葡萄籽原花青素的纯化与结构研究
李春阳1，张红城2，王乃富1，刘文旭1
(1. 江苏省农业科学院农产品加工研究所，江苏 南京 210014；2. 中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093)摘 要：将大孔树脂HP-2MGL 和交联葡聚糖凝胶SephadexLH-20用于葡萄籽原花青素的纯化。HP-2MGL 可除去蛋白、多糖、高聚物等杂质，获得原花青素含量为96.5%的GSPP3。 SephadexLH-20能够进一步纯化GSPP3，获得低聚原花青素GSPP3-SP1和GSPP3-SP2。经HPLC 柱分离，GSPP3-SP1有4个峰，GSPP3-SP2有7个峰。GSPP3-SP1和GSPP3-SP2质谱分析发现，含有大量m/z 287、m/z 289、m/z 290、m/z 408、m/z 426、m/z 577、m/z 578、m/z 580等分子离子及碎片质谱信息，证明是由儿茶素和表儿茶素构成的原花青素二聚体的同分异构体。激光光散射与GPC 联用测定原花青素粗提物GSP 的重均相对分子质量为4.15×104，多分散系数为1.65；GSPP3的重均相对分子质量为4.26×103，平均聚合度为13，多分散系数为1.56，相对分子质量分布曲线呈对称分布，以高聚合度原花青素为主；葡萄籽原花青素纯化分级级分GSPP3-SP 的重均相对分子质量为1.89×103，平均聚合度为6，多分散系数为1.45，以低聚合度原花青素为主。关键词：葡萄籽；原花青素；纯化；结构
Purification and Structural Characterization of Proanthocyanidin from Grape Seed
LI Chun-yang 1，ZHANG Hong-cheng 2，WANG Nai-fu 1，LIU Wen-xu 1
(1. Institute of Agro-food Science and Technology, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China ；
2. Institute of Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China)
Abstract ：Macroporous resin HP-2MGL and SephadexLH-20 Gel was used to purify the proanthocyanidin from grape seed.Fraction GSPP3HP-2MGL was obtained by separation of crude grape seed extract through HP-2MGL and its proanthocyanidin content reached 96.5%. The fraction was further purified with SephadexLH-20 and two proanthocyanidin dipolymers GSPP3-SP1 and GSPP3-SP2 were resulted. HPLC analysis showed 4 peaks from GSPP3-SP1 and 7 peaks from GSPP3-SP2 were recognized. Mass spectrums revealed the abundance of the fragment ions like m/z 287, m/z 289, m/z 290, m/z 408, m/z 426,m/z 577, m/z 578 and m/z 580, suggesting this proanthocyanidin was a catechuic acid epigallocatechin--epicatechin dimer. The M W of GSP was determined to be 4.15×104 by laser light scattering combined with GPC and the coefficient of polydispersity was 1.65. The M W of GSPP3 was 4.26×103 with the average degree of polymerization of 13 and the coefficient of polydispersity of 1.56. The relative molecular weight curve showed a symmetrical distribution and this proanthocyanidin was highly polymerized.GSPP3-SP was found to lowly polymerized proanthocyanidin with the M W of 1.89×103, the average degree of polymerization of 6 and the coefficient of polydispersity of 1.45.
Key words ：grape seed ；proanthocyanidin ；purification ；structure
中图分类号：S663.1 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)23-0218-06
收稿日期：2009-08-11
基金项目：2006年度江苏省科技攻关(农业、苏北星火带)项目(BE2006313)
作者简介：李春阳(1966—)，男，副研究员，博士，主要从事农产品加工与活性物质研究。 E-mail ：lichunyang968@https://www.doczj.com/doc/2611885163.html,
原花青素(proanthocyanidin ，PA)又称为缩合单宁，是自然界中广泛存在的聚多酚类化合物，具有高效、低毒、高生物利用度以及多种生物活性，是近年来不断研究开发的一种极强的体内活性功能因子。葡萄籽原花青素一般采用有机溶剂提取，其产品含有少量溶
剂残留，对人体有一定毒副作用，因此一般常选择乙醇为提取剂[1]。
乙醇提取的葡萄籽原花青素含有蛋白、多糖、黄酮类化合物等杂质，可利用大孔吸附树脂进行纯化，提高葡萄籽原花青素的含量和纯度。通过采用交联葡聚糖
凝胶Sephadex LH-20可将纯化后的葡萄籽原花青素进一步分级，获得低聚合度葡萄籽原花青素[2]。
目前国内外对葡萄籽原花青素的研究较多，主要集中在提取工艺和生理活性研究方面，关于GPC凝胶渗透色谱法测定原花青素的平均分子量以及通过硫解、部分酸水解以及酶解鉴定原花青素结构单元的报道较少[3-4]。国外学者根据原花青素结构单元中花青定和翠雀定所占比例多少，将其划分为5种类型，用于原花青素结构类型的判断[5-6]。但是如果确定其平均分子量、分子量分布、以及所含单体的结构情况还需使用激光光散射、液质联用(LC-MS)等仪器，这方面的研究还鲜见报道。
本实验采用HP-2MGL大孔吸附树脂纯化葡萄籽原花青素，通过SephadexLH-20凝胶柱进行纯化分级，并对纯化后的葡萄籽原花青素进行硫解。通过多角度激光光散射与GPC联用，对乙酰化葡萄籽原花青素各级分进行分离，经浓度检测器测定其浓度，根据激光光散射仪测定的散射光强等参数，由ASTRA软件可算出乙酰化葡萄籽原花青素重均相对分子质量和相对分子质量分布，用LC-MS对分离纯化的葡萄籽原花青素单体成分和硫解后的原花青素结构单元进行定性和分析。
１材料与方法
1.1材料与试剂
赤霞珠(Cabernet Sauvignon )酿酒葡萄籽秦皇岛市华城葡萄酒厂；葡萄籽原花青素标准对照品(纯度≥99%) 天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供。
HP-2MGL大孔吸附树脂日本三菱公司；Sephadex LH-20 美国Pharmacia公司；四氢呋喃(进口色谱纯) 美国S i g m a公司；甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、丙酮、乙酸酐、吡啶等均为分析纯。
1.2仪器与设备
