食 品 科 技 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2011年 第36卷 第7期 提取物与应用 · 201 · 罗宇倩1，郭 辉1，胡林福2，施林巍2，钱俊青1* (1.浙江工业大学药学院，杭州 310014； 2.浙江竹类资源生物技术研究开发中心，安吉 313300) 摘要：为了有效利用竹叶中黄酮类物质，研究采用不同的方法(DPPH法、邻苯三酚自氧化法(325 nm)和 Fenton法)评价了竹叶黄酮的抗氧化活性，以Vc和茶多酚为阳性对照品。结果表明：竹叶黄酮清除超氧负离子自由基和DPPH自由基的能力比茶多酚强，其EC 50相应为11.7 μg/mL和18.3 μg/mL，分别是Vc的约1.2倍和3.4倍；竹叶黄酮在清除羟自由基效果与茶多酚相当，EC 50 为0.58 mg/mL，比Vc效果好。因此竹叶黄酮具有很强的抗氧化能力，值得深入研究其生理功能及开发利用价值。 关键词：竹叶；黄酮；抗氧化性 中图分类号：TS 202.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2011)07-0201-03 Antioxidant activity of ? avonoids from bamboo leaves LUO Yu-qian 1, GUO Hui 1, HU Lin-fu 2, SHI Lin-wei 2, QIAN Jun-qin 1* (1.College of Pharmacognosy of Zhejiang University of Technology Hangzhou 310014; 2.Biological Technology R&D Center of Bamboo Resources, Anji 313300) Abstract: The antioxidant activity of total flavonoids from bamboo leaves was determined by various assays, including DPPH radical-scavenging, self-oxidation of 1, 2, 3-phentriolassay method(325 nm) and Fenton reactions. The results showed that ? avonoids from bamboo leaves have very strong scavenging capabilities for superoxide anion and DPPH free radical, their EC 50 values are 11.7 μg/mL and 18.3 μg/mL respectively, and are approximately 1.2 times and 3.4 times as much as that of vitamin C respectively. The scavenging capability of bamboo leaves ? avonoids for hydroxyl radical is stronger than that of vitamin C, weaker than tea polyphenol, and its EC 50 is 0.58 mg/mL.Key words: bamboo leaves; ? avonoids; antioxidation 收稿日期：2010-11-07 ﹡通讯作者基金项目：浙江省制药工程重中之重开发基金项目。 作者简介：罗宇倩(1986—)，女，湖南株洲人，硕士研究生，研究方向为天然药物的提取与纯化以及药理研究。 淡竹叶和淡竹沥是中医一味传统的清热解毒药，早已为我国人们所认识。竹叶中黄酮类物质是主要活性物质，含量平均在2%，主要为黄酮糖苷[1]，分别是荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷，以及木犀草素苷、洋芹苷和黄酮苷类。竹叶黄酮具有明显的抗脂质过氧化[2-3]、清除羟自 由基和调节血脂功能及抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、保护心血管疾病[4-5]及保肝等生理活性，是一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂[1,6-8]。 我国竹叶资源丰富，因此充分开发利用竹叶中的黄酮类成分具有十分重要的现实经济意义。 竹叶黄酮的抗氧化活性研究
中草药叶下花总黄酮提取方法 作者：杨发忠，杨斌，杨德强，陈厚琴，代红娟，张丽，李东海 【摘要】目的对叶下花总黄酮的种类与提取方法进行初步研究。方法采用定性检测、光谱分析、单因素测定、正交实验等，研究黄酮种类，考察乙醇体积分数、温度、固液比、时间对提取率的影响。结果叶下花含黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等多种黄酮类化合物；所考察的影响因素中，对总黄酮提取率影响程度大小顺序为乙醇体积分数＞温度＞时间＞固液比。结论最佳提取条件为A1B2C3D3 (乙醇体积分数30%、温度65℃，提取时间180 min，固液比1∶80)，在此提取条件下，提取量高达5.233%。 【关键词】叶下花总黄酮提取方法正交实验 Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction conditions for the total flavonoids from Ainsliaea pertyoides Franch and to study the categories of the total flavonoids. MethodsThe methods of the chemical qualitative detection, the spectral analysis, single factor determination, orthogonal test were adopted to study the categories of the total flavonoids, and the effect of four factors, i.e. the volume fraction of ethanol, the temperature, the ratio of solid to liquid, the
