1 《动物细胞工程》的基本概念及主要研究内容。
动物细胞工程是通过细胞及其组分的人工操作，来研究生命活动规律，实现遗传改造，结合非生物材料等手段，生产用于治疗疾病的人工器官、代谢产物等或用于深入研究的材料。
动物细胞工程所涉及的主要技术有细胞培养、细胞融合、染色体或染色体组转移、基因转移以及动物胚胎工程等，从细胞整体水平、核质水平、染色质水平和基因水平上对细胞进行遗传操作。
2 人造细胞概念及技术。
1 从山羊身上取出支原体细菌体，再将该细菌体的内部掏空，备用。
2 研究人员通过邮购目录购买DNA片段，随后用4个瓶子装上含此DNA片段不同序列的物质。
3 含DNA片段不同序列的瓶装物质被放入酵母液中，使其重新组合形成人造DNA。
4 人造DNA被植入备用的支原体细菌体中，随后该细菌体会分裂成两个子细胞，一个含人造DNA，一个具有天然DNA。
5 向培养皿中加入抗生素，导致具有天然DNA的细胞被杀死，而含人造DNA的细胞得以存活。
6 支原体细菌体中的原有天然DNA被彻底清除，最终由人工DNA支撑其恢复生命机能，自此“人造细胞”得以生成。
能够自我复制的人造细胞诞生
https://www.doczj.com/doc/2c132339.html, 2010年05月22日13:59 科技日报
本报讯据英国《泰晤士报》5月21日(北京时间)报道，有“科学怪人”之称的美国生物学家克雷格·文特尔领导的研究小组宣称，他们已经在实验室制造出了首个完全由人造基因指令控制的细菌，这标志着“人造生命”这个梦想已经走进现实。
文特尔研究小组将制造生命的研究分“三步走”，而整个过程从四瓶化学物质开始。第一步，研究人员制造出丝状支原体(Mycoplasma mycoides)细菌的4个DNA碱基，合成出108万个DNA片段。第二步，将这些片断“组装”成完整的基因组。第三步，将人造基因组注入另一种剔除了遗传物质的近亲细胞山羊支原体(Mycoplasma capricolum)中，并且激活了该细胞，最终得到了一个新的、完全被人造基因组控制的人造细胞Synthia。到目前为止，新细胞已经分裂了10亿多次。
文特尔指出，这个名为Synthia的人造细胞是能够自我复制的生物，它的出现意味着，人类能够制造出自然界从来不曾出现的、具有特定功能的生物有机体。研究人员希望使用这项技术制造生物燃料、海藻以及更好的疫苗等。
文特尔的技术进展“一石激起千层浪”。有些科学家承认，在人工合成迄今为止最大的DNA方面，在足以替代细菌自己的DNA方面，文特尔都取得了巨大的进步。
但也有人持不同的意见。据美国《纽约时报》20日报道，诺贝尔生理学与医学奖获得者大卫·巴尔的摩教授认为，除了组装出一块大的DNA外，文特尔的实验没有取得新的突破，“他并没有制造生命，仅仅模拟了生命。人类要制造出人造生命，还有很长的路要走”。
另外，该项研究也引发了公众有关伦理道德的忧虑。批评人士担心这种技术会带来“生物恐怖主义”，威胁环境和人类健康。他们希望政府出台更加严格的管理政策。对此，据《纽约时报》报道，美国总统奥巴马要求白宫生物伦理委员会于6个月内提供一份有关合成生物学的详尽研究报告。奥巴马表示，新的技术进展提出了“真正的忧虑”。
早在2002年9月，美国科学家艾克德·魏玛领导的研究小组曾合成出脊髓灰质炎病毒的全基因组序列，该病毒基因组不仅可以指导合成出与天然病毒蛋白质同样的蛋白质，而且
同样具有侵染宿主细胞的活力。文特尔的实验原理上同魏玛的一样，只不过，魏玛的病毒的基因组仅有7500个片段，而文特尔的细菌的基因组拥有的基因片段更多而已。
加拿大生物伦理学组织ETC主任帕特·穆尼表示，文特尔的技术是一个潘多拉的魔盒，我们都必须面对其可能会引发的巨大震动。(刘霞)
在生物学界被称作“坏小子”，文特尔有时的确挺不招人待见，但巴尔的摩作为一位令人尊敬的诺奖得主，如此评价这项成果也嫌偏颇。较之近年来屡屡公布的相关进展，文特尔的人造细胞除基因片段显著增加外，更实现了分裂，而细胞的分裂和进化才是生命体最重要的功能和特征。所以，我们与其讨论它是不是新的突破，还不如心平气和地关注其目标指向，特别是这个曾狂言“基因没有好坏”的人，最终究竟是想造出一千个爱因斯坦，还是一千个希特勒。
3 显微镜的由来
1604年荷兰人詹森把两块磨好的透镜同轴间隔一定距离装在铜管子里，用它来看书本上的字，字被放得很大。詹森因此成为显微镜的奠基人。
后来，伽利略通过两个玻璃透镜形成一个圆柱体工具，观察到了昆虫的眼睛，并绘制几何图，成为了第一个通过原始显微镜记录生物的学者。
1665年，英国人Robert Hooke用自制显微镜观察软木栓，观察到了“小室”结构，并定名为cell
再后来，1674到1683年之间，荷兰人安东尼·范·列文虎克用自制的所谓高倍显微镜观察了许多物体，并发现了细菌，此后两个世纪没有人看到比细菌更小的细胞。
随着技术的进一步发展，现在又出现了荧光显微镜、电子显微镜等放大倍数更高的显微镜。
4 相差显微镜，荧光显微镜, 透射电子显微镜和扫描电子显微镜的特点和用途。
相差显微镜：利用光的衍射和干涉原理，将光透过样品后产生的光程差转换成振幅差，从而产生明暗差异，立体感强，不需染色。可进行活体观察、连续观察。
荧光显微镜：染色简便，彩色图像，明亮，效果好，灵敏度高。用途：通过荧光素的标记观察物体构造；用抗体荧光标记后，通过荧光的有无、色调比较进行物质判别；通过发荧光量的测定对物质定性、定量分析。
透射电子显微镜：用波长很短的电子束作为光源，穿透样品，需制作超薄切片，用来观察样品内部结构，二维。
扫描电子显微镜：收集电子束激发样品产生的二次电子，用来观察样品表面结构，立体感强，三维。
5 什么时候需要使用显微镜的相差，荧光功能。
6 如何理解细胞形态由其功能所决定？
细胞的形态结构与功能的相关性与一致性是很多细胞的共同特点,在分化程度较高的细胞更为明显.这是生物漫长进化过程的产物,从进化观点看有一定的合理性.
