实验指导书
目录
课程说明 (2)
实验一MS培养基的配制 (3)
实验二植物组织继代培养 (4)
实验三原生质体的制备 (6)
实验四原生质体的培养 (8)
实验五愈伤组织的诱导 (9)
实验六愈伤组织的分化 (11)
实验七植物多倍体诱导及其细胞学鉴定 (13)
实验八植物细胞悬浮培养 (15)
实验九植物组织培养技术 (19)
实验十细胞周期观察 (22)
实验十一花药培养及花粉发育时期的鉴定 (25)
课程说明
植物细胞工程是一门以植物组织和细胞的离体操作为基础的实验性很强的新兴学科,是生物技术的重要内容,近年来发展迅速。不论在植物细胞生物学的基础理论方面还是在实际应用方面。都取得了很多具有重大意义的研究成果。回顾植物细胞工程发展历程,可以看到其取得的每项重要进展,无不和研究方法的改进或实验技术的革新有直接关系。目前世界上所有以改良作物、培育新品种为目标的植物生物工程实验室,不但都建立了植物组织和细胞培养等离体操作技术。并且十分重视研究和发展植物离体操作的新方法和新技术。
本课程为生物技术(植物)专业本科生的专业课。植物细胞工程课程的开设,有利于学生掌握植物组织培养的理论和实际操作技术,为学生进一步从事分子水平上定向改良植物性状,培育植物新品种的研究奠定基础,也为部分学生进一步深造或从事与生物技术有关的工作打好基础。
实验一MS培养基的配制
一实验目的
了解并掌握MS培养基的配制。
二说明
MS培养基是植物组织培养中最基本的一种培养基,也是最常用的一种培养基。MS培养基含有多种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对多种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按浓度的20倍或100倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时,取其总量的1/20(50ml)或1/100(10 ml),加水稀释制成培养液,可方便使用。
三仪器、用具和药品
天平、烧杯(1000ml)、三角瓶、量筒(100ml)、玻璃棒、pH试纸、线绳、牛皮纸、棉塞、电炉、高压灭菌锅。蒸馏水、蔗糖、琼脂、1mol/L NaOH溶液、各种培养基母液。
四方法与步骤
1.母液的量取
取1000ml烧杯,分别按比例取各种成分的母液,20倍取50ml,100倍取10 ml加入烧杯,然后加蒸馏水至1000ml。
2.溶化
称取蔗糖30g,琼脂5g,将配好的混合培养基母液用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,并加入蔗糖和琼脂,煮沸2-3分钟。
3.调pH
用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(5.4-7.0)测培养基的pH,一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)。
4.培养基的分装
溶化的培养基应该趁热分装。分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入三角瓶中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。三角瓶中培养基的量约为三角瓶容量的1/5-1/4。每1000ml培养基,可分装20瓶。培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。先用棉塞塞紧,然后用一层薄牛皮纸封盖瓶口,再用线绳捆扎。最后在三角瓶外壁贴上标签。
5.高压灭菌
将分装好MS培养基的三角瓶放入高压灭菌锅内,在98 kPa、121.℃下,灭菌20min。
五作业
简要回答在培养基配制的过程中需要注意的问题。
附录
母液的组成成分
实验二植物组织继代培养一实验目的
1.掌握植物组织培养相关理论知识。
2.掌握植物组织继代培养的操作方法。
二实验原理
细胞全能性是植物组织培养的理论基础和依据。植物细胞的全能性是指植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性,在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。组织培养的接种是指将灭过菌的材料,在无菌的情况下,切成小块,放入培养基的过程。
三相关知识
1.植物组织培养指离体(in vitro)条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再
生出完整植株的过程。广义的组织培养依外植体不同可分为:1) 器官培养。2)茎尖分生组
织培养。3)愈伤组织培养。4)细胞培养。5)原生质体培养。按其培养过程可分为初代培养和继代培养。
a) 外植体指由活体(in vivo)植物体上提取下来的,接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官
等。愈伤组织指在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。
b) 初代培养是指无菌外植体的建立。
c) 继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程。主要用作材料的扩繁和保存。继
代培养中扩繁的方法包括:切割茎段、分离芽丛、分离胚状体、分离原球茎等。切割茎段
常用于有伸长的茎梢、茎节较明显的培养物。这种方法简便易行,能保持母种特性。
2.植物组织培养的应用领域
①快速繁殖,②种苗脱毒,③远缘杂交,④突变育种,⑤基因工程,⑥生物制品。
四试剂和器材
1.马铃薯试管苗
2.MS培养基、超净工作台、剪刀、镊子、酒精灯、70%酒精
五方法与步骤
1.在超净工作台上放好接种时所需要的酒精灯、70%酒精、镊子、剪刀、火柴、培养基等。
紫外灯灭菌30min。
2.将继代培养的材料(装有试管苗的三角凭)用酒精(70%)擦拭后放入超净工作台,用酒
精棉球擦手,并对接种工具用酒精灯火焰烧灼。
3.用剪刀将材料切割成若干片段,并用镊子迅速接种入培养基中。接种时,三角瓶(或试管)
应斜向火焰,在酒精灯火焰附近操作。
4.材料接种好后,将三角瓶瓶口及棉塞在酒精灯火焰上转动烧一遍,盖好瓶盖,注明材料名
称及接种日期。
5.材料接种后,应置于26-28℃的培养室中进行培养。
注意事项:
①接种时尽量避免和他人交谈,以免形成污染。
②接种工具如镊子、剪刀,必须用酒精灯火焰外焰烧灼,且接种时确信已经冷却,避免将材料
灼伤或灼死。
③接种工具在接种过程中应经常火焰烧灼灭菌。
④接种时如发现所要使用的培养基有污染情况,则培养基不能使用。
⑤剪取的材料不能太接近原培养基底部,特别是在原培养基有轻微污染时。材料须带有生长点,
如腋芽、茎尖。
六思考与作业
1.简要说明植物组织培养的各种方式及其各自的应用。
2.在接种过程中需要注意那些问题?
实验三原生质体的制备
一实验目的
掌握植物细胞酶解去壁方法。
二实验原理及说明
原生质体培养和体细胞杂交是植物细胞工程中的重要内容。由于这一技术在植物遗传操作和培育新品种中具有重要意义,因而引起国内外研究者的重视。植物与动物细胞不同,它的细胞外面有一层较硬的(主要由纤维素等所组成)细胞壁,妨碍了对植物细胞进行遗传操作和细胞融合,因此,在进行遗传操作或融合之前,必须将细胞壁脱掉。脱掉了细胞壁的细胞称为“原生质体”(protoplast)由于来自各个方向的膨压相等,因而它的主要形态特征为圆球形,这是区分原生质和未脱壁细胞的主要标志。自从20世纪60年代初英国生物学家柯肯因(E. C.