黄酮类化合物生物活性的研究进展 王 慧 （山东博士伦福瑞达制药有限公司，山东 济南 250101） 摘 要：黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一类多酚化合物，有许多潜在的药用价值。现就黄酮类化合物抗肿瘤、抗心血管疾病、抗氧化抗衰老、抗菌抗病毒、免疫调节等作用的研究进展作一综述，以期为开发利用该类药物提供参考。关键词：黄酮类化合物；生物活性；综述文献 中图分类号：R282.71 文献标识码：A 文章编号：1672-979X （2010）09-0347-04 收稿日期：2010-05-31 作者简介: 王慧（1974-），女，山东临沭人，主管药师，从事质量控制工作 E-mail : wanghui0602@https://www.doczj.com/doc/259928017.html, Progress in Bioactivity of Flavonoids WANG Hui (Shandong Bausch & Lomb Freda Phar. Co., Ltd., Jinan 250101, China ) Abstract: Flavonoids are polyphenols widely found in nature and they have many potential medicinal values. This paper reviews the progress in anti-tumor, anti-cardiovascular disease, anti-oxidation and anti-aging, antibacterial and antivirus, immunological regulation of flavonoids, which can provide the references for the development and utilization of flavonoids. Key Words: flavonoids; bioactivity; review 黄酮类化合物是一类低分子植物成分，具有C6-C3-C6 基本构型，为植物体多酚类代谢物。主要分为黄酮及黄酮醇类、二氢黄酮及二氢黄酮醇类、黄烷醇类、异黄酮及二氢异黄酮类、双黄酮类，以及查尔酮、花色苷等[1]。黄酮类化合物独特的化学结构使其对哺乳动物和其它类型的细胞有重要的生物活性。黄酮类化合物有高度的化学反应性，例如清除生物体内的自由基；又有抑制酶活性、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗衰老、抗心血管疾病糖尿病并发症等药理作用，且无毒无害。黄酮类化合物还是茶及黄芩、银杏、沙棘等众多中草药的活性成分。因此受到广泛关注，研究进展很快。1 黄酮类化合物的理化性质 黄酮类化合物多为晶体且有颜色，少数如黄酮苷类为无定形粉末，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋光性外，余者则无。黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有差异，一般游离态苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂。其中，黄酮、黄酮醇、查儿酮等平面型分子因堆砌较紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等系非平面型分子，排列不紧密，分子间引力较小，有利于水分子进入，水溶解度稍大[2]。 2 黄酮类化合物的生物活性2.1 抗肿瘤活性 黄酮类对多种肿瘤细胞有明显的抑制作用，主要表现在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、干预信号转导、影响细胞 [11] Denyer S P, Baird R M. Guide to microbiological control in pharmaceuticals and medical devices[M].2nd ed. Boca Raton: CRC Press, 2006: 325-326. [12] Mao k, Masafumi U, Takeshi K, et al Evaluation of acute corneal barrier change induced by topically applied preservatives using corneal transepithelial electric resistance in vivo [J].Cornea , 2010, 29(1): 80-85. [13] Noecker R. Effects of common ophthalmic preservatives on ocular health[J]. Adv Ther , 2001, 18: 205-215. [14] Kostenbauder H B. Physical factors influencing the activity of antimicrobial agents// Block S S. Disinfection, Sterilization and Preservation[M]. 3rd ed. PhiladelpHia: Lea and Febiger, 1983: 811-828. [15] Berry H, Michaels I. The evaluation of the bactericidal activity of ethylene glycol and some of its monoalkyl ethers against Bacterium coli [J]. J Pharm Pharmacol , 1950, 2: 243-249.
