双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF的浓度
VEGF简介：
VEGF属于PDGF因子家族，是A、B、C、D四种亚类的一类因子的总称，它们在血管发生过程中起重要作用。其中在血管再生和内皮细胞的再生过程中，VEGF-A扮演重要的角色。现已发现VEGF-A有许多种因切割后氨基酸数不同的亚型，其中含有的肝磷脂接合区域，能与胞外基质内的肝磷脂结合，以VEGF165量最多。VEGF-A可由多种细胞分泌的分子量为45kDa的糖蛋白。
VEGF的功能主要表现在伤口的愈合和女性生殖周期循环上。在病理组织中，VEGF能提升血管通透性。这就是肿瘤的转移和肿瘤复发的基础。在胚胎期，VEGF的作用表现为调控胚胎细胞的增殖、转移和提高内皮细胞的存活力上，通过成骨细胞和成软骨细胞的蓦集作用提升骨形成的效率。VEGF-A的功能还表现在一些如血管再生和血管通透相关联的生理过程中。肿瘤释放的细胞因子和生长因子能刺激骨髓中的巨核细胞分裂为血小板，这样就间接增加了VEGF-A 向肿瘤的迁移。
骨组织、心肌、肝实质、成骨细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、角化细胞、棕色脂肪组织、CD34+干细胞、内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞等细胞和组织均可表达 VEGF。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中VEGF 的浓度。VEGF 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的VEGF 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人VEGF 抗体后，抗人VEGF 抗体与VEGF 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在VEGF 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，VEGF 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中VEGF 浓度。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头；
2.酶标仪；
3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水；
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.若标准品复溶后，请在三天内用完。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作：
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；
D. 若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 标准品:加入去离子水0.5ml至冻干标准品瓶中使VEGF终浓度达到2000pg/ml，静置15分钟后轻轻混悬待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为2000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60分钟。
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
ELISA检测方法有哪些？ 酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么，它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗？跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等，直接上图： 直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色，但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法，见后文。 间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。 夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法： 双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”，