Cocking)首次成功地用酶处理法大量游离出原生质体并得到了分化苗以来,原生质体培养技术受到了研究者们的广泛关注,取得了快速的进展,现已从上百中植物中成功地分离出了原生质体并获得了分化植株。原生质体培养的主要原理是:用一定浓度的纤维素酶和果胶酶(后离析酶)混合溶液消化细胞壁和使组织解离成单细胞,获得圆球形的原生质体后,将酶液洗掉,经过漂洗、纯化等步骤,最后用培养基将原生质体稀释成一定浓度的悬浮液,在一定的条件下进行培养,使原生质体重新形成细胞壁并开始细胞分裂;当愈伤组织形成后,把愈伤组织转移到分化培养基上进行培养,使之分化苗和根。后面的一些步骤与一般的组织培养相同。原生质体培养与一般细胞培养的不同之点在于原生质体无细胞壁保护,在分离和培养过程中必须时刻
注意原生质体内外渗透压的平衡,否则会因渗透压的内外差异过大引起原生质体的破裂(压差内大外小)或收缩(压差内小外大),引起原生质体死亡。
三实验材料
马铃薯试管苗。
四仪器、用具和药品
倒置显微镜、细菌过滤器(可连接注射器使用的小型号的)、不锈钢筛(200目-300目)或相当的尼龙网、高压灭菌锅、超净工作台、离心机(水平转子,并有速度指示器)、酸度计注射器(10ml塑料一次性)及组织培养所用的工具等。
按培养基中的配方准备所用药品(均必须是分析纯及)、酒精、纤维素酶(Qnozuka R-10)、果胶酶、甘露醇、葡萄糖硫酸钾、双蒸水、石蜡薄膜,微孔滤膜(0.22μm)等。
五方法与步骤
1.实验准备:配置并过滤酶液。将准备好的实验用品,用纸包好,0.1大气压灭菌20min。
2.材料:在超净台内将马铃薯试管苗叶片从培养瓶内取出,放在培养皿内萎蔫1hr。
3.把萎蔫(或灭菌)的马铃薯叶片移至培养皿中,用小解剖镊子撕下表皮及去叶脉,将叶片剪
成0.5cm2的小块(不易太小,否则会得到过多地破碎细胞),浸在酶混合液中,封透气膜。
4.将培养皿置于摇床上,黑暗振荡培养,保持27℃,酶解12-24hr,振速为50-60rpm/min。
5.将已解离过的组织(可先用倒置显微镜观察原生质体分离情况)连同酶液用不锈钢筛过滤以
去除残渣。
6.将滤液置于离心管中,在500转/min下离心,沉淀原生质体,弃去全部液体。把沉淀在同样
离心速度下用0.7mol/L的甘露醇溶液洗涤2-3次(每次均须尽可能把液体吸尽,把酶彻底清洗掉)。
7.为了获得纯净的原生质体,还可用0.8mol/L的蔗糖液漂浮原生质体。原生质体在这种溶液
中,在1000转/min的离心下,活原生质体会漂浮于溶液的表层,用吸管小心地吸出表层(呈现绿色)的原生质体,放入另一试管中,用原生质体培养基稀释至一定浓度(一般为1×104/ml,可用血球计数器校正),制成原生质体悬浮液。
六思考与作业
1.原生质体有哪些应用?
2.原生质体的成功制备需要哪些条件?
附录:
酶液:纤维素酶2%和果胶酶0.4%溶液(W/V),并于酶液中加入0.2%的葡萄糖硫酸钾、5mmol/L 氯化钙、1mmol/L磷酸二氢钾和0.7mol/L甘露醇(渗透压调节剂),PH调至5.8。
实验四原生质体的培养
一实验目的
1.掌握原生质体的培养方法。
2.原生质体活力鉴定的方法。
二实验原理及说明
原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下,①具有再生细胞壁,进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力;②具有摄取外源大分子、细胞器,以及细菌,病毒的能力,因此是进行遗传操作,基因转移的好材料;③通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,培育出新品种。
许多化学、物理学和生物学方法可诱导原主质体融合,现在被广泛采用并证明行之有效的融合方法是聚乙二醇(PEG)法。高Ca高pH法和电融合法:
PEG作为一种高分子化合物,20-50%的浓度能对原生质体产生瞬间冲击效应,原生质体很快发生收缩与粘连,随后用高Ca高pH法进行清洗.使原生质体融合得以完成。
PEG诱导融合的机理:PEG由于含有醚键而具负极性,与水、蛋白质和碳水化合物等一些正极化基团能形成氢键,当PEG分子足够长时,可阼为邻近原生质表面之间的分子桥而使之粘连。PEG也能连接Ca2+等阳离子,Ca2+可在一些负极化基团和PEG之间形成桥,因而促进粘连。
在洗涤过程中,连接在原生质体膜上的PEG分子可被洗脱.这样将引起电荷的紊乱和再分布.从而引起原生质体融合:高Ca高pH由于增加了质膜的流动性,因而也大大提高了融合频率,洗涤时的渗透压冲击对融合也可能起作用。
三实验材料
原生质体、小培养皿(直径6cm)、摇床、封口膜、倒置显微镜。
四方法与步骤
1.原生质体培养
1)采用液体浅层静止培养法,即:吸取原生质体悬浮液2ml放入灭过菌的6cm直径培养皿中,
用石蜡膜封口,在300LX的弱光下培养,培养温度为25℃左右。为了防止培养液蒸发而
引起渗透压变化,应将培养皿放在装有湿滤纸的塑料袋中。经常在倒置显微镜下观察原生
质体成活和分裂的情况。
2)原生质体密度:除在极少数富营养培养基中原生质体可以单个培养,并进一步分裂外,在
其它培养基中培养原生质体必须有一定密度,不然难以分裂。密度参数值是104-105个/ml,
确切的密度应该随材料、培养期等其它条件不同而异。
3)原生质体再生:具有活力的原生质体在合适的培养条件下,3-6天就可以看见原生质体的
第一次分裂,2周左右可见到小细胞团。要不断加入新鲜细胞培养基,加入的时间和容量
按实验的情况而异,原则上要在原生质体一次或几次分裂后逐步再加入。细胞团继续长大
成愈伤组织到植株分化的过程与其它组织培养的情况。
2.原生质体活力的鉴定
1)目测法:在显微镜下观察,根据细胞形态、流动性确定原生质体活力。
2)FDA法:FDA(二乙酸荧光素)是一种非极性物质,能自由地穿越细胞质膜,在活细胞内,
FDA被酯酶裂解即发荧光(荧光素),由于荧光素不能自由通过质膜,因而可以在荧光显
微镜下通过具荧光的细胞的观察确定细胞活性。
3)伊凡蓝法:伊凡蓝不能穿过质膜,只有质膜受到严重损坏使,细胞才能被染色,因而可以
通过细胞被染色与否确定活性。
五思考与作业
1.根据观察结果,绘制原生质体图形。
2.根据自己的体会简要说明原生质体活力与原生质体制备和培养的关系。
实验五愈伤组织的诱导
一、目的要求
学习诱导植物器官外植体形成愈伤组织的方法。
二、基本原理
已有特定结构与功能的植物组织,在一定条件下,其细胞被诱导改变原来的发育途径,逐步逆转其原有的分化状态,转变为具有分生能力的胚性细胞,这个过程称为脱分化(dedifferentiation)。来自于植物各种器宫的外植体在离体培养条件下,细胞经脱分化等一系列过程,改变了它们原有的特性而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团,即愈伤组织。一般情况下,植物各器