如红细胞，细胞体积小,呈扁圆形,非常有利于在血管内快速运行,体积小则相对表面积大,有利于提高气体交换效率.细胞内主要是血红蛋白,有助于结合更多的氧气与二氧化碳.因此,红细胞的形态和结构装置与其运输的功能的关系是非常合理的.
7 GFP技术及其特点。
GFP最早是从水母中分离出来的, 当其受到紫外或蓝光激发时，可以发出绿色荧光。而其基因可在异源组织中表达并产生荧光。由于其良好的物理特性及荧光特性而成为良好的报告基因和荧光标记分子,并在探索生命现象过程中得到了非常广泛的应用。
特点：
(1) 可用在活细胞中直接观察蛋白质在细胞器中的运动.
(2) 既具有敏感的标记检测率，又没有放射性的危害.
(3) 易于构建载体且对活细胞无毒害，对目的基因的功能也没有影响.
(4) 转化后细胞可以继续传代。
8 报告基因的使用技巧。
报告基因的选择取决于特定的研究目的以及分析的可行性（敏感性、可信度、可检测性以及动力学性质），
报告基因的稳定性将决定其是否适合转录的动态研究、高通量研究以及在转基因实验中全或无式的基因表达研究。例如，萤火虫Luc
和海洋腔肠Luc由于对蛋白质水解的敏感性，其半衰期较氯霉素乙酰转移酶（CAT）要短,这样的特性使其更适合转染效率和动力学研究；再如，野生型GFP 与Luc相比，荧光信号的线性范围较窄，这就不大适合转录的定量研究；
GFP 由于缺乏酶促扩大效应，因此其灵敏性较Luc要差，这就使其局限于那些只有高表达的基因研究，
而且GFP在细胞内的累积使其更不适合高通量的筛选。
目前已使用双报告基因系统，例如：萤火虫和海洋腔肠双LUC
9 细胞组分的几种分离技术。
用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物:用低渗匀浆,超声破碎或研磨等方法可使细胞膜破碎,形成细胞核,线粒体,叶绿体,内质网,高尔基体,溶酶体等细胞器和细胞组分的混合匀浆,再通过差速离心和密度梯度离心将各种亚细胞组分和各种颗粒分开.
10 细胞类型的分离技术及其特点。
差异沉降differential sedimentation:根据大小、密度
差异附着differential adhesion:免疫吸附，磁性分离
抗体选择antibody selection
流式细胞分离flow cytometry
11 Fiber FISH技术。
Fiber FISH是近几年发展起来的一项高分辨率和高灵敏度的荧光原位杂交技术,已被广泛应用于人类及动植物基因组的研究。
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization)将DNA用特殊修饰的核苷酸分子标记(如biotin-dUTP或dig-oxigenin-Dutp)作为探针分子特异结合来检测该DNA染色体上的位置。具有不需放射性同位素、实验周期短和检测灵敏度高的优点。已被广泛应用于动植物基因组结构的研究,染色体结构的分析和DNA谱的构建等。
12 细胞周期。
由一个细胞增殖分裂为两个细胞的过程.在这个过程中染色体复制一次,随后随着细胞分裂平均分配到两个子细胞中,这个周期分为G1;S;G2;M四个时期,G1,S,G2为细胞间期,M为分裂期.
13 细胞周期的关键调控点。
G1--→S(存在于G1之内,控制细胞进行复制的关键点)
G2--→M(存在于G2之内,控制细胞进行分裂关键点)
14 G0期细胞及其生物学意义。
位于细胞周期中G1后段,而且存在G1--→G0的转化过程,G0细胞处于静止状态,不进行分裂.在G1--→S关键点,细胞要做出是否进入下一次分裂或处于静止状态G0的决策.
如,部分肝脏细胞,一定时期乳腺细胞.另外有一部分细胞属于终端分化细胞,如神经细胞,肌肉细胞等
总之,分裂细胞+终端分化细胞+G0细胞=机体和组织细胞活动多样性.
15 细胞系及其特性。
在体外培养条件下,可以永久进行繁殖的细胞,这种细胞可以无限传代,称为细胞系.
特点:
1>可以提供大量的同一类型的细胞,有利于研究工作
2>可以大量分离细胞产物,用于企业化生产
3>可以长期并存于液氮之中,需要时可以解冻复苏
4>细胞系细胞多数为非整倍染色体,个别为二倍体,如WI-38.
16 细胞操作的无菌技术的原则，含义及其内容。
原则:保证细胞培养皿,培养瓶内部,吸管包装层内部,以及培养基的无菌状态,这一点十分重要,它包括:
1>工作环境以及表面处理
2>实验者的操作技术
3>细胞培养所用的玻璃以及塑料制品的处理
4>培养基的无菌处理
消毒与灭菌
1>超净工作台:用75%乙醇擦洗,紫外灯灭菌30-50分钟
2>无菌间:用30W的紫外灯30-50分钟
3>玻璃器皿:新器皿用5%HCl泡12h
用过的器皿用酸剂浸泡,煮沸,清洗,浸泡,清洗,晾干,灭菌
4>其它器皿:橡胶,塑料器皿用专用洗涤剂清洗以后,2%NaOH浸泡过夜,5%HCl泡
30分钟,清洗晾干,灭菌.
金属器皿洗净后,用酒精棉球擦,灭菌.
