 β-变形菌纲
Betaproteobacteria (8.8%)
R235-1 1 13.1* Herbaspirillum chlorophenolicum (NR_024804) 99.4 R215-2 7 10.1*–14.6# Dyella yeojuensis (DQ181549)
100.0 γ-变形菌纲
Gammaproteobacteria (14.0%)
R192 1 3.3*
Pseudoxanthomonas japonensis (AB008507)
99.7
R138 11 1.1*–114.8# Paenibacillus agaridevorans (NR_025490) 98.0
R172 4 37.6#–44.0#
P. contaminans (EF626690) 94.6 R12-2 2 26.3#–26.4#
P. alkaliterrae (AY960748) 96.3 R59 1 7.7#
Bacillus aerophilus (AJ831844) 100.0 厚壁菌门 Firmicutes (33.33%)
R95 1 11.6#
B. niabensis (DQ176422) 99.8
R73-1 1
1.7#
Nocardioides aquiterrae (AF529063) 98.3 R100 1 15.3#
Brachybacterium paraconglomeratum (AJ415377) 100.0 R152 1 9.6#
Arthrobacter niigatensis (AB248526) 100.0 放线菌门 Actinobacteria (7.0%) R205 1 1.6#
Streptomyces albaduncus (AY999757) 98.7 拟杆菌门
Bacteroidetes (1.8%) R156-1 1 2.1* Chitinophaga terrae (AB267724) 97.4 *
相对标准偏差值RSD <5%; #相对标准偏差值RSD 介于5–10% *The relative standard deviation values were less than 5%; #The relative standard deviation values were 5–10%.
198 生物多样性 Biodiversity Science第18卷
图1可分泌IAA的春兰根内生细菌的16S rDNA系统发育树(图中分枝上数字为1,000次抽样的Bootstrap百分值, 括号内为序列登录号)
Fig. 1 A dendrogram based on the 16S rDNA partial sequences of IAA-producing endophytic bacteria from the roots of Cymbidium goeringii. Bootstrap values (percent) calculated from 1,000 resamplings are shown at branch nodes. GenBank accession numbers are given in parentheses.
第2期刘琳等: 春兰根中可分泌吲哚乙酸的内生细菌多样性 199
Altererythrobacter、戴沃斯氏菌属(Devosia)、中慢生
根瘤菌属(Mesorhizobium)及土壤杆菌属(Agrobacterium)。其中菌株R83-1与已知菌Altererythrobacter epoxidivorans JCM 13815T相似性
为96.3%, 可能为潜在的新种。这20株菌的IAA分泌
量最高为47.1 μg·mL–1 · (OD600)–1, 属于戴沃斯氏菌属; 其次是与斯科曼氏球菌属(Skermanella)相似性
最高的4株菌, 其分泌量范围为10.0–43.1 μg·mL–1 · (OD600)–1。
5个组中的19株细菌属于Firmicutes, 所占比例
为33.3%, 为第二大优势类群。其中3个组的17株细
菌与类芽孢杆菌属(Paenibacillus)的序列相似性最高, 其余2个组的细菌属于芽孢杆菌属(Bacillus)。其
中菌株R172与已知菌P. contaminans LMG 24216T的
相似性仅为94.6%, 可能为潜在的新属; 菌株R12-2
与已知菌P. alkaliterrae DSM 17040T相似性为96.3%, 可能为潜在的新种。类芽孢杆菌属不仅是可
分泌IAA的内生细菌中的最优势菌属(29.8%), 且分
泌IAA能力最强的9株细菌同属于菌株R138所代表
的组, 其代表菌株与P. agaridevorans的亲缘关系最
近(序列相似性98.0%), 它们的IAA分泌量范围为51.1–114.8 μg · mL–1 · (OD600)–1, 说明类芽孢杆菌属
是高产IAA的主体类群。
属于变形菌门γ-变形菌纲的有2个组的8株细菌, 分属于Dyella和假黄色单胞菌属(Pseudox- anthomonas)。属于变形菌门β-变形菌纲的有4个组
的5株细菌, 分属于贪食菌属(Variovorax)、伯克氏菌
属(Burkholderia)和草螺菌属(Herbaspirillum)。属于
放线菌门(Actinobacteria)的有4个组的4株菌, 分属
于类诺卡氏菌属(Nocardioides)、短状杆菌属(Brachybacterium)、节杆菌属(Arthrobacter)和链霉
菌属(Streptomyces)。属于拟杆菌门的仅1株菌, 其属
于噬几丁质菌属(Chitinophaga)。属于这些类群的菌
株的I A A分泌量较低,均低于20μg·m L–1· (OD600)–1。
3讨论
目前已从多种植物如甘蔗(Mendes et al., 2007)、龙葵和烟草(Long et al., 2008)、杨树和柳树(Taghavi et al., 2009)、大豆(Kuklinsky-Sobral et al., 2004)、草莓(Dias et al., 2008)等植物体内分离到了
分泌IAA的植物内生细菌。上述研究中发现的分泌IAA的内生细菌均少于10个属, 而本研究从春兰根中获得的分泌IAA的内生细菌属于6大类群的18个已知属和2个潜在的新属, 显示出丰富的多样性。在这18个已知属中, 除了芽孢杆菌属、伯克氏菌属、土壤杆菌属和Sphingopyxis4个属在上述研究中已有报道外, 其余14个属未见有关其分泌IAA内生细菌的报道。