UV-1100紫外-可见分光光度计北京瑞利分析仪器公司；DAWN EOS多角激光光散射仪美国Wyatt Technology Corp；Waters 600/650E高效液相色谱仪、Waters 2690液相色谱仪含二极管阵列检测器美国Wa-t e r s公司。
1.3方法
1.3.1葡萄籽原花青素纯化物的制备
大孔树脂HP-2MGL纯化物的制备：将葡萄籽原花青素用水溶解上HP-2MGL树脂柱，分别用去离子水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇分步洗脱，分别收集30%乙醇洗脱物(即葡萄籽原花青素纯化物1，以下简称GSPP1)、50%乙醇洗脱物(即葡萄籽原花青素纯化物2，以下简称GSPP2)、70%乙醇洗脱物(即葡萄籽原花青素纯化物3，以下简称G S P P3)，将其浓缩，冻干。
SephadexLH-20纯化物的制备：将GSPP3用甲醇溶解上柱，分别用30%、50%、70%甲醇依次洗脱后，再用50%丙酮洗脱，收集丙酮洗脱物，浓缩，冻干，得到GSPP3纯化产物(以下简称GSPP3-SP)。丙酮洗脱前半部分为纯化物1(以下简称GSPP3-SP1) ，后半部分为纯化物2(以下简称GSPP3-SP2)。
1.3.2LC-MS测定葡萄籽原花青素
配制葡萄籽原花青素溶液，进样量10μl，用Lichrospher C18柱分离分析。柱温30℃，流动相为乙腈-水-0.1%乙酸，梯度洗脱，流速0.5ml/min。
1.3.3激光光散射与GPC联用测定葡萄籽原花青素相对分子质量
乙酰化葡萄籽原花青素制备：称取葡萄籽原花青素50mg，加入25ml乙酸酐和吡啶(1:1，V/V)，室温下搅拌均匀，在暗处放置72h。取出，加入去离子水，在冰水浴中冷至室温，放置4h。3500r/min离心15min，收集沉淀物。再用去离子水漂洗3次，重复离心沉淀。将沉淀物在30℃真空干燥，即得乙酰化葡萄籽原花青素。
乙酰化葡萄籽原花青素测定：精确称取乙酰化葡萄籽原花青素10mg左右，四氢呋喃溶解，定容10ml。进样10μl，进行测定。测试条件：采用Waters Styragel column，相对分子质量测定范围：103～106，分子粒径测量范围：10n m～1μm，散射体积：0.1μl，流速精度：0.1%，扫描速率：2、4、8、16次/s，进样体积200μl，运行时间45min。
２结果与分析
2.1葡萄籽原花青素提取物和大孔树脂HP-2MGL纯化级分的比较
葡萄籽原花青素提取物GSP经大孔树脂HP-2MGL纯化后可得GSPP1、GSPP2、GSPP3三个级分，由于GSPP3的原花青素含量最高为96.5%，因此把GSPP3作为进一步研究对象。比较GSP与GSPP3正相高效液相色谱图(图1)，可以发现GSP色谱图中的杂峰很多，且有许多包峰，说明G SP含有的成分较为复杂，除原花青素外，还含有蛋白、多糖、以及与原花青素结构类似的黄酮类物质，以及一些高聚原花青素；经大孔树脂纯化后的GSPP3包峰数量明显减少，30min以后基本没有峰，而且出峰主要集中在20m in左右，说明大孔树脂纯化效果较为理想，除去了一些杂质和高聚原花青素。据国外资料报道[7]，正相液相色谱出峰顺序基本是由低聚原花青素到高聚原花青素，由此可以推知，纯化后的G SP P3杂质基本除去，高聚原花青素减少，低聚原花青素明显增多。
号峰和4号峰的质谱图进行分析和解析。由图3可见，[M-H]+ m/z 578.9为原花青素二聚体的分子正离子峰，m/z 602.8为原花青素的二聚体加钠(Na +)的分子正离子峰，m/z 290.8为原花青素二聚体断裂后的基本结构单元碎片(儿茶素)正离子峰， 根据原花青素二聚体和原花青素基本结构单元分子量及其质谱图，可以推测2号峰和4号峰这两种物质为原花青素二聚体的异构体。
2.2经SephadexLH-20纯化的葡萄籽原花青素单体结构
分析
丰度(×108)
时间(min)
20406080100120
3210123
46
8
910
131415
161718
192021222425
2627
图２ 经HP-2MGL 纯化的GSPP3 LC-MS 的总离子流图Fig.2 LC-MS total ion chromatograms of GSPP3 purified by HP-2MGL
2.29相对强度(%)
时间(min)
10
20
30405060
100－17
3.517.937.048.4412.66
16.7419.8321.93
26.4330.29
35.01
GSP
相对强度(%)
时间(min)
10
20
3040
50
60
100－6
2.29
GSPP3
3.65
8.54
9.15
17.8514.70
19.7023.0024.3527.54
45.02
图１ 葡萄籽原花青素提取物(GSP)和HP-2MGL 大孔树脂纯化组分
(GSPP3)的正相高效液相色谱图
Fig.1 NP-HPLC chromatogram of GSP and GSPP3 purified by
HP-2MGL
通过LC-MS 进一步分析GSPP3组成(图2)，从总离子流图来看GSPP3共有27个峰，说明GSPP3原花青素的组分也很多。这是由原花青素的定义和性质决定的，
原花青素是由儿茶素、表儿茶素、没食子酸以及没食子酸酯以共价结合，或黄烷-3-醇的单体结构单位(儿茶素、表儿茶素)聚合而成的高分子聚合物，其键合(或氧化缩合)位置常发生在杂环C4和A 环的C6或C8，其中
以直链4，8键聚合的原花青素最常见，直链4，6键较常见，而支链4，6键或4，8键的聚合体较少见。在反相高效液相中，极性低聚原花青素一般先被洗脱出来，高聚体原花青素和非极性物质然后再被洗脱出来，高聚原花青素电离时离子碎片多质谱信号强。由图2总离子流图来看，90m in 后出峰的质谱信号明显增强。国内外关于原花青素各种单体的质谱研究较少[8-9]，可供借鉴的资料不多，由于缺少标样，对GSPP3的27个质谱峰定性十分困难，因而本实验从27个峰中选择2
丰度(×107)
m/z
200400
6008001000120014001.251.000.75
0.500.250
162.7220.6
290.8
391.0
578.9
丰度(×107)
m/z
200400
6008001000120014002.01.51.00.5
0162.7220.6
290.8
391.0
602.8
图３ 经HP-2MGL 纯化的葡萄籽原花青素GSPP3两个二聚体原花青
素的质谱图
Fig.3 MS spectrum of two proanthocyanidin dimers from grape
seed purified by HP-2MGL
A
B
相对强度(%)
时间(min)
2
4
6
8
101214161820100－4
GSPP3-SP1
相对强度(%)
时间(min)
2.557.51012.51517.52022.52527.5
100－14
GSPP3-SP2
图４ 原花青素纯化分级级分高效液相色谱图Fig.4 HPLC chromatogram of purified grape seed PC
A
B
用交联葡聚糖凝胶Sephadex LH-20对GSPP3进一步分级纯化，可得GSPP3-SP1和GSPP3-SP2。 经HPLC 分析发现(图4)，GSPP3-SP1有4个峰，GSPP3-SP2有7个峰。
由图5、6质谱图可见，GSPP3-SP1和GSPP3-SP2含有大量m/z 287、m/z 289、m/z 290、m/z 408、m/z 426、m/z 577、m/z 578、m/z 580等分子离子及碎片质谱信息，未发现m/z 441(表儿茶素没食子酸酯)和m/z
305(表棓儿茶素)碎片信息，说明GSPP3-SP1和GSPP3-SP2成分构成中不含有表棓儿茶素和表儿茶素没食子酸酯，属于非酯、非棓型二聚体原花青素，是由儿茶素与表儿茶素聚合而成的原花青素。这是因为葡萄籽原花青素一般含有三种单体：(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素及(-)-表儿茶素没食子酸酯，相对分子质量分别为290、290及442，相应的分子负离子 [M-H]－ m/z 分别为289、289、及441。各单体(C6-C3-C6黄烷醇骨架结构)之间以C4→C6或C4→C8相连，形成原花青素二聚体。
根据报道
[10]
，聚合体原花青素的碎片断裂方式