黄酮提取实验方案 1材料与仪器 1.1材料 1.2试剂 芦丁，无水乙醇，氢氧化钠，石油醚，硝酸铝，三氯化铁，三氯化铝，浓氨水，浓盐酸，镁粉，亚硝酸钠(以上均为国产分析纯)，实验所用水均为蒸馏水。 1.3实验仪器 电热恒温水浴锅 电子天平(感量0.0001g) 722型光栅分光光度计 索氏提取器 量筒(100ml,10ml)25ml比色管移液管小试管白瓷板圆底烧瓶100m 容量瓶 锥形瓶 2实验原理 2.1提取原理 溶剂提取原理游离黄酮黄酮昔备注 乙辱溶解范围广+ + (甲醇)著■甘元均可溶(90-95%) (6M)甲醇毒性大 沸水多糖昔易于水+ 成本低、安全, 水溶性杂质多 臓性水或稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇酚强基的酸性 + +石灰水除杂质效果好
分离依据 之间的极性（分配系数K ）差异 分离工艺 回收 回收 单糖瞽 多糖昔 誓元 爸游离黄酮的乙瞇液 2 黄酮与杂质 昔与昔元 昔元与昔元 ）溶剂萃取法 2.2分离方法及原理 （二）pH 梯度萃取法 分离依据： 游离黄酮类化合物的酸性差异（见黄酮酸性规律） 分离工艺： 依次以 5%NiiH0h . 5%Na2C0 0. 2%N SL OH. 4%NaOH^取 5%NaHCO3< 5%Na2CO3液 0. 2KNaOH 液 4%NaOH 液 母液 （脂溶性杂石油駆液 乙豔液 乙酸乙酯 （脂溶性杂质）| | 丄酸化 水饱和正丁醇 母液 （水溶性杂质） 减压回收 原料的提取苹缩液（水溶液） 依次以石油耿、乙馳、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取
3 实验部分 3.1 原料的预处理 金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎 3.2 芦丁—标准溶液的配制 将芦丁在干燥箱里用120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品O.OIg用85%勺乙醇溶液配制成100.00mL 的溶液，备用。 3.3 测定波长勺选择 精确移取芦丁标准溶液0.50mL, 置于25.00mL 勺比色管中，用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀，放置10min; 加入10%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min, 再加入4%勺氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min, 加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后在460?560nm处测定吸光度，⑷（以试剂样品做空白）选择最大吸收波长。 3.4 芦丁标准曲线勺绘制 精确吸取芦丁标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于6支25.00mL的比色管中，用质量分数为85%勺乙醇稀释到10.00mL 处，加人5%勺亚硝酸钠溶液0.80mL, 混匀，放置10min; 加入1 0%硝酸铝溶液0.80mL , 混匀，放置10min, 再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min，加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min后于波长500nm处测定吸光度，（以第一瓶为空白溶液）然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图，绘制标准曲线。 3.5 黄酮类化合物的特征性实验[5]-[6] 在一定条件下对提取的黄酮类化合物进行特征性实验，具体内容如 下： （1）盐酸一镁粉反应：取 1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀，再加入浓盐酸数滴（1次加入），观察其泡沫颜色。（2）三氯化铝反应：取提取液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液， 吹干，观察颜色变化。（3）三氯化铁反应：取几滴提取液于白瓷板上，滴加1%三氯化铁乙醇溶液， 观察其颜色。（4）浓氨水反应：取乙醇提取液点在滤纸上，将滤纸在浓氨水上方熏0.5min ，观察 其颜色变化。 3.6 单因素实验 2.6.1 较佳提取剂质量分数的确定 准确称取3g 处理好的金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用无水乙醇、95%、85% 80%、 75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为80C下回流提取3h.提取完毕，用与提取剂的 质量分数相同的乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包，将其定容于100:00mL 容量瓶中，然后精确吸取 0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到10.00mL处，加人5%的亚硝酸钠溶液0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL ,混匀，放置10min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.00mL, 混匀，放置10min, 加入85%的乙醇溶液至刻度，摇匀，10min 后 于波长500nm处测定其吸光度，同时做三组平行实验。
