结晶紫中性红胆盐琼脂
前言 本标准代替GB/T 4789.38-2008 《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》。 本标准与GB/T 4789.38-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中文名称； ——修改了培养基和试剂； ——将“第二法大肠杆菌VRB-MUG 平板计数法”改为“大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）”；——删除了“第三法大肠杆菌Petrifilm TM 测试片计数法”； ——修改了附录A。 GB 4789.38-2012 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数 1 范围 本标准规定了食品中大肠埃希氏菌（Escherichia coli）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠埃希氏菌的计数，其中大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）不适用于贝类产 品。 2 术语和定义 2.1 大肠埃希氏菌Escherichia coli 大肠杆菌 广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP 试验、柠檬酸盐）生化试验为＋＋－－或－＋－－的革兰氏阴性杆菌。以此作为粪便污染指标来评价食品 的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。 2.2 最可能数 基于泊松分布的一种间接计数方法，简称为MPN。 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a）恒温培养箱：36 ℃±1 ℃； b）冰箱：2 ℃～5 ℃； c）恒温水浴箱：44.5 ℃±0.2 ℃； d）天平：感量为0.1 g； c）均质器； d）振荡器； e）无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头；f）无菌锥形瓶：容量500 mL； g）无菌培养皿：直径90 mm； h） pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸； i）菌落计数器； j）紫外灯：波长360 nm～366 nm，功率≤6 W。
表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.doczj.com/doc/316022586.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.doczj.com/doc/316022586.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟
嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.doczj.com/doc/316022586.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂
培养基成分汇总 显色培养基 ?大肠杆菌显色培养基 ?大肠菌群显色培养基 ?大肠杆菌／大肠菌群显色培养基 ?TBX培养基 ?细菌总数显色培养基 ?O157显色培养基 ?沙门氏菌显色培养基 ?李斯特氏菌显色培养基 ?金黄色葡萄球菌显色培养基 ?弧菌显色培养基 ?念珠菌显色培养基 ?阪崎肠杆菌显色培养基 ?肠球菌显色培养基 ?尿道定位显色培养基 菌落总数检测培养基 ?平板计数琼脂（PCA） ?TTC营养琼脂 ?营养肉汤（NB） ?营养琼脂（NA） ?2216E琼脂 ?标准I号营养琼脂 ?标准II号营养琼脂 ?胰胨大豆胨固绿琼脂 ?m-TGE肉汤 ?水平板计数琼脂培养基 ?TGE培养基 ?CVT琼脂 ?肉汤培养基 ?酵母粉琼脂 ?平板计数琼脂 ?平板计数琼脂（含麦芽提取物）?2216E液体培养基 ?嗜冷菌计数琼脂 ?NA培养基 ?MPC琼脂培养基 ?接触皿培养基 ?R2A琼脂 大肠杆菌O157检验培养基 ?三糖铁（TSI）琼脂 ?月桂基硫酸盐胰蛋白胨MUG培养基 ?mEC肉汤 ?mTSB肉汤 ?SD-39琼脂 ?改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂?改良EC肉汤(mEC+n) ?半固体琼脂 ?山梨醇麦康凯琼脂基础（SMAC） ?改良麦康凯肉汤（CT-MAC） ?月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤-MUG ?PBS-Tween20洗液 ?O157显色培养基 大肠菌群、大肠杆菌检验培养基?月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） ?EC肉汤 ?乳糖胆盐发酵培养基 ?乳糖复发酵培养基 ?去氧胆酸盐琼脂（DC） ?MR-VP培养基 ?结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） ?西蒙氏枸橼酸盐琼脂 ?肠道菌计数琼脂（VRBDA） ?品红亚硫酸钠琼脂 ?乳糖蛋白胨培养液 ?亮绿乳糖培养基 ?肠道菌增菌肉汤（EE） ?LB肉汤 ?LB营养琼脂 ?苯丙氨酸脱氨酶培养基 ?伊红美蓝琼脂（EMB） ?哥伦比亚MUG培养基 ?BDS培养基 ?葡萄糖琼脂 ?Andrade氏糖类肉汤 ?Korser氏枸椽酸盐肉汤 ?Endo培养基 ?缓冲MUG琼脂