肝功能检查常见各项检测指标及其临床意义 全网发布：2013-12-04 17:28 发表者：张涛23219人已访问 一、谷丙转氨酶（ALT）： 最常见的肝功能检查项目之一，参考值为小于40单位，是诊断肝细胞实质损害的主要项目，其高低往往与病情轻重相平行。 临床意义： 在急性乙肝及慢性乙肝与肝硬化活动，肝细胞膜的通透性改变，谷丙转氨酶就从细胞内溢出到循环血液中去，这样抽血检查结果就偏高，转氨酶反映肝细胞损害程度。 但ALT缺乏特异性，有多种原因能造成肝细胞膜通透性的改变，如：疲劳、饮酒、感冒甚至情绪因素等等。上述原因造成的转氨酶增高一般不会高于60个单位，转氨酶值高于80个单位就有诊断价值，需到医院就诊。 另外需要注意，ALT活性变化与肝脏病理组织改变缺乏一致性，有的严重肝损患者ALT并不升高。因此肝功能损害需要综合其他情况来判断。 二、谷草转氨酶（AST）：谷草转氨酶的正常值为0～37μ/L，当ALT明显升高，谷草(AST)／谷丙(ALT)比值>1时，就提示有肝实质的损害。 临床意义：谷草转氨酶（AST）在肝细胞内与心肌细胞内均存在，心肌细胞中含量高于肝细胞，但肝脏损害时谷草转氨酶（AST）血清浓度也可升高，临床常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。 三、碱性磷酸酶（ALP）：正常参与值为30-90u/L。 临床意义：ALP主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清ALP明显升高。 但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清ALP亦可升高，应加以鉴别。 四、谷氨酰转移酶（GGT）： 健康人血清中GGT水平甚低（小于40单位） 临床意义：主要来自肝脏，少许由肾、胰、小肠产生。GGT在反映肝细胞坏死损害方面不及谷丙转氨酶（ALT），但在黄疸鉴别方面有一定意义，肝脏内排泄不畅（肝内梗阻）和肝外梗阻（如胆道系统阻塞）等疾病，急、慢性病毒性肝炎、肝硬化：急性乙肝时，GGT呈中等度升高；慢性乙肝、肝硬化的非活动期，酶活性正常，若GGT持续升高，提示病变洁动或病情恶化； 急、慢性酒精性肝炎、药物性肝炎：GGT可呈明显或中度以上升高（300～1000U/L），ALT 和AST仅轻度增高，甚至正常。酗酒者当其戒酒后GGT可随之下降。其他如中毒性肝病、脂肪肝、肝肿瘤均可升高。 五、总蛋白（TP）、白蛋白（A）、球蛋白（G）：
各免疫指标测定的意义 1、免疫器官指数的测定 胸腺、脾脏和法氏囊是肉鸡重要的免疫器官,其脏器指数可在一定程度上反映机体免疫功能的强弱。胸腺和法氏囊是重要的中枢免疫器官，其主要功能是产生Ｔ淋巴细胞和分泌胸腺素,主要参与细胞免疫;脾脏是外周免疫器官具有丰富的淋巴细胞和巨噬细胞,但Ｂ淋巴细胞比例较大,因此与体液免疫关系更为密切。其重量和其功能以及其中的免疫细胞数量有关，器官指数的高低决定了其中淋巴细胞增殖的程度，可粗略估计免疫功能的强弱，是一个粗浅和滞后的指标。 2、血液指标的测定 2.1 血清免疫球蛋白IgG , IgM , IgA 免疫球蛋白(Ig)是指具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白，一般存在于血液等多种体液中及某些细胞的表面上，血清免疫球蛋白的测定是检查体液免疫功能最常用的方法。通常检测IgG,IgM,IgA，这三类Ig就可以代表血清Ig的水平。禽类有3种免疫球蛋白，即IgG, IgM, IgA；IgG：是单体免疫球蛋白，是再次体液免疫反应产生的重要Ig，其血清中的浓度约为5-7mg/ml，远高于其它免疫球蛋白，且维持时间长，是机体杭感染的主要力量。它还参与抗肿瘤、抗寄生虫以及某些变态反应等过程。血清IgG是B淋巴细胞产生，血清含量最高，直接参与体液免疫反应的主要免疫分子。IgM是初次体液免疫反应产生的重要Ig，其含量仅次于IgG，是由浆细胞完整分泌，一般仅存在于血液内，起抗原受体作用。IgA是外分泌液中的主要Ig，能抵抗微生物入侵肠道、呼吸道、泌尿生殖道、乳腺和眼睛，能凝集颗粒性抗原和中和病毒。血清Ig含量升高，说明机体体液免疫功能增强。 2.2血清补体C3、C4 补体(complement, C)是存在于正常人和动物血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质。正常情况下，补体是血浆蛋白的组成成分。补体系统的各成分，以无活性的前体存在于血浆中。需要时，再在激活物如抗原-抗体复合物等的作用下，依次被激活，最终发挥溶解、破坏细菌、病毒等致病物的作用。补体系统激活过程中，可产生多种生物活性物质，引起一系列生物学效应，参与机体的抗感染免疫，扩大体液免疫效应，调节免疫应答。同时，也可介导炎症反应，导致组织损伤；补体的含量相对稳定，不因免疫而增强，补体的活化和抑制通过多种补体分子严格控制。补体系统是体内重要的免疫效应和免疫效应放大系统，发挥机体特异性和非特异性的抗感染作用。补体C3, C4含量的升高，说明机体特异性细胞免疫功能增强。 2.3血清细胞因子IL-2, IL-4，IFN-γ, TNF-α IL-2：主要由激活的T淋巴细胞产生，在免疫系统中具有十分重要的免疫生理调节效应，能激活、提高免疫细胞的多种功能，如提高它们杀伤癌细胞、病毒或细菌感染细胞、促进细胞因子的繁殖，刺激T细胞在体外的生长，促进抗体生成和分泌的能力。IL-2能刺激T辅助