灭菌方法:
1>物理方法:干热,湿热,过滤
2>化学方法:消毒剂,抗菌素
17 细胞冻存与复苏技术要点。
细胞冻存要点：
(1)细胞分装入冻存管中。冻存管具有螺旋口，可以防止液氮漏入管中，提高冻存效率。
(2)应采用分步的方式达到临界点，使内部冰晶无法形成，同时不影响水的外流，1摄氏度|
分为降温标准，可以采用程序方式的细胞冻存仪。
(3)降温支架，可以使冻存管保持在气象上方，冻存管下降到液氮罐中的不同温度，可以调
节冻存速率。
(4)悬重离心收集的细胞，1ml冻存液，成分为：培养基7ml，PBS2ml，甘油或DSMO为1ml
（5-20%），在配置时注意比例。
(5)加入1ml细胞，标明细胞系名称，日期培养基。
(6)-80摄氏度过夜或用程序细胞仪。
(7)次日，直接将其转入液氮中。
细胞冻存的复苏
（1）将烧杯中水温调至40摄氏度。
（2）从液氮中取出冻存管。
（3）将冻存管放在烧杯中至完全融化，一旦冰块消失，立即将冻存管取出。这一重要操作的目的是使细胞温度不升至37摄氏度以上。
（4）用75%乙醇擦洗冻存管外部，减少污染。
（5）取出细胞加入培养瓶中，缓缓加入少许培养基，混匀。
37摄氏度培养，24h更换培养基。
18 影响动物细胞生长的环境因素。
1>营养成分的要求
根据各种细胞具体要求准备培养基,一般要求有:合成培养基(营养基本);血清
2>对pH的要求
pH因素是细胞生长环境的重要因素,一般大多数要求为pH7.2-7.4
a.培养基中应有缓冲液,如Hepes,H+缓冲液,对细胞没有副作用,可以在较长时间控制
pH的波动.
b.CO2浓度的要求,多数细胞要求5%CO2,95%空气,常CO2培养箱
3>对温度的要求
一般温度T为37℃左右,不同的细胞对温度有不同的要求
4>对渗透压的需要
一般260-320mosm/kg,培养基的渗透压指用以阻止水分经过半透膜进入培养基的压
力
5> 对抗生素的要求
双抗(青霉素:100单位/ml培养基+链霉素:100ug/ml培养基)
另有,青霉素G, Na+盐,硫酸链霉素,用缓冲液如Hanks液配制.
19 大规模细胞培养的类型。
①悬浮培养:少数动物细胞需悬浮培养.
②微载体培养:增加细胞生长贴壁面积,生长条件已控制且易放大，兼贴壁与悬浮培养，取样方便，易于分离。
③多孔载体培养:多空载体是大规模高密度培养支持物.细胞在小孔内生长.
④微囊化培养:微囊是人工半透膜制成的多孔微球体，小分子可自由通过，该培养借助于固定化技术将细胞包裹在微囊中在培养液中悬浮培养.
⑤中空纤维培养:模拟细胞在体内的生长三维状态，利用中空纤维给细胞生长提供营养等。
20 设计一个细胞追踪技术路线。
21 干细胞的概念，种类, 分布。
概念：干细胞是一种具有自我更新的能力;高度增殖;多向分化潜能，可再生各种组织的细胞。种类：依来源可分为胚胎干细胞、胚胎性生殖干细胞、成体组织来源干细胞；
依能力可分为全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞
分布：普遍存在于各种器官，但数量很少。
22 干细胞的生物学特征, 分化潜能。
生物学特征：1）细胞形态结构及核型：体积小核大，常染色质，核型正常，克隆状生长，迅速增殖，可在体外选择、操作、冻存
2）高度分化潜能：一旦脱离饲养层则自发分化，单层培养时自发分化成多种
细胞。用胚胎干细胞注射于同源动物皮下可形成组织瘤，其细胞组成可代表三
个胚层。
3）碱性磷酸酶的表达：快绿染色法
4）细胞表面有特异抗原的表达：比如人的干细胞表达SSEAS-4，而小鼠不表
达
分化潜能：1）全能干细胞：具有形成完整个体的分化潜能
2）多能干细胞：具有形成多种组织的分化潜能，但不能形成个体
3）单能干细胞：只能向一种或密切相关的几种细胞分化
23 胚胎干细胞的鉴定技术。
根据胚胎干细胞的生物学特征来鉴定
24 胚胎干细胞面临的难题和挑战。
1）如何维持题外扩增时不分化
2）分化细胞的增殖是一个瓶颈问题
3）如何定向诱导干细胞分化
4）胚胎干细胞真正用于器官克隆与移植需有技术上的突破
5）克服移植排斥问题
6）安全性问题，如致癌、致畸
7）伦理问题，如来源
25 成体干细胞。
主要包括6种：1、骨髓造血干细胞HSC(Marrow Hematopoietic Stem Cells)；2、外周血干细胞PBSC(Peripheral Blood Stem Cells)；3、胎肝干细胞(Fetal Liver Stem Cell)；4、脐带血干细胞(Umbilical Cord Blood Stem Cell)；5、神经干细胞（Neural Stem Cells）；6、皮肤干细胞（Skin Stem Cell）。
26 肿瘤干细胞、它与正常干细胞的异同。
概念：肿瘤内具有自我更新，能产生表型多样的肿瘤细胞群体，并驱动肿瘤发生的一类干细胞。
同：都具有自我更新能力，数量少，子代细胞与亲代不同
异：肿瘤干细胞分布于肿瘤细胞中，使肿瘤细胞群体产生多种表型，可以诱导肿瘤发生正常干细胞分布于各组织器官中，具有多向分化潜能，但不会诱发肿瘤的产生
27 干细胞应用。
研究人类发育和细胞分化的机制；研究疾病机制；用于疾病治疗
28 干细胞的法律、伦理道德问题。
如干细胞的取材问题
29 对干细胞的新认识,干细胞与分化细胞的关系。
新认识：
干细胞是可以进行复制、具有自我更新能力和多向分化能力的未成熟细胞。
干细胞通过基因的突变和重组产生各种类型的细胞，同时这些改变也可能会造成肿瘤。
干细胞很难杀死，因为它在人的一生中十分重要，进化出了保护机制，这也就解释了肿瘤干细胞很难被抗癌药物杀死的原因。
关系：
干细胞是机体中保有的未分化的原始细胞，一旦需要则发育成分化细胞
分化细胞在一定条件的诱导下，可成为多能干细胞，重新编程
30 诱导型干细胞及其技术，它的生物学意义。
诱导多功能干细胞是通过基因重新编排方法，“诱导”普通细胞回到最原始的胚胎发育状态，能够像胚胎干细胞一样进行分化。
将4 个Oct4、Sox2、c-Myc 和Klf4对维持ES多能性有重要作用的因子，经逆转录病毒连续转染入小鼠胚胎或成体的成纤维细胞中，诱导形成i P S 细胞.