官和组织均有诱导产生愈伤组织的潜在可能性。植物生长调节剂是诱导愈伤组织形成的极为重要的因素。生长素是用于诱导愈伤组织形成的生长物质,常用的种类有2,4-D, IAA和NAA, 所需浓度在0.01~10mg/L范围内;常用的细胞分裂素是激动素、玉米素和6-BA,使用的浓度范围在0.1~10mg/L。对有些植物材料而言,生长素和细胞分裂素对保持愈伤组织的快速生长是必要的,特别是两者结合使用时,能更强烈地刺激愈伤组织的形成。来自于不同植物、同一植物的不同器官或组织,产生的愈伤组织在质地和物理性状方面是有差别的。在一定条件下,离体的外植体可以形成愈伤组织(即一块未分化的组织),形成愈伤组织的过程也是细胞的脱分化过程。已有的实验表明,所有的多细胞植物,包括双子叶植物和单子叶植物,都有诱发愈伤组织形成的潜在可能性。一般认为诱发愈伤组织成败的关键不在于植物材料的来源,而在于培养的条件。外植体上损伤的细胞能释放一种自溶产物,对诱导细胞的分裂起着重要的作用。但在培养基中还必须加人一些生长调节物质,才能使已经分化后静止的细胞恢复分裂、脱分化和生产愈伤组织。但是在实践中,能否成功地诱导出愈伤组织还是研究者们面临的一个重要问题,有很多植物的愈伤组织的诱导还是不太成功。对有关植物细胞的生理、生长等研究工作来说,不能成功地诱导出该植物的愈伤组织就意味着实验的完全失败,后续植物细胞生理或代谢等的相关研究就根本无法开展。要使培养的细胞或组织最终发育成一个完整的植物体,一般要经过愈伤组织的细胞脱分化、人工诱导再分化两个不同的阶段,因此在这些实验中愈伤组织的诱导是否成功也是关键的基本因素。总之,愈伤组织诱导条件的选择在植物细胞培养技术中占据着非常重要的地位。影响愈伤组织诱导的因素包括以下几个方面:目前一般认为能够影响愈伤组织诱导形成的主要因素。(1)不同植物和外植体诱导愈伤组织能力的差异。(2)培养基种类对愈伤组织诱导的影响。(3)外源激素对愈伤组织诱导的影响。(4)培养条件对愈伤组织诱导的影响:湿度条件、温度条件、光照条件。
三、器材
1.材料:新鲜胡萝卜
2.培养基:(1) 准备好培养基各种母液。(2) 诱导胡萝卜块根愈伤组织培养基为:MS +2,4-D 1mg/L +蔗糖3g/L+琼脂0.8g/L, pH5.8。
3.器具:各种接种工具,超净工作台。
四、操作步骤
1.取新鲜胡萝卜的中间段,用洗涤剂和清水洗净,并用在70%酒精中浸泡过的纱布擦拭萝卜表面。2.将萝卜浸入0.5%升汞中,消毒8~12min。
3.用无菌水冲洗胡萝卜5次,去除表面的升汞残留,并将胡萝卜置于无菌滤纸上,吸去表面水分。4.用灭菌的打孔器钻取髓部或形成层部分。
5.将取下的部分置于无菌的培养皿中,切去两头各10mm, 余下部分切成厚3~6的圆片,作为培养用外植体。
6.用镊子夹取外植体并置于培养基上,每瓶3~5块为宜。并做好标记。
7.将培养材料置于28℃温箱或培养室中暗培养。
8.培养周期为4~6周,培养过程中注意记录愈伤组织的生长情况和污染情况。
五、实验报告
1.结果:观察接种的外植体在接种1周后产生愈伤组织的颜色和质地,计算愈伤组织诱导率:诱导率(%)=(形成愈伤组织的材料数/总接种材料数)×100%
2.思考题
(1)从不同植物材料产生的愈伤组织形态特征有什么差异?
(2)分析影响愈伤组织诱导和分化的主要原因。
实验六愈伤组织的分化
一、目的要求
了解愈伤组织再分化原理,学习诱导愈伤组织分化的方法。
二、基本原理
愈伤组织在离体培养过程中,组织和细胞的潜在发育能力可以在某种程度上得到表达,伴随着反复的细胞分裂,又开始新的分化。将脱分化的细胞团或组织经重新分化而产生出新的具有特定结构和功能的组织或器官的一种现象,称为再分化。在一定的培养条件下,愈伤组织通过分化可以形成苗或根的分生组织甚至是胚状体,继而发育成完整的小植株(图3-1)。
图3-1 植物离体组织或器官分化成植株的途径
三、器材
1.材料:非洲紫萝兰叶片愈伤组织,胡萝卜块根胚性愈伤组织。
2.实验用品:(1) NAA、BA、琼脂、蔗糖、2 ,4-D、IBA等。(2)分化培养基Ⅰ(生芽):MS + NAA0.1 mg/L+BA 1 mg/L+蔗糖3g/L+琼脂0.8g/L,pH 5.8。(3)分化培养基Ⅱ(生根):MS + IBA1 mg/L +蔗糖3g/L+琼脂0.8g/L,pH 5.8。
3.器具:各种接种工具、超净工作台。
四、操作步骤
1. 按照培养材料的要求,分别配制诱导愈伤组织生芽培养基或生根培养基。
2. 培养基和接种工具消毒,准备无菌水和无菌纸。
3. 在酒精灯旁,小心从愈伤组织容器瓶中,挑选出愈伤组织3~5块,放置到分化培养基中,盖上盖后写上接种日期、外植体名称和培养基成分。
4. 在培养室中培养,2 周后统计愈伤组织分化情况。
五、实验报告
1.记录胡萝卜肉质根胚性愈伤组织或非洲紫罗兰叶片愈伤组织,在接入分化培养基培养2 周后新生芽发生和生长的状况,计算分化率。分化率(%)=(生芽愈伤组织块数/接种愈伤组织总块数)×100%
2. 记录愈伤组织培养10天后,发生不定根的情况,计算生根率(%): 生根率(%)=(生根愈伤组织块数/接种愈伤组织总块数)×100%
六、思考题
1 .愈伤组织发生不定芽和不定根的能力与叨肠些因素有关?
2 .植物生长物质对诱导愈伤组织分化起何作用?
实验七植物多倍体诱导及其细胞学鉴定
一、目的要求
通过实验掌握诱导植物多倍体的方法和技术,观察多倍体的特点及染色体加倍后的细胞学表现。利用染色体分析的方法对多倍体的细胞作出准确判断。
二、基本原理
生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目,这是物种的基本特征之一。如玉米的体细胞具有20条染色体,人类则具有46条染色体,但是这些细胞核内的染色体并不是杂乱无序的,而是组成一个或多个染色体组(genome),或称基因组。在同一染色体组内所有的染色体在形态上以及染色体上携带的基因都不相同,但是它们包含了这一物种最基本的全套遗传物质,并以完整而协调的方式发生作用,构成了完整、协调的基因体系。在进化过程中由于选择压力的影响,这些基因以其平衡、协调的方式与环境相互作用,缺乏染色体组中的任何成分将面临淘汰的危险。每个染色体组所包含的染色体数目称为基数(basic nμmber),通常以X表示。例如玉米的20条染色体包含了2个染色体组,X=10。两组染色体之间有成对的同源染色体(homologous chromosome),在减数分裂过程中,每对同源染色体的2个成员分到2个子细胞中,因此配子细胞只含有体细胞中2组染色体中的1组。一倍体(monoploid)是指细胞核中具有一个染色体组,而单倍体(haploid)是指其细胞核内所含的染色体数与该物种配子中所含的染色体数目一样。就个体发育而言生物体生殖细胞是单倍的,但是由于产生配子的生物体的倍性水平不同,配子可以是一倍的也可是非一倍的。多倍体是在细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。自然界中有许多植物是多倍体的,是变异发生的重要途径之一。多倍体植物在形态上较二倍体的植物个体大,叶片上的气孔也很大,因此很容易辨认。多倍体的研究在育种工作中非常重要,因为利用多倍体可以改良作物的某些经济性状,同时还可利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。利用一些诱发因素可以人工诱导植物产生多倍体。这些因素包括物理的因素,如温度的剧变、射线处理等,还有化学因素,如植物碱、植物生长激素等。在众多的化学药品中,秋水仙素是诱导多倍体形成最为有效和常用的药品之一。在适宜浓度的秋水仙素的作用下,它既可以有效地阻止纺锤体的形成,又不至于对细胞发生较大的毒害。因此,当细胞继续分裂后,可以使细胞的染色体数加倍。如果用秋水仙素处理植物的根尖,则在根尖分生区内可检测到