测序结果显示, 4个组的代表菌株的16S rDNA 序列与已知模式菌株的最高序列相似性低于97%, 可能为潜在的新属或新种。这4个组共包含11株细菌, 占分泌IAA菌株总数的19.3%。该数据显示, 在分泌IAA的春兰根内生细菌中存在较多的潜在新种或新属, 这可能与宿主植物类型、生长条件及分离培养条件等因素有关。我们之前的实验证实(孙磊等, 2009), 分离春兰根内生细菌的最佳培养基为R2A培养基。R2A培养基是含有丙酮酸钠的贫营养培养基。有研究表明, 贫营养的培养基以及添加丙酮酸钠的培养基能分离出数量和种类更多的细菌(Aagot et al., 2001)。春兰根组织是一个还未被充分研究的特殊生境, 其中可能存在一些新的微生物资源，说明植物体内已成为除各种极端环境外的又一个贮存微生物资源的仓库。
类芽孢杆菌属被认为是植物根际促生细菌(plant growth-promoting rhizobacteria, PGPR)。其中许多种具有抑制土传病害(Selim et al., 2005)、固氮(Berge et al., 2002)及产生广泛的次级代谢产物如生长素(Da Mota et al., 2008)等功能。类芽孢杆菌在多种植物根际广泛存在, 但其作为分泌IAA的内生细菌很少被报道。本研究结果显示类芽孢杆菌属为春兰根中分泌IAA内生细菌中的最优势菌属, 并且IAA的分泌量也较高。由于生长素对植物幼苗的影响取决于其浓度: 低浓度生长素会促进植物生长, 而高浓度却可能会抑制其生长(Arshad & Franken-berger, 1991), 并且不同植物幼苗对生长素浓度的反应不同(Sarwar & Frankenberger, 1994), 分泌生长素浓度相同的不同种属的微生物对植物幼苗的影响也不同(Tsavkelova et al., 2005)。因此本研究筛选出的可分泌IAA的内生细菌对植物生长是否具有促进作用, 还需通过促生实验进一步证实。
本文发现春兰根组织内具有丰富的可分泌IAA 的细菌, 为进一步研究内生细菌与春兰植物之间的相互作用提供了基础资料。
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(责任编委: 东秀珠责任编辑: 时意专)
阅读下文，完成小题。 失根的兰花 陈之藩 ①顾先生一家约我去费城郊区的一个大学里看花。汽车走了一个钟头的样子，到了校园；校园笑得像首诗，也像幅画。依山起伏，古树成荫，绿藤爬满了一幢一幢的小楼，绿草爬满了一片一片的坡地；除了鸟语，没有声音。像一个梦，一个安静的梦。 ②花圃有两片，里面的花，种子是从中国来的。一片是白色的牡丹，一片是白色的雪球；如在海的树丛里，闪烁着如星光的丁香，这些花全是从中国来的呀！由于这些花，我自然而然地想起北平公园里的花花朵朵，与这些简直没有两样；然而，我怎么也不能把童年时的情感再回忆起来。我不知为什么，总觉得这些花不该出现在这里，它们的背景应该是今雨轩，应该是谐趣园，应该是故宫的石阶，或亭阁的栅栏。因为背景变了，花的颜色也褪了，人的情感也弱了，泪，不知为什么流下来。 ③十几岁，就在外面漂流，泪从来也未这样不知不觉地流过。在异乡见过与童年完全相异的东西，也见过完全相同的花草；同也好，不同也好，我总未因异乡事物而想过家。到渭水滨，那水，是我从来没见过的，我只感到新奇，并不感觉陌生；到咸阳城，那城，是我从来没有见过的，我只感觉到它古老，并不感觉伤感。我曾在秦岭捡过与香山上同样红的枫叶，在蜀中我也曾看到与大庙中同样的古松，我也并未因而想起过家。我曾骄傲地说过：“我，到处可以为家。”
④然而，自至美国，情感突然变了；在夜里的梦中，常常是家里的小屋在风雨中坍塌了，或是母亲的头发一根一根地白了；在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西。我这时才恍然悟出，我所谓的到处可以为家，是因为蚕未离开那片桑叶；等到离开国土一步，即到处不可以为家了。 ⑤花搬到美国未，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心；这时候才忆起，故乡土地之芬芳与故乡花草的艳丽。我曾记得，8岁时肩扛小镰刀跟着叔叔下地去割金黄的麦穗，而今这童年的彩色版画，成了我一生中不朽的绘画。 ⑥古人说：“人生如萍”——在水上漂流；那是因为古人未出国门，没有感觉离国之苦，萍还有水可借；以我看：人生如絮，飘零在此万紫千红的春天。 ⑦宋末画家郑思肖画兰，连根带叶均飘于空中。人问其故，他说：“国土沦亡，根着何处？”国，就是根，没有国的人，是没有根的草，不待风雨折磨，即行枯萎了。 ⑧我十几岁就无家可归，并未觉其苦。十几年后，祖国已破，却觉出个中滋味了。不是有人说：“头可断，血可流，身不可辱”吗？我觉得，应该是“身可辱，家可破，国不可忘。” 45．阅读全文，谈谈你对文章标题“失根的兰花”的理解。 46．第②段末尾“泪，不知为什么流下来”，请你联系上下文，分析作者流泪的原因。 47．第④段中画线句中“不爱看与故乡不同的东西”与“不敢看与故
植物生长调节剂3-吲哚乙酸的合成 一、实验目标 1．掌握利用Fe/HCl 体系将-NO2氧化成-NH2的方法； 2．掌握减压蒸馏中真空泵的使用方法； 3．初步掌握利用氮气置换空气的操作方法； 4．初步掌握压热釜的操作方法。 二、产品特性与用途 3-吲哚乙酸的英文名称：3-Indoleacetic acid ，化学式：C10H9NO2，相对分子质量：175.19。 本品为无色结晶，见光后迅速氧化成红色而活性降低，应放在棕色瓶中贮藏。熔点167～169℃，微溶于水、甲苯，易溶于乙酸乙酯。在酸性介质中不稳定，在无机酸作用下能迅速失去活性。其水溶液也不稳定，但其钠、钾盐比游离酸稳定。通常以粉剂或可湿性粉剂使用。 市售3-吲哚乙酸为人工合成产品，其LD50 = 150 mg / kg （小白鼠腹腔注射）。3-吲哚乙酸可以经茎、叶和根系被植物吸收。它对植物生长有刺激作用，可影响细胞分裂、细胞伸长和细胞分化，也影响营养器官和生殖器官的生长、成熟和衰老，可促进植物生根，提高产量，是一种植物生根调节剂。当用于插枝生根的木本植物、草本植物时，可以加速根的形成；当用于处理甜菜种子时，可提高块茎产量与含糖率，也可以促进胡萝卜的生长。 吲哚乙酸由于见光容易分解，在植物体内容易被吲哚乙酸氧化酶分解，并且价格较贵，所以在生产上应用受到限制，主要用于组织培养，诱导愈伤组织和根的形成。 三、实验原理 1．邻甲苯胺的合成 2．N-甲酰基邻甲苯胺的合成 3．吲哚的合成 4．3-吲哚乙酸的合成 CH 3NO 2Fe H-Cl CH 3 NH 2 CH 3NH 2HCOOH CH 3 NHCHO H -OH CH 3NHCHO ( t - C H ) OK N H CH 3 NH 2CO