仅供科研使用，不得用于临床检验。 人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）说明书 【产品名称】 通用名称：人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Human Interleukin-6（IL-6）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素6（IL-6）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素6（IL-6）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品浓度依次为：320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择） 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
血清临床检测指标 血清酶 血清生化 血清蛋白 血清激素 一、血清酶 ALT：丙氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶） AST：天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶） ALP（ALKP）：碱性磷酸酶 GGT：γ-谷氨酰转肽酶 CK：肌酸激酶 LDH：乳酸脱氢酶 AMYL：淀粉酶 LIPA：脂肪酶 Arginase：精氨酸酶 1、ALT：丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase ） 来源：大量存在于犬和猫的肝细胞浆内，肝脏疾病时，ALT逸至血清中且超过正常的3倍；横纹肌里也含有此酶，横纹肌损伤，ALT不会超过正常的3倍 作用： 丙氨酸磷酸吡多醛谷氨酸 ↓↑ALT （肝内）↓↑ 丙酮酸磷酸吡多胺α-酮戊二酸 犬正常值：8 - 75 (<6个月)；10-100 (成)U/L 猫正常值：12-115 (<6个月)；12-130 (成)U/L 升高评价： 200~400U/L中等程度肝坏死，400以上表明肝脏严重坏死。肝细胞坏死或损伤停止后此酶仍升高1~3周。此酶半衰期犬60h，猫3.5h。 检查适应症：腹泻、黄疸、腹水、精神不振和厌食，以及难以诊断的疼痛时，应检验此酶。 ALT值升高： 肝病：见于肝坏死、肝肿瘤（癌）、脂肪肝及肝炎（原发及继发）、肝硬化、肝脓肿和肝胆炎时。肝脏损伤（自然、手术、外伤） 药物：氯丙嗪、利福平、红霉素、氯霉素、四环素、庆大霉素、皮质类固醇抗惊厥药（扑癫酮、苯巴比妥）等药物。 中毒：四氯化碳，铅、汞等重金属，砒霜等中毒 传染病：犬传染性肝炎、猫传染性腹膜炎、马传贫。肝脓肿和肝胆炎、钩端螺旋体病、败血症。
其他疾病：肾炎，肺炎，败血症，脑炎，脑膜炎，肌肉发炎，胆囊炎，胆结石，胆管梗阻，甲亢，风湿病，消化道疾病，尿毒症，骨骼疾病、蛔虫、肝片吸虫等时也升高。 严重休克肝脏灌流不足。 ALT值在肝损害一周以上才持续升高。当肝细胞千分之一有炎症时，血清转氨酶含量就会增高一倍以上。 生理：妊娠、过度劳累、剧烈活动（乳酸在体内大量生成、积聚，使机体相对缺氧及低血糖，致使肝细胞膜通透性增加，引起转氨酶升高）。 代谢紊乱与继发性肝疾病：急性胰腺炎、糖尿病、应激、肾上腺皮质机能亢进、肾病综合征、 毒血症、饥饿或长期厌食、不吸收综合症、酮血病和各种原因引 起的肝脂肪沉积症（肥胖猫多见）、猫甲状腺机能亢进。 循环紊乱与继发肝病：心肌炎、心脏机能不足、心肌梗死、心力衰竭、严重贫血、缺氧、 休克。 ALT值降低： 无临床意义。但肝脏纤维化或硬化时可能减少。 2、AST：天门冬氨酸氨基转移酶 来源：AST通常存在于心肌细胞和肝细胞的线粒体中，心肌细胞中含量最高，其次是肝细胞及骨骼肌细胞。 作用：L-天冬氨酸+α-酮戊二酸←AST（肝、肌肉）→草酰乙酸+谷氨酸 犬正常值：0-50U/L 猫正常值：0-32 (<6个月);0-48 (成)U/L 犬半衰期12h，猫半衰期1.5h。多用于大动物。 AST升高： 由心肌疾病（心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭、损伤）、骨骼肌疾病（坏死、损伤，见下页）、肝细胞受损（坏死、肝癌、硬化）等引起。使役、训练和运动后及妊娠也会升高。中毒（铜、黄曲霉）、甲亢继发等也会升高。人为误差（溶血、分离血清延时）。 AST升高就是肝脏和肌肉部位的损害并无理论依据，为了进一步了解损害部位，有必要进行其他更多的特殊检查。 骨骼肌肉疾病也升高：损伤和坏死、挫伤、褥疮、肌肉注射、蛇咬伤。肌炎、梭菌性疾病、化脓感染、嗜酸性白细胞性肌炎。捕捉、过度训练。犬变性肌病。 胆囊炎、胆石症急性发作时。 非特殊性组织损伤：败血症、慢性铜中毒、黄曲霉毒素中毒、疝痛。 延长血清与红细胞分离时间和溶血（人为）。 结合ALT和CK值的升高： ALT升高，AST正常或轻微升高，有轻微可逆性肝损伤。 AST和ALT都明显升高，有明显肝细胞损伤或坏死。 AST升高，ALT正常或轻微升高，不是肝问题，如果CK升高就是肌肉损伤。 AST降低：VB6缺乏；大面积肝脏硬化（纤维化）。