大量染色体加倍的细胞,若处理植物幼苗的芽,则可以得到染色体加倍的植株。
三、器材
搪瓷盘、镊子、剪刀、烧杯、培养皿、恒温水浴锅、纱布、试管、2.0~4.0g/L秋水仙素水溶液、改良苯酚品红染液、蚕豆、洋葱、小麦种子、小麦幼苗、Carnoy 固定液。
四、操作步骤
1.蚕豆材料的处理:在盛有蛭石和沙土的花盆内埋入蚕豆种子,在盆内浇适量清水。将花盆放在窗台上阳光充足的地方进行萌发。经常进行观察,约4~6d蚕豆的主根长到3cm左右,侧根长到1~1.5cm时,将蚕豆取出。用清水将蚕豆上的泥土冲净,然后放入盛有4.0g/L 的秋水仙素水溶液的小烧杯内继续培养3~4d,待观察到根尖膨大时取材固定。与在水中培养的蚕豆做对照,进行染色体分析。
2. 洋葱的处理:将搪瓷盘的盘口用线绳编织成许多网格,在盘内注人清水。把洋葱的鳞茎洗干净,用刀片将鳞茎上的老根削除,再把其放在搪瓷盘的网格上,使其生根部位恰好接触到水面,在25℃下培养几日。待新根刚刚长出时,将搪瓷盘内的清水换成4.0g/L的秋水仙素水溶液,用继续在水中培养的洋葱鳞茎作对照。培养几日后,在处理液中培养的根尖明显比对照根尖肥大,此时便可用解剖剪将根尖取下,长度大约在1.5cm左右,放入固定液中固定24h。然后可按照常规的压片法进行细胞学制片,用显微镜观察并计数。
3. 小麦种子的处理:先将小麦种子在清水中浸泡24h ,在培养皿内铺上一块纱布,用少许清水将纱布浸湿后将小麦种子放在上面进行培养。当种子刚刚萌发长出km的根时,将纱布换掉,以
4.0g/L 的秋水仙素替代清水在25℃下继续培养,此时要注意及时补充培养皿内的处理液,保证处理液的浓度不变。当长出的根出现膨大时就应及时取材固定。
4. 小麦幼苗的处理:在小麦苗的幼芽长到3~5mm时,用解剖刀在芽上作一纵切,然后用一浸有秋水仙素溶液的纱布条包在切口处,纱布条的另一端浸在一个盛有秋水仙素水溶液的小烧杯内,烧杯的口用封口膜封好以防处理液蒸发,处理12h。隔天后再处理1次,然后将幼苗洗净,种到花盆内或大田中。
5. 形态观察和细胞学鉴定:比较处理植株与对照的外部形态有什么差异。将叶面的表皮撕下,在显微镜下进行观察,多倍体植株的气孔比二倍体大很多,叶片也比较肥厚。用根尖压片法制成染色体载玻片标本,在显微镜下认真观察和计数,与对照进行对比。
五、思考题
1. 与对照植物相比,处理后的植物有哪些不同特征?
2. 你观察到的被鉴定物种的染色体数目是多少?处理后得到了哪些染色体数目变异类型的细胞?
3. 许多染色体畸变的类型可以通过多倍体传递下去,且多倍体植物对环境具有更强的适应性,为什么?
4.使用秋水仙素诱导多倍体时应注意哪些问题?
实验八植物细胞悬浮培养
一、目的要求
了解植物细胞悬浮培养的基本原理,通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。
二、基本原理
利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点,比如在培养过程中,植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布,而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响,从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点,当植物的组织在液体培养基中生长时,我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡,一般可用100~120r/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡,使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的,既有游离的单个细胞,也有较大的细胞团块,还有接种物的死细胞残渣。在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养,因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说,细胞在培养到第18~25d 时达到最大的密度,此时应进行第一次继代培养。在继代培养时,应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系,就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作,特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株,即可获得携带有目标基因的个体。
三、器材
超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、磁力搅拌器、恒温空气摇床、镊子、锥形瓶、水
稻种子
四、操作步骤
1.配制培养基
(1) 用于诱导水稻愈伤组织的培养基(N6),见表4-1。
(2) 用于水稻悬浮培养的液体培养基,见表4-2。按照培养基配方取各种药品,最后用蒸馏水定容到所需体积。所配制的培养基经高压蒸汽灭菌后备用,固体琼脂培养基分装在250mL 的锥形瓶内,每瓶约分装30mL。
2.水稻种子的消毒
(1)将种子置于无菌的培养皿内,以体积分数95%的酒精消毒1~2min。
(2)取出后用无菌水冲洗2~3遍。
(3)将种子放入25.0g/L的次氯酸钠溶液中轻轻摇动后,浸泡60min 。
(4)取出后用无菌水冲洗,将次氯酸钠溶液充分洗净。
3. 接种在超净工作台内,将灭菌后的水稻种子接到诱导愈伤组织的固体培养基上,每个培养瓶接5~10粒种子。接种完毕后用封口膜将培养瓶封好,放在26℃的恒温培养箱中进行黑暗培养。表4-1 用于诱导水稻愈伤组织的培养基
表4-2 用于水稻悬浮培养的液体培养基成分
4.悬浮培养的开始:
当得到愈伤组织后,将其转人到AA液体培养基中。注意愈伤组织块应小于3mm。若组织块较大可用无菌解剖刀将其分割成小块。液体培养基分装在250mL的锥形瓶内。接种完毕后将瓶口用封口膜封好,把培养瓶放到恒温摇床上进行震荡培养。调整摇床的旋转速度,使之为120r/min。培养温度为26℃,在黑暗中培养。
5.悬浮培养物的保持进行悬浮培养后要不断进行观察,由于培养物的继代培养与培养瓶内培养物的密度及细胞生长速度有关,因此当发现培养瓶中培养物密度较大时,应及时用无菌的吸管吸取部分培养物到一新的50mL培养基中继续培养。同时还要及时淘汰一些大的组织团块和黄褐色的坏死组织。一般每隔4~7d就要继代一次。
五、思考题
1. 什么是分化和脱分化?