主要包括结构单元间的共价键断裂(C4→C6或C4→C8)和RDA 反应。RDA 反应是指原花青素二、三聚体的C 环(也称杂环断裂，失去一个中性的C 8H 8O 3结构(相对分子质量152)，形成的离子片段还可以进一步失去一分子H 2O ，这样就会出现m/z 425、m/z 408碎片。国外研究发现[11-12]，三聚体原花青素的R D A 反应，只产生m/z 713，而没有发现m/z 425、m/z 408碎片。
对于GSPP3-SP1来说，其5.45min 和10.10min 所出现的两个峰的质谱图非常相像，且都含有m/z 287、m/z 289、m/z 290、m/z 408、m/z 426、m/z 577、m/z 578等质谱碎片信息，碎片断裂方式符合R D A 反应特征，因此可以断定两者是由儿茶素和表儿茶素构成的原花青素二聚体的同分异构体；同理，7.31min 和11.60min 所出现的两个峰的质谱图也非常相像，含有m/z 289、m/z 290、m/z 580等质谱碎片信息，但不含有m/z 408、m/z 426、m/z 577、m/z 578等质谱碎片信息，其碎片断裂方式不符合二聚体原花青素的RDA 反应特征，判断两者也为同分异构体，推测为原花青素的单体即儿茶素和表儿茶素。根据资料报道，反相HPLC 中(+)-儿茶素在(-)-表儿茶素之前出峰，因此认为7.31min 时出的峰为(+)-儿茶素，11.60min 时出的峰为(-)-表儿茶素。
1000181.5
相对丰度(%)
m/z
200
300
400
500
600700800900
180.7289.3289.6
299.4300.0
407.5
407.2407.9
426.0451.8
407.6539.7
577.2578.0
578.2578.9580.0
758.2
482.2
B
1000相对丰度(%)
m/z
200300
400
500
600700800900
245.6
289.0290.7289.6
387.6469.8
579.8
580.8
C
10044
5.50
相对丰度(%)
时间(min)
5
1015
7.36
10.05
11.65A
峰a
峰b
峰c
峰d
100
0相对丰度(%)
m/z
200300
400500
600700800900
287.4
287.8
289.7
381.8
407.7
407.8
426.0
496.6
451.8577.4578.3
577.9
600.0695.7
758.2
896.4
D
1000
相对丰度(%)
m/z
200
300
400
500
600700800900245.6
289.1289.6
290.5
469.8
580.0
A.GSPP3-SP1总离子流图；B ～E.峰a ～峰d 的质谱图。图５ GSPP3-SP1的LC-MS 总离子流和各个峰的质谱图Fig.5 Chromatogram of total ion current and MS spectrogram of
each peak from GSPP3-SP1E
10040
相对强度(%)
时间(min)
2.5 5.07.510.012.515.0
1.32 5.55
7.47
4.88
6.54
9.22
10.10
11.86
14.29
15.73
峰a
峰b
峰c
峰d
峰e
峰f
峰g
A
项目原花青素GSP 原花青素GSPP3原花青素GSPP3-SP 经乙酰化9.39×1049.64×103 4.25×103未经乙酰化 4.15×104
4.26×103
1.89×103
多分散系数(M w/M n)
1.65 1.56 1.45平均聚合度
—
13
6
表１ 葡萄籽原花青素及纯化物的重均相对分子质量、多分散系数和
平均聚合度
Table 1 Relative M W , coefficient of polydispersity and DP of
purified PC
对于GSPP3-SP2来说，它除了GSPP3-SP1中的两对
原花青素同分异构体外，还含有3种其他原花青素类物质，其中6.54min 和9.22min 所出现两个峰的质谱图也非
常相像，含有m/z 287、m/z 289、m/z 290、m/z 407、m/z 408、m/z 426、m/z 577、m/z 578等质谱碎片信息，符合二聚体原花青素的RDA 反应特征，推测两者也为原花青素二聚体的同分异构体；15.73min 所出现的峰含有m/z 290、m/z 407、m/z 408、m/z 426、m/z 577、m/z 578等质谱碎片信息，可以推断其也为原花青素二聚体的同分异构体。2.3
葡萄籽原花青素相对分子质量
1000
相对丰度(%)
m/z
200300400
500 600 700 800 900287.5
289.5
289.8
290.6
407.7451.8
577.7
577.8
578.8599.7
B
100
相对丰度(%)
m/z
200300400
500 600700800900245.6
287.7
289.0289.6299.8
407.2407.8
425.8
426.0451.7559.8
577.7
578.8
578.9
579.2
866.0
714.8793.2C
1000
相对丰度(%)
m/z
200300400500 600700800900245.0
245.6289.2
289.6
290.6325.6
580.0
D
1000
相对丰度(%)
m/z
200300400
500 600700800900287.4
287.5289.8407.1
407.6
408.1
492.7577.3
577.9
578.8
599.9
756.1
873.5
E
1000
相对丰度(%)
m/z
200300400
500 600700800900
287.6
289.6
407.2
407.8
425.7
426.9
577.5578.9580.0
577.9
698.2
F
100
相对丰度(%)m/z
200300400
500 600700800900245.0
245.3289.3289.6
345.8
403.6582.9642.8678.1
799.7
H
100
相对丰度(%)
m/z
200300400500 600700800
217.7249.6289.9323.6407.4407.8
425.7452.1
500.9
575.6579.1
587.9575.9
577.9697.4
642.5795.8
736.1A.GSPP3-SP2总离子流图；B ～I.峰a ～峰g 的质谱图。图６ GSPP3-SP2（经SphadexLH-20纯化）的LC-MS 总离子流和
各个峰的质谱图
Fig.6 Total ion current chromatogram and MS spectrum of each
peak from GSPP3-SP2 purified by SephadexLH-20
I
由表1可见，经大孔树脂和SephadexLH-20纯化后
的GSPP3-SP 最小，这与前面HPLC 和LC-MS 分析结果基本吻合。未经纯化的GSP 相对分子质量很大，为4.15×104，相对分子质量分布范围很宽，ASTR A 软件无法处理其相对分子质量分布曲线。GSPP3相对分子质量分布曲线基本呈对称分布，相对分子质量基本集中
在1.1×104附近；GSPP3-SP相对分子质量分布曲线基本呈对称分布，相对分子质量基本集中在8.0×103和4.0×103附近，两个对称中心的出现和重叠说明GSPP3-SP含有低聚和一定量的高聚原花青素。
３结 论
3.1HP-2MGL树脂纯化葡萄籽原花青素可以得到3种纯化产物GSPP1、GSPP2和GSPP3，其中GSPP3原花青素含量最高为96.5%。用SephadexLH-20进一步纯化GSPP3，得到 GSPP3-SP1和GSPP3-SP2。
3.2LC-MS分析结果表明，GSPP3质谱总离子流共有27个峰，说明GSPP3组成较为复杂。GSPP3-SP1有4个峰，GSPP3-SP2有7个峰，通过质谱及碎片信息分析与判断，它们主要含有单体和二聚体原花青素。
3.3激光光散射与GPC联用测定GSP的重均相对分子质量为
