与IVF/ICSI相关基因印记疾病研究进展
纪冬梅综述,冯云审校(上海交通大学医学院附属瑞金医院生殖医学中心,上海200025)
摘要:基因印记是表观遗传修饰的一种,基因印记对原始生殖细胞功能、配子成熟、胚胎生长发育、胎盘结构和功能以及出生后生长发育均有重要意义。整个过程中,基因组印记经历了擦除和重建和维持,其中任何一个环节出现错误都可能导致胚胎发育缺陷。I V F/ICSI等辅助生育技术的操作过程可能改变基因印记导致印记紊乱引起相关疾病。
关键词:表观遗传修饰;基因印记;印记性疾病;I V F/ICSI
中图分类号:R39413文献标识码:A文章编号:1006-9534(2009)05-0009-04
辅助生育技术(assisted reproducti on techono l ogy,ART),包括体外受精-胚胎移植(i n v itro fertilizati on-embryo trans-fer,I VF-ET)、单精子卵胞浆内注射技术(intracy t op l as m i c si ng le sper m i n j ec tion,ICSI)、宫腔内人工授精(I U I)以及植入前遗传学诊断(PGD)等,从第一例试管婴儿诞生至今,辅助生殖迅速应用于临床不孕不育的治疗,为不孕不育夫妇带来了福音。由于I V F/ICSI的临床使用最普遍且涉及到配子操作、胚胎体外培养等非自然受孕过程(如药物超排卵、附睾/睾丸穿刺取精、显微注射等),其安全性一直是人们关注的热点。尤其是近年来随着表观遗传学的发展人们越来越关注ART出生胎儿基因组印记的改变所引起的基因印记疾病,主要包括Beck w it h-W i ede m ann syndrom e(B W S)和A nge l m an syndrom e(AS)。本文就表观遗传修饰、I VF/I CSI相关的印记疾病及原因、机制研究进展做一综述。
1.表观遗传修饰与基因印记
表观遗传修饰(epi g enetic m odifica ti on),又称基因型外修饰或后成基因型修饰,它涉及对DNA双螺旋结构的修饰而没有改变DNA的碱基排列顺序,只通过甲基化导致基因沉默和恢复转录活性。表观遗传修饰主要包括DNA修饰和组蛋白修饰。表观遗传改变对哺乳动物生长发育的调控起重要作用,在不同组织发生改变的时间不同,影响和决定细胞定向分化。体内所有细胞的表型都是细胞的基因结构、表观遗传标志以及环境因素相互作用的结果[1]。
基因印记又称基因组印记、配子印记或亲源印记,是一种表观遗传修饰,指体细胞来源于不同亲代的一对等位基因发生的差异性表达,即机体仅表达来自亲本一方的等位基因,而另一方不表达或很少表达,具有以上特性的基因称为印记基因。其中,父系等位基因不表达者就称为父系印记,而母系等位基因不表达者就称为母系印记;父系印记基因主要包括H19、I G F2R、GRAB10、CDKN1C、TSSC3,M A S H2等,母系印记基因主要包括I G F2、PLAG L1、PEG、M EST等[2]。基因印记最具特征的标志是DNA甲基化/去甲基化,通常甲基化的DNA不具有转录活性,去甲基化DNA有转录活性[3]。甲基化抑制基因转录的机制可能有两种:一种是特殊转录因子结合到DNA上干扰转录,另一种是甲基结合区域蛋白结到DNA阻遏转录。基因印迹不遵循孟德尔遗传定律,是一种非遗传性基因调控方式,解释了许多孟德尔遗传规律不能解释的现象。基因印记缺陷包括DNA甲基化修饰异常(低甲基化、超甲基化、甲基化缺失等)及组蛋白乙酰化、甲基化异常等。
目前,已经明确的人类印迹基因大约有80个左右,与胚胎的生长发育有密切关系。有研究表明基因印迹在配子形成时期即开始建立,并能够在以后配子发育和胚胎植入前早期保持完整[4]。印记基因的特点主要包括:印记基因通常成簇存在,很少是单独存在;一般都有印记中心即差异甲基化区D M R(d iffe renti a lly m ethy i ated reg ion,D M R);在印记基因的DM R内,有富含CpG的Cp G岛(Cp G island);基因印记的过程包括印记形成、维持和擦除,在生殖细胞系印记过程是可逆的。