2. 记录和描述你所诱导培养的愈伤组织的特点。
3. 得到分散良好悬浮系后,利用血球记数计算细胞密度。
4. 总结此实验成功的关键因素。
实验九植物组织培养技术
一、实验目的
掌握植物组织培养相关理论知识
掌握植物组织培养的操作方法
了解不同激素及其比例对愈伤组织再分化的作用
二、相关知识
离体(in vitro)条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整植株的过程。
1958年,英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养,成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株,不但使细胞全能性理论得到证实,而且为组织培养的技术程序奠定了基础。应用领域
1、快速繁殖运用组织培养的途径,一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例如一株兰花一年繁殖到400万株。
2、种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严重危害,通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗。
3、远缘杂交利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功,从而育成一些罕见的新物种。
4、突变育种采用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。
5、基因工程基因工程主要研究DNA的转导,而基因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生。
6、生物制品有些极其昂贵的生物制品,如抗癌首选药物--紫杉醇等,可通过组织培养方式生产。植物组织培养的分类
广义的组织培养依外植体不同,可分为:
1) 器官培养(organ culture)
2)茎尖分生组织培养(shoot tip culture, apical meristem culture)
3)愈伤组织培养(calluse cultrue)
4)细胞培养(cell culture)
5)原生质体培养(protoplast culture)
外植体(explant):由活体(in vivo)植物体上提取下来的,接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。
愈伤组织(callus):在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。
植物组织培养特点
①培养条件可以人为控制
②生长周期短,繁殖率高
③管理方便,利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养营养条件-培养基(Culture Medium)
培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
国际上流行的培养基有几十种,常用的培养基有:
MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基、KM-8P培养基常用培养基简介--MS培养基1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养,效果良好。有些培养基是由它演变而来的。
《Java语言与面向对象程序设计基础》课程 实验报告四 姓名:xxx 学号:20097110080xxx 实验题1 [实验要求] ?掌握Java IO流处理 ?掌握文件操作 ?掌握多线程程序设计 [实验程序] import java.io.*; public class Test4_1 { public static void main(String[] args) { try { File myDir=new File("C:/Test"); if ( !myDir.exists()) myDir.mkdir(); else if ( !myDir.isDirectory()) { System.err.println(" 'C:/Test' is not a directory"); return; } File f=new File(myDir,"a.txt"); f.createNewFile(); FileWriter out = new FileWriter(f); for (int i=0;i<26;i++){ out.write((char)('A'+i)); } out.close(); } catch (IOException e) { System.out.println(e); } } } [运行结果]
[实验结论与收获]
掌握文件及文件夹的创建及文件的写入。 实验题2 [实验要求] 将实验1题中新建的"a.txt"文件内容复制到"C:\Test\Ex"目录中"b.txt"文件中。[实验程序] import java.io.*; public class Test4_2 { public static void main(String[] args) { try { File myDir=new File("C:/Test/Ex"); if ( !myDir.exists()) myDir.mkdir(); else if ( !myDir.isDirectory()) { System.err.println(myDir+ " is not a directory"); return; } File myFile =new File(myDir,"b.txt"); myFile.createNewFile(); FileReader in= new FileReader("C:/Test/a.txt"); BufferedReader bufIn = new BufferedReader(in); FileWriter out= new FileWriter (myFile); BufferedWriter bufOut= new BufferedWriter(out); String line; line = bufIn.readLine(); //System.out.println(line); while ( line!= null ) { System.out.println(line); bufOut.write(line,0,line.length()); bufOut.newLine(); line = bufIn.readLine(); } bufIn.close(); bufOut.close(); } catch (IOException e) { System.out.println(e); } } } [运行结果]
Java 实验二 实验二类与对象 实验目的 1、掌握面向对象程序设计的方法与Java 作为面向对象程序设计语言的特点; 2、掌握修饰符与构造方法的使用规则; 3、掌握接口的特点、结构、调用与继承; 4、掌握如何创建包, 通过包如何管理类; 5、掌握Java 的继承机制与实现多态的方法实验内容 (1)定义一个类Student,属性为学号、姓名与成绩;方法为增加记录SetRecord与得到记录GetRecord。SetRecord赋值学号、姓名与成绩,GetRecord通过学号得到考生的成绩。通过实例验 证编程无误。 ⑵定义一个接口Area,其中包含一个计算面积的抽象方法calculateArea()然后设 计Circle与Rectan两个类实现这个接口的方法calculateArea()分别计算圆与矩形的面积。通过实例验证编程无误。 (3) 假定根据学生的3门学位课程的分数决定其就是否可以拿到学位,对于本科生, 如果3门课程的平均分数超过60分即表示通过,而对于研究生,则需要平均分超过80分才能够通过。根据上述要求,请完成以下Java类的设计: (i)设计一个基类Student描述学生的共同特征。 (ii)设计一个描述本科生的类Undergraduate该类继承并扩展Student类。 (iii)设计一个描述研究生的类Graduate该类继承并扩展Student类。 (iv)设计一个测试类StudentDemo分别创建本科生与研究生这两个类的对象,并输 出相关信息 附实验一名称就是Java 语言基础实验报告分为以下几个部分 一实验名称二实验目的三实验仪器四实验步骤(把您的操作一步一步写清楚,java 程序代码要写) 五实验结果(程序运行后的结果就就是DOS 环境下运行出来的结果写在实验报告上) 六实验讨论(实验过程中的错误及如何改正,您的心得体会等) 答案: (1)定义一个类Student,属性为学号、姓名与成绩;方法为增加记录SetRecord与得到记录GetRecord。SetRecord 赋值学号、姓名与成绩,GetRecord 通过学号得到考生的成绩。通过实例 验证编程无误 public class Student { private int ID; private String name; private float score; public void SetRecord(int ID,String name,float score){ this、ID=ID; this、name=name; this、score=score; } public float getRecord(int ID){ if(ID==this 、ID) return this 、score; else return -1; }
《Java程序设计》课程实验指导书
实验一Java开发环境的安装与配置,熟悉Java程序 结构 一、实验目的: 1.掌握JDK的安装步骤。 2.理解环境变量PATH,CLASSPATH的作用,以及它们的设置方法。 3.熟悉Eclipse编辑环境,编写简单的Application程序,并编译和执行。 二、实验内容: 熟悉JDK的安装和配置,学习如何编写并运行简单的Application程序和Applet程序(能输出一条简单的问候信息); 三、实验要求: 1.能正确地安装JDK 2.熟悉环境变量PATH,CLASSPATH设置方法,熟悉编辑环境 3.调试程序、编译,运行后得到正确的结果 4.写出实验报告,要求记录编译和执行Java程序当中的系统错误信息提示, 并给出解决办法。 四、实验步骤: 1.从https://www.doczj.com/doc/3c10145897.html,上下载最新版本的JDK,并安装。 2.设置环境变量PATH,CLASSPATH,使得Java程序能正确编译和执行。 3.编写一个HelloWorld.java程序, (1)在主方法static public void main(String[]args)中调用System. out.println()方法,使程序输出一条问候信息; (2)编译运行程序,观察运行情况和输出结果。(使用JDK环境,调用 javac.exe和java.exe编译和执行程序)