4.15×104，多分散系数为1.65，由于含有少量大分子物质(如蛋白质、多糖等)，相对分子质量分布很宽，ASTRA软件无法处理得到其分布曲线；GSPP3的重均相对分子质量为4.26×103，平均聚合度为13，多分散系数为1.56，相对分子质量分布曲线呈对称分布，以高聚合度原花青素为主；葡萄籽原花青素纯化分级级分GSPP3-SP的重均相对分子质量为1.89×103，平均聚合度为6，多分散系数为1.45，相对分子质量分布曲线基本呈对称分布，以低聚合度原花青素为主。
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花青素和原花青素 一、区别 （一）定义 1、花青素：又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然素，属黄酮类化合物。也是植物花瓣中的主要呈色物质，水果、蔬菜、花卉等颜色大部分与之有关。在植物细胞液泡不同的pH 值条件下，使花瓣呈现五彩缤纷的颜色。在酸性条件下呈红色，其颜色的深浅与花青素的含量呈正相关性，可用分光光度计快速测定，在碱性条件下呈蓝色。花青素的基本结构单元是2一苯基苯并吡喃型阳离子，即花色基元。现已知的花青素有20多种。 2、原花青素：也叫前花青素，英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins 简称 OPC，是一种在热酸处理下能产生花色素的多酚化合物，是目前国际上公认的清除人体内自由基有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。原花青素属于植物多酚类物质，分子由儿茶素，表儿茶素(没食子酸)分子相互缩合而成，根据缩合数量及连接的位置而构成不同类型的聚合物，如二聚体、三聚体、四聚体……十聚体等，其中二到四聚体称为低聚体原花青素(Oligomeric Proanthocyanidins，缩写为OPC)，五以上聚体称为高聚体。在各聚合体原花青素中功能活性最强的部分是低聚体原花青素(OPC)。部分二聚体、三聚体、四聚体的结构式。通常把聚合度小于6的组分称为低聚原花青素,如儿茶素、表儿茶素、原花青素B1和B2等,而把聚合度大于6的组分称为多聚体.一般认为,药用植物提取物中存在的低聚原花青素是有效成分,它们具有抗氧化、捕捉自由基等多种生物活性。 （二）化学结构 从化学结构来看，花青素与原花青素是两种完全不同的物质，原花青素属多酚类物质，花青素属类黄酮类物质。原花青素也叫前花青素，在酸性介质中加热均可产生花青素，故将这类多酚类物质命名为原花青素。 （三）颜色 花青素是一种水溶性色素，是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。原花青素是无色的，是由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成。 （四）存在区域 原花青素广泛存在于植物的皮、壳、籽中，比如葡萄籽、苹果皮、花生皮、蔓越莓中;花青素广泛存在于如蓝莓、樱桃、草莓、葡萄、黑醋栗、山桑子等，其中以紫红色的矢车菊色素，橘红色的天竺葵色素，及蓝紫色的飞燕草色素等三种为自然界常见。 （五）功效 虽然花青素与原花青素都有抗氧化去除自由基的作用，但是原花青素抗氧化的作用比花青素要大得多。OPC具有强大的抗氧化和清除自由基能力和对人体微循环具有特殊改善的双重功效，以高效、高生物利用而著称。数据表明，原花青素具有很强的清除氧离子的能力,其抑制邻苯三酚自氧化率可高达91.5%。
本技术涉及植物有效成分的提取，具体地说，本技术提供了一种从越橘中提取原花青素的生产方法，将越橘原料粉碎后经负压空化法提取，超滤有机膜过滤，树脂纯化步骤，得到原花青素制品。本技术所述方法提高了原花青素的收率，减少对环境的污染，并有利于工厂生产的进行和生产成本的降低。 权利要求书 1.一种从越橘中提取原花青素的方法，其特征在于，包含如下 步骤： （1）粉碎：将越橘洗净、干燥、粉碎、过筛，得到越橘粉末； （2）提取：将越橘粉末及提取溶剂加入负压空化设备，料液比 为1:4～1:6，进行负压空化提取，过滤得到提取液； 其中，提取溶剂为乙醇-水混合物，乙醇与水的体积比为6:4～8:2， 压力为-0.08MPa～-0.06MPa，提取次数2～3次，提取时间30～60min， 提取温度为25～40℃； （3）膜分离：将步骤2）得到的提取液经超滤有机膜截留，得到 透过液； （4）树脂纯化：将步骤3）得到的透过液上预处理好的大孔吸附
树脂柱，先用去离子水洗脱至无糖，再用5～10倍柱体积、质量浓度为20～50%的乙醇水溶液洗脱，得到洗脱液；浓缩洗脱液并干燥，得到原花青素。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）取越橘 洗净、60℃真空干燥，用机械粉碎法进行粉碎，过80目筛。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中越橘 粉末与提取溶剂的料液比为1:5，提取溶剂中乙醇与水的体积比为3:2，压力为-0.08MPa，提取2次，提取时间30min，提取温度为40℃。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中先经 截留分子量为500～1000的超滤有机膜截留，收集截留液，弃透过液，收集到的截留液再经截留分子量为50000～100000的超滤有机膜截留，得到透过液。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中大孔 吸附树脂是AB-8、XAD-7、XAD-10或D101。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中洗脱 液经浓缩后，冷冻干燥或喷雾干燥，得到原花青素制品。 说明书
葡萄籽提取物的基本介绍： 葡萄籽提取物是从天然葡萄籽中提取的有效活性营养成份配以维生素E等主要原料精制而成的营养食品。葡萄籽提取物是从葡萄籽中提取的一种人体内不能合成的新型高效天然抗氧化剂物质。陕西浩洋生物科技有限公司经过研究发现葡萄籽提取物是目前自然界中抗氧化、清除自由基能力最强的物质，其抗氧化活性为维生素E的50倍、维生素C的20倍，它能有效清除人体内多余的自由基，具有超强的延缓衰老和增强免疫力的作用。抗氧化、抗过敏、抗疲劳增强体质、改善亚健康状态延缓衰老、改善烦躁易怒、头昏乏力、记忆力减退等症状。葡萄籽的功效与作用。 葡萄籽提取物的功效和作用： 1.清除自由基、抗衰老、增强免疫力： 清除自由基，阻止自由基对人体细胞的破坏。保护人体器官和组织，防治心脏病、癌症、早衰、糖尿病、动脉硬化等100多种由自由基所引起的疾病。 2.保护皮肤、美容养颜： 有“皮肤维他命”和“口服化妆品”的美誉，保护胶原蛋白，改善皮肤弹性与光泽，美白、保湿、祛斑；减少皱纹、保持皮肤的柔润光滑；清除痤疮、愈合疤痕。 增强皮肤抵抗力、免疫力，防治皮肤过敏及各类皮肤病；增强皮肤抗辐射能力，阻止紫外线侵害； 3.抗过敏： 深入细胞从根本上抑制致敏因子“组胺”的释放，提高细胞对过敏源的耐受性；清除致敏自由基，抗炎、抗过敏；稳定皮肤血管组织，缓解荨麻疹、干革热、过敏性鼻炎等各种过敏症状；有效调节机体免疫力，彻底改善过敏体质。 4.保护血管： 保护心脑血管，降低胆固醇，防止动脉硬化，预防脑溢血、中风、偏瘫等； 维持毛细血管适度的渗透性，增加血管强度，减低毛细血管易脆性； 降血脂、降血压，抑制血栓的形成，减少脂肪肝的发生；预防血管壁脆弱引起的浮肿、血丝；减轻水肿及腿部肿胀，减轻淤伤、运动受伤； 改善静脉曲张、静脉机能不全、静脉炎，防治毛细血管出血。 5.抗辐射： 有效预防和减轻紫外线辐射对皮肤的损伤，抑制自由基引发的脂质过氧化；减少电脑、手机、电视等辐射对皮肤、内脏器官造成的伤害。 6.保护消化系统： 保护胃粘膜，防治胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡。 7.保护眼睛： 保护眼睛免受辐射损伤，防治红血丝；增强夜视力、减少视网膜症等。阻止自由基对晶状体蛋白的氧化，预防白内障、视网膜炎。
年产300吨松针提取原花青素生产线建设项目可行性研究报告 建设单位：商洛市XXX科贸有限责任公司 建设地点：商洛市商州区杨峪河镇 编制日期：二○一三年八月