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 双抗夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。 间接法 间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。
②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。 注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
血液生化检查各项指标临床意义 一、肝功全项 (一)白蛋白／球蛋白的比例A/G 1—2、5 用于衡量肝脏疾病的严重程度。A/G比值＜1提示有慢性肝实质性损害。动态观察A/G比值可提示病情的发展与估计预后,病情恶化时白蛋白逐渐减少,A/G比值下降,A/G比值持续倒置表示预后较差。 (二)球蛋白 1、增高 (1)、多发性骨髓瘤及原发性巨球蛋白血症。 (2)、肝硬化。 (3)、结缔组织病、血吸虫病、疟疾、红斑狼疮。 (4)、慢性感染、黑热病、慢性肾炎等。 2、降低 1、生理性低蛋白血症,见于3岁以内的婴幼儿。 2、低Y-球蛋白血症或先天性无Y-球蛋白血症。 3、肾上腺皮质功能亢进与使用免疫抑制药等常使免疫球蛋白合成减少,引起球蛋白降低。 (三)间接胆红素IBIL 1、5-18、0umol/L 增高常见于溶血性黄疽、先天性黄疽、肝细胞性(肝炎)或混合性黄疽,也见于阻塞性黄疽。 注:总胆红素,直接胆红素、间接胆红素的辩证关系: 1、三者均高,属肝细胞性黄疽、如急性重症肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、中毒性肝炎、肝癌等。 2、总胆红素与直接胆红素升高,属阻塞性黄疽,如胆道结石、胆道阻塞、肝癌、胰头癌等。 3、总胆红素与间接胆红素升高,属于溶血性黄疸,如溶血性盆血、血型不合输血、恶性症疾、新生儿黄疽等。 (四)总胆红素TBIL 5、1－20、0cmol／2 1、增高见于 (1)肝细胞性疾病:如急性黄疽性肝炎,慢性活动性肝炎,肝硬化、肝坏死等。 (2)阻塞性疾病:如胆石症、胰头癌等。 (3)其她:如新生儿黄疽、败血症、溶血性贫血、严重大面积烧伤、溶血等。 2、减低无临床意义 (五)直接胆红素DBIL 1、7-6、8umol/L 增高常见于阻塞性黄疽、肝癌、胰头癌、胆石症等。 减少:无临床意义 (六)丙氨酸转氨酶ALT 0-40u／L 增高: 1、肝胆疾病:传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆石症、胆管炎、胆囊炎。 2、心血重疾病:心肌梗死、心肌炎、心功能不全的肝淤血、脑出血等。 3、骨骼肌病:多发性肌炎、肌营养不良等。 4、其她:某些药物与毒物引起ALT活性升高,如氨丙嗪、异烟肼、水杨酸制剂、乙醇、铅、汞、四氯 化碳或有机磷等。 减少:无临床意义 (七)天冬氨酸转氨酶AST 0-40u/L 增高:
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 （1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 （2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 （3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 （4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 肝功能检查常见各项检测指标及其临床意义 肝功能检查常见各项检测指标及其临床意义一、谷丙转氨酶（ALT）： 最常见的肝功能检查项目之一，参考值为小于 40 单位，是诊断肝细胞实质损害的主要项目，其高低往往与病情轻重相平行。 临床意义： 在急性乙肝及慢性乙肝与肝硬化活动，肝细胞膜的通透性改变，谷丙转氨酶就从细胞内溢出到循环血液中去，这样抽血检查结果就偏高，转氨酶反映肝细胞损害程度。 但 ALT 缺乏特异性，有多种原因能造成肝细胞膜通透性的改变，如： 疲劳、饮酒、感冒甚至情绪因素等等。 上述原因造成的转氨酶增高一般不会高于 60 个单位，转氨酶值高于 80 个单位就有诊断价值，需到医院就诊。 另外需要注意， ALT 活性变化与肝脏病理组织改变缺乏一致性，有的严重肝损患者 ALT 并不升高。 因此肝功能损害需要综合其他情况来判断。 二、谷草转氨酶（AST）： 谷草转氨酶的正常值为 0～37 /L，当 ALT 明显升高，谷草(AST) ／谷丙(ALT) 比值1 时，就提示有肝实质的损害。 临床意义： 1 / 6