实验二Java语言基础 一、实验目的: 熟悉Java基本语法,基本数据类型,各种运算符及表达式的使用,掌握运算符优先级,熟悉使用Java的选择语句,循环语句。 二、实验内容: 1.编写Java Application程序,输出1900年到2000年之间的所有润年。 (闰年的判断条件:能被4整除且不能被100整除,或能被400整除); 2.编写Java Appet程序打印“水仙花”数(它的个、十、百位数字的立 方的和等于该数本身,如:153=1^3+5^3+3^3) 3.编写Java Application程序,分别用do-while和for循环计算 1+1/2!+1/3!+1/4!...的前20项和 三、实验要求: 1.正确使用Java语言的选择语句,循环语句; 2.调试程序、编译,运行后得到正确的结果 3.写出实验报告。要求记录编译和执行Java程序当中的系统错误信息提成 示,并给出解决办法。 四、实验步骤: 1.编写主类; 2.在static public void main(String[]args)方法中加入实现要求功能 的代码,主要步骤如下: (第一题)从1900到2000循环,按照闰年的判断条件是则输出1900年到2000年之间的所有润年。 (第二题)编写Java Applet,在public void paint(Graphics g)方法中加入实现要求功能的代码,主要步骤是:从100到1000循环,判断每个 数是否符合水仙花数的特点,是则输出之。 3.编译运行程序,观察输出结果是否正确。 五、自做实验 1.输出100以内的所有素数。
实验报告 课程名称面向对象课程设计 实验项目名称类的继承 班级与班级代码13计算机科学与技术1班实验室名称(或课室)SS1 205 专业计算机科学与技术 任课教师尹华 学号:12251102120 姓名:林淑英 实验日期:2014 年4 月28 日 广东财经大学教务处制
姓名林淑英实验报告成绩 评语: 指导教师(签名) 年月日说明:指导教师评分后,实验报告交院(系)办公室保存。
实验三类的继承、多态、接口、访问控制符与修饰符 实验目的:通过编程练习掌握类的继承,多态,接口,访问控制符与修饰符的使用方法。 实验原理:类的继承,接口。 实验设备:计算机,Eclipse。 实验题目: 1.设计一个Person 类,其成员变量有:姓名(name)、性别(gender)、年 龄(age);再设计一个Student类,它是类Person的子类,其成员变量有:学号(id)、班名(cname)、成绩(score),类Student中要有一个方法 display(),用来显示一个学生的信息。 编写一个测试程序,创建一个Student类的对象,要求name和id 是自己的姓名和学号,输出学生的各种信息,学生的基本信息在类Student的带参数的构造方法中设定。 2.定义一个类A,该类有一个方法f,方法f可以输出英文字母,再定义 一个类B是A的子类,子类B不能重写父类A的方法f,子类有一个方法g,可以输出中文字符串。 编写测试程序,创建B的对象,输出英文字母和中文字符串。 3.定义一个坐标类Pointer,成员变量包括x和y;成员方法有: (1)构造方法 (2)setX、setY、getX、getY、display方法 (3)类方法distance用来计算两点之间的距离 编写测试程序,创建Pointer的两个对象并计算两个点坐标的距离。
信息工程学院1 Java程序设计实验/实习报告 学院: 班级:地信姓名: 学号:2 成绩:A 面向对象编程 一、实验/实习过程 (一)实验目的 掌握Java程序面向对象编程的基本架构,会运用面向对象的思想编写Java程序。(二)实验过程 【实验题1】完成如下程序,完成思考题 [基本要求] 运行程序并观察运行结果。 [思考问题] 试述程序中主要语句的作用 运行结果: 主要程序语句的作用已标注为注释: class CCircle // 类的声明 { double pi; //申明成员变量 double radius; //申明成员变量 double getRadius() //创建方法 实验报告的内容与格式按任课教师的要求书写。
{ return radius; //返回 radius } void setCircle(double r, double p) //创建方法 { pi=p; //初始化数据成员 radius=r; //初始化数据成员 } } public class Ex2_1 //类的声明 { public static void main(String args[]) //主方法 { CCircle cir1=new CCircle(); //创建对象 cir1.setCircle(2.0,3.1416); //调用对象 System.out.println("radius="+cir1.getRadius()); //输出结果 } } 【实验题2】设计一个用来描述汽车的类,使用类的静态成员变量来表示汽车的车主姓名、当前的速率和当前方向盘的转向角度,使用类的非静态成员方法来表示改变汽车的速率和停车两个操作。 package zz1; public class Car{ String name; int speed; int jiaodu; public Car(String name,int speed,int jiaodu){ https://www.doczj.com/doc/3c10145897.html,=name; this.speed=speed; this.jiaodu=jiaodu; System.out.println("车主:"+https://www.doczj.com/doc/3c10145897.html,); System.out.println("车速为:"+this.speed);
实验四异常处理 实验目的 1、掌握异常的概念和Java 异常处理机制。 2、掌握异常的定义、抛出和捕捉处理。 实验内容与要求 1、仔细读下面的JAVA语言源程序,自己给出程序的运行结果 import java.io.*; public class Ch31 { public static void main(String args[])throws IOException { int[] ko=new int[15]; int n,a; String x; BufferedReader keyin=new BufferedReader(new InputStreamReader(System.in)); System.out.print("Enter an integer:"); x=keyin.readLine(); n=Integer.parseInt(x); try { a=110/n; ko[15]=100; System.out.println("此描述无法执行!"); } catch(ArithmeticException e){ System.out.println("除数为0的错误"); } catch(ArrayIndexOutOfBoundsException f) { System.out.println("数组索引值大于数组长度的错误!"); } System.out.println("执行完catch的描述!!!"); } } 2.运行下面的程序,自己给出程序的运行结果。 import java.io.*; public class Ch32{ public Ch32(){ try{ int a[] = new int[2]; a[4] = 3; System.out.println("After handling exception return here?"); }catch(IndexOutOfBoundsException e){ System.err.println("exception msg:" + e.getMessage()); System.err.println("exception string:" + e.toString()); e.printStackTrace(); }finally{
实验三类与对象 1、(1)创建一个Rectangle类,添加两个(private)属性width与height (2)创建一个构造方法,选择width与height为形式参数。 (3)在Rectangle类中添加两个方法计算矩形的周长和面积 2、创建三角形、梯形和圆形的类封装:分别定义三角形、梯形和圆形类,要求每个类中包含构造方法、求周长及面积的方法。最后在主方法main中为三角形、梯形和圆形类创建对象并打印输出各种图形的周长及面积。(一个文件中包含三个class和main) a) Trangle类具有类型为double的三个边,以及周长、面积属性,Trangle类具有返回周长、面积以及修改三个边的功能。另外,Trangle类还具有一个boolean 型的属性,该属性用来判断三个属能否构成一个三角形。 b) Lader类具有类型double的上底、下底、高、面积属性,具有返回面积的功能。 c) Circle类具有类型为double的半径、周长和面积属性,具有返回周长、面积的
功能。
3、编写下面程序写出运行结果,谈谈成员变量的继承与隐藏,方法的覆盖与重载。
上例内B继承了类A,在子类B中定义变量num2与父类A 同名,故在子类中父类成员变量num2被隐藏,故sum3=10+200=210;同时在子类B中父类A方法sum2()被重写(覆盖),使num2为子类定义值200,故sum4=50+200=250. 这个例子中,B是A的一个子类。其中声明了一个和父类A同名的变量num2,并定义了与之相同的方法sum2,这时在子类B中,父类的成员变量num2被隐藏,程序第25行父类的方法sum2被重载。于是子类对象所使用的变量num2为子类中定义的num2,子类对象调用的方法sum2( )为子类中所实现的方法。 4、理解下面3个类的定义,分析它们之间的关系,写出运行结果。
华北电力大学 实验报告 实验名称Java程序面向对象设计(一)课程名称Java程序设计 专业班级:学生姓名: 学号:成绩: 指导教师:张学斌实验日期:
一、实验目的及要求 1.掌握类的定义。 2.掌握成员变量和成员方法的定义。 3.掌握构造方法的定义和使用。 4.掌握类的多态性 二、实验环境 Windows2000/Windows XP,JDK 1.2~1.6 三、试验内容和步骤 要求按照实验内容,写出详细实验过程和步骤,必要时截图。 实验1 机动车 1.1实验要求 编写一个Java应用程序,该程序有两个类:Vehicle(用于刻画机动车)和User(主类)。具体要求如下: Vehicle类有一个double类型的变量speed,用于刻画机动车的速度,一个int型变量power,用于刻画机动车的功率。定义了speedUp(int s)方法,体现机动车有加速功能。定义了speedDown()方法,体现机动车有减速功能。定义了setPower(int s),用于设置机动车的功率。定义了getPower()方法,用于获取机动车的功率。 在主类User的mian()方法中用Vehicle类创建对象,并让该对象调用方法设置功率,演示加速和减速功能。 1.2程序模板 Vehicle.java public class Vehicle { 【代码1】//声明double型变量speed,刻画速度 【代码2】//声明int型变量power,刻画功率 void speedUp(int s) { 【代码3】//将参数s的值与成员变量speed的和赋值给成员变量speed } void speedDown(int d) { 【代码4】//将成员变量speed与参数d的差赋值给成员变量speed } void setPower(int p) { 【代码5】//将参数p的值赋值给成员变量power } int getPower() { 【代码6】//返回成员变量power的值