目录 第一章项目概况 (4) 1.1概述 (4) 1.2编制依据和范围 (5) 1.3项目基本情况 (7) 1.4项目建设的背景 (8) 1.5项目建设的意义及必要性 (12) 1.6项目经济技术指标 (15) 第二章市场分析 (17) 2.1项目市场分析 (17) 2.2相关领域国内外技术现状 (18) 2.3市场风险分析及措施 (19) 2.4营销策略............................................................................................................... 错误！未定义书签。第三章产品方案与建设规模 . (22) 3.1产品方案 (22) 3.2建设内容 (22) 第四章建设条件和场址选择 (24) 4.1建设条件 (24) 4.2场址选择 (29) 第五章工程技术方案 (31) 5.1工艺技术方案 (31) 5.2设备选型............................................................................................................... 错误！未定义书签。 5.3土建工程............................................................................................................... 错误！未定义书签。第六章总图运输与公用辅助工程 .......................................................................... 错误！未定义书签。 6.1厂区概述............................................................................................................... 错误！未定义书签。 6.2总图布置............................................................................................................... 错误！未定义书签。 6.3公用工程............................................................................................................... 错误！未定义书签。第七章环境影响评价 ............................................................................................. 错误！未定义书签。 7.1设计依据............................................................................................................... 错误！未定义书签。 7.2环境影响分析....................................................................................................... 错误！未定义书签。 7.3环境保护措施....................................................................................................... 错误！未定义书签。 7.4综合评价与结论................................................................................................... 错误！未定义书签。第八章节能、节水 ................................................................................................. 错误！未定义书签。 8.1概述....................................................................................................................... 错误！未定义书签。 8.2设计原则及依据................................................................................................... 错误！未定义书签。 8.3能耗分析............................................................................................................... 错误！未定义书签。 8.4节能、节水措施................................................................................................... 错误！未定义书签。第九章劳动安全卫生与消防 .................................................................................. 错误！未定义书签。 9.1劳动安全卫生....................................................................................................... 错误！未定义书签。 9.2消防....................................................................................................................... 错误！未定义书签。第十章项目管理与实施进度 .................................................................................. 错误！未定义书签。
花青素的作用花青素含量高的水果花青素是一种对人体健康可以带来很多好处的营养成分，这种物质在生活中的很多食物中存在，可以食用食用这些食物来为人体补充花青素，那么在生活中有哪些水果中的花青素含量高呢?下面就来为你详细解答花青素含量高的水果吧，可以选择自己喜欢的水果食用哦。 1、葡萄 部分葡萄中含有很高的花青素，但不是所有的葡萄都含有，仅仅局限于颜色比较深的葡萄，比如：红葡萄，紫葡萄和黑葡萄这三种葡萄的皮中含有大量的花青素，是目前商业提取花青素的主要原料。 2、桑葚 花青素在不同的PH环境中呈现出不同的颜色，桑葚在生时是青色，在成熟之后呈紫红色或紫黑色，成熟之后的桑葚中也含有大量的花青素。 3、蓝莓 蓝莓味道酸甜，成熟之后的蓝莓蓝色很深，有的甚至偏向紫色。蓝莓中花青素的含量很高，并且口感也比较好。 4、杨梅 杨梅味道很酸，含有很多的植物酸，PH也比较低，花青素在这种环境中呈现出紫黑色，杨梅在成熟之后花青素的含量也很高。 5、无花果 无花果的外皮也是紫黑色，而且靠近外皮的那层果肉也带有紫
色，无花果中也含有很高的花青素，但是主要集中在无花果外皮上，果肉中含量比较低。 6、血橙 橙子和柚子都有黄色果肉和红色果肉两种，血橙中含有一定量的花青素，在维生素C和柠檬酸的作用下，花青素呈红色，因此，被称为血橙，这类水果中花青素的含量不是很高。 7、山楂 山楂在成熟之后果皮也呈紫红色，外皮中含有一定量的花青素，含量不如紫色和黑色的水果高。 8、小贴士 1.花青素在酸性环境中呈紫色或红色，在碱性环境中呈蓝色，因此，平时在选择水果时选择颜色较深的都含有一定量的花青素。 2.在目前所知道的食物中黑枸杞中的花青素的含量最高，并且也是最好吸收的一种，需大量补充花青素的人可选用黑枸杞。 9、花青素的功效价值 1.有助于预防多种与自由基有关的疾病，包括癌症、心脏病、过早衰老和关节炎 2.通过防止应激反应和吸烟引起的血小板凝集来减少心脏病和中风的发生; 3.增强免疫系统能力来抵御致癌物质 4.降低感冒的次数和缩短持续时间; 5.具有抗突变的功能从而减少致癌因子的形成