重点题型1探究不同浓度吲哚乙酸对插条生根的影响 1.实验原理 适宜浓度的生长素类似物(如NAA、2，4－D等)可以促使扦插枝条基部薄壁组织细胞恢复分裂能力，产生愈伤组织，长出大量不定根。 2.实验流程 (1)扦插枝条的选取：一般选取生长旺盛的一年生插条。枝条上保留少量的幼叶和芽，原因是幼叶和芽产生的生长素促进插条生根。 (2)处理部位：插条的形态学下端。 (3)处理方法： ①浸泡法：要求药液溶液浓度较低。 ②沾蘸法：要求药液溶液浓度较高。 (4)分组设置 ①设置重复组，即每组不能少于3根枝条。 ②设置对照组，预实验中蒸馏水空白对照；设置浓度不同的几个实验组作为相互对照，正式实验中，可不设空白对照。 (5)分析结果，得出结论。统计各组的平均生根条数或平均长度，最多或最长的一组所对应的浓度为生长素类似物的最适浓度。 1.探讨进行科学研究时，为什么在正式实验前要做预实验？ 提示既可以为进一步的实验摸索条件，也可以检验实验设计的科学性和可行性，以免由于设计不周，盲目开展实验而造成人力、物力和财力的浪费。
2.请指出本实验的自变量、因变量及无关变量依次是什么？ 提示(1)注意区分本实验的三个变量 ①自变量：生长素类似物(如2，4－D溶液)的浓度。 ②因变量：插条生根的数量(或长度)。 ③无关变量：处理溶液剂量、温度、光照及选用相同的花盆、相同的植物材料，插条的生理状况、带有的芽数相同，插条处理的时间长短一致等。 3.在实验中，若两种浓度的生长素类似物促进插条生根效果基本相同，请分析原因。如何进一步确定最适浓度？ 提示由生长素作用曲线可知，存在作用效果相同的两种生长素浓度。最适浓度应在作用效果相同的两种浓度之间，即在两种浓度之间再设置一系列浓度梯度的生长素类似物溶液进行实验，如图所示： 【例证1】(2018·经典高考)如图为一种植物扦插枝条经不同浓度IAA浸泡30 min 后的生根结果(新生根粗细相近)，对照组为不加IAA的清水。下列叙述正确的是() A.对照组生根数量少是因为枝条中没有IAA B.四组实验中，300 mg/L IAA诱导茎细胞分化出根原基最有效 C.100与300 mg/L IAA处理获得的根生物量相近 D.本实验结果体现了IAA对根生长作用的两重性
《失根的兰花》阅读附答案 失根的兰花 顾先生一家约我去费城郊区的一个大学里看花。汽车走了一个钟头的样子，到了校园；校园美得像首诗，也像幅画。依山起伏，古树成荫，绿藤爬满了一幢一幢的小楼，绿草爬满了一片一片的坡地；除了鸟语，没有声音。像一个梦，一个安静的梦。 花圃有两片，里面的花，种于是从中国来的。一片是白色的牡丹，一片是白色的雪球；如在海的树丛里，闪烁着如星光的丁香，这些花全是从中国来的呀!由于这些花，我自然而然地想起北平公园里的花花朵朵，与这些简直没有两样；然而，我怎么也不能把童年时的情感再回忆起来。我不知为什么，总觉得这些花不该出现在这里，它们的背景应该是今雨轩，应该是谐趣固，应该是故宫的石阶，或亭阁的栅栏。因为背景变了，花的颜色也褪了，人的情感也弱了，泪，不知为什么流下来。 十几岁，就在外面漂流，泪从来也未这样不知不觉地流过。在异乡见过与童年完全相异的东西，也见过完全相同的花草；同也好，不同也好，我总未因异乡事物而想过家。到渭水滨，那水，是我从来没见过的，我只感到新奇，并不感觉陌生；到咸阳城，那城，是我从来没有见过的，我只感觉到它古老，并不感觉伤感。我曾在秦岭捡过与香山上同样红的枫叶，在蜀中我也曾看到与大庙中同样的古松，我也并未因而想起过家。我曾骄傲地说过：“我，到处可以为家。” 然而，自至美国，情感突然变了。在夜里的梦中，常常是家里的小屋在风雨中坍塌了，或是母亲的头发一根一根地白了；在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西。我这时才恍然悟歪，我所谓的到处可以为家，是因为蚕未离开那片桑叶；等到离开国土一步，即到处不可以为家了。 花搬到美国来，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心；这时候才忆起，故乡土地之芬芳与故乡花苹的艳丽。我曾记得，8岁时肩扛小镰刀跟着叔叔下地去割金黄的麦穗，而今这童年的彩色版画，成了我一生中不朽的绘画。 古人说：“人生如萍”——在水上漂流；那是因为古人未出国门，没有感觉离国之苦，萍还有水可借；以我看：人生如絮，飘零在此万紫千红的春天。 宋末画家郑思肖画兰，连根带叶均飘于空中。人问其故，他说：“国土沦亡，根着何处?”国，就是根，没有国的人，是没有根的草，不待风雨折磨，即行枯萎了。 我十几岁就无家可归，并未觉其苦。十几年后，祖国已破，却觉出个中滋味了。不是有人说：“（甲）头可断，血可流，身不可辱”吗?我觉得，应该是“（乙）身可辱，家可破，国不可忘”。 1．本文以“失根的兰花”为题，你能理解作者的用意吗？ 2．十几岁在外面漂流，我曾骄傲地说“我，到处可以为家”，而到了美国，却经常“泪，不知为什么流下来”，原因是什么？（用原句回答）3．仿造例句，用比喻句写出你对人生的感悟。 例句：人生如絮，飘零在此万紫千红的春天。 4．甲句中说“身不可辱”，而乙句说“身可辱”，这两种说法矛盾吗？为什
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
失根的兰花 ①顾先生一家约我去费城郊区的一个大学里看花。汽车走了一个钟头的样子，到了校园；校园美得像首诗，也像幅画。依山起伏，古树成荫，绿藤爬满了一幢一幢的小楼，绿草爬满了一片一片的坡地；除了鸟语，没有声音。像一个梦，一个安静的梦。 ②花圃有两片，里面的花，种子是从中国来的。一片是白色的牡丹，一片是白色的雪球；在如海的树丛里，闪烁着如星光的丁香，这些花全是从中国来的呀! 由于这些花，我自然而然地想起北平公园里的花花朵朵，与这些简直没有两样；然而，我怎么也不能把童年时的情感再回忆起来。我不知为什么，总觉得这些花不该出现在这里，它们的背景应该是今雨轩，应该是谐趣园，应该是故宫的石阶，或亭阁的栅栏。因为背景变了，花的颜色也褪了，人的情感也弱了，泪，不知为什么流下来。. ③十几岁，就在外面漂流，泪从来也未这样不知不觉地流过。在异乡见过与童年完全相异的东西，也见过完全相同的花草；同也好，不同也好，我总未因异乡事物而想过家。到渭水滨，那水，是我从来没见过的，我只感到新奇，并不感觉陌生；到咸阳城，那城，是我从来没有见过的，我只感觉到它古老，并不感觉伤感。我曾在秦岭捡过与香山上同样红的枫叶，在蜀中我也曾看到与大庙中同样的古松，我也并未因而想起过家。