规范食品中大肠菌群计数测定的标准操作规程。 2范围 本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 3术语和定义 大肠菌群coliforms 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 最可能数most probable number，MPN 基于泊松分布的一种间接计数方法。 4责任 质量部组织制订、化验室负责实施。 5内容 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 冰箱：2 ℃～5 ℃。 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 天平：感量 g。 均质器。 振荡器。 无菌吸管：1 mL（具 mL 刻度）、10 mL（具 mL 刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量500 mL。 无菌培养皿：直径90 mm。
pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 菌落计数器。 培养基和试剂 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A 中。煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A 中。结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录A 中。 磷酸盐缓冲液：见附录A 中。 无菌生理盐水：见附录A 中。 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中。 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中。 大肠菌群MPN 计数法 检验程序
大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。 图1 大肠菌群MPN 计数法检验程序 操作步骤 样品的稀释 .1 固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2
出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 Method for examination of coliform，fecal coliform and escherichia coli in food for export SN 0169—92 代替ZB X09 002—86 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。 本标准适用于出口食品的检验。 2 设备和材料 2.1 吸管：1mL，具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。 2 2 水浴箱：44.5±0.5℃。 2.3 培养箱：36±1℃，44.5±0.5℃。 2.4 冰箱：0～5℃和-15～-20℃。 2.5 均质器。 2.6乳钵和研棒。 2.7 平皿：直径90mm。 2.8天平：感量0.1g。 2.9 显微镜。 2.10 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。 2.11 玻璃珠：直径约5mm。 2.12菌落计数器。 3 培养基及试剂 3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(LST)肉汤。 3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。 3.3 EC肉汤。 3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。 3.5营养琼脂斜面。 3.6 色氨酸肉汤。 3.7 MR-VP培养基。 3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。 3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。 3.10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液。 3.11 生理盐水。 3.12 革兰氏染色液。 3.13 Kovacs氏靛基质试剂。 3.14 甲基红指示剂。 3.15 V oges—pros kauer(V—P)试剂。 4 样品制备 4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2—5℃18h内解冻，或在45℃以下15min内解冻。 4.2 不同食品样品匀液的制备 4.2.1 液体食品 以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，以30cm幅度、于7s 内振摇25次(或以机械振荡器振摇)，制成1：10的样品匀液。
农产品质量检测专业及绿色食品生产与经营专业2015级《食品微生物检测技术》课 程期末考试卷（A卷） 是，观察真菌采取的制片方法是。 4．微生物生长需要的营养要素有、、、、生长因子和能源。 5．根据细菌的生长曲线，可将细菌的生长分为、、、四个时期，作为研究材料应取的细菌最合适。 6．一般培养基的制备主要程序可分为：称量、、调节pH、过滤、、加塞包扎、和无菌检查等步骤。 7．无菌室的熏蒸消毒，主要采用熏蒸消毒法，测定无菌室无菌程度一般采用法。