总黄酮的提取方法 1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单 3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。 4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。 5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是%，% 和%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。
竹叶中黄酮提取分离及抗氧化活性研究 摘要：采用体积分数95%的乙醇浸提与超声波相结合的方法提取竹叶黄酮，并通过邻苯三酚自氧化法和Fenton反应测定其抗氧化性能。结果表明，竹叶黄酮的提取率为5.30%，粗提物中黄酮的含量为13.90%。0.2 mL 1 mg/mL竹叶黄酮对超氧阴离子自由基（O2-·）的清除率为17.39%；0.7 mL 1 mg/mL竹叶黄酮对羟基自由基（·OH）的清除率为58.20%，表明竹叶黄酮有优良的抗氧化活性。 关键词：竹叶；总黄酮；提取；抗氧化 Extraction of Flavonoids from Bamboo Leaves and Their Antioxidant Activity Abstract：Total flavonoids were extracted from bamboo leaves by 95% ethanol as solvent and ultrasonic. The oxidation activity of flavonoids in bamboo leaf was determined by the methods of pyrogallol autoxidation and Fenton reaction. The results showed that the extraction yield of flavonoids from bamboo leaf was 5.30%，and the content of flavonoids in the crude extract was 13.90%. The clearance rate of O2-· by 0.2 mL 1 mg/mL bamboo leaf flavonoids was 17.39%；while the clearance rate of ·OH by 0.7 mL 1 mg/mL bamboo beaf flavonoids was 58.20%，it showed that flavonoids in bamboo leaf had good antioxidant activity. Key words：bamboo leaf；total flavonoids；extraction；antioxidant activity 竹叶在中国有着悠久的食用和药用历史，其性淡、寒、味甘、微涩，具有清热利尿、明目解毒、止血、免疫调节、抗氧化、抗艾滋病和抑制肿瘤等功效，且无毒无害，可作为绿色食品进行开发。竹叶中含有丰富的黄酮类物质，总黄酮含量平均在10 mg/g左右。竹叶黄酮具有优良的抗溃疡、解痉、抗菌、消炎、降血脂、镇痛、利尿、降血清胆固醇和雌性激素、抗氧化等功效[1-7]。郑德勇等[8]报道从竹叶中提取的总黄酮对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH·）具有显著的清除能力；张英等[9]和章荣华等[10]研究发现竹叶黄酮能显著提高衰老小鼠体内SOD和GSH-Px的活力，说明竹叶黄酮有优良和稳定的抗氧化活性。闽北是中国竹子之乡，但目前对竹叶的利用十分有限，大部分被废弃，未能得到充分的利用。本研究采用乙醇浸提和超声波提取相结合的方法从竹叶中提取总黄酮，并采用邻苯三酚自氧化法测定其清除超氧阴离子自由基（O2-·）的作用，用Fenton反应产生羟基自由基（·OH）使溴甲酚紫退色的方法测定竹叶黄酮清除羟基自由基的作用，为竹叶黄酮的开发利用提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 实验用竹叶采自福建省武夷山市，用蒸馏水洗净后80 ℃烘干，粉碎、过40目筛，烘干备用。
大孔吸附树脂对竹叶黄酮的吸附分离特性研究 冯 涛 曹东旭 高 辉 吕晓玲 (天津科技大学食品科学与生物工程学院 天津 300222) 摘 要 选取12种大孔吸附树脂,分别测定了它们对竹叶黄酮的吸附率与解吸率,从而筛选出了对竹叶黄酮有较好吸附分离效果的树脂ADS-17。结果表明,ADS-17树脂比较适合于竹叶黄酮的提纯,经该树脂吸附解吸,吸附率可达70.16%、解吸率可达71.72%,两项指标均明显高于其它树脂。对解吸液脱醇后真空冷冻干燥,测得终产品中黄酮纯度可达28.04%,与上柱前粗提物中8.564%的黄酮纯度相比提高了约2倍多。 关键词 竹叶黄酮;大孔吸附树脂;吸附;解吸 Abstract Through the comparison among twelve kinds of macroporous resin’s adsorption and elution capacity of bamboo leaf flavone, ADS-17resin is selected as bamboo leaf flavone’s absorbent.Experiments results show thatADS-17resin is suited for purification of bamboo leaves flavone.Through its adsorption and elution,the adsorption ratio and elution ration can reach70.16%and71.72%respectively,these two levels are all obviously higher than any other resin.The flavone purification degree of28.04%is determined in the final product which is dryed by vacuum freezing after the ethanol of elution being removed,and it is over2times in comparison with the flavone purification degree of8. 