生物学意义：1、获得人的iPS 细胞，运用ips技术进行疾病治疗，特别是患者特异的移植治疗。
2、细胞治疗
3、正常胚胎发育
4、研究疾病机制
5、检测药物的作用
6、畸形学研究
31 组织工程概念，目标。
概念：
组织工程是应用工程学和生命科学的原理来研究开发生物替代物，用于恢复、维持或者改进组织的生物学功能。
目标：
1）完成生物性机械作用（骨、软骨）
2）代替生理功能（肝脏、神经）
3）输送分泌物（胰岛）
4）上述目标的综合
32 组织工程基本过程，主要途径及要素
主要途径：
1）细胞囊封化（体外）：a）把需要的细胞密封在半透膜中
b）植入密封装置或与体内连接
c）细胞分泌物用于治疗
d）治疗完成时装置取出或断开连接
2）体外合成：a）体外细胞接种在支架装置上
b）细胞培养、扩增群体并进行组织工程
c）在被植入的装置上建立起细胞群
d）装置降解，支架被重塑组织取代
3）体内合成：a）植入多孔支架装置
b）细胞体内生长
c）支架被重塑组织取代
要素：
种子细胞，支架，微环境
种子细胞
种子细胞的条件：
1）容易在体外大量培养，粘附力强
2）培养出的细胞具有正常的分化能力
3）进入体内不会传染病菌也不会产生肿瘤
4）其分子结构和功能与正常血管细胞相似
5）临床上易取得，具有实用性
种子细胞的来源
1）同种异体：已分化的细胞，不易在体外培养复制
2）自体组织：首选，但是数量上有局限性，长期传代后细胞功能会老化
3）干细胞：近年来热门领域
胚胎干细胞：具有分化潜能
成体干细胞：直接利用
待解决的问题：
1）增加细胞的增殖能力
2）延长细胞的生命期
3）提高细胞的分泌能力
4）优选不同组织来源的同一功能的最佳细胞
5）建立标准细胞系，使研究工作有更好的可比性和科学性
6）同种异体与异种移植的免疫学
7）细胞与人工细胞外基质的相互作用与影响因素
支架
组织工程支架是细胞附着的基本框架和代谢场所，作为组织工程的平台，不仅提供了细胞生长的框架，使之形成特定的组织或器官形状，而且作为细胞外基质（ECM）成分之一，是细胞间信号传导和相互作用的媒介，同时也是细胞生长所需的生物活性剂，其形态和功能直接影响所构成的组织形态和功能。
理想的三维支架的构建是组织工程化人工器官研究成功的前提条件，其类型分：天然支架
人工支架
复合支架
细胞微环境
组织细胞生长的最佳环境，给细胞提供一个能够生长、增殖、分化的良好环境
其基本要素包括：
1）免疫分子：球蛋白家族
主要作用是表达细胞的免疫和炎性应答，识别抗原和负责细胞间的传递2）整合素家族
主要作用是对细胞之间及细胞与胞外机制进行连接
整合素大多为特异性细胞粘附分子，其作用依赖于钙离子。介导细胞与细胞间的相互作用及细胞与细胞外基质间的相互作用。
3）选择蛋白
选择蛋白是膜整合糖蛋白的一个家族，他能够识别从另外一个细胞表面伸展出来的特异性的糖基因，并与之特异性结合，因此它也是细胞表面受体。
作用是使淋巴、血小板和白细胞与内皮细胞之间的相互作用，负责血细胞与内皮细胞的连接。
4）生长因子
功能：能诱导或直接作用于基因表达，因而作用于细胞的增殖和分化。
Process
Donor tissue
Degradable polymer scaffold
Fix
Implant
Or
Culture
Functional
3D tissue Enzyme
Cells
33 哺乳动物细胞表达系统的特点、优势。
在哺乳动物细胞表达系统中，可进行多肽链的修饰从而产生有功能的蛋白质
1）糖基化问题：糖基化的蛋白质才能在人体中发挥应有的生物活性
2）免疫原性问题：非糖基化蛋白质易聚集，使抗原性增强或改变，引发抗体识别，而糖基化了的蛋白质由于寡糖链的存在，易溶解，不聚集
3）寡糖链结构问题：其他真核细胞表达系统由于糖基化酶不同，寡糖链末端多为甘露糖、半乳糖、N-羟乙酰神经氨酸等，易被肝细胞、巨噬细胞表面的受体识别从而清除，具有免疫原性。
34 穿梭质粒及其基本组成元件。
常作为质粒载体,是在细菌和哺乳动物细胞内部可以扩增的质粒。
元件：
1>一个真核表达载体首先必须含有三个基因的转录元件：
a. 一个真核表达启动子和增强子
b. 一个真核表达终止信号和poly(A)信号(真核生物都有poly(A)信号)
c. 一个真核表达剪切信号(切出内含子)
2>允许载体在细菌体内扩增的质粒序列,多数含有质粒PBR322的序列.如在细菌内复
制的起始位置ori,抗基性标记基因amp.
3>能用于筛选出外源基因已经整合的选择标记
4>选择性增加外源基因拷贝数的扩增系统.
3>,4>多用在一个系统中起作用,DHFR(二氢叶酸还原酶)
5>特定的限制性内切酶位点,有利于插入目的基因.