我曾骄傲地说过：“我，到处可以为家。” ④然而，自至美国，情感突然变了；在夜里的梦中，常常是家里的小屋在风雨中坍塌了，或是母亲的头发一根一根地白了；在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西。我这时才恍然悟出，我所谓的到处可以为家，是因为蚕未离开那片桑叶；等到离开国土一步，即到处不可以为家了。 ⑤花搬到美国来，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心；这时候才忆起，故乡土地之芬芳与故乡花草的艳丽。我曾记得，8岁时肩扛小镰刀跟着叔叔下地去割金黄的麦穗，而今这童年的彩色版画，成了我一生中不朽的绘画。 ⑥在沁凉如水的夏夜中，有牛郎织女的故事，才显得星光晶亮；在群山万壑中，有竹篱茅舍，才显得诗意盎然；在晨曦的原野中，有拙重的老牛，才显得纯朴可爱。祖国的山河，不仅是花木，还有可感可泣的故事，可吟可咏的诗歌，是儿童的喧哗笑语与祖宗的静肃墓庐，把它点缀得美丽了。 ⑦古人说：“人生如萍”——在水上漂流；那是因为古人未出国门，没有感觉离国之苦，萍还有水可借；以我看：人生如絮，飘零在此万紫千红的春天。 ⑧宋末画家郑思肖画兰，连根带叶均飘于空中。人问其故，他说：“国土沦亡，根着何处?”国，就是根，没有国的人，是没有根的草，不待风雨折磨，即自行枯萎了。
吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理 1、吲哚乙酸产品概述: 吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。 2、试验原理: 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 二、准备仪器及药品 T6新悦型分光光度计离心机 恒温水浴锅天平 研钵试管 移液管烧杯 20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。
1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。 1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。 22 1mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约 90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。 吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一): 试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。用时1ml样品中加入试剂4ml。 试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。用时于样品中加入试剂。试剂B较试剂A灵敏。 三、操作步骤 1(将大豆或绿豆种子于30?温箱中萌发3梍4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶，留下胚轴作材料。 2(取0.5g下胚轴，置研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液5ml，置冰浴中研磨成匀浆。再按100mg鲜重材料加0.5ml磷酸缓冲液的比例，用磷酸缓冲液洗涤研钵。离心(4000r/min)10分钟，所得上清液即为粗酶液。 3(取试管2支，于一试管中加入氯化锰1ml，二氯酚1ml，IAA2ml，酶液1ml，磷酸缓冲液5ml，混合均匀。另一试管中除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。一起置于30?恒温水浴中，保温30分钟。 IAA(175ug磷酸缓冲液处理 MnCl2 2、4-二氯酶液 /mL) (pH6.0) 酚 实验组 1 1 2 1 5 对照组 1 1 2 0 6 4(吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂B 4ml，摇匀，置于30?的黑暗处保温30分钟，使显色。
经典化学合成反应标准操作 吲哚的合成
目录 2. Fischer 吲哚合成 (2) 2.1 Fischer 吲哚合成反应示例 (2) 3. 从硝基苯的衍生物出发合成吲哚 (3) 3.1 邻甲基硝基苯衍生物合成吲哚 (4) 3.1.1 邻甲基硝基苯衍生物合成吲哚示例 (4) 3.2 邻甲酰基硝基苯衍生物合成吲哚 (4) 3.1.2 邻甲酰基硝基苯衍生物合成吲哚示例 (5) 3.3 邻氰甲酰基硝基苯衍生物合成吲哚示例 (5) 3.4 邻乙烯基硝基苯衍生物合成吲哚示例 (6) 3.5 邻位有氢的硝基苯衍生物直接用乙烯格氏试剂合成吲哚（Bartoli反应）示例7 4. 从苯胺的衍生物出发合成吲哚 (7) 4.1苯胺经佛克烷基化再还原关环合成吲哚 (7) 4.2 N-羟基苯胺DMAP催化下与丙炔酸酯缩合合成3-羧酸吲哚衍生物 (9) 4.3 Nenitzescu吲哚合成 (9) 5. 2-叠氮基-3-芳基丙烯酸酯环合合成2-羧酸吲哚衍生物 (10) 5.1 2-叠氮基-3-芳基丙烯酸酯环合合成2-羧酸吲哚衍生物示例 (11)
1. Introduction 吲哚及其衍生物是一类非常有效的药物中间体。已有不少相关综述报道其合成方法 1 。我们将一些常用的合成方法简单的列举了出来，供大家在合成此类化合物的时候参 考。 1 (a) G. W. Gribble, Contemp. Org. Synth., 1994, 145. (b) U. Pindur and R. Adam, J. Heterocycl. Chem., 1988, 25, 1. (c) C. J. Moody, Synlett , 1994, 681. (d) R. J. Sundberg, Indoles , Academic Press, San Diego, CA, 1996. (e) T. L. Gilchrist , J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1999, 2849. (f) G. W. Gribble, J. Chem. Soc ., Perkin Trans. 1, 2000, 1045. 2. Fischer 吲哚合成 Fischer 吲哚合成法是一个常见的吲哚合成方法。通过苯腙在酸催化下加热重排消除一分子氨得到2－取代或3－取代吲哚衍生物。在实际操作中，常可以用醛或酮与等当量的苯肼在酸中加热回流得到苯腙，其在酸催化下立即进行重排、消除氨而得到吲哚化合物。常用的催化剂有氯化锌、三氟化硼、多聚磷酸等，常用的酸有AcOH ， HCl, 三氟乙酸等。其机理大致如下： N H N R'R H + H 2H R N +R' NH 2H H N H R R' 2.1 Fischer 吲哚合成反应示例 Br NHNH 2.HCl + O N H Br 1 23 4-Bromophenylhydrazine hydrochloride 1 (21 g) was suspended in 150 mL of acetic acid, and the mixture was heated to reflux. Then a solution of cyclohexanone 2 (9.3 mL) in 10 mL of