JavaWeb 实验三 一、JSP实验题: P105 例子4-1 P108 例4-2 P109 例4-3 P110例4-4 P111 例4-6 P115 例4-8 P118 例4-9 P124 例4-12 二、mysql实验题 1.创建student和score表 CREATE TABLE student ( id INT(10) NOT NULL UNIQUE PRIMARY KEY , name VARCHAR(20) NOT NULL , sex VARCHAR(4) , birth YEAR, department VARCHAR(20) , address VARCHAR(50) ); 创建score表。SQL代码如下: CREATE TABLE score ( id INT(10) NOT NULL UNIQUE PRIMARY KEY AUTO_INCREMENT , stu_id INT(10) NOT NULL , c_name VARCHAR(20) , grade INT(10) ); 2.为student表和score表增加记录 向student表插入记录的INSERT语句如下: INSERT INTO student VALUES( 901,'张老大', '男',1985,'计算机系', '北京市海淀区'); INSERT INTO student VALUES( 902,'张老二', '男',1986,'中文系', '北京市昌平区'); INSERT INTO student VALUES( 903,'张三', '女',1990,'中文系', '湖南省永州市'); INSERT INTO student VALUES( 904,'李四', '男',1990,'英语系', '辽宁省阜新市'); INSERT INTO student VALUES( 905,'王五', '女',1991,'英语系', '福建省厦门市'); INSERT INTO student VALUES( 906,'王六', '男',1988,'计算机系', '湖南省衡阳市'); 向score表插入记录的INSERT语句如下: INSERT INTO score VALUES(NULL,901, '计算机',98); INSERT INTO score VALUES(NULL,901, '英语', 80);
南京信息工程大学实验(实习)报告 实验(实习)名称Java类实验(实习)日期 10.17 得分指导教师刘文杰院计算机与软件学院专业软件工程年级 2017级班次 1 姓名张成学号20171344024 1.实验目的: 1)熟练MyEclipse工具的使用与调试; 2)掌握Java类、方法和变量的定义和使用; 3)熟悉方法重载和覆盖、掌握this和supper关键字使用; 4)掌握4类访问控制符的使用。 2.实验内容: (1)定义一个类Circle,实现其面积计算功能getArea(); (2)编写程序,读入一个正整数并按降序显示它的所有最小因子。(教材第3章习题9)(3)利用多态性编程,实现求三角形、正方形和圆形的面积。(教材第4章习题6) 3.实验步骤 1、 public class Circle { public double radius; public Circle(double r) { radius= r; } public double getArea() { return radius*radius*Math.PI; } public static void main(String[] args) { Circle area1 = new Circle(5); System.out.println("The area is " + area1.getArea()); } }
2、 import java.util.Scanner; public class Read { public static void main(String[] args) { Scanner input =new Scanner(System.in); System.out.print("输入一个正整数:"); int n=input.nextInt(); int []a=new int[n]; int []b=new int[n]; int p,q=0,m=0; for(p=2;p<=n;p++) { while(n%p==0) { n=n/p; if(n!=1) { a[q]=p; q++; } else { a[q]=p; } } } while(q!=-1) { b[m]=a[q]; m++; q--; } for(p=0;p 实验四类和对象;类的继承和派生;多态性; 接口;构造器应用 一、实验目的 1、掌握类与对象的关系; 2、掌握类的定义; 3、掌握对象的声明及使用; 4、掌握构造方法的概念及调用时机; 5、掌握构造方法的重载; 6、掌握匿名对象的使用。 二、实验学时 2学时 三、实验类型 验证性实验 四、实验需求 1、硬件 每位学生配备计算机一台 2、软件 Windows 7操作系统,JDK,eclipse,MySQL 3、网络 无 4、工具 无 五、实验理论与预备知识 1、类与对象的关系; 2、类的定义; 3、对象的声明及使用; 4、构造方法的概念及调用时机; 5、构造方法的重载; 6、匿名对象的使用。 六、实验内容与结果 1、编写一个应用程序,该程序中有3个类:Trangle、Leder和Circle,分别用来刻画“三角形”、“梯 形”和“圆形”。 //三角形类 class Trangle { double sidea,sideb,sidec,sjxzc,sjxmj; boolean boo; public Trangle(double a,double b,double c) { sidea=a; sideb=b; sidec=c; if(a+b>c && a+c>b && b+c>a) { boo=true; } else { boo=false; } } double getlength() { double length; length=sidea+sideb+sidec; return length; } public double getarea() { if(boo) { double area; double p=(sidea+sideb+sidec)/2.0; area=Math.sqrt(p*(p-sidea)*(p-sideb)*(p-sidec)); return area; } else { System.out.println("不是一个三角形,不能计算面积"); return 0; } } } //梯形类 class Lader 《Java程序设计》实验报告 目录: 1题目 2目的和要求 3功能说明 4设计流程图 5源程序 6数据结果 7实验心得与体会 1、题目 用户自行定义一个异常,编程创建并抛出某个异常类的实例,运行该程序并观察执行结果。例如:用户密码的合法化验证,要求密码由4-6个数字组成,若长度不落在这个范围或不是由数字组成,抛出自己的异常。 2、目的和要求 熟悉ava的异常机制处理原理,掌握用户自定义异常类,掌握如何抛出异常、捕获并处理异常。 3、功能说明 用户密码的合法化验证,密码由4-6位数字组成,若不在范围内,则抛出“密码超出范围”,若不是数字,则抛出“密码格式错误”,输入密码正确则输出“密码是”。 — 4、设计流程图 5、源代码 import javax.swing.*; import java.awt.*; import java.awt.event.*; class passwordException extends Exception { public passwordException() { super(); } public passwordException(String s) { super(s);JOptionPane.showMessageDialog(null,s); } } public class WUXING { public static String passwordcheck()throws passwordException { String str=JOptionPane.showInputDialog(null,"输入密码:"); if(str.length()<4||str.length()>6) { throw new passwordException("密码超出范围"); } else if (!str.matches("\\d+")) { throw new passwordException("密码格式错误!!"); } return str; } public static void main(String args[]) { try{ String password = passwordcheck(); JOptionPane.showMessageDialog(null,"密码是:" + password); }catch(passwordException e){ e.printStackTrace(); 蛋白质与核酸的定性与定量 一.实验目的 1.学习和掌握纯化蛋白质的原理和方法、蛋白质等电点的测量原理 和方法。 2.掌握使用双缩脲法对蛋白质的定性测定。 3.学会利用定糖法对核酸的定性与定量测定 二.实验原理 1.区分蛋白质和核酸:蛋白质在碱性溶液中可与Cu2+紫红色反应。这是蛋白质分子中肽键的反应,肽键越多反应颜色越深。核酸由单核苷酸所组成,无此反应。另外,核酸组成成分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收,所以核酸也具有强烈的紫外吸收,最大吸收值在260mn,利用这一性质亦可鉴别核酸样品和蛋白质样品。 2.蛋白质的纯化方法: (1)粗分离:中性盐对蛋白质胶体的稳定性有显著的影响。一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。 (2)蛋白质类别及分子量的确定:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定样液中含有几种蛋白质,每种蛋白质的分子量大小。由于SDS 是阴离子,使多肽表面覆盖的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷量,消除了原来的电荷差异。改变了蛋白质单体分子的构象,不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都相同,长轴长度随其分子量的大小 成正比变化。 (3)蛋白质的精制:根据上一步骤得到的蛋白质的分子量,采用葡聚糖凝胶层析的方法。聚糖凝胶层析,是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱,各个组分由于分子量不相同,在凝胶柱上受到的阻滞作用不同,而在层析柱中以不同的速度移动。分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻,不能进入凝胶颗粒内部,阻滞作用小,随着溶剂在凝胶颗粒之间流动,因此流程短,而先流出层析柱;分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内,阻滞作用大,流程延长,而最后从层析柱中流出。若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间,则在两者之间从柱中流出,由此就可以达到分离目的。 3.蛋白质的含量测定以及等电点、比旋度等性质 (1)蛋白质的含量测定:采用Folin-酚试剂法。蛋白质中有带酚基的酪氨酸,故能与试剂乙反应而呈蓝色,蓝色深浅与蛋白质溶度相关,在一定溶度范围内呈线性关系,因此可做比色测定。 (2)等电点与比旋度。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的PH达到一定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。