564%in the roughly extracting product before going through the column of ADS-17resin. K ey w ords bamboo leaf flavone;macroporous resin;absorption;elution 1 前言 长期以来,人们对竹叶的利用价值缺乏重视,竹叶(淡竹叶)除作为中药使用外,几乎没有其它用途。从现代医学了解到,竹叶中含有大量的黄酮类化合物和其他生物活性成份,如酚酸、内酯、多糖、特种氨基酸和钙、锌、硒等人体所必需的矿物元素,其中黄酮是主要功能因子。 竹叶黄酮因其分子量小,易被人体吸收,能有效地清除自由基和脂质过氧化物,并阻断强致癌物质N -亚硝酸氨化合物的合成,能显著提高机体免疫能力,抵御疾病,能调节血压,降低血脂,改善脑部缺血,同时具有抗疲劳、抗衰老的生物功效。竹叶黄酮还可作为医药中间体,产品可替代银杏黄酮,具有抗衰老、降胆固醇等明显疗效。因此,提高竹叶黄酮产品的纯度是一个亟待解决的问题。 提纯的一种有效方法是利用大孔吸附树脂。大孔吸附树脂是近十年来发展起来的一类有机高分子聚合物吸附剂,它具有物理化学稳定性高、吸附选择性独特,不受无机物存在的影响,再生简便、解析条件温和、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸 收稿日期:2002-10-3多特点,广泛用于生化物质的分离纯化,本文选择了12种树脂,分别比较了它们对竹叶黄酮的吸附、解吸特性,借以选择较为合适的工业化生产用树脂[1]。 2 材料和方法 2.1 试验仪器、材料与试剂 日本岛津UV-120-02紫外/可见分光光度计; p HS-3C型酸度计,天津市盛邦电器厂;JA2003全自动光电分析天平,上海精科天平;L G J0.5冷冻干燥机,军事医学科学院实验仪器厂;芦丁,北京化学试剂公司;氢氧化钠;亚硝酸钠;硝酸铝;12种树脂的型号、特性及生产单位见表1。 2.2 试验方法 2.2.1 树脂的预处理 表1树脂均先经乙醇浸泡充分溶胀,然后用乙醇洗至洗出液加适量水无白色浑浊现象,再用去离子水洗尽乙醇即可[1]。 2.2.2 竹叶黄酮检测方法 竹叶总黄酮含量测定采用以芦丁为对照品的分光光度法。 (1)标准曲线的绘制[4] 准确称取充分干燥后的芦丁标准药品0.055g,用 9
收稿日期:2007205225 作者简介:梁 丹(19852),女,河南鹿邑人,贵州大学农药学硕士研究生,研究方向为植物源农药. 第24卷第5期周口师范学院学报 2007年9月Vol.24No.5Jo urnal of Zhoukou Normal U niversity Sept.2007 黄酮类化合物提取和分离方法研究进展 梁 丹1,张保东2 (1.贵州大学农学院,贵州贵阳550025;2.周口师范学院继续教育学院,河南周口466001) 摘 要:黄酮类化合物具有多种生理活性,从天然产物中提取和分离黄酮类化合物,引起了人们的广泛关注,其提取和分离方法也不断地改进和发展.文章主要综述了近几年来不同的提取和分离方法在黄酮类化合物中的应用进展.随着科技的进步,黄酮类化合物的提取和分离方法将更加快速、高效、完善.关键词:黄酮;提取;分离;进展 中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:167129476(2007)0520087203 黄酮类化合物是植物界分布广泛的天然酚类化 合物,植物中的黄酮大体上可分为“黄酮类”与“黄烷酮类”两大类物质,已知化学结构的黄酮类物质至少有4000余种.黄酮类化合物具有广泛的生理功能, 是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值,如有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[1,2].黄酮类化合物还在食品、化妆品等行业中广泛应用.随着市场需求量的增加,经济效益的提高,黄酮类化合物提取和分离方法也在不断地改进和提高. 1 黄酮类化合物提取方法的研究进展 1.1 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂).热水一般仅限 于提取苷类.在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素.此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产.郭京波等[3]以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍),可以明显提高芦丁的产率.(2)有机溶剂萃取法.乙醇和甲醇是提取黄酮类化合物的最常用溶剂.高浓度的醇(90%～95%)适合提取苷元,60%左右的醇适合提取苷类,提取的次数一般为2～4次[4].胡福良等[5]提取蜂胶液中黄 酮类化合物,以80%乙醇提取的总黄酮的含量最高.其他有机溶剂法是根据相似相溶原理,对不同性质的黄酮选择最佳的有机溶剂进行提取. (3)碱提取酸沉淀法.黄酮类成分大多具有酚羟 基,易溶于碱水(如碳酸钠、 氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)和碱性稀醇.因此,可先用碱性水提取,碱性提取液加酸后黄酮苷类即可沉淀析出.提取时应控制酸碱的浓度,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物的母核.当有邻二酚羟基时可加硼酸保护.此方法简 便易行,橙皮苷、 黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.1.2 按提取条件不同分类(1)回流提取法.