并非所有印记基因都能编码蛋白质,有的编码非翻译的RNA、反义RNA或小RNA,可能在基因表达调控中起到重要作用[5],其调控机制有待进一步研究。最早发现的印记基因包括I G F2和H19,二者均位于11号染色体短臂15区5带(1l p15.5)。染色体1lp15.5的印记基因调控位点从功能上可分为两个:IGF2、H19存在于位点1,IGF2为母系印记可表达胎儿生长因子,H19为父系印记表达非编码RNA;位点2包括印记基因CDKN1C、KCNQ1、KCNQ1OT1等[6]。
2.基因印记疾病与I V F/ICSI相关性
(1)基因印记疾病及其危害
Beckw ith-W i edem ann syndrom e是一种以过度生长为特点的基因印记异常相关疾病,典型的临床表现有:巨舌症、出生前/后过度生长、前腹壁缺陷(脐疝)等,也可出现肥胖、新生儿低血糖、面部红斑、耳部凹陷皱褶、肾脏异常以及胚胎性肿瘤如肾母细胞瘤、肝母细胞瘤等;目前认为B W S的发生与染色体1l p15.5位点KCNQ1、IGF2-H19、CDKN1C等基因印记异常有关。
A ng el m an syndrom e是一种罕见的神经系统障碍综合征,特征性临床表现包括小头畸形、严重精神发育迟滞、多动、易兴奋、智力障碍、共济失调、严重运动及语言障碍、躯干肌张力降低,四肢肌张力增高等,呈特殊面容。AS发生的机制涉及染色体异常、印记缺陷、U BE3A基因突变及不明原因的遗传缺陷。按发病机制可将AS综合征分为5个类型:I型为染色体15ql1-13缺失(约占70%);ò型为单亲二倍体(占5%);ó型为印记缺陷(占510%)[7]。通过对AS患者基因型-表型的研究发现I型和V型危害最大,表现为明显的发育迟滞、癫痫发作频率高及显著的EEG异常[8,9];ò型和ó型表现相对较轻;?型介于轻重之间,癫痫发作情况、小头畸形与?、?型相似,运动及语言障碍较轻,具体机制仍不明确[10]。
(2)相关性临床及基础研究
至今关于I V F/I CSI是否会真的增加基因印记疾病的风险仍存在一定的争议,但是引起人们越来越多的关注。早在2000年就有动物研究发现胚胎体外培养会引起基因印记缺陷而影响早期胚胎发育导致出生后缺陷[11]。2002年Cox 等[12]第一次报道两个I CSI受孕出生子代出现A S,并且发现2例患者均存在15号染色体上印迹基因的缺失。2003年又有一例I CSI后代患有A S并伴有印记缺陷[13]。Ludw i ng等收集16例不育夫妇(不育>2年或接受助孕治疗)所生A S患者,其中有4例印记缺陷者,其中ICS I助孕和激素治疗各1例,通过比较相对危险度(RR)发现不育夫妇更容易生出印记缺陷引患A S的孩子(1215%vs4%)[14]。以上研究报道与ART相关的AS并非由最常见染色体异常引起,而且均与基因印记缺陷有关,均为I CSI助孕后代,推测其发生可能与ICS I助孕过程中促排卵、显微操作、体外培养等有关[12-14]。
随后有许多研究报道IVF/I CSI会增加子代患B W S的的风险。2003年有报道65例IVF生出3例B W S患儿3/65 (416%),比整个美国普通人群的B W S发生率018%高出约6倍。在7例ART出生B W S患者中,5例是ICSI助孕出生;分子生物学检测发现5例有特异的表观遗传改变(4例L I T1基因印记改变,1例L IT1、H19均发生异常)[15]。M athe r等回顾研究大量的散发B W S病例,在诊断出的149例B W S病例中6例是经ART(3例I VF、3例ICS I)出生的,与普通人群的发病率112%相比较,ART与B W S的关联性比正常妊娠出生者高4倍。其中2例存在KCNQ1OT1印迹丢失,由于I VF、ICS I均可增加B W S发生,推测印记基因甲基化缺失可可能与体外胚胎培养有关[16]。