原花青素（OPC）、花青素（VMA）与花色苷 区别一：结构不同 花青素是自然界中广泛存在于植物中的类黄酮化合物，由苯基丙酸类合成路径和类黄酮合成途径生成。 原花青素是黄烷-3-醇单体及其聚合体缩合而成的聚多酚类化合物，通常由儿茶素和表儿茶素这两类原花青素单体组成。 区别二：存在的物质不同 原花青素广泛存在于植物的皮、壳、籽中，比如葡萄籽、苹果皮、松树皮、银杏叶、黑米种皮中；但是近年来，发现黑果枸杞是自然界中原花青素含量最高的植物。 花青素广泛存在于如蓝莓、樱桃、草莓、葡萄、黑豆、紫薯等水果和蔬菜中，其中以紫红色的矢车菊色素，橘红色的天竺葵色素，及蓝紫色的飞燕草色素等三种为自然界常见。 区别三：功效不同 虽然花青素与原花青素都有抗氧化去除自由基的作用，但是原花青素抗氧化的作用比花青素要大得多。OPC具有强大的抗氧化和清除自由基能力和对人体微循环具有特殊改善的双重功效，以高效、高生物利用而著称。数据表明，原花青素具有很强的清除氧离子的能力,其抑制邻苯三酚自氧化率可高达91.5%。 区别四：颜色不同 花青素是一种水溶性色素，是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。除绿色外，花瓣及果实表现出来的颜色都是花青素作用的结果。影响花青素呈色的因子包括花青素的构造、pH值、共色作用等。原花青素高度提纯粉末为红棕色。它根据浸泡溶液的PH值发生变化。当溶液为酸性时，呈紫色；溶液为碱性时，呈蓝色。 区别五：物质转化 原花青素在酸性介质中加热可产生花青素，所以叫“原花青素”。但是花青素不能转化成原花青素，此过程不能逆转。 花色苷是花青素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物。植物中，花青素多以花色苷的形式存在。
葡萄籽中分离提取原花青素的研究 花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。 标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验 1 概述 原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。属于缩合鞣质或黄烷醇类。最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。它于1879年在意大利上市。 由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。 2 葡萄籽中花青素的提取 本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。 2.1 实验方法 2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取 本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。 所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。测
原花青素 1外观 葡萄籽原花青素提取物外观一般为深玫瑰红至浅棕红色精制粉末，低聚物无色至 浅棕色，但因为葡萄籽种类、来源不同，所以在外观、色泽上都存在一定的差异。 2鞣性 原花青素能与蛋白质发生结合。一般情况下，结合是可逆的。原花青素一一蛋白 质结合反应是其最具特征性的反应之一。 3溶解性 低聚原花青素易溶于水、醇、酮、冰醋酸、乙酸乙酷等极性溶剂，不溶于石油醚、 氯仿、苯等弱极性溶剂中。高聚原花青素不溶于热水但溶于醇或亚硫酸盐水溶液， 这一点相当于水不溶性单宁，习惯上称为“红粉”。聚合度更大的聚合原花青素不 溶于中性溶剂，但溶于碱性溶液，习惯上又称为“酚酸”。 4紫外吸收特性 葡萄籽提取物原花青素水溶液的紫外最大吸收波长为278nm。因其分子中所含的 苯环结构，在紫外光区有很强的吸收。可起到“紫外光过滤器”的作用，在化妆品 中可开发研制防晒剂。 图1为原花青素分子结构
现在发现多种植物中含有原花青素，被提取的植物包括葡萄、英国山楂、花生、银杏、日本罗汉柏、北美崖柏、蓝莓和黑豆等。葡萄籽是葡萄酿酒的主要副产品，且它在葡萄皮渣中占65%，其多酚类物质含量可达5%～8%，在这些多酚物质中，原花青素含量最高，可达80%～85%。花青素广泛存在于各种植物的核、皮或种籽等部 位。 图2为原花青素常见来源植物蓝莓。
1.1提取 目前，普遍采用的工艺是先脱脂的方法包括压榨法、溶剂法、超临界CO2萃取 法，其中，超临界CO2萃取法最佳，不仅油脂提取率高，而且对原花青素的破 坏作用最小，质量较好。 1.2分离 纯化原花青素单体物质通常采用柱色谱进行分离，其中，聚酰胺、SephadexLH-20 和ToyopealHW-40是最有效的填料。对于较难分离或需要量较小的化合物，可 用半制备反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和正相高效液相色谱法(NP-HPLC)制 备。随聚合度的增加，原花青素的同分异构体数目呈几何级数递增，分离纯化这 类大分子的单体物质非常困难。对于多聚体，可将其按分子量(聚合度)大小分段。 目前，已建立起来的分级方法有溶剂沉淀法和多种色谱法，如薄层色谱法、正相 高效液相色谱、凝胶排阻色谱、逆流色谱法等。 2.生物合成法 由硼氢化钠作为还原剂还原(2R，3R)-二氢-3′，4′，3，5，7-五羟黄烷的主要产物 是白矢车菊素(Leucocyanidin)的2，3-反-3，4-反异构体，而酶的还原产物是2， 3-反-3，4-顺异构体。在微酸的条件下，3，4-反异构体可能部分地转化为3，4- 顺异构体。3，4-顺异构体相对于3，4-反异构体较偏酸性，并且易于同硫醇和二 醇还原酶反应。酶合成要求的条件比较苛刻，同时也存在一个顺反异构体的问题， 目前，此法还不太成熟。 药理活性 1.抗氧化活性 原花青素具有极强的抗氧化活性，是迄今为止人类所发现的最强、最有效的自由 基清除剂之一，尤其是其体活性，原花青素的抗氧化活性呈现剂量-效应关系，但 如果超出一定的浓度，其抗氧化活性将随着浓度的升高而降低。 抗氧化特点及机理：①有效地清除超氧阴离子自由基和羟基自由基等，也可中断 自由基链式反应；②参与磷脂、花生四烯酸的新代和蛋白质磷酸化，保护脂质不 发生过氧化损伤；③为强有力的金属螯合剂，可螯合金属离子，在体形成惰性化 合物；④保护和稳定维生素C，有助于维生素C的吸收。 2.抗肿瘤活性 原花青素对于多种肿瘤细胞都具有显著的杀伤作用，对于多种致癌剂在启动及促 癌阶段都具有显著的抑制作用。原花青素能抑制癌细胞生长及诱导细胞凋亡。此 外，对于肝癌、前列腺癌、皮肤癌等，均表现出较好的抗癌活性，随着研究的深 入，原花青素将会在癌症的预防和治疗中发挥更大的作用，为癌症的治疗带来福 音。 3.抗炎、抗过敏、抗水肿活性 原花青素可降低由炎性介质组胺、缓激肽等引起的毛细血管通透性增高，减少毛 细血管壁的脆性，使毛细血管的力和通透性减小，保护毛细血管的物质转运能力， 从而起到抗炎的活性。此外，原花青素还可抑制组胺脱羧酶的活性，限制透明质 酸酶的作用，对各种关节炎及胃、十二指肠溃疡效果显著。 4.其它 原花青素还具有免疫调节活性、抗辐射作用、抗突变、抗腹泻、抗菌抗病毒、抗 龋齿、改善视觉功能、预防老年性痴呆、治疗运动损伤等功效。 保护心血管作用 1.抗心肌缺血再灌注损伤