三、单项选择题（总分20分，每题1分，将答案写在下面） 1——5 ： 6——10： 11——15： 16——20： 1.紫外线的杀菌机理可能是（） A.紫外线的高热作用 B.紫外线的辐射作用 C.紫外线凝固细菌蛋白质 D.紫外线干扰细菌DNA复制与转录 2.革兰氏染色的关键操作步骤是（） A.结晶紫染色 B.碘液固定 C.酒精脱色 D.复染 ） C.用65％的酒精棉球擦容器口周围 D.用酒精灯烤容器口周围 9.某微生物在有氧和无氧时均可以生长并可以利用氧，它属于（）。 A.微好氧菌 B. 好氧菌 C. 厌氧菌 D. 兼性厌氧菌 10.一般培养基高压蒸汽灭菌的条件是：（） A.121℃/15-30min B.115℃/15-30min C.130℃/15-30min D.65℃/15-30min 11.采用湿热高压蒸汽灭菌，（）是影响灭菌质量的关键。
A.灭菌时间 B. 压力表的指针 C.视锅内装量 D. 排除冷空气 12.根据食品卫生要求，或对样品污染程度的估计，一般选择2—3个适宜稀释度做10倍递增稀释液，每个稀释度作( )平皿， A.4个 B.3个 C.2个 D.1个 13.依据GB/T 4789.2-2010，菌落数测定结果1:100（第一稀释度）菌落数分别为204,213； 1:1000（第二稀释度）菌落数分别为19,18。结果菌落总数报告为（）。 A.2.0×104 B.2.1×104 C.1.9×104 D.4.0×104 14.霉菌及酵母菌的培养温度是( )。 直径 20.在微生物检测中最常见的是细胞生物，其中最多的是（）。 A.病毒 B.真菌 C.霉菌 D.细菌 四、判断题（下列叙述中，对于正确的在括号里标“√”，错误的标“×”每小题1分，总分10分，共10题。将答案写在下面:） 1——5： 6——10： 1.进行微生物检验采集的食品样品，在送检过程中应越快越好，一般不应超过24h。（） 2.病原微生物分离鉴定工作可以在普通微生物检测实验室中进行。（）
中华人民共和国进出口商品检验行业标 准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方 法SN 0169-92 代替 ZB X09 002-88 Method for examination of coliform, fecal coliform and escherichia coli in food for export ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。 本标准适用于出口食品的检验。 2 设备和材料 2.1 吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。 2.2 水浴箱：44.5±0.5℃。 2.3 培养箱：36±1℃,44.5±0.5℃。 2.4 冰箱: 0～5℃和-15～-20℃。 2.5 均质器。 2.6 乳钵和研棒。 2.7 平皿：直径90mm。 2.8 天平：感量0.1g。 2.9 显微镜。 2.10 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。 2.11 玻璃珠：直径约5mm。 2.12 菌落计数器。 3 培养基及试剂 3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤。 3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。 3.3 EC 肉汤。 3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。 3.5 营养琼脂斜面。 3.6 色氨酸肉汤。 3.7 MR-VP培养基。 3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。 3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。 3.10 Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液。 3.11 生理盐水。 3.12 革兰氏染色液。 3.13 Kovacs氏靛基质试剂。
微生物检验规范 1.目的 明确微生物检验方法和监控标准，规范微生物检验的各项操作，通过对原料、产品及生产线各要求环节进行微生物测试，从检测结果来判定原料、产品及生产线微检监控点的微生物情况是否符合公司和国家规定的标准，确保产品品质。 2.适用范围 公司所有需要作微生物检验的原料、每批产品及微检监控点。 3.职责 3.1 品保微生物检验员负责微生物检验实验器材和无菌室的准备工作。 3.2品保微生物检验员负责原料和生产线微检监控点的微检样品抽样、保存、 登记和微生物检测工作。 3.3成品制程人员负责成品微检样品的抽样工作，品保微生物检验员负责成 品微检样品的保存、登记和微生物检测工作。 3.4品保微生物检验员负责出具检测报告并作出符合性判定。 3.5品保科长负责微生物检测报告的审核。 4.作业程序 4.1实验器材 4.1.1 实验器材、培养基和试剂 1．超净工作台2．恒温培养箱36±1℃ 3．低温培养箱25-28℃4．恒温水浴锅46±1℃ 5．电子/托盘天平（精确到0. 1g）6．高压蒸汽杀菌锅 7．烘箱8．酒精灯 9．记号笔10．打火机 11．镊子12．药匙 13. 生物滤膜14．培养皿9cm/6cm 15. 锥形瓶300ml/500ml+硅橡胶塞16．试管 17．小发酵管18．试管架 19．接种环20．显微镜