H a lliday等分析维多利亚1983-2003年间自然出生的1316500例中有37例B W S患者(约1/35580),同期出生的I VF子代14894例中有4例B W S患者(约1/4000),通过比较表明I V F后代B W S比普通人群高出9倍,而且7例经ART出生的B W S患者,其中6例存在KCNQ1OT1或H19的印迹缺失,可能与体外培养条件或配子/胚胎暴露在特殊的培养基或生长因子中有关[17]。
但是并非所有研究报道都认为IVF/I CSI会增加印记疾病的风险。一项研究分析92例ICS I后代未发现15号染色体上有基因印迹异常,认为ICS I后代中没有出现DNA甲基化缺失风险增高[18]。L idegaard等[19]分析丹麦I V F助孕出生的6052个儿童印记疾病的发生率与自然受孕的442349个儿童发现I V F并没有增加印记疾病的潜在风险。
B W S涉及染色体11p1515印记基因簇的异常基因主要包括I GF2、KCNQ及CDKN1C等。一种机制是母系印记基因KCNQ1低甲基化或甲基化缺失,这种甲基化异常会引起KCNQ1过度表达,从而导致其附近的CDKN1C基因表达下降。CDKN1C是一种生长抑制基因,它的表达下降会导致过度生长、器官增大。最近有研究[20]B W S患者的I GF2基因印记缺陷与K vD M R1位点母源性特异等位基因甲基化缺失(LOM)引起的CDKN1C的表达下降相似。通过分析人和小鼠I GF2基因三个差异甲基化位点(D M R s:DM R0,DMR1, DM R2),发现在DM R0有四个SNP s包括T123C、G358A、T382G及A402G,这几个SNP s有3/16的可能出现单元型为TGTA、CATG及CAGA。对73例散发B W S患者和健康对照组的DM R0SNP s进行DNA分析发现病例组CAGA出现的频率显著增高而CATG出现的频率显著降低。同时发现以上现象在K vDM R1LOM T B W S患者也有非常显著,表明382G SNP上的G等位基因与K vD M R1上的LOM有关。
3.相关性机制研究
普通人群中发现的B W S和A S既包含父系等位基因的重复又包含母系等位基因在不同的印迹区域的功能缺陷,而与ART相关的AS和B W S主要机制是母系等位基因上的甲基化丢失。配子印记在雌性和雄性发生的时间不同[21,22],精子早在早孕期原始生殖细胞转移到生殖脊后一旦在生殖脊印记擦除,便进入减数分裂I和II。印记序列在出生前甚至在精子生成完成前[17]。雌性原始生殖细胞也经历相似的过程转移到生殖脊并擦除原先的甲基化印记,但卵子的减数分裂I期开始后几年直到排卵前才完成,而且减数分裂II期直到受精前才完成。由于甲基化和母系印记发生在减数分裂期,所以由于精子和卵子减数分裂开始和持续的时间不同[21],认为虽然父系印记在受精前很早就建立,但是母系印记在配子ART体外操作过程中更容易受到干扰而发生改变。植入前期亦是DNA甲基化容易发生改变的时期,不同物种发生改变的具体时间不同[23],有的始于6细胞或8细胞期,有的始于囊胚期。早在受精后4小时,发生去甲基化重新建立表观遗传改变,在这个早期植入前基因组范围大规模去甲基化时,印记位点受到保护以维持亲本特异性甲基化印记,如果保护缺失就可能导致印记异常[22]。
配子和早期胚胎形成期是甲基化印迹擦除、建立和维持的关键窗口期,而此期恰为辅助生殖技术体外干预阶段,可能干扰基因组印迹的建立和维持,导致遗传性印迹病的产生。目前仍不清楚ART引起基因印记异常的具体原因及其机制,相关动物研究表明胚胎体外培养和相关操作均有可能与引起基因组印记异常[24]。可能的机制总结如下:
(1)操作对配子的影响最早报道认为I CSI是引起子代患A S最主要的危险因素[18]。可能的原因包括:人类15号染色体的母系甲基化印迹排卵前尚未建立,而建立于受精时或之后,而大多数A S的印迹缺失均发生于此期[25],所以认为A S的发生可能与ICS I有关。I CSI操作的影响:ICSI注射之前取出卵丘的操作可能改变卵子正常的减数分裂,显微注射过程造成机械损害同时避开了对精子的自然选择可能选择缺陷精子进行受精,而且将精子顶体及消化酶类引入卵胞浆也可能破坏卵胞浆内环境。但是2003年3个报道共19例B W S患者中只有9例是ICSI出生[16,26]。