35 哺乳动物细胞表达系统中的各种宿主细胞。
至今批准的由动物细胞表达的产品宿主细胞几乎都是CHO（中国仓鼠卵巢细胞），但是
1>.需要微载体，因为悬浮培养时产量会降低
2>.某些产物会聚集化：如单链尿激酶原变成双链，尿激酶失去活性。
已开发的其它一引起细胞系，如：
1>.CHO-k1 1957年，从中国仓鼠卵巢中分离的一株上皮样细胞，目前用于构建工程的细胞是dhfr-营养突变株，可以在MTX（氨甲喋呤）压力下使外源基因的拷贝数扩增，使用权外源蛋白质水平表达。目前是主流细胞株。
2>.BHK-21 1961年，取自a one-day old mice’s 肾，必须贴壁生长。1963采用单细胞分离技术经13次克隆的细胞，经多次传代，可以悬浮生长。广泛用于表达重组蛋白，病毒增殖。
3>.C127 来自RIII小mice乳腺肿瘤细胞。特别用于：带有牛乳头瘤病毒的载体的转染。当BPV-1病毒载体转染以后，细胞的生长形态发生改变，因此转染成功的细胞可通过特有形态来识别。
4>.MDCK 由Madin Darby在1958年从雌性西班牙长耳狗肾脏中分离。它是一种贴壁生长的上皮样细胞，已成功在微载体上培养。它可以支持多种病毒的增殖，用于生产兽用疫苗。
5>.Namalwa 以Burkitt淋巴瘤的同名病人获得的一株类淋巴母细胞含有许多EB病毒的基因，但不产生EB病毒。目前已被批准用于大规模生产α干扰素。
6>.vero 从非洲绿猴肾分离而得到，它是贴壁生长的成纤维细胞支持多种病毒的增殖。已被用于生产多种疫苗。如狂犬疫苗、乙脑疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗。
7>.cos1981年，Gluzman用复制起点缺失；sv40基因组，DNA转化非洲绿猴肾细胞，cv-1得到3个细胞素，cos-1,-3,-7 广泛用于基因瞬时表达系统，基因的表达调控的研究等。cos 细胞易培养，易转染；同时,cos细胞能组成性表达sv40大T搞原，能使大多数哺乳动物细胞携带有sv40 ori复制子的质粒，以附加体形式高拷贝数扩增，扩增的mRNA和蛋白质易
回收利用分析
8>.鼠骨瘤细胞 它是非常好的分泌细胞，培养上清中可生产高达成1mg/L 的蛋白，可以在
无血清下高度悬浮生长。
36 逆转录病毒介导基因转移技术的特点及其基本步骤。
逆转录病毒介导基因转移技术具有可大量感染细胞、单拷贝整合和高转化频率（可达100%）
等优点。该技术大致包括以下步骤：
1） 构建病毒载体，将外源基因替换病毒的与致病或致癌有关的基因，使该病毒成为缺
陷病毒。
2） 选择和培养组装细胞系，该细胞系含有所需辅助病毒，重组病毒载体在该细胞中能
组装成重组病毒。
3） 用此重组病毒载体感染靶细胞，使靶细胞转化，并表达外源基因。该技术在人体内
有潜在的危险。
37 线粒体移植技术。
线粒体移植技术大体上可以分为两种途径，卵母细胞时期移植和受精卵时期移植。
1、卵母细胞时期移植：用正常第三者细胞质替换
2、受精卵时期移植：保留核，去除病变线粒体
38 几种细胞基因转染技术。
基因转染是将具生物功能的核酸转移或转运到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能的
技术，广泛应用于基因组功能研究和基因治疗研究。 LTR LTR
E gag pol env
逆转录病毒基因组 + gag pol env + 外源基因 引入病毒蛋白编码区 缺失病毒蛋白和调控区插入外源基因 gag pol env
病毒蛋白
E LTR LTR E LTR LTR
载体结构 辅助细胞 gag pol env
病毒蛋白 收集病毒载体
载体病毒 感染目的细胞
D17细胞 逆
转
录病
毒
载
体构建技
术
路
线
根据转染的机制不同可将转染法分为化学转染法，物理转染法，病毒感染法。
化学转染法：
①DEAE-葡聚糖是最早应用于哺乳细胞转染的试剂之一，它是阳离子多聚体，与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取。成功应用于瞬时开始，但用于稳定转染却不可靠。
②磷酸钙共沉淀法试剂易得，价格便宜，广泛应用于瞬时转染和稳定转染的研究。先将DNA与氯化钙混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过包膜的内吞作用摄入DNA。
③人工脂质体法可以介导DNA和RNA转动物和人体内，用于基因治疗。人工合成的阳离子脂质体与带负电荷的核酸结合后形成复合物，当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入细胞质，随后DNA复合物被释放进入细胞核内。
物理转染法
①电穿孔法利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进入的微孔。可用于瞬时转染和稳定转染，可方便地用于悬浮细胞，重现性好，但需要较多细胞。影响转染效率的主要因素是脉冲强度和持续时间。必须找到能够使核酸有效释放而又不杀死细胞的最佳平衡点。
②显微注射法费力但有效。常用来制备转基因动物，但不适用于需要大量转染细胞的研究。
③基因枪法依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内，适用于培养的细胞和在体的细胞。
病毒感染法病毒颗粒是一类非常有效的基因释放系统，是将外源基因导入大量细胞的最有效的方法。病毒感染具有高效率、可稳定遗传、适用于各种不同来源的细胞及操作简单等优点。但多数病毒有其潜在的危险性，操作者需要有一定的病毒操作经验和良好的设施。
逆转录病毒接介导技术
特点：可以大量感染细胞，单拷贝整合，高转化频率
步骤：
1）构建病毒载体，将外源基因替换病毒的与致病或致癌有关的基因，使该病毒成为缺陷病毒；
2）选择和培养组装细胞系，该细胞含有所需的辅助病毒，重组病毒载体在该细胞中能组装成重组病毒；
3）用此重组病毒载体感染靶细胞，使靶细胞转化，并表达外源基因。
39 杂交细胞的染色体丢失现象。
当两种动物细胞如人和小鼠的细胞融合为一个杂交细胞以后，在最初几代都可以完整地保留两种亲代的染色体，没有染色体丢失的现象。但是，在随后的增殖中，人类的染色体会丢失，最后只剩下少数几条或1条人类的染色体的杂交细胞。
染色体的丢失是随机的，所以可获得各种不同的含有少数人类染色体的细胞克隆。种间杂种细胞所显示的优先排除一个物种染色体核保留另一种物种染色体的现象叫染色体分离。染色体丢失的快慢与亲本细胞种间的遗传距离有关。较近的距离，染色体丢失的速度很慢；较远的距离，染色体的丢失很快。杂交时，多数细胞是不会发生染色体丢失的。
40 HA T选择系统的原理。
亲本细胞由于酶的缺陷不能利用培养基中的核酸原料来合成核酸而死亡，杂种细胞能通过互相补偿这些缺陷而继续生长繁殖。
细胞1：含有TK酶，但缺乏HGPRT酶，即TK+/HGPRT-
细胞2：含有HGPRT 酶，缺乏TK酶，即TK-/HGPRT+
正常培养时：这两种细胞虽然不能通过补充途径合成DNA，但均能生长，因为他们可以通
过主要途径来合成DNA.