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案 一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。 二．实验方案： 1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)： 2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法） (1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、 1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1ml 测定。 (2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。 (3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃; 检测器:紫外检测器,检测波长525nm 流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。 3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品 色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm； 流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈； 流量：1ml /min； 进样量：5μl; 柱温：30℃； 检测波长：280nm. 洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液) 0 ～5 % ，10min； 5%～20%，10～20min； 20%～40%，20～40min； 40%～50%，40～50min； 50%～5%，45～50min； 5%～0，50～60min。 稳定液配制：取0.5g 抗坏血酸置于1L 容量瓶中，加约500mL 双蒸水，混合，溶解 抗坏血酸。加入100mL 乙腈，用双蒸水稀释至刻度。标准品溶液液的配制与稀释均使 用稳定液做溶剂。
蓝莓花青素含量是不是最多的关于蓝莓相信大家一定不会觉得陌生，在生活中是很常见到的。尤其是对于一些饮料，什么蓝莓味道的水果或者一些护肤品也是很常见的材料。而在蓝莓中所含的花青素就是对于人的身体有些很大的帮助的，很多的人并不是很了解什么蓝莓中所含的花青素是不是最多的都是大家想要了解得，下面一起去看下蓝莓花青素含量是不是最多? 蓝莓所含有的花青素是所有的水果与蔬菜之中含量最高的，它含有15種以上的花青素，花青素是強效抗氧化劑，在水果中含量不單 是第一位，而且比第二位的含量高出3-4倍，在日本藍莓被稱為『視力果』 花青素的作用： 花青素还能够增强血管弹性，改善循环系统和增进皮肤的光滑度，抑制炎症和过敏，改善关节的柔韧性。具体来说，花青素有如下几种作用： 1.有助于预防多种与自由基有关的疾病，包括癌症、心脏病、过早衰老和关节炎 2.通过防止应激反应和吸烟引起的血小板凝集来减少心脏病和中风的发生; 3.增强免疫系统能力来抵御致癌物质 4.降低感冒的次数和缩短持续时间;
5.具有抗突变的功能从而减少致癌因子的形成 6.具有抗炎功效，因而可以预防包括关节炎和肿胀在内的炎症; 7.缓解花粉病和其它过敏症 8.增强动脉、静脉和毛细血管弹性; 9.保护动脉血管内壁 10.保持血细胞正常的柔韧性从而帮助血红细胞通过细小的毛细血管，因此增强了全身的血液循环、为身体各个部分的器官和系统带来直接的益处，并增强细胞活力。 11.松弛血管从而促进血流和防上高血压(降血压功效)。 13.防止肾脏释放出的血管紧张素转化酶所造成的血压升高(另一个降血压功效)。 14.作为保护脑细胞的一道屏障，防止淀粉样β蛋白的形成、谷氨酸盐的毒性和自由基的攻击，从而预防阿尔茨海默氏病。 15.通过对弹性蛋白酶和胶原蛋白酶的抑制使皮肤变得光滑而富有弹性，从内部和外部同时防止由于过度日晒所导致的皮肤损伤等等。 16花青素还具有抗辐射的作用，花青素颜色因pH值不同会发生变化，大部分花青素具有良好的光、热、pH值稳定性，对于白领或是长期处于日晒、电辐射环境中的人群，花青素的功效可是不可或缺的。 17.花青素可以促进视网膜细胞中的视紫质再生，预防近视，增进视力。 关于蓝莓花青素含量是不是最多的上文中都做了详细的解释
植物色素的深加工工艺 1.概述 1.1色素的概念 物质的颜色因其能够选择性地吸收和反射不同波长的反射光,其被反射的光作用在人的视觉器官上而产生的感觉.把食品中能够吸收或反射可见光进而使食品呈现各种颜色的物质称为食品色素. 食品色素按其来源可分为天然色素和人工合成色素,其中人工合成色素通过化学合成得到,不但没有任何营养价值,而且对人体有害.天然食用色素(natural food colouring agent)是从天然原料(主要是植物原料)提取并经过精制而制得的产品,易吸收且具有一定的功能性,现在已经得到广泛应用可用于果汁、汽水、酒、糖果、糕点、果味粉、罐头、冷饮等食品的着色，也可用于日用化工产品如牙膏等添加剂，在医药工业用做药片外衣的着色，还可用于化妆品的着色。 1.2天然色素的分类及特点 1.2.1按色素的来源分类 (1)植物色素从植物的某一部位得到的色素，如叶绿素、姜黄色素、越橘(桔)红色素等。 (2)动物色素是指从动物体和动物分泌物得到的色素，如血红素、紫胶红色素、虾红素等。 (3)微生物色素是从微生物得到的色素，如从红曲霉得到的红曲色素。 1.2.2 按色素的化学结构分类 (1)吡咯类如叶绿素、血红素等 (2)多酚类如单宁、茶黄素、黑加仑色素等 (3)类黄酮类如花青素、儿茶素等 (4)类胡萝卜素如胡萝卜素、叶黄素、番茄红素等 (5)其他如焦糖色素、甜菜红色素等 1.2.2天然色素的主要特点
①绝大多数天然色素无毒、副作用，安全性高。 ②天然植物色素大多为花青素类、黄酮类、类胡萝卜类化合 物，因此，天然食用色素不但无毒无害，而且很多天然食用色素含 有人体必需的营养物质或本身就是维生素或具有维生素性质的物 质。如核黄素、番茄红素、玉米黄色素、胡萝卜素等，尤其是p胡 萝卜素，国家已归类为营养强化剂，用于食品强化可防止人体维生 素A的缺乏症和干眼病等。还有一些天然色素具有一定的药理功 能，对某些疾病有预防和治疗作用。 ③天然植物色素不但具有着色作用而且具有增强人体功能、保健防病等功效。如芸香甘天然食用黄色素具有使人维持毛细管正常抵抗能力和防止动脉硬化等功能，在医学上一直作为治疗心血管系统疾病的辅助药物和营养增补剂。 ④天然色素的着色色调比较自然，更接近于天然物质的颜色。 ⑤大部分天然色素对光、热、氧、金属离子等很敏感，稳定性较差。 ⑥绝大多数天然色素染着力较差，染着不易均匀。 ⑦天然色素对pH值变化十分敏感，色调会随之发生很大变化。如花青素在酸性时呈红色，中性时呈紫色，碱性时呈蓝色。 ⑧天然色素种类繁多、性质复杂，就一种天然色素而言，应用时专用性较强，应用范围狭窄。 1.3天然色素的主要作用 食品的色泽直接影响人们的食欲，是商品销售的重要因素之一。其主要作用有： ①食品的颜色常常意味着食品的新鲜程度，用天然食用色素着色，会使食品颜色接近新鲜食品的颜色和自然色，使食品具有更好的自然新鲜感。 ②食品的各种色泽，是评定食品质量的一个重要方面，许多食品合理的着色，使食品更鲜艳，可以诱发人的食欲，增加诱人的力量。 ③许多天然食用色素，本身就是或者含有人体需要的各种营养物质，例如p胡萝卜素，本身是天然食用色素，而且也是人体中维生素A的来源。义如天然玫瑰茄色素含有19种氨基酸(其中天门冬氨酸1．71％，谷氨酸0．8％)和大量维生素C(含量达0．5％)，都是对人体具有营养价值的物质。此外还有一些天然食用色素，对某些疾病具有疗效作用，对人体有
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/2611885163.html, 花青素的生理功能研究进展 作者：韩笑 来源：《科学与财富》2020年第03期 摘要：花青素是一种普遍存在于植物中的能够决定植物颜色的水溶性类黄酮色素，又称为花色苷，是一种纯天然的具有一定保健功能且无副作用的可食用色素。本文综述了花青素具有的抗氧化、抗癌、保护视力、美容防衰等生理功能及其研究进展。 关键词：花青素;生理功能;研究进展 引言 现代实验研究证明花青素具有良好的生理保健作用。随着人们健康意识的提升，由于花青素的自然提取无毒可食用以及易溶于乙醇等溶剂的优点，近年来对于花青素的研究也越来越重视，花青素的生理功能也逐渐被更好的开发和利用。本文主要介绍了花青素的抗氧化作用，强大的抗癌作用，延缓衰老，抑制细菌生长防止由细菌引起的发炎感染，在烟酒的长时间摧残下保护肝脏功能不受损伤，降低血糖预防肥胖有效解决肥胖人口大幅度上升的情境，以及提高记忆力等生理功能。 1.抗氧化作用 1.1心脑血管疾病方面的应用 心脑血管疾病作为中老年人的主要威胁之一，不但有着极高的患病几率，而且治愈成功后至少一半的患者会有瘫痪的后遗症。大量的科学实验数据表明，自由基与心脑血管疾病、糖尿病、癌症等少许疾病的产生有着密不可分的关系，因此清除自由基是预防和治疗上述一系列疾病的关键所在，也是其治疗之根本。花青素可以清除多余的自由基使其处于平衡状态以防止疾病的产生，其强力抗氧化效果与Ve相比高出了5O多倍，是现如今人们所发现的最高效的抗氧化剂，也是功能性最强的最有效的清除自由基的药剂。 1.2保护视力 据调查，我国近视人口高达4.6亿位居世界第一，其中比重最大的为10-20岁之间的青少年。花青素可以延缓视网膜的神经节细胞衰亡，缓解青光眼等症状。有研究发现，蓝莓的花色素能够更有效的增进人眼视网膜上视黄醛与视紫蛋白结合构成的视紫红质被光诱导分解与再组成，缩短人眼对于阴暗处的适应时间。陈玮对黑米花青素在大鼠视网膜光化学损伤中的抗氧化作用进行了一系列的实验研究，发现黑米花青素能降低视网膜组织细胞中 MDA （脂质的过氧化物）的含量，提高视网膜组织细胞中抗氧化酶的活性，从而对感光细胞进行保护。花色素