(2)胚胎体外培养多个研究报道胚胎体外培养会引起基因印记改变,比如将鼠胚在体外M16液中培养会导致H19、I GF2、G rb10等基因印记改变[27];在W h itten c s培养液中培养会引起H19基因印记缺失[28],通过克隆获得的鼠胚也会引起多个基因印记改变等。
(3)超排卵和不孕尽管早在2002年就有报道I CSI出生的B W S患者父亲都有精子异常认为印记缺陷可能与男性不育有关[12],此后的研究观点仍有很大差异,有的发现ART 相关印记缺陷主要与母系位点低甲基化、超排卵和胚胎体外培养有关[29]。另有发现不孕不育本身更能引起潜在的印记缺陷,而且超排卵比ICS I的风险更大,由于所选对照组是
I VF出生儿童,所以不能排除配子/胚胎体外培养或胚胎操作是否会增加印记缺陷[14]。最近一项研究[30]第一次报道了精子数低于10@106男性不育患者配子发生印记基因甲基化异常的风险大大增加,他们通过亚硫酸氢盐基因组测序比较少精子症患者与正常对照组H19、M EST印记基因甲基化模式,发现15例少精子症患者中有7例(4617%)表现H19和/或M EST印记基因缺陷,其中2例既有H19低甲基化又有M ES T超甲基化,另外5例只有一种基因缺陷,研究还表明不同形式的甲基化可发生于同一个病人但是严重少精子症患者也可能产生印记正常的精子。
4.能否改变I V F/ICSI引起的印记改变
目前认为改变发生在配子期的基因印记的建立和胚胎植入前期表观遗传重建均是有可能的。许多动物研究发现改变胚胎体外培养液的成分可以导致印记基因的改变[27,28,31],如标准培养液加氨基酸可引起H19印记基因双亲表达,改变培养液成分可改变I GF2-H19的DNA和组蛋白甲基化。在羊和牛的研究中发现的/大仔综合征0(l arge o f-f spr i ng syndro m e,LO S)是一种子代体积偏大、出生死亡率高的疾病,可能与体外操作过程中印记基因和表遗传重建发生异常有关[32],进一步分析发现与体外培养后I GF2R甲基化缺失有关[11]。羊的LOS模型在体外也可以通过补充培养基增加囊胚细胞数量、囊胚体积以及从而增加影响发育重要基因的转录建立。但是人类并没有IGF2R基因印记,所以人类植入前胚胎表遗传改变可能通过其他路径改变,目前还没有明确。除了培养液成分以外,其他的相关因素如铵离子浓度、氧分压、温度及冷冻保存等也有可能改变基因印记的建立、修饰,可进一步实行相关方面的研究。
综上所述,虽然与IVF/I CSI相关的基因印记疾病发生比例相对较高,实际发生还是比较罕见,并不影响其广泛的临床应用,而且目前也无法得出ART一定增加先天性印迹疾病发生率的结论,需要进行更多的多中心大样本临床随访研究。但是以往众多的动物实验和临床研究均表明此I V F/IC-SI可引起基因印记改变引起相关疾病,而且通过一定的操作有可能人为改变基因印记,这为我们更进一步探索各个印记基因之间的相互作用机制、ART相关基因印记疾病发生机制,利用印记调控机制对辅助生殖相关异常印记基因进行干预以获得完全健康子代带来希望。
参考文献
[1]M organ HD SF,G reen K,et a.l E p i gen etic reprogra mm i ng i n m a mm al s
[J].Hum M olG enet,2005,14:47-58.
[2]H orst h e mke B L M1Ass i sted reprodu cti on:t h e ep i genetic pers pecti ve
[J].Hum Rep rod Update,2005,11:473-482.
[3]C D1Ep i genetics and diseas e:altered states[J].N ature,2003,421:
686-688.
[4]Tycko B M I1Physiol og i cal functi ons of i m p ri nted gen es[J].J Cell
Phys i o,2002,192:245-258.