HA T 培养基中含有氨基喋呤（阻止主要途径——抗核酸合成药物），次黄嘌呤，胸腺嘧啶核
苷，当这两种细胞融合后，放在HA T 中培养。亲本细胞由于核酸合成的主要途径被抗核酸
合成药物——氨基喋呤所阻断，补充途径因自身TK 或HGPRT 缺陷，不能合成DNA ，所以
两个亲本细胞1和2 均会死亡。而杂种细胞利用细胞1的TK ，细胞2的HGPRT ，通过补
充途径生存下来。
TK ：胸苷激酶 HGPRT ：次黄嘌呤鸟嘌呤核酸转移酶。
HA T 选择培养系统利用了细胞的酶的互补性，亲本必须是TK-或HGPRT-
补充：核酸的合成途径 主要途径：氨基酸，糖
补充途径：核苷，次黄嘌呤 胸腺嘧啶核苷
41 PEG 的特性及其诱导细胞融合的机制。
特性：亲水性，有毒性
机制：PEG 因其亲水性可能与邻近细胞膜的大分子结合，使细胞之间只有几个埃的空间的
水分被取代，由此降低细胞表面的极性，导致脂质双分子层不稳定，引起膜的融合。
42 细胞电融合的特点及其诱导细胞融合的机制。
特点：融合效率高，不存在残留毒性，操作简便，重复性好，操作过程可控，需要昂贵的细
胞融合仪
机制：1）细胞在电场中呈串排列，细胞位于电融室合适的溶液之中，该溶液是一种电介质，
对融合施加正弦交变电场，由于在融合之间形成均匀的电场，这使细胞在电场中沿电力线呈
串排列。2）细胞膜局部区域的双分子层结构发生紊乱，紧密地呈串排列的细胞在高频电脉
冲作用下，导致细胞膜局部区域紊乱，出现了许多小孔。3）细胞膜的通透性增强，桥膜形
成。相邻细胞紧密接触的部位的微孔形成物质交流的桥膜，继而发生细胞的融合。
43 细胞融合技术的应用。
1.细胞融合技术可以用于基因定位。
由于种间的细胞杂交其中一个物种细胞染色体丢失，利用基因丢失导致细胞表型的变化，
也可以确定基因在哪一条染色体上。
2.细胞融化技术可以用于制备单克隆抗体。
经过B 细胞和骨髓瘤细胞的融合，可以产生单克隆抗体，B 细胞可以产生基因组合，以致
产生多类抗体，故需要用多种方法选择杂交瘤细胞。
3制作克隆动物，转基因动物
44 单克隆抗体技术。
a. 定义及基本原理
单克隆抗体技术:将产生单一特异性抗体的B 淋巴细胞同小鼠骨髓瘤细胞融合在一起,培
养成既能产生单一抗体,又能在体外快速生长的杂交瘤细胞.此种杂交瘤细胞群持续分泌
成分单一的有特异性的抗体,即单克隆抗体.
b. 过程 (参考笔记P41的图,太复杂没画)
（1）免疫动物（2）融合细胞的制备（3）两种细胞杂交融合（4）分装培养（5）抗体检测
（6）杂交瘤细胞的克隆
多种酶作用 氨基喋呤 阻断 核苷酸 DNA
TK 和HGPRT 核苷酸
c. 应用
（1）临床诊断及治疗（2）免疫学研究（3）大分子蛋白的提纯
45 小鼠作实验材料的优点。
1.小鼠的遗传比较深入，可供使用的纯系较多，如昆明白鼠、C57、裸鼠。
2.一次超排卵处理，可以获取许多卵子（30-50枚）
3.卵子和胚胎培养体系成熟。
4.小鼠体型小，容易饲养，成本低。
5.小鼠是小型的哺乳动物，可以作为大量动物和人类的模型。
6.世代间隔短。
7.小鼠基因组测序基本完成，易于遗传工程操作。
46 通过超排卵途径获取小鼠卵的技术方法。
1. 注射性激素诱导排卵，促进卵子发育和成熟
a. PMSG（孕马血清促性腺激素）腹腔注射5-10U；
2. 促进成熟卵泡的排卵
b. 35-48小时以后，再注射5-10U HCG（人绒毛膜促性腺激素）；
3. 雌雄小鼠交配，使其受精，以获取正常胚胎；
4. 人工收集小鼠胚胎。
47 液体石蜡油下培养小滴的优点。
a. 防止培养基蒸发
b. 防止空气中杂物混入
c. 便于观察（透明）
48 试管婴儿技术的核心技术，该技术应用的意义。
①试管婴儿技术的核心技术是：IVF-ET，体外受精加上胚胎移植。其中体外受精也叫试管
内受精（in vitro fertilization）;胚胎移植（embryo transfer）。
②产生过程：
体外受精产生受精卵或早期胚胎（in vitro fertilization）
受精卵或早期胚胎移到代孕母体子宫内，让其继续发育，直到出生（Embryo transfer）③意义与作用：
为不育者带来了福音，几万名试管婴儿已经诞生。
加速动物遗传育种。
有利于濒危动物保护
研究受精机理
产生大量动物个体
遗传检查：利用体外受精卵的发育状况或染色体核型检测形态不正常精子其染色体是否正常
49 嵌合体小鼠及其制作技术。
①将一不同品系小鼠的胚胎干细胞（ES细胞）注入另一品系的胚胎囊胚腔内，它可嵌入囊
胚内细胞团中，并参与胚胎发育，由此可产生嵌合体小鼠。
②制作技术：
雌雄小鼠自然交配（供体）另一品系雌雄小鼠自然交配（受体）
收集胚胎，收集胚胎，
液体石蜡油下培养液体石蜡油下培养
获得胚胎干细胞发育到囊胚阶段
利用显微注射技术将ES细胞注入到囊胚中
将聚合成功的胚胎移植到一代孕母亲子宫内
嵌合体小鼠出生后从皮毛颜色或其他方面进行分析、鉴定。
50 精子体外获能，影响精子体外获能的因素。
包括：雌性生殖道自然获能，体外人工获能
1.有能力到达卵细胞并穿过透明带
2.有能力进行顶体反应
3.成熟过程中获得的结合蛋白结合位点适时暴露给卵细胞以结合透明带
4.可与卵细胞融合并进入卵质中
方法：添加诱导精子获能的有效成分，提供适宜环境
影响因素：
温度：对精子膜脂的物理状态有影响
物种：某些物种的精子只需在基本的平衡盐溶液即可，加上适当的能源和蛋白质另一些物种的精子则需要添加特殊成分，即牛黄酸氨基乙黄酸或亚牛黄酸（氨乙基亚牛黄酸）。
不同物种中，获能所需时间也不同，这与质膜稳定性有关，小鼠、猫、人类大约为1个小时，猪为3.5小时。
精子的收集部位：
附睾尾部精子具有较高的受精能力。
培养基的组成：
正常离子强度，正常的渗透压，290mosm’,对家兔和牛可能需要较高的盐浓度，如180mmol/L NaCl。
Ca2+，获能必须成分，细胞内外流对获能十分重要，它可以引起顶体反应，并激活顶体酶。肝素促进Ca2+的吸收，从而诱发顶体反应。
牛血清白蛋白（BSA）可改变精子膜通透性，促进精子获能。
51 显微受精的概念，技术种类，及其意义。
①概念：借助于显微镜操作仪将精子或生精细胞直接注入到卵母细胞质内（ICSI）或卵间
隙，即透明带下，实现受精的过程。
②意义：（1）揭示了动物雌雄配子相互作用的机制即受精的本质。
（2）可以提高优良种畜利用率，加速动物育种进程。
（3）可以用来拯救和保护濒危动物。
（4）可以治疗男性不育。
52 转基因，转基因动物的概念。
①转基因是用现代分子生物学的方法将某一基因转到某一载体或其他基因的特定位置的过程。
②转基因动物是一种遗传工程化动物，在其基因组中整合了一个或多个拷贝的外源基因，
或者变异基因，这使该动物具有新的遗传特性和表现型。
53 产生转基因动物几种技术。
(1) 基因显微注射技术
①基因显微注射技术:即用显微注射的方法将外源目的基因导入受精卵.