原花青素的分离纯化 一、实验目的 对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程 二、仪器、材料及试剂 原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶 三、实验步骤 大孔树脂的预处理： 新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。 将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。
大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制： 1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照） 2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。（乙醇湿法装柱） 3、沿玻璃柱壁缓慢加入洗脱剂（50%的乙醇溶液，PH为5），使其覆盖在大孔树脂上方，厚度约为0.5cm，用滴管吸取原花青素提取液沿玻璃柱壁加入玻璃柱，再沿玻璃柱壁缓慢加入流动相（洗脱剂），使原花青素提取液流入大孔树脂床，并用试管在下方接收流出液 4、每5ml（大约）接收一份流出液，测定吸光值，重复此流程直至流出液的吸光值相近，根据所测数据绘制大孔树脂动态饱和吸附曲线图 饱和大孔树脂的解吸： 5、向玻璃柱缓慢加入60%的乙醇溶液（PH为５）进行解吸，用
花青素 什么是花青素 花青素(Anthocyanin)，又称花色素，一种水溶性色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属类黄酮化合物。花青素可以随着细胞液的酸碱改变颜色，细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。花青素是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。花青素存在于植物细胞的液泡中，可由叶绿素转化而来。 花青素结构 花青素的基本结构单元是2一苯基苯并吡 喃型阳离子，即花色基元。现已知的花青素有 20多种，主要存在于植物中的有：天竺葵色素 (Pelargonidin)、矢车菊色素或芙蓉花色素 (Cyanidin)、翠雀素或飞燕草色(Delphindin)、芍 药色素(Peonidin)、牵牛花色素(Petunidin)及锦葵 色素(Malvidin)。自然条件下游离状态的花青素 极少见，主要以糖苷形式存在，花青素常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷，已知天然存在的花色苷有250多种。 蓝莓 葡萄 紫甘薯 黑枸杞
目前自然界已有超过300种不同的花青素。他们来源于不同种水果和蔬菜如胭脂萝卜、桑葚、紫玉淮山、紫甘薯、越橘、酸果蔓、黑枸杞、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡萝卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。 紫甘薯花青素 紫甘薯，是指薯肉颜色为紫色的甘薯。由于富含花青素等一类对人体营养的保健物质而在近年被认定为特用品种。紫甘薯紫皮、紫肉都可食用，味道略甜。花青素含量20—180mg/100克。有较高的食用和药用价值，是一种纯天然的保健食品。 紫甘薯含有丰富的锌、钙、镁等多种人体有益元素，特别含有最佳值的硒元素.硒元素巳被世界医学界称为超级巨星、生命火种和抗癌之王.其抗癌功能在所有食品中独占第一.长期食用，具有提高人体免疫力，抗癌防癌、软化血管、降紫甘薯，是指薯肉颜色为紫色的甘薯。由于富含花青素等一类对人体营养的保健物质而在近年被认定为特用品种。紫甘薯紫皮、紫肉都可食用，味道略甜。花青素含量20—180mg/100克。有较高的食用和药用价值，是一种纯天然的保健食品。紫薯中含有丰富的蛋白质，18种易被人体消化和吸收的氨基酸，维生素C、B、A 等8种维生素和磷、铁等10多种天然矿物质元素。其中铁和硒含量丰富。而硒和铁是人体抗疲劳、抗衰老、补血的必要元素，特别是硒被称为“抗癌大王”，易被人体吸收，可留在血清中，修补心肌，增强机体免疫力，清除体内自由基，抑制癌细胞中DNA的合成和癌细胞的分裂与生长，预防胃癌、肝癌等癌病的发生。紫薯富含纤维素，可增加粪便体积，促进肠胃蠕动，清理肠腔内滞留的粘液、积气和腐败物，排出粪便中的有毒物质和致癌物质，保持大便畅通，改善消化道环
葡萄皮原花青素的提取工艺研究 陈国文 兰州理工大学石油化工学院2008级应用化学四班 摘要:以野生毛葡萄皮为原料,以原花青素提取率考察指标, 研究提取溶剂种类、浓度、料液比、提取温度、提取时间、提取次数等因素对原花青素提取效果的影响。通过正交实验, 确定野生毛葡萄皮中原花青素的最佳提取工艺条件为: 提取溶剂为60% 乙醇, 料液比1：9 , 提取温度60o C , 提取时间25 h, 提取3 次。在此优化条件下野生毛葡萄皮中原花青素的平均提取率为5.02% 。 关键词:野生毛葡萄; 原花青素; 提取 引言：山葡萄（Vitis amurensis Pupr）人工家植近４０年，由于该树种生产 栽培易管理，产量和效益高，目前在我国内蒙古和东北地区生产栽培近1.1万ｈｍ２，年总产量１２.８万ｔ，果实发酵酿酒产生废皮渣近１.８万ｔ，目前这些皮渣大多被当作肥料、饲料甚至垃圾处理，附加值很低。随着国内外不断深入研究发现，葡萄皮渣中存在着大量的、多种的有益成分，蕴含着巨大的经济效益，其中低聚原花青素、白藜芦醇、齐墩果酸、葡萄籽油等多种功能性成分，具有良好的医疗、保健作用[1-2] 。因此，开展葡萄皮渣综合利用，不仅可以获得良好的社会效益，而且能够有效减轻环保压力，获得巨大的经济效益[3] 。于2009-2010 年对山葡萄发酵酿酒皮渣中的原花青素、籽油和白藜芦醇含量进行测定分析，取得了良好的效果。 野生毛葡萄是喀斯特地区特有的生态植物 , 所酿造的葡萄酒以独特的风味和具有软化血管和驻颜益寿的功效著称。葡萄皮中还具富含黄酮类化合物[4-5] , 原花青素作为黄酮类化合物的一种, 由于其优越的抗氧化活性和能预防心血管疾病、抗肿瘤、抗辐射、防血小板凝结, 且能调节哺乳动物关键生物途径, 抑制多种细菌, 以高效、低毒、高生物利用率等功效越来越受到国内外的广泛关注 [6-7]。我国西部地区有着丰富的野生毛葡萄资源 , 其中大部分用于酿酒 , 另一部分用于葡萄汁饮料。葡萄酿酒或果汁加工的下脚料主要是葡萄籽与葡萄皮。如何将这些资源充分利用 , 变废为宝 , 用来开发研制高附加值产品 , 成为亟待解决的问题, 虽然目前国内对葡萄籽原花青素的研究有了广泛基础[8-9] , 但都是以普通葡萄为原料 , 原花青素的提取率都比较低 , 对于从野生毛葡萄中提取原花青素的研究未见相关报道。本论文对野生毛葡萄皮中原花青素的提取工艺进行了研究 , 为开发纯天然抗氧化剂提供一定的科学依据。 1 简介 原花青素，英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins（OPC），是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。一般为葡皮提取物或法国海岸松树皮从蓝莓叶中提取的原花青素可以抵抗丙肝病毒提取物。原花青素（葡萄皮提取物）是一种新型