[5]S eit z H R H,L i n SP,Youngs on N,Ferguson-Sm it h AC,C availle
J1I mp ri nted s m allRNA genes[J].B i ol Che m i stry,2004,385:905. [6]A da m C1Sm i th SC,Jose C1Ferrei ra,And Rosanna W eksberg1G ro w th
Regu lati on,I m pri n ted Gen es,and Ch ro m oso m e11p1515[J].Ped i atric Research,2007,61:43-47.[7]Lal and eM CM A.M ol ecu l ar ep i gen eti cs of Angel m an syndro m e[J].
CellM oI L i fe Sc,i2007,64:947-960.
[8]C l ayt on-Sm ith Ja L L.Angel m an s ynd ro m e:a revie w of the cli n i cal
and geneti c as pects[J].J M ed Genet,2003,40:87-95.
[9]M oncl a A,M al zac P,Voel ck elM A,Auqu i er P,G irardotL.Phenot ype
-genotype correlati on i n20del etion and20non-deleti on Angel m an s yndro m e pati en t s[J].Eu r J H um G enet,1999,7:131-139. [10]Loss i e AC,W h it ney M M,A m i don D,Dong H J,Chen P,Theri aqu e
D,et a.l D i s ti nct ph enot ypes d i sti ngu is h t h e m ol ecu l ar classes of An-gel m an syndro m e[J].J M ed Genet,2001,38:834-845.
[11]Young LE,M c E voy TG,Bu tterw it h SC,Guti errez CG,Carolan
C1Ep i genetic change i n I GF2R is associated w it h f etal overgro w th a-f ter s heep e mb ryo cu l ture[J].NatGen et,2001,27:153-154. [12]C ox GF BJ,L i p V,M au UA,Spend i ng K,et a.l In tracytop las m ic
s per m i n jecti on may i ncrease the ris k of i m pri n ti ng defects[J].Am J
H um G enet,2002,1:62-64.
[13]K H Rstavi k KE,CB van d er H agen,S Spetal en,K K i erul,f O
Sk jel da,l K Bu iti ng.An other C ase of I m pri n ti ng Defect i n a G irlw i th Angel m an Synd ro m eW h oW as Conceived by I n tracytop l as m i c Sp er m In j ecti on[J].Am J H um Gen et,2003,72:218-219.
[14]M Ludw i g AK,S Gro B,A Su tcliffe,R Varon,B H ors-t
he m ke1Increased prevalence of i m p ri nti ng defects i n p ati en ts w ith An-gel m an syndro m e b orn t o s ub fertile coup l es[J].J M ed Gen et,2005, 42:289-291.
[15]M ichael R.DeBaun ELN,And re w P Fei nberg.Associati on of i n v i tro
fertili zation w it h b eckw it h-w iede m ann synd ro m e and ep i genetic a-l terati on s of LI T1and H19[J].Am J H um Genet,2003,72:156-160.
[16]E R M aher LAB,S C Bow di n,A Luhari a,W C oop er,T R C ol e,F
M acdon al d,et a.l B eckw i th-W iede m ann s yndro m e and ass i sted re-p roduction techn ol ogy(ART)[J].JM ed Genet,2003,40:62-64.
[17]Jane H alli day KO,Su e B reh eny,E lizabet h A l gar,Davi d J Am or.
Beckw i th-w i ede m ann s yndro m e and I VF:A case-con trol st udy [J].Am J H u m Gen et,2004,75:526-528.
[18]M ann i ng M L W,Bonduelle M,C a mu s M,D e R ijcke M,et a.l S t udy
of DNA-m et hy l ation p atterns at chromoso m e15q11-q13i n ch i-l
d ren born after ICSI reveals n o i m pri n ti ng def ects[J].M olH um Re-
p rod,2000,6:1049-1053.
[19]L i degaard O PA,And ers en AN1I m printi ng d iseases and I VF:Dan i sh
N ati onal I VF cohort st udy[J].H um Reprod,2005,20:950-954. [20]Angel a Sparago FC,M aria Vernucc,i G i ovann i Batti sta Ferrero,M ar-
gherita C i rill o S il engo,Andrea R i cci o11M icrodel eti ons i n t he hum an H19D M R res u lt i n loss of I GF2i m p ri nti ng and B eckw i th-W iede-m ann syndrom e[M].Nat u re Gen eti cs,2004136.