②基本步骤:
(2)胚胎干细胞技术
①胚胎干细胞(ES):是从早期胚胎内细胞团(ICM)分离出来的,能在体外培养的一种高度未分化的多能细胞.
②胚胎干细胞技术:就是对ES细胞进行基因操作,将外源目的基因导入ES细胞,把ES细胞
移入胚泡期的胚胎,再把这样的胚胎移植到假孕的代孕子宫内,这样产生的子代其部分生殖细胞就是由转基因的ES细胞形成.然后在得到的转基因鼠间进行杂交,子代再配对杂交,就获得了纯合的转基因动物.
(3)基因定位导入技术
基因定位导入技术:基于外源DNA合内源基因在核苷酸序列上的一致性,他们可以相互通过碱基配对,并发生交换,产生重组的DNA.通过同源配对稳定的整合到预定的内源基因位点上,在预期的位点上改变成设计的外源基因,从而改变细胞的特异基因,使其特异地表达,从而产生转基因动物.
(4)精子载体法
精子载体法:即让基因在获能过程中获取外源DNA,通过体外受精,胚胎移植等途径,可以实现转基因的目的.
（5）逆转录病毒技术：用逆转录病毒感染供体卵细胞的8细胞胚
54 显微注射技术产生转基因动物技术的基本过程，遗传特性。
①构建外源基因结构,具有启动子等表达调控元件,可以调控表达.
②制备受精卵.
③借助显微操作系统,把外源基因注入到受精卵雄性原核中.
④胚胎移植.
⑤转基因的整合和表达分析.
遗传特性：
①转基因随机整合到基因组的某位点.
②大多数呈头尾相连,串联多拷贝整合.
③转基因动物当代是一个半合子.
④转基因按孟德尔方式遗传.
⑥转基因是显形或加性的.
55 对显微注射技术的认识。
显微注射法是利用管尖极细的玻璃微量注射针，将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中，然后藉由宿主基因组序列可能发生的重组、缺失、复制或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内。这种显微注射术的程序，需有相当精密的显微操作设备，制造长管尖时，需用微量吸管拉长器，注射时需有固定管尖位置的微量操作器。这种技术的长处为任何DNA在原则上均可传入任何种类的细胞内。此法已成功运用于包括小鼠、鱼、大鼠、兔子及许多大型家畜，如牛、羊、猪等基因转殖动物。
显微注射技术用于转基因动物的基本步骤：
①构建外源基因结构，具有启动子等表达调控元件，可调控表达；
②制备受精卵，1-细胞期（可见原核）；
③借助显微操作技术，把外源基因注入到受精卵，雄原核中；
④胚胎移植；
⑤转基因的整合、遗传和表达分析（PCR、GFP等）
显微注射技术产生的转基因动物的遗传特性：
①转基因随机整合到基因组的某位点；
②大多数是头尾相连，串联多拷贝整合；
③转基因动物当代是一个半合子
④转基因按孟德尔方式遗传
⑤转基因是显性或加性物
56 胚胎干细胞的获得途径，特性。
(1)获得途径
①直接由动物体中获取囊配在分离ICM.但由于得到的囊胚数量比较少,质量不高,因此会影响分离ESC的效率.
②由卵细胞去核培养,转入体细胞核,体外培养得到去透明带的囊胚,由这些囊胚进一步分离得到ESC.
(2)特性
①体积小,但核比较大,有一个或几个核仁.
②细胞中多为常染色质,胞质结构简单,散布着许多核糖体和线粒体.
③在体外分化抑制培养基中呈克隆状生长,细胞紧密结合在一起.
④增值迅速,18-24小时分裂一次.
⑤可在体外进行选择,操作,冻存.
⑥具有高度分化的潜能.
⑦AKP(碱性磷酸酶)可作为鉴定ESC或ESC分化与否的标志之一.
⑦ssEA也可作为ESC的鉴定标志.