谷草转氨酶（AST）在肝细胞内与心肌细胞内均存在，心肌细胞中含量高于肝细胞，但肝脏损害时谷草转氨酶（AST）血清浓度也可升高，临床常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。 三、碱性磷酸酶（ALP）： 正常参与值为 30-90u/L。 临床意义： ALP 主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。 患这些疾病时，肝细胞过度制造 ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清 ALP 明显升高。 但由于骨组织中此酶亦很活跃。 因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。 佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清 ALP 亦可升高，应加以鉴别。 四、谷氨酰转移酶（GGT）： 健康人血清中 GGT 水平甚低（小于 40 单位）临床意义：主要来自肝脏，少许由肾、胰、小肠产生。 GGT 在反映肝细胞坏死损害方面不及谷丙转氨酶（ALT），但在黄疸鉴别方面有一定意义，肝脏内排泄不畅（肝内梗阻）和肝外梗阻（如胆道系统阻塞）等疾病，急、慢性病毒性肝炎、肝硬化：急性乙肝时， GGT 呈中等度升高；慢性乙肝、肝硬化的非活
免疫血清学检验 一、血清C-反应蛋白检验 1．英文或缩写：C-Reactive Protein，C-RP。2．标本采集：空腹静脉血2.0ml，立即送检。应避免脂血、溶血和污染。 3．正常参考值：0-8g/L。 4．临床意义： CRP 是一种能与肺炎链球菌C 多糖体反应的急性时相反应蛋白，能激活补体，促进吞噬和其他免疫调控作用。 CRP 是一种急性期蛋白，在各种急性和慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗塞、手术创伤、放射线损伤数小时迅速升高，病情好转时又迅速降至正常。此反应不受放疗、化疗、皮质激素治疗影响。 细菌感染较病毒感染含量高，急性风湿病较慢性高。5．注意事项： RF 可干扰本试验，产生假阳性结果，故类风湿关节炎患者欲用本试验判断其疾病是否活动，应先对其血清样品进行处理，以破坏RF，方法为：取待测血清125ul， 加3mmol/L 二硫苏糖醇100ul，37oC30 分钟后加0.25%H2O2(新鲜配置)150ul，再按操作。(3mmol/L 二硫苏糖醇4oC 可保存1 周)。 血清样品要用蒸馏水稀释，不可用生理盐水稀释。 胶乳试剂不可冻存，应保存于2-8oC，用前摇匀；室温如低于20oC，加胶乳试剂后应延长摇动时间2 分钟。 二、血清转铁蛋白检验 1．英文或缩写：Transferrin，TRF。2．标本采集：空腹静脉血2.0ml。应避免脂血、溶血和污染。 3．正常参考值：(2.72±0.81)g/L。 4．临床意义： TRF 为β球蛋白中能和铁结合的一种糖蛋白。利用转铁蛋白换算血清总结合力，比生化检验血清铁结合力方法简单、灵敏而准确，是诊断贫血的重要指标之一。 主要功能是运转微量元素铁，调节铁的吸收，防止机体吸收过多的铁，引起铁 中毒。 升高：妊娠末期、缺铁性贫血、急性肝炎。 降低：急慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、恶性肿瘤。5．注意事项： 及时送检，若不能及时送检，分离血清-20oC 保存。 三、血浆结合珠蛋白检验
人白细胞介素ELISA 检测试剂盒 人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理： 人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
一、临床常规检验项目及检查指标的临床意义 血常规： 1、红细胞记数RBC： 临床意义：诊断各种贫血和红细胞增多症 正常参考值：男（4.0-5.5）T/L 女（3.5-5.0）T/L 2、血红蛋白HGB 临床意义：同上 正常参考值：110-160g/L 3、红细胞比积HCT 临床意义：同上 正常参考值：0.37-0.49 4、平均红细胞体积MCV 临床意义：判断贫血的类型 正常参考值：82-92fl 5、平均红细胞血红蛋白含量MCH 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：27-31pg 6、平均红细胞血红蛋白浓度MCHC 临床意义：判断贫血的类型和轻重程度 正常参考值：320-360g/L 7、红细胞体积分布宽度RDW 临床意义：RDW增加可见于营养缺乏性贫血 正常参考值：11.6-14.8 8、白细胞记数WBC 临床意义：增高见于感染、组织损伤、白血病；降低见于血液病、自身免疫病、脾功能亢进等 正常参考值：4-10G/L 9、白细胞分类DC 临床意义：用于血液病等疾病的诊断和判断感染轻重程度。中性粒细胞增高见于感染、白血病；降低见于某些感染、自身免疫疾病、脾亢等 嗜酸性粒细胞（EOS）增高见于过敏性疾病、某些皮肤病及传染病的早期；降低见于使用肾上腺皮质激素后等。 正常参考值：分叶核粒细胞GRAN 50-70% 嗜酸性粒细胞EOS50-300G/L（G=106） 淋巴细胞L YM 20-40% 单核细胞MID 3-8% 10、血小板记数PLT 临床意义：检测凝血系统的功能 正常参考值：100-300G/L 11、平均血小板体积MPV 临床意义：判断血小板减少的原因 正常参考值：6.8-13.5fl 12、血小板压积PCT