[21]Jacob S M K1Ga m etes and e mb ryo epigeneti c reprogra mm i ng affect
d evelopm ental ou tco m e:i m pli cati on f or ass i sted reproducti v
e techno-l
ogies[J].Ped i atr Res,2005,58:437-446.
[22]J M T.G a m ete i m pri n ti ng:setti ng ep i genetic patt erns for the next
generation[J].Rep rod FertilD ev,2006,18:63-69.
[23]R ei k W DW,W alter J1Ep i geneti c reprogra mm i ng i n ma mm alian de-
vel op m en t[J].S cience,2001,293:1089-1093.
[24]al Ksd w bde.C u l ture of prei m p lantation m ouse e mb ryos affects fet al
d evelopm ent and th
e expressi on o
f i m pri n t ed genes[J].b i ol Reprod,
2001,64:918-926.
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结果
1.人FA-1cDNA的扩增我们采用RT-PCR法获得了编码人FA-1的c DNA片段,包括起始密码子、终止密码子及酶切位点的序列约400bp(见封三上图1)。
2.重组质粒pBV220/FA-1的鉴定重组质粒pBV220/ FA-1经EcoR?和Ba mH?双酶切鉴定,结果显示,双酶切得到了插入片段,编码FA-1的cDNA片段已克隆到了表达载体pBV220中,重组表达质粒pBV220/FA-1结构正确(见封三上图2)。重组质粒经DNA序列分析,该cDNA序列与文献报道的序列相一致。
3.重组人FA-1的诱导表达将诱导后的pBV220/FA -1工程菌及对照菌进行SDS-PAGE电泳分析,在分子量约1
4.6kD处出现一条明显的新蛋白条带(见封三上图3),对照未见明显的新条带。
讨论
越来越多的已婚育龄夫妇被不孕不育问题所困扰,据统计大约有10~15%育龄夫妇因各种原因不能生育,并且比例似乎还有上升趋势[3]。其中因体内存在由精子抗原诱导的抗精子抗体(An ti-sper m anti body,A S A)引发的免疫性不育约占9~12.8%[4]。A S A一般存在血液、淋巴、精液、女性的宫颈和阴道液中,通过不同途径作用于受孕过程的多个环节影响生育。人类精子抗原种类繁多,目前已涉及100多种,分别位于精子的多个部位,但并不是所有A S A的抗原都对生育有影响,有些抗原并未参与生殖过程,而有些抗原的抗体结合区不同于功能区,抗原结合A SA后对其功能无影响[5]。因此,研究不孕不育患者体内A S A的抗原,阐明A S A 引起不育的原因,排除无关ASA的干扰,对不孕不育的后续治疗及研发有效的避孕疫苗意义重大。
与不孕不育相关A S A的抗原通过影响下述途径:精子获能、顶体反应、精卵结合和胚胎植入等过程影响正常生育。FA-1蛋白是与精子获能及顶体反应(acroso m e reacti on, AR)相关的ASA的抗原,FA-1蛋白只在人睾丸中特异性表达,抗FA-1的抗体明显抑制AR,且抑制活性呈抗体浓度依赖型[1]。因此,血清中FA-1蛋白的检测可为后续治疗不孕不育提供有效帮助。另外,FA-1蛋白的不孕不育相关性为研究避孕疫苗提供了理想的靶位点,最理想的避孕措施是能同时满足高效、安全、便宜、长效、可逆和方便等特点的方法,而避孕疫苗是目前最好的方法[6,7],近年,在精子特异性抗原或抗原功能小肽的疫苗筛选方面已取得了一些突破性的研究进展[8,9],与不孕不育相关的精子抗原为设计疫苗提供了一种理想的靶位点。而具有组织特异性的、只在人睾丸中特异表达的FA-1蛋白又是最理想的避孕疫苗的侯选精子相关抗原。
本研究成功地克隆了人FA-1的编码基因,诱导表达了重组人FA-1,这为下一步免疫性不孕不育症的诊疗及避孕疫苗的研制奠定了一定的基础。
参考文献
[1]K ap l an P,Naz RK.Th e fertiliz ati on an ti gen-1does not have p rot eo-
l yti c/acrosi n acti v i ty,but its m onocl onal an tibody i nh i b i ts s per m ca-pacit ati on and acroso m e reaction[J].FertilS eri,l1992,58(2):396-402.