21．塑料篮子22．移液管1ml、5ml、10ml 23. 膜过滤设备24. 医用不锈钢剪刀 4.1.2培养基和试剂 1．总菌数培养基平板计数琼脂培养基 2．大肠菌群培养基结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）、煌绿乳糖胆盐 （BGLB） 3. 霉菌、酵母菌培养基虎红培养基 4．氯化钠 6．乙醇 7．二氧化氯粉剂 8. 过氧乙酸 4.2 微生物检验的前准备 4.2.1检验所需器具的灭菌 4.2.1.1培养皿及移液管的干热灭菌 洁净干燥的培养皿，倒放于专用培养皿铁筒内，洁净干燥的移液管，尖端朝下，置于移液管专用的铁筒内，把铁筒放在烘箱中，于120℃干热灭菌120分钟后，调至160-180℃干热灭菌120分钟后，关掉烘箱，自然冷却至60℃以下，方可打开烘箱门取出置无菌室冷却备用。 4.2.1.2锥形瓶及移液管的湿热灭菌 洁净的锥形瓶，塞上硅橡胶塞并用牛皮纸包扎好瓶口，洁净的移液管，用牛皮纸包扎完善后，置于蒸汽灭菌锅中，于121℃湿热灭菌20分钟即可。 4.2.1.3镊子、接种环等的火焰灭菌 接种环、镊子要在酒精灯上须灼烧过方可使用；稀释操作时试管口应在火焰上方；培养基容器口边在火焰上方。 4.2.1.4化学灭菌（75%酒精、100×10-6ClO2） 无菌超净台，手部及不能加热灭菌的PE或塑胶制品，桌子等需用化学灭菌法；操作台、桌子、凳子、地面在使用完后均用100×10-6 ClO2擦洗灭菌。 4.2.2培养基及其缓冲稀释液的配制和湿热灭菌 4.2.2.1 0.9%生理盐水的配制 称取2.25g氯化钠，溶于250ml蒸馏水中，经湿热灭菌即可。
食品学院毕业实习报告(1) 食品学院毕业实习报告 姓名:郝xx 年级:食检20XX级 指导教师: 实习单位:xxx集团 实习时间:— 完成日期: 目录 1.集团简介 2.微生物部分 1.样品流程图 2.微生物室规章制度 3.实验室检验依据 4.样品处理过程 5.微生物检验项目及详细步骤 附A培养基的配制 B计数后废皿的处理 CSN0168-92SN0169-92 SN0170-92SN0172-92 5.检验结果报告单
三,理化部分 1.有机磷的检验方法 2.有机氯的检验方法 3.六六六的检验方法 4.重金属的测定方法 5.甜蜜素的测定方法 6.抗生素的测定方法 7.防腐剂的测定方法 8.磺胺的测定方法 9.二氧化硫的测定方法 10.亚硝酸盐的测定方法 11.氯霉素的测定 12.样品检验报告单 四,实习总结 xxx集团简介 xxx集团位于风光秀丽的黄海之滨,地处中国山东对外开放的黄金地带,与日本群岛,朝鲜半岛隔海相望,集团下辖30多处企业,总资产14亿元,职工8000多人.20XX年实现销售收入12亿元,出口创汇3800万美元,是全国乡镇企业出口创汇十强企业. 集团创建于1978年,以集团化,跨国化,现代化为目标,全方位实施跨国经营战略,成为一处渔,工,贸,科,教一体化
经营的国家级企业集团.先后与日本,美国,韩国,香港,台湾等国家或地区的客商建立了15处合资企业,实际利用外资20XX万美元,其中食品加工企业10处.设计开发出"xxx"牌系列食品,具有营养丰富,方便快捷等特点,现已形成200多个品种,年产量5万吨的生产规模,企业内部管理上建立健全ISO——9001质量管理体系,并全面实施计算机网络化管理,1998年xxx食品通过美国FDA认证,取得了HACCP验证书,并在欧盟注册成功,从而打开了通向欧美市场的绿色通道.集团在日本,美国,香港,朝鲜等国家或地区成立了分公司或办事处,在国内16个大城市设立了销售分公司,建立起完善的市场营销网络. xxx产品目前具有排类系列,汉堡系列,串类系列,菜卷系列,主食系列,粗加工系列,休闲系列等十余个系列,300多种规格.产品口味多样,适合不同的消费需求.主要原料大部分来自海鲜,高蛋白,低脂肪,营养丰富. 化验中心简介 化验中心于1992年筹建,占地面积260平方米,随着公司对外贸易的开展,实验室的建设得到不断的加强.本室现有12名成员.中心拥有气相色谱,液相色谱,原子荧光光度计,旋转蒸发器,恒温箱,水浴箱等先进仪器,齐备的国内外有关标准,完整的规章制度,能够独立承担本公司的进出口食品的检验工作.
目的：食品中大肠菌群的计数。 范围：本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的计数。 责任人：QC。 内容： 术语及定义 1 大肠菌群( coliforms) 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 2 最可能数 most probable number，MPN 基于泊松分布的一种间接计数方法。 3设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 3.4天平：感量 0.1 g。 3.5均质器。 3.6振荡器。 3.7无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8无菌锥形瓶、培养皿、菌落计数器。 3.9 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 4 培养基和试剂 4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录 A 中 A.1。 4.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录 A 中 A.2。 4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录 A 中 A.3。 4.4 磷酸盐缓冲液：见附录 A 中 A.4。 4.5 无菌生理盐水：见附录 A 中 A.5。 4.6 无菌 1 mol/L NaOH：见附录 A 中 A.6。 4.7 无菌 1 mol/L HCl：见附录 A 中 A.7