小升初阅读专练 失根的兰花 ①顾先生一家约我去费城郊区的一个大学里看花。汽车走了一个钟头的样子，到了校园；校园美得像首诗，也像幅画。依山起伏，古树成荫，绿藤爬满了一幢一幢的小楼，绿草爬满了一片一片的坡地；除了鸟语，没有声音。像一个梦，一个安静的梦。 ②花圃有两片，里面的花，种子是从中国来的。一片是白色的牡丹，一片是白色的雪球；在如海的树丛里，闪烁着如星光的丁香，这些花全是从中国来的呀! 由于这些花，我自然而然地想起北平公园里的花花朵朵，与这些简直没有两样；然而，我怎么也不能把童年时的情感再回忆起来。我不知为什么，总觉得这些花不该出现在这里，它们的背景应该是今雨轩，应该是谐趣园，应该是故宫的石阶，或亭阁的栅栏。因为背景变了，花的颜色也褪了，人的情感也弱了，泪，不知为什么流下来。 ③十几岁，就在外面漂流，泪从来也未这样不知不觉地流过。在异乡见过与童年完全相异的东西，也见过完全相同的花草；同也好，不同也好，我总未因异乡事物而想过家。到渭水滨，那水，是我从来没见过的，我只感到新奇，并不感觉陌生；到咸阳城，那城，是我从来没有见过的，我只感觉到它古老，并不感觉伤感。我曾在秦岭捡过与香山上同样红的枫叶，在蜀中我也曾看到与大庙中同样的古松，我也并未因而想起过家。我曾骄傲地说过：“我，到处可以为家。” ④然而，自至美国，情感突然变了；在夜里的梦中，常常是家里的小屋在风雨中坍塌了，或是母亲的头发一根一根地白了；在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西。我这时才恍然悟出，我所谓的到处可以为家，是因为蚕未离开那片桑叶；等到离开国土一步，即到处不可以为家了。 ⑤花搬到美国来，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心；这时候才忆起，故乡土地之芬芳与故乡花草的艳丽。我曾记得，8岁时肩扛小镰刀跟着叔叔下地去割金黄的麦穗，而今这童年的彩色版画，成了我一生中不朽的绘画。
失根的兰花①顾先生一家约我去费城郊区的一个大学里看花。汽车走了一个钟头的样子，到了校园；校园美得像首诗，也像幅画。依山起伏，古树成荫，绿藤爬满了一幢一幢的小楼，绿草爬满了一片一片的坡地；除了鸟语，没有声音。像一个梦，一个安静的梦。②花圃有两片，里面的花，种子是从中国来的。一片是白色的牡丹，一片是白色的雪球；在如海的树丛里，闪烁着如星光的丁香，这些花全是从中国来的呀! 由于这些花，我自然而然地想起北平公园里的花花朵朵，与这些简直没有两样；然而，我怎么也不能把童年时的情感再回忆起来。我不知为什么，总觉得这些花不该出现在这里，它们的背景应该是今雨轩，应该是谐趣园，应该是故宫的石阶，或亭阁的栅栏。因为背景变了，花的颜色也褪了，人的情感也弱了，泪，不知为什么流下来。③十几岁，就在外面漂流，泪从来也未这样不知不觉地流过。在异乡见过与童年完全相异的东西，也见过完全相同的花草；同也好，不同也好，我总未因异乡事物而想过家。到渭水滨，那水，是我从来没见过的，我只感到新奇，并不感觉陌生；到咸阳城，那城，是我从来没有见过的，我只感觉到它古老，并不感觉伤感。我曾在秦岭捡过与香山上同样红的枫叶，在蜀中我也曾看到与大庙中同样的古松，我也并未因而想起过家。我曾骄傲地说过：“我，到处可以为家。”④然而，自至美国，情感突然变了；在夜里的梦中，常常是家里的小屋在风雨中坍塌了，或是母亲的头发一根一根地白了；在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西。我这时才恍然悟出，我所谓的到处可以为家，是因为蚕未离开那片桑叶；等到离开国土一步，即到处不可以为家了。⑤花搬到美国来，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心；这时候才忆起，故乡土地之芬芳与故乡花草的艳丽。我曾记得，8岁时肩扛小镰刀跟着叔叔下地去割金黄的麦穗，而今这童年的彩色版画，成了我一生中不朽的绘画。⑥在沁凉如水的夏夜中，有牛郎织女的故事，才显得星光晶亮；在群山万壑中，有竹篱茅舍，才显得诗意盎然；在晨曦的原野中，有拙重的老牛，才显得纯朴可爱。祖国的山河，不仅是花木，还有可感可泣的故事，可吟可咏的诗歌，是儿童的喧哗笑语与祖宗的静肃墓庐，把它点缀得美丽了。 ⑦古人说：“人生如萍”——在水上漂流；那是因为古人未出国门，没有感觉离国之苦，萍还有水可借；以我看：人生如絮，飘零在此万紫千红的春天。⑧宋末画家郑思肖画兰，连根带叶均飘于空中。人问其故，他说：“国土沦亡，根着何处?”国，就是根，没有国的人，是没有根的草，不待风雨折磨，即自行枯萎了。⑨我十几岁就无家可归，并未觉其苦。以后，祖国已破，觉出个中滋味了。不是有人说：“头可断，血可流，身不可辱”吗?我觉得，应该是“身可辱，家可破，国不可忘。”作者陈之藩选自《读者》有删改 【注】①陈之藩，科学家，散文家。河北霸县人。1924年生，国立北洋大学机电工程系毕业，获美国宾夕法尼亚大学科学硕士、英国剑桥大学哲学博士。②郑思肖(1238-1317)，宋朝末年著名的诗人、画家，福建省连江县人。 １．写出与第⑨段中“头可断，血可流，身不可辱”意思相同的一个成语士可杀不可辱。2．第⑤段中加点的“彩色版画”是指（Ｂ）。A．回忆中的童年生活B．回忆中的8岁时跟叔叔割麦的情景C．童年时绘制的8岁时跟叔叔割麦的情景的彩色版画D．成年后绘制的 8岁时跟叔叔割麦的情景的彩色版画３．第④段画线句“在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西”，这种说法矛盾吗？说说你的理解。 不矛盾。作者虽身处异国，渴望见到故乡的种种，所以“不爱看与故乡不同的东西”，但真的见到又会勾起对祖国无限的思念，感情难以承受，所以又说“不敢看与故乡相同的东西”，这样的说法表达了漂泊在外的游子对深爱着的祖国刻骨铭心而又无法排遣的思念之情。