[2]X i aolong Zhu,N az RK.Fertili zati on anti gen-1:c DNA clon i ng,testi s
-s pecific expression,and i m m unocon tracepti veeffects[J].Proc Natl
A cad Sc,i1997,94(9):4704-4709.
[3]Boh ri ng C,K rause W.The role of anti sper m anti bod i es du ri ng fertil-i
z ati on and f or i m muno l og i cal i n fertili ty[J].Che m I mm unol A ll ergy, 2005,88:15-26.
[4]Ch i u WW,Cha m ley L W.C li n ical associati on s and m echan is m s of ac-
tion of an tis p er m anti bod ies[J].Fertil Steri,l2004,82(3):529.
[5]Boh ri ng C,K rauseW.I mmune i n fertili ty:to w ards a better understand-
i ng of sper m(au t o)-i m m un i ty.The va l ue of proteo m i c ana l ysis[J].
H um an Reproducti on,2003,18(5):915-924.
[6]N az RK.An ti sper m vacci ne for contracepti on[J].Am J R eprod I m-
m uno,l2005,54(6):378-383.
[7]Naz RK.An tis p er m I mm un i ty f or Con tracep tion[J].J And ro,l2006,
27(2):153-159.
[8]Bhande S,Naz RK.M olec u lar i den tities of hum an sper m protei ns reac-
tive w it h an ti bod i es i n sera of i m munoinfertil e w o m en[J].M o l Re-p rod Dev,2007,74(3):332-340.
[9]W illi a m s J,S a mu elA,Naz RK.P resen ce of anti sper m anti bod ies reac-
tive w it h pep ti d e ep i top es of FA-1and YLP12i n sera of i m m unoi n-fertil e w o m en[J].Am J Rep rod I m muno,l2008,59(6):518-524.
收稿日期:2008-07-08
(上接第11页)
[25]E I-M aarriO BK,Peery EG,et a.l M aternalm ethyl ati on i m p ri nts on
hum an ch ro m os o m e15are estab li shed around or after fertili zation [J].Nat Genet,2001,27:341-344.
[26]G i cquelC GV,M andel baum J,S iffro i J-P,F l ah au l tA,et a.l In v i tro
fertili zation m ay increas e the ri sk of Beckw ith-W iede m ann syn-
d ro m
e related to t h e abnor m al i m pri n ti ng o
f t he KCNQ1OT gen e
[J].Am J H u m Gen et,2003,72:1338-1340.
[27]Khos l a S D W,B ro w n D,Rei k W,FeilR1Cu lt u re of prei m p lantation
m ou s e e mb ryos affects fetal d evelopm ent and t he expressi on of i m-p ri nted genes[J].b i olR eprod,2001,64:918-926.
[28]Doherty AS MM,T re mb lay KD,Bart o l o m eiM S.D ifferenti al effects of
cu l ture on i m pri n ted H19express i on i n t h e p rei m plan t ati on m ou se
e mb ryo[J].B i ol Reprod,2000,62:1526-1535.[29]A rnaud P FR1E pigeneti c d eregu l ation o
f gen o m ic i m pri n ti n
g i n hu-
m an d i sorders and f o ll o w i ng ass i sted reproducti on[J].B irt h D efects Res C Emb ryo Today,2005,75:81-97.
[30]M arques PC,Vaz F C arval ho,Fernandes A B arros and M
Sousa1Abnor ma lm et hylati on of i m pri n ted genes i n hum an s per m i s associat ed w it h oli goz oosper m ia[J].MHR-Basic Sci en ce of Repro-ducti ve M ed i ci ne,2008,14:67-73.
[31]L iT VT,U laner GA,et a.l I VF res u lts i n de novo DNA m et hy l ation
and h istone m et hylati on at an Igf2-H19i m pri n ti ng ep i genetic s w itch[J].M o lH um Reprod,2005,11:631-640.
[32]Young LE F H1I mp rov i ng the saf ety of e mb ryo technol ogies:possi b le
role of geno m ic i m p ri nti ng[J].Theri ogeno l ogy,2000,53:627-6481
收稿日期:2008-07-14