竭诚为您提供优质文档/双击可除 免疫血清鉴定指标 篇一：免疫血清的制备 免疫血清的制备 免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备 免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。免疫血清的 效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。… 免疫血清的制备是常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免 疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。免疫血清的效 价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。因此，如欲获得高特异性的免疫血清，
必须予先纯化抗原。此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。 一、原理 具有免疫原性的抗原可刺激机体相应b细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的b细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。另外，抗体的产生具有回忆应答的规律性，牨m现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。是由于记忆性b细胞参与再次应答所致。 二、免疫方法 根据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人Igg免疫血清为例作具体说明。 1.用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤； 2.第一次免疫：用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FcA)乳化的抗原(人Igg)下称FcA-Igg)液1ml，每侧脚掌皮下各注入0.5ml。 3.第二次免疫：间隔10-14天后，于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FcA-Igg，每淋巴结注0.1ml，其余注入
人P16ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人P16的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P16水平。用纯化的人P16抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P16，再与HRP标记的P16抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P16呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人P16浓度。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
评估机体免疫水平主要有哪些免疫学指标？ 这里要分两大类:一是"临床应用学的免疫指标",二是"理论研究型的免疫学指标",而"临床学应用指标"的范围较小,其指标也包括在理论研究型的指标中,即理论研究型不但包括日常医疗应用的指标(临床应用),也包括了理论研究与教学的指标 一,临床应用学的免疫指标: 1-免疫细胞学指标:白细胞,中性粒细胞,淋巴细胞,T淋巴细胞,NK细胞, 2-血液学指标:Ig-G,Ig-M,Ig-E,或"免疫球蛋白"等 3-抗原学指标: (1)血液免疫学指标:常见有:乙肝两对半中的第一,第三项, (2)人体各种分泌物中的病原体检查(如淋病双球菌,大便中的寄生虫,大便中的伤寒弧菌的检查,痰中的结核杆菌检查,等等) 二,理论研究学的免疫学指标(以上各类其实也是,但理论研究学中,还有更深入的指标,以下只列以上所说之外的): 1-抗原;即各种微生物的分离,检查,定型; 2-免疫球蛋白:Ig-A,Ig-D,再加上以上临床学免疫指标的各项; 3-补体系统; 4-细胞免疫学指标: (1)T细胞; (2)B细胞; (3)NK细胞; (4)CD白细胞(以上各种,还有:CD30以上的系列, 5-体液免疫学指标: (1)以上免疫球蛋白各种; (2)特异性抗体的滴度; (3)补体系统的滴度 临床常用免疫学检测： 免疫球蛋白检测 血清补体检测 感染性疾病的免疫学指标 肿瘤标志物检测 自身免疫性疾病的免疫学指标 其他体液免疫指标 细胞免疫相关检测 免疫球蛋白检测 P440-442 缺乏特异性诊断价值，主要用于机体体液免疫功能状态的评估。 临床检验现状： 血清补体检测 P442-443 缺乏特异性诊断意义，主要用于机体体液免疫功能状态的评估。 肿瘤标志物检测 P458-462 肿瘤标志物（tumor marker)：P458 在肿瘤发生、发展过程中，由肿瘤细胞合成、释放的物质或由机体对肿瘤发生反应而产生的一类物质；与正常组织相比，这些物质在机体内的含量显著增高；检测这些物质可以反映肿瘤的恶变阶段和肿瘤的基因型。 自身免疫性疾病的免疫学指标