本法是加热回流提取黄酮类化合物的一种方法.所用回流剂一般有水、 醇及混合溶剂.此法操作简便,但效率不够高,一般很难一次性完全提出黄酮化合物,需要反复回流提取[6,7]. (2)索式提取法.该法是用索式提取器,多次提取黄酮,其溶剂可反复利用,操作方便,价格低廉且提取效率高,但此法所需时间较长.索式提取黄酮类 化合物的方法已广泛为人们所利用[8].(3)微波辅助提取法.该法是利用微波加热的特性对成分进行选择性提取的方法.此法具有快速、高效、高选择性、对环境无危害等特点.刘峙嵘等采用微波萃取银杏叶中黄酮类化合物及唐课文等采用微 波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物,与传统溶剂萃取方法相比,微波萃取法更简单,而且具有萃取时间短、成本低、萃取效率高等优点[9,10].(4)超声提取法.该法是利用超声波浸提黄酮类 化合物的一种方法.其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞内,同时超声波的强烈振动能给植物和溶剂传递巨大的
举例说明黄酮的提取分离方法 组长：崔宁 组员：翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成 1.提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2～4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜：生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花：各取5g干菊花4份, ，在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低；pH为11时,虽然黄酮
食 品 科 技FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 提取物与应用· 198 ·2013年 第38卷 第2期 黄酮类化合物广泛存在于水果、蔬菜、谷物、植物来源的饮料(如红酒、绿茶等)等植物性食品中，具有保护心血管、降血压、降胆固醇、抗收稿日期：2012-08-25 基金项目：宁波职业技术学院2011年院级课题(NZ11022)；宁波工程学院“北仑科技创新基金”项目。 作者简介：汤晓(1981—)，女，浙江宁波人，硕士研究生，讲师，研究方向为植物有效成分提取与应用。 癌、杀菌、消炎等多种生理活性[1]。黄酮类化合物的基本结构为2个苯环通过中央三碳链连接而成，目前已确认结构的黄酮有5000多种，可划分为10汤 晓1，焦泽武1，龚淑珍1，梁 春1，方振飞1，关亚璠1，仇 丹2 (1.宁波职业技术学院应用化工系，宁波 315800 ； 2.宁波工程学院化学工程学院， 宁波 315016)摘要：测定槲皮素、异槲皮素、杨梅素、山萘酚、儿茶素、表儿茶素、芹菜素、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷等9种黄酮类化合物及其两两混合物的体外抗氧化活性，以研究黄酮混合物的协同、拮抗与加合作用。以DPPH 清除能力、羟基自由基清除能力、总抗氧化性、还原能力为评价指标。结果表明，含有较多B 环羟基的黄酮类化合物更易发生拮抗作用，可通过调节黄酮单品的比例减小混合物的拮抗作用或是增强其协同作用，不同反应机理的评价指标所得结果不同。 关键词：黄酮；抗氧化活性；协同；拮抗；加合 中图分类号：R 285 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2013)02-0198-09 Interaction of flavonoids mixtures on antioxidant activities in vitro TANG Xiao 1, JIAO Ze-wu 1, GONG Shu-zhen 1, LIANG Chun 1, FANG Zhen-fei 1, GUAN Ya-fan 1, QIU Dan 2 (1.Department of Chemical Engineering, Ningbo Polytechnic College, Ningbo 315800;2.College of Chemical Engineering, Ningbo University of Technology, Ningbo 315016)Abstract: This study investigated in vitro antioxidant activities of quercetin, isoquercetrin, myricetin, kaempferol, catechin, epicatechin, apigenin, delphinidin-3-O-glucoside, cyanidin-3-O-glucoside and their pairwise mixtures to evaluate synergistic, antagonistic, and additive effects of flavonoids mixtures. DPPH radical scavenging activity, hydroxyl radical scavenging activity, total antioxidant activity and reducing power were used as evaluation indicators. The results indicate that flavonoids with more B ring hydroxyls are more influenced by antagonistic effect. Antagonistic effect could be reduced and synergistic effect could be enhanced by changing the ratio of single flavonoid in the mixture. Different reaction mechanisms could induce different experimental results.Key words: flavonoids; antioxidant activity; synergistic; antagonistic; additive 黄酮混合物体外抗氧化活性的相互作用
黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1．1 传统提取方法 1．1．1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。此外，水提取物容易发霉发酵[22]。1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1．1．3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同，可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇为提取溶剂[15]。
1、本课题国内外研究动态，选题的依据和意义。 1.1 竹叶黄酮的提取工艺 黄酮类化合物的糖苷是多酚化合物，具有酚性化合物的特征，呈弱酸性，可溶于碱性溶液，但很多黄酮类化合物在溶于碱性溶液的同时有氧存在，其黄酮苷会发生降解反应。根据相似相溶原理，按黄酮类化合物的极性来选择所用溶剂，竹叶所含的有效活性物质主要为黄酮苷类，具有较大的极性和亲水性，故可选择热水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇等溶剂进行提取。竹叶黄酮的提取方法传统上多用浸提和蒸馏，目前已采用一些高新技术提取和精制竹叶提取物，如CO，超临界提取、超声波提取等。提取原料选新鲜竹叶，最好是现用现取。 1.1.1溶剂提取法 水提法此法适用于黄酮苷类物质提取。具有成本低，对环境及人类无毒害，设备简单，适合工业化大生产，但提取率低，提取中杂质较多(如无机盐，蛋白质，糖类等)，后续分离麻烦，现在很少单一使用此法。 有机溶剂提取法根据黄酮类化合物与杂质极性不同来选择适合的有机溶剂，常用有乙酸乙酯，丙酮，乙醇，甲醇，水或某些极性较大的混合溶剂。如甲醇一水(1：1)进行提取。竹叶中黄酮苷类易溶于水，甲醇，乙醇等强极性的溶剂中，故一般用浓度为60％左右的乙醇提取黄酮苷类。 陈彦等以水和乙醇水溶液为提取剂，对影响提取率的因素进行了优化，得出乙醇最佳提取浓度为75％。 1.1.2微波提取法 微波法原理是利用磁控管所产生的每秒亿次超高频率的快速震动，使材料内分子互碰撞、挤压，使得位于细胞内的有效成分从细胞壁周围自由流出，传递转移至萃取介质周围，在较低的温度下背萃取介质获取并溶解其中。此法具有提取率高，准确，快速，操作成本低，减少原料预处理费并于环境无害。微波射线穿透性好，在接近环境温度下抽提竹叶中所需的有效成分，对于热敏性成分的萃取非常有效。微波萃取作为一种新的顺应潮流的高新技术必将得到迅
一.黄酮类化合物的提取分离方法 按所用溶剂不同分类 (1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取 (2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸 (3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取. 2.按提取条件不同分类 (1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素 (2)索式提取法----------柑橘属类黄酮 (3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物 (4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质 (5)超滤法----------黄岑甙 (6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率 (7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油 PH 梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮 高效液相色谱分析法：五味子、葛根 高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位 柱色谱法 （1）硅胶柱色谱：姜黄素 （2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊 （3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿 （4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙 二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计） 方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法 （1） 槐米粗粉20g 加约120ml 的%硼砂水溶液， 搅拌下加入石灰乳至pH8-9， 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布 趁热滤过，反复2次 提取液 药渣 浓盐酸调pH2~3 搅拌，静置放冷，滤过。 滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶 芸香苷结晶 碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图 （2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。 提 碱 取 溶 分 酸 离 沉