蛋白质的比旋度可用旋光仪。 实验四Java语言解决算法问题(4学时) 一、实验目的 (1)熟悉Java图形用户界面GUI类; (2)学习处理ActionEvent事件; (3)掌握事件源、监视器、处理事件的接口这三个概念; (4)使用Java语言解决算法问题。 二、实验学时:2学时 三、实验要求 (1)编写一个训练算术能力的测试软件; (2)Teacher类对象给出题目,判断答案是否正确;ComputerFrame类对象提供题目GUI 视图;MainClass作为主类。 四、实验原理 (1)事件源指的是能够产生事件的对象,如文本框、按钮等; (2)监视器指的是对事件源进行监视的对象,以便对发生的事件进行处理; (3)Java语言使用接口回调技术设计了它的处理事件模式。事件源增加监视的方法addXXXListener(XXXListener listener)中的参数是一个接口,listener可以引 用任何实现了该接口的类所创建的对象,当事件源发生事件时,接口listener立 刻回调被类实现的接口中的某个方法。 五、实验内容 课堂实验任务:请按模板要求,将【代码】替换为Java程序代码。 1.题目一算术测试 模板代码:Teacher.java public class Teacher { int numberOne,numberTwo; String operator=""; boolean right; public int giveNumberOne(int n) { numberOne=(int)(Math.random()*n)+1; return numberOne; } public int giveNumberT wo(int n) { numberTwo=(int)(Math.random()*n)+1; return numberTwo; } public String giveOperator() { double d=Math.random(); if(d>=0.5) operator="+"; else operator="-"; return operator; } public boolean getRight(int answer) { if(operator.equals("+")) { if(answer==numberOne+numberTwo) right=true; else right=false; } else if(operator.equals("-")) 广东海洋大学学生实验报告书(学生用表) 实验名称实验三. 分支与循环语句课程名称Java程序设计与开发 技术 课程号16232204 学院(系) 信息学院专业计算机科学与技术班级计科 学生姓名学号实验地点钟海楼 04019 实验日期 2015年 9月22日 一、实验目的 (1)学习掌握Java中的if-else if-else多分支语句; (2)学习使用Java 程序中的if-else分支和while循环语句解决问题。 二、实验任务 完成实验三指导上实验1、实验2的实验任务。 三、实验仪器设备和材料 安装有J2SE开发工具的PC机。 四、实验内容和步骤 实验1 回文数 编写一个Java应用程序。用户从键盘输入一个1~9999之间的数,程序将判断这个数是几位数,并判断这个数是否是回文数。 代码如下: Number.java import java.util.Scanner; public class Number{ public static void main(String args[]){ int number=0,d5,d4,d3,d2,d1; Scanner reader=new Scanner(System.in); System.out.println("输入一个1至99999之间的数"); number=reader.nextInt(); if(number>=1&&number<=99999){ d5=number/10000; d4=number%10000/1000; d3=number%1000/100; d2=number%100/10; d1=number%10; if(d5!=0){ GDOU-B-11-112 华北电力大学 实验报告实验名称Java程序面向对象设计(一)课程名称Java程序设计 专业班级:学生姓名: 学号:成绩: 指导教师:张学斌实验日期: 一、实验目的及要求 1.掌握类的定义。 2.掌握成员变量和成员方法的定义。 3.掌握构造方法的定义和使用。 4.掌握类的多态性 二、实验环境 Windows2000/Windows XP,JDK 1.2~1.6 三、试验内容和步骤 要求按照实验内容,写出详细实验过程和步骤,必要时截图。 实验1 机动车 1.1实验要求 编写一个Java应用程序,该程序有两个类:Vehicle(用于刻画机动车)和User(主类)。具体要求如下: Vehicle类有一个double类型的变量speed,用于刻画机动车的速度,一个int型变量power,用于刻画机动车的功率。定义了speedUp(int s)方法,体现机动车有加速功能。定义了speedDown()方法,体现机动车有减速功能。定义了setPower(int s),用于设置机动车的功率。定义了getPower()方法,用于获取机动车的功率。 在主类User的mian()方法中用Vehicle类创建对象,并让该对象调用方法设置功率,演示加速和减速功能。 1.2程序模板 Vehicle.java 【代码1】//声明double型变量speed,刻画速度 【代码2】//声明int型变量power,刻画功率 void speedUp(int s) { 【代码3】 //将参数s的值与成员变量speed的和赋值给成员变量speed } void speedDown(int d) { 【代码4】//将成员变量speed与参数d的差赋值给成员变量speed } void setPower(int p) { 【代码5】 //将参数p的值赋值给成员变量power } int getPower() { 【代码6】 //返回成员变量power的值 } double getSpeed() { return speed; } } ---------------------------------------------------------------------------------------------- User.java Java 实验日志 指导教师实验时间:2010 年月日学院计算机专业计算机科学与技术 班级3110802 学号08600201 姓名张梦实验室S 实验题目: Java 布局管理和 java的事件 实验目的: 1. 掌握 Java语言中几种布局管理器。 2. 能熟练综合运用这几种布局管理器设计复杂的图形界面。 3. 理解事件的概念。 4. 能熟练使用 Java 提供的事件处理方法,进行符合要求的事件处理 实验要求: 结合多种布局管理器设计一个复杂的图形界面。 掌握 Java提供的各种事件接口,并能灵活使用。 实验主要步骤: 1.用BorderLayout和GridLayout布局管理器设计一个如下图所示的图形界 面: 2.在记事本编辑如下源程序: import java.awt.*; public class Ex9_1 { private Frame demoframe; private Button b1; private Button b2; private Button b3; private Button b4; private Panel cpanel; private Button b[]; public void Init() { demoframe =new Frame("布局管理器"); b1 =new Button("确定"); demoframe.add(b1,"East"); b2 =new Button("取消"); demoframe.add(b2,"West"); b3 =new Button("Hello,"); demoframe.add(b3,"North"); b4 =new Button("Java!......"); demoframe.add(b4,"South"); cpanel =new Panel(); cpanel.setLayout(new GridLayout(3,3,7,7)); demoframe.add(cpanel,"Center"); b =new Button[9]; for(int i=0;i<9;i++) { b[i] =new Button(); b[i].setSize(50,50); b[i].setLabel(Integer.toString(i)); cpanel.add(b[i]); } demoframe.pack(); demoframe.setVisible(true); } public static void main(String[] args) { Ex9_1 demo =new Ex9_1(); demo.Init(); } } 3.保存程序Ex9_1.java,编译运行程序。理解BorderLayout和GridLayout 布局管理器的用法。 运行结果: 实验结果: 运行结果: 4.结合上述例子,试编写如下图所示的图形界面: 实验三熟悉常用java工具包并运用编程 实验目的: 本实验旨在巩固同学们对上课所讲java.util工具包中Collection,List,Set,Map加深理解,对其用法编程有一个更加深入的理解,为同学们以后的能够用Java进行独立地编写桌面程序打下一定的基础。 实验内容: 本实验的内容为:用Collection,List,Set,Map来存储数据,并进行排序,任何用Iterator,ListIterator或者Enumeration来打印其结果(按顺序和降序排列打印)。共分为四部分部分(前三部分必做,如果选第四个,前三个可以不做。。): (1)按顺序把1,10,5,7,6,2,9,20,14,存入到List中(注:允许自己自定义任何数),并对其进行排序,打印其升序和降序排列的结果。然后再向List中位置为第四位插入数35看看会有啥结果?再向List中插入字符串“ddy”,试猜想排序是否会出错?然后看看运行结果是啥? 程序: import java.util.*; public class SY3 { public SY3() { List list=new ArrayList(); list.add(1); list.add(10); list.add(5); list.add(7); list.add(6); list.add(2); list.add(9); list.add(20); list.add(14); list.add(35); list.add("ddy"); System.out.println("原序列:"); for(int i=0;i<=list.size()-1;i++) { System.out.println(list.get(i)); } System.out.println("新序列"); for(int i=0;i<=list.size()-1;i++) {Java实验四 -实验报告
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生化设计实验
实验四Java语言解决算法问题
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java程序设计-试验2(学生版)()
实验四 Java 布局管理和 java的事件
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