初一语文阅读训练 命题人：马永志审核人：张玉兰 现代文阅读： 今天就开始 这是一个萧瑟多雨的天气。在这种日子里，我只想赖在家中，一点儿不愿意出门。但是女儿凯罗琳打来电话，坚持要我开车上山去她家看风景。多少年来，为了“生态”、“环保”，她将自己交给了大自然，难得今天想得到我。 开了2小时的车子，穿过厚重的浓雾到了她家。一进门，我就对她说：“这种时候出门，一点也不值得。吃了中饭，就回家吧。” “但是我想让您开车带我去汽车修理厂取我的车子。”凯罗琳说。 “有多远?”我问。 “大约三分钟的路程吧，”她说，“咱们走吧!我来开车。” 在山路上行驶了约十分钟后，我着急地望着她说：“不是说只需三分钟吗?” 她顽皮地朝我笑笑：“我们绕了远道。” 不一会，汽车拐进一条小路，我们停下车沿着山间的小道往前步行。小路旁茂盛的冬青下长满了各式野花，姹紫嫣红。立即，一种宁静舒坦的感受充满我的心间。我们转了个弯，我更被眼前的景致镇住了，全然忘了急着回家的想法。 沿着山顶往下，几亩鲜花似一床绚丽多彩的绒毯斜铺在山坡，五彩缤纷的花儿——从淡淡的象牙红到令人心醉的柠檬黄、鲜艳的橙红——展现在我们眼前的这幅绒毯在浓雾过后的阳光下显得如此娇艳，如此令人赏心悦目。 我们在花间穿行，这儿是紫色的风信子，那儿是珊瑚色的郁金香，然而更美的要算那一大片象征着鸿运高照的鲜黄色的水仙，她们在蓝宝石般的燕尾花上颤动着晶莹透彻的羽翼。 我的脑海中立即闪现出一个问题：“是谁，又是如何创造出这幅美丽的图画?” 当我们走到花木拥抱的那间小屋前，我的疑问得到了解答。小屋前竖立着一块小木板，上面有几行字：“亲爱的客人，我知道你想问什么：第一，一位女士有两只手两条腿和一个对生活充满渴望的头脑；第二，立即动手；第三，开始于1958年。” 回到家早已过了午后，可我被刚才所亲眼看到的深深地感动着：“从开垦土地、育种开始，差不多40年，她坚持了，多么难能可贵啊。” 吃完午饭，我的心情还不能平静。“如果”我说，“我每天干点儿，我能坚持吗？” 似乎凯罗琳在眼前，她充满信心地看着我：“明天就开始。”“为什么不今天就开始呢？”我卷起衣袖说。 1. 文章题目“今天就开始”的含义是什么？ _________________________________________________________________________________ 2. 文章中说，当“我”来到花木拥抱的小屋前，“我的疑问得到了解答”。那么“我的疑问”是什么？“得到解答”的答案又是什么？ __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ 3. 文中写沿路的景色的作用是什么？ __________________________________________________________________________________ 4. 文章说：“从开垦土地、育种开始，差不多40年，她坚持了。”凯罗琳为什么要这样做？__________________________________________________________________________________
生长素 29.（16分） 向光性是高等植物中广泛存在的生理现象，是植物适应环境变化的一种体现。研究表明，单侧光照射下水稻的根会发生背光弯曲即“负向光性”。为研究IAA对水稻根负向光性运动的影响及有关作用机理，研究人员进行了相关的实验。 （1）已知Ca2+作为信号分子，在植物的多种信号转导及生长发育过程中起着重要的作用。为探究Ca2+是否会影响稻根中IAA的分布，研究人员用加入H2O、CaCl2溶液、LaCl2溶液（Ca2+通道阻断剂）以及后两者混合液的四组培养液分别培养水稻秧苗刚长出的根，在单侧光的照射24h后，四组稻根均出现负向光性，每组根中IAA的分布结果如下图。 由结果可知，在单侧光照下对照组中IAA的分布情况是，而Ca2+作为信号分子。与对照组相比，后两组实验的结果表明Ca2+能，从而进一步证明Ca2+在根负向光性运动中对IAA 分布的影响。 （2）目前已知cpt1基因编码的CPT1蛋白是水稻胚芽鞘向光性运动过程中IAA横向运输的重要载体。为探究cpt1基因是否与水稻根负向光性运动有关，研究人员对水稻秧苗刚长出的根分别进行不同处理，24h后测量稻根弯曲度（处理条件及结果见下表）。同时研究人员还测定了各组稻根中cpt1基因表达量（结果如下图）。 上图中的1～4表示黑暗条件下cpt1基因的表达量，7表示H2O处理组的表达量，5、6、8应分别是处理的结果。由此可知，外源施加的四种试剂对稻根中cpt1 基因表达量的影响与它们对稻根弯曲度的影响是一致的。在此实验结果基础上，并结合科研人员测定的单侧光照下cpt1 基因缺失突变体水稻根的向光侧和背光侧IAA均匀分布这一事实，推测CPT1蛋白在根中也是。 （3）综合上述实验结果推测，在Ca2+信号作用下，单侧光照射下水稻根内的IAA通过 ，导致IAA在向光侧与背光侧分布不均匀；由于根对IAA浓度，使得两侧的生长速度表现为，
β-EP，骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒 种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊； 标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水等等； β-EP，骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒 样本保存：保存的话看取样周期到检测有多长，如果在1个礼拜内，2-8摄氏度，如果在1个礼拜以上1个月以内-20 保存，如果1个月以上-80保存；单纯的全血不能冻存。 操作程序总结： 1、准备试剂，样品和标准品 2、加入准备好的样品和标准品，37度反应30分钟 3、洗板5次，加入酶标试剂，37度反应30分钟 4、洗板5次，加入显色液AB，37度显色10分钟 5、加入终止液 6、15分钟内读OD值 7、计算 定量分析实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β内啡肽(β-EP)水平。用纯化的β内啡肽(β-EP)抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入β内啡肽(β-EP)，再与HRP标记的β内啡肽(β-EP)抗原结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β内啡肽(β-EP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算 样品中β内啡肽(β-EP)浓度。 β-EP，骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒研究范围涉及分子生物学、免疫学、生命科学基础研究等多个领域。其规格：96T可用做84个标本，12个标准曲线或48T可用做42个标本，6个标准曲线。可检测多做类型标本，如：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等（标本均为液体，固态标本应先转化成液态）。 骆驼β内啡肽试剂盒组成:
部编人教版七年级下册语文课外阅读理解含答案 一、部编版七年级语文下册阅读理解训练 1．阅读下面文章，回答后面小题 失根的兰花 陈之藩 ①顾先生一家约我去费城郊区的一个大学里看花。汽车走了一个钟头的样子，到了校园；校园笑得像首诗，也像幅画。依山起伏，古树成荫，绿藤爬满了一幢一幢的小楼，绿草爬满了一片一片的坡地；除了鸟语，没有声音。像一个梦，一个安静的梦。 ②花圃有两片，里面的花，种子是从中国来的。一片是白色的牡丹，一片是白色的雪球；如在海的树丛里，闪烁着如星光的丁香，这些花全是从中国来的呀！由于这些花，我自然而然地想起北平公园里的花花朵朵，与这些简直没有两样；然而，我怎么也不能把童年时的情感再回忆起来。我不知为什么，总觉得这些花不该出现在这里，它们的背景应该是今雨轩，应该是谐趣园，应该是故宫的石阶，或亭阁的栅栏。因为背景变了，花的颜色也褪了，人的情感也弱了，泪，不知为什么流下来。 ③十几岁，就在外面漂流，泪从来也未这样不知不觉地流过。在异乡见过与童年完全相异的东西，也见过完全相同的花草；同也好，不同也好，我总未因异乡事物而想过家。到渭水滨，那水，是我从来没见过的，我只感到新奇，并不感觉陌生；到咸阳城，那城，是我从来没有见过的，我只感觉到它古老，并不感觉伤感。我曾在秦岭捡过与香山上同样红的枫叶，在蜀中我也曾看到与大庙中同样的古松，我也并未因而想起过家。我曾骄傲地说过：“我，到处可以为家。” ④然而，自至美国，情感突然变了；在夜里的梦中，常常是家里的小屋在风雨中坍塌了，或是母亲的头发一根一根地白了；在白天的生活中，常常是不爱看与故乡不同的东西，而又不敢看与故乡相同的东西。我这时才恍然悟出，我所谓的到处可以为家，是因为蚕未离开那片桑叶；等到离开国土一步，即到处不可以为家了。 ⑤花搬到美国未，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心；这时候才忆起，故乡土地之芬芳与故乡花草的艳丽。我曾记得，8岁时肩扛小镰刀跟着叔叔下地去割金黄的麦穗，而今这童年的彩色版画，成了我一生中不朽的绘画。 ⑥古人说：“人生如萍”——在水上漂流；那是因为古人未出国门，没有感觉离国之苦，萍还有水可借；以我看：人生如絮，飘零在此万紫千红的春天。 ⑦宋末画家郑思肖画兰，连根带叶均飘于空中。人问其故，他说：“国土沦亡，根着何处？”国，就是根，没有国的人，是没有根的草，不待风雨折磨，即行枯萎了。 ⑧我十几岁就无家可归，并未觉其苦。十几年后，祖国已破，却觉出个中滋味了。不是有人说：“头可断，血可流，身不可辱”吗？我觉得，应该是“身可辱，家可破，国不可忘。” （1）阅读全文，谈谈你对文章标题“失根的兰花”的理解。 （2）“花搬到美国未，我们看着不顺眼；人搬到美国来，也是同样不安心”与哪句话相照应？ （3）第②段末尾“泪，不知为什么流下来”，请你联系上下文，分析作者流泪的原因。（4）第④段中画线句中“不爱看与故乡不同的东西”与“不敢看与故乡相同的东西”这种说法
植物生理学模块实验指导 李玲主编 科学出版社 吲哚乙酸氧化酶的测定方法 【实验目的】 学习用比色皿法测定吲哚乙酸氧化酶 【实验原理】 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶懂得作用下，被氧化破坏失去活性。吲哚乙酸氧化酶活力的大小可通过其破坏吲哚乙酸的速度表示，用比色法测定吲哚乙酸的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 分光光度计、离心机、恒温水浴锅、天平、研钵、试管、移液管、烧杯 2.实验试剂 1mmol/L 2,4-二氯酚：称取16.3mg 2,4-二氯酚，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 1 mmol/L氯化锰：称取19.8mg MnCl2·4H2O，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 1 mmol/L吲哚乙酸：称取17.5mg IAA，用少量乙醇溶解，用蒸馏水定容至100ml。 吲哚乙酸试剂：10ml 0.5 mol/L FeCl3，500ml 35% 过氯酸，使用前混合即可，不光保存。用时将1ml样品加入2ml试剂。 20 mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0） 3.实验材料 同过氧化氢酶 【实验步骤】
1. 称取植物组织材料鲜重1.0g，置于研钵中，加5ml预冷的磷酸缓冲液研磨成匀浆，再加入1ml磷酸缓冲液稀释，4000r/min离心20min，上清液为粗酶提取液。 2. 取试管2支，于1支试管中加入氯化锰1ml、2,4-二氯酚1ml、IAA2ml、粗酶提取物1ml、磷酸缓冲液5ml，混合。 3. 吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂4ml，摇晕。在黑暗条件下，置于30℃恒温水浴中20min，使显色。 4. 将显色的反应液与分光光度计中测定530nm处的OD值。根据读数从标准曲线上查出相应的吲哚乙酸残留量。 5. 配制浓度从0~30μg/ml的吲哚乙酸浓度，按照上述方法，分别测定OD值，绘制标准曲线或计算直线回归方程。 【实验报告】 按照下列公式，计算不同处理的材料吲哚乙酸氧化酶的活力（μg IAA/g鲜重·h）。 式中，C1为反应液中残留的酶IAA量（μg/ml）；C2为无酶提取液中的IAA量（μg/ml）；V1为样品制得的粗酶提取液体积（ml）；V为反应液中粗酶提取物体积（ml）；W为测试材料鲜重（g）；t为反应时间；10为反应液体积（ml）。 【注意事项】 制作标准曲线时，OD值在0.2~0.6时，测量的误差最小，所以当反应液浓度测定的OD 值大于0.6且接近1时，需要稀释后才能进行测定。 【思考题】 反应混合液与吲哚乙酸试剂混合后，为什么要在暗条件下对IAA进行显色反应？
吲哚乙酸的运输详解 植物激素特点之一是可以广泛地在植物体内各组织和器官内移动，运输是一种天然的调节特定组织或器官内活性激素水平的手段。 游离态IAA具有极性运输的特点，在植物胚芽鞘、幼茎及幼根中，形态学上端的IAA 只能运向形态学下端，这种现象称为极性运输(po1ar transport)。IAA极性运输是由某些载体介导的主动运输。呼吸链抑制剂氰化物和解偶联剂DNP均能抑制IAA极性运输，说明IAA 极性运输需要有氧呼吸提供能量。另外，植物组织对放射性IAA的吸收受到非放射性IAA 的部分抑制，说明放射性标记与非标记的IAA竞争数量有限的载体位点。 Goldsmith(1977)提出了“化学渗透极性扩散假说(chemiosmotic polar diffusion hypothesis)” （图8-4，见e DH08-04）。该假说认为：位于某个细胞基部的IAA输出载体从细胞内单向输出IAA-，IAA-进入细胞壁空间后即被质子化为IAAH，IAAH扩散通过细胞膜，顺着其浓度梯度进入其下部相邻的细胞内。由于细胞质的pH约为7.2，IAAH进入到细胞质后，几乎所有的都被解离成阴离子IAA-的形式。IAA-不能扩散通过细胞膜，只能依靠输出载体输送至细胞壁空间。按此规律，IAA顺序通过纵向排列的细胞柱向形态学下端运输。在此过程中，位于质膜上的H+-ATPase不断地将H+从胞内泵出，以防止H+在胞内积累，并维持细胞壁酸性环境和适宜的跨膜电势梯度，以提供能量。 现已清楚，IAA-也可通过载体介导的2H+-IAA-同向共运输体进入，质膜上一个小的AUX1/LAX透酶家族是生长素的输入载体，可同时转运2个质子和IAA-同向进入细胞质。PIN家族是IAA的输出载体。 在拟南芥中，存在8个基因编码PIN蛋白，研究表明PIN1、PIN2 、PIN3 、PIN4 和PIN7 都参与了生长素极性运输，它们介导不同组织的生长素输出。PIN1是发现最早的，也是主要负责生长素的从茎顶端向根尖的极性运输。最近几年研究者还发现另外一种依赖ATP 的转运蛋白参与生长素的极性运输，它们属于多种药物抗性/ 磷酸糖蛋白家族(multidrug resistance/ P-glycoprotein，MDR/ PGP)，或ATP 结合盒(ATP-binding cassette ,ABC) 转运蛋白超级家族中的“B”亚家族（ABCB）。ABCB基因发生缺陷的拟南芥和玉米植株均表现为不同程度的矮小，改变向地性，并且生长素的输出减少。它们均匀地分布在质膜上，驱动生长素的依赖ATP的输出，PINs协同ABCBs调控生长素的极性运输。 某些化合物能够专一地抑制IAA极性运输，如2,3,5-三碘苯甲酸(TIBA, 2,3,5-triiodobenzoic acid)、9-羟基氟-9-羧酸(HFCA, 9-hydroxyfluorine-9-carboxylic acid, 又叫形态素)和N-1-萘基邻氨甲酰苯甲酸(NPA, N-1-naphthylphthalamic acid)。TIBA及NPA通过阻止生长素外流而阻止生长素的极性运输。它们的抑制作用均为非竞争性的，说明它们与IAA在输出载体上占有不同的位置，它们与载体的结合引起载体蛋白构型发生改变，抑制载体对IAA输出。
吲哚一词来源于印度的英文单词（India ）：在十六世纪从印度进口的蓝色染料被称作靛篮。将此染料化学降解可得到氧化的吲哚－吲哚酚和羟基吲哚。吲哚在1866年通过在锌粉作用下蒸馏羟基吲哚第一次被制备出来。 吲哚可能是自然界中分布最广的杂环化合物。色氨酸是必需的氨基酸，也是大多数蛋白质的组成部分。它还可作为各种色胺、吲哚和2，3－二氢吲哚的生物合成前体。 2 N NH 2 在动物中，存在于血液中的5－羟基色胺（5－HT ）是中枢神经系统中非常重要的神经递质，在心血管和胃肠道中也起很大作用。结构类似的激素褪黑素被认为能控制生理功能的昼夜节律。 N NH 2 O H N H NHAc CH 3O 植物王国中色胺酸衍生物包括3－吲哚基乙酸，它是一种有效的植物生长调节激素；以及大量不同结构的二级代谢产物－吲哚类生物碱，这一类化合物由于其有效的生理活性被广泛作为药物使用。 吲哚的结构单元也大量出现在许多人工合成的药物中，如具有消炎镇痛作用的环氧酶抑制剂吲哚美辛，止吐作用的5－HT 3受体拮抗剂昂丹司琼等。 N CH 3CH 3O O Cl COOH N H O N N Me 由于吲哚在天然产物全合成和药物合成中的重要性，有机合成领域不断有大量关于吲哚环的全新合成方法和改进方法出现，已经形成了一个相当系统的合成框架，以下是一些目前可行的最重要的合成方法及示例。 1．通过醛和酮的苯腙的制备方法 （1） Fischer 合成法
Fischer吲哚合成法发明于1883年，利用苯腙在酸或Lewis酸催化下通过重排反应，亲核关环，再消除氨而形成吲哚环 N H N CH 3 Ph N H Ph 1 事实上，有时将醛或酮与苯肼在乙酸中一起加热即可发生“一锅煮”的反应2，生成的苯腙可不经分离直接发生重排反应。甲基苯磺酸、阳离子交换树脂及三氯化磷都可有效地催化环化反应，有时在室温或更低的温度下反应也可进行3。苯环上的供电基能提高Fischer环化反应的速率，而吸电基则降低反应速率。但带有硝基的苯腙在合适的酸和反应条件下也可较好地发生反应，如甲苯与多聚磷酸的两相混合物4或三氟化硼的乙酸溶液5。多步Fischer反应的详细机理仍不能完全确定，但有一点可以肯定的是，最重要的一步碳碳键形成的反应是与Claisen 重排类似的电环化反应。 （2）Grandberg合成法 NHNH 2 Cl O EtOH/H 2 O,Reflux N H NH 2 6 2．通过邻－（2－氧代烷基）苯胺的制备方法（1）Reissert合成法 CH 3 NO 2(EtO C)/KOEt 2NO2 OK COOEt H/Pd N H COOEt 7 （2）Leimgruber-Batcho合成法 Leimgruber-Batcho合成法8是最广泛使用的新方法之一，其主要是利用芳环硝基邻位或吡啶α，β位9甲基的酸性与作为“一碳单位”的烯胺缩合而引入吲哚α-碳。该方法首先将邻硝基甲苯结构的底物与二甲基甲酰胺二甲缩醛（DMF-DMA）在DMF中加热回流（无须加碱）缩合形成烯胺中间体，然后将硝基还原，经过分子内关环形成吲哚环。据报道，三（1-派啶基）甲烷与双（二甲氨基）-叔丁氧基甲烷是比DMF-DMA更有效的“一碳单位”试剂10。