57 利用干细胞设计一项细胞工程方案。
1．揭示人及动物的发育机制及影响因素
生命最大的奥秘便是人是如何从一个细胞发展为复杂得不可思议的生物体的。人胚胎细胞系的建立及人胚胎干细胞研究，可以帮助我们理解人类发育过程中的复杂事件，使人深刻认识数十年来困扰着胚胎学家的一些基本问题，促进对人胚胎发育细节的基础研究。人胚胎干细胞的体外可操作性，可以一种伦理上可接受的方式，提供在细胞和分子水平上研究人体发育过程中极早期事件的方法。这种研究不会引起与胎儿实验相关联的伦理问题，因为仅靠自身胚胎干细胞是无法形成胚胎的。
2. 药学研究方面
胚胎干细胞系可分化为多种细胞类型，又是能在培养基中不断自我更新的细胞来源。它发展为胚体后的生物系统，可模拟体内细胞与组织间复杂的相互作用，这在药物研究领域具有广泛的用途。胚胎干细胞有望在短期内就能体现的优势在于药物筛选中。目前用于药物筛选的细胞都来源于动物或癌细胞这样非正常的人体细胞，而胚胎干细胞可以经体外定向诱导，为人类提供各种组织类型的人体细胞，这使得更多类型的细胞实验成为可能。虽不会完全取代在整个动物和人体上的实验，但会使药品研制的过程更为有效。当细胞系实验表明药品是安全的且效果良好，才有资格在实验室进行动物和人体的进一步实验。
在候选药物对各种细胞的药理作用和毒性试验中，胚胎干细胞提供了对新药的药理、药效、毒理及药代等研究的细胞水平的研究手段，大大减少了药物检测所需动物的数量，降低了成本。另外，由于胚胎干细胞类似于早期胚胎的细胞，它们有可能用来揭示哪些药物干扰胎儿发育和引起出生缺陷。人胚胎干细胞还可以用于其它用途。由于这类细胞本质上可以无限量地产生人体细胞，它们对于旨在发现稀有人蛋白的研究计划理应有用。国际上许多制药公司、学者都瞄准了这一重要的研究领域。
3. 细胞替代治疗和基因治疗的载体
胚胎干细胞最诱人的前景和用途是生产组织和细胞，用于“细胞疗法”，为细胞移植提供无免疫原性的材料。任何涉及丧失正常细胞的疾病，都可以通过移植由胚胎干细胞分化而来的特异组织细胞来治疗。如用神经细胞治疗神经退行性疾病(帕金森病、亨廷顿舞蹈症、阿尔茨海默病等)，用胰岛细胞治疗糖尿病，用心肌细胞修复坏死的心肌等。
胚胎干细胞还是基因治疗最理想的靶细胞。这里的基因治疗是指用遗传改造过的人体细胞直接移植或输入病人体内，达到控制和治愈疾病的目的。这种遗传改造包括纠正病人体内存在的基因突变，或使所需基因信息传递到某些特定类型细胞。
当然，干细胞技术的最理想阶段是希望在体外进行“器官克隆”以供病人移植。如果这一设想能够实现，将是人类医学中一项划时代的成就，它将使器官培养工业化，解决供体器官来源不足的问题；使器官供应专一化，提供病人特异性器官。人体中的任何器官和组织一旦出现问题，可像更换损坏的零件一样随意更换和修理。
58 基因打靶（同源重组，gene targeting)的原理。
基因定位导入技术:基于外源DNA合内源基因在核苷酸序列上的一致性,他们可以相互通过碱基配对,并发生交换,产生重组的DNA.通过同源配对稳定的整合到预定的内源基因位点上,在预期的位点上改变成设计的外源基因,从而改变细胞的特异基因,使其特异地表达,从而产生转基因动物.
59 利用胚胎干细胞定位导入技术，制作转基因动物的技术路线，特点。
①技术路线：
1.胚胎干细胞系的建立与维持
2.将外源目的基因导入胚胎干细胞
3.同源重组的筛选,筛选出转染过的胚胎干细胞。
（其中，2、3步运用基因定位导入技术：a.设计合适的外源载体基因，b.利用正负选择的方法定位筛选出目的基因.Neor基因为正向选择，Tk基因为负向选择。）
4.把胚胎干细胞移入胚泡期的胚胎。
5.再把以上胚胎移植到假孕的代孕子宫内。
6.产生嵌合体小鼠。
7.嵌合体小鼠间杂交，筛选，得到具外源基因表象的子代杂合体小鼠。
8.子代杂合体小鼠间杂交，得到纯合的转基因动物。
②特点：
1.可以定点导入外源基因到确定位置，而不是随机整合。
2.可以任意让某一基因突变，使其失去活性。
60 转基因动物的应用，特别是该技术在基因功能分析上的应用。
1.促进基础生命科学研究。
可以通过转基因动物技术，在体内研究基因的功能。
2.促进医学研究
建立人类疾病模型。
3.器官来源
解决器官短缺的有效方法。
4.动物遗传性质的改良。
转基因观赏动物，转基因生物反应器等
61 转基因动物与生物反应器。
①转基因动物:是一种遗传工程化动物，在起基因组中整合了一个或多个拷贝的外源基因或
突变的内源基因，这使该动物具有新的遗传特性和表现型。
②生物反应器：以产生商品蛋白为目标，直接将target-gene导入动物体内，使其在动物体内稳定的表达.
62 对转基因动物食品的安全认识。
1.正确客观对待
2.不要一味反对，科学看待转基因食品安全
转基因技术只要是从人类的生存和健康角度出发去开发应用，对人类的贡献只会是利远远大于弊，以至于可以把弊害控制在最低限度，真正实现生物技术造福于人类。
第一代转基因食品增加农作物抗逆性，减少农药对人健康的损害;第二代转基因食品改善食品品质，增加食品营养;第三代转基因食品以增加食品中的功能因子和免疫功能为目标.
3.监管工作必须紧紧跟进，以确保转基因食品的研发沿着正确的轨道前进。
63 如何在个体水平实现每个细胞均具有外源基因?
将外源基因导入胚胎干细胞的
64 克隆的种类及概念。
①分子克隆：在细菌和病毒中由一个原始的具有一定结构的DNA分子增殖的一组DNA分
子，叫做分子克隆或DNA克隆。
②细胞克隆：一个亲代细胞通过有丝分裂产生的一群在遗传上相同的细胞，叫细胞克隆
③个体克隆：无性繁殖产生的在遗传上相同的一群个体，即个体克隆，多指植物无性繁殖。
④动物克隆：通过核酸转移技术，将体细胞核转移到去核的卵母细胞中去，由此产生在遗
传上相同的个体，即现在所称的动物克隆。
65 动物克隆技术的种类，其技术路线。
种类：(1) 胚胎分割法克隆(2) 胚细胞核移植法克隆(3) 体细胞核移植法克隆
技术路线:
1>.从供体卵巢获得卵母细胞，体外培养成熟，去核后将其激活备用。
期体细胞，获取核。
2>.从供体家畜获得体细胞，归零培养G
3>.去核卵母细胞与核融合（电融合）重组胚
4>.体外培养得组胚至囊胚期
5>.对受体母畜同眇进行发育周期处理，然后胚胎移植克隆动物
66 Dolly羊诞生的学术意义。
①理论意义：1>.证明分化细胞经过处理，在去核卵母细胞的支持下，能恢复其全能性。
2>.对动物发育过程中的基因的表达调控及跗学理论有深远影响。
②实践意义:为人们提供了体细胞克隆哺乳动物的方法。
说明高等动物体细胞具有发育的全能性，说明高等动物成体可以通过无性途径被复制
67 转基因克隆动物。
1>.目的基因载体转入体细胞中
2>.对转基因成功的体细胞进行筛选，将其核移植入去核卵母细胞中
3>.将重构胚培养至桑椹胚时期，胚胎移植克隆动物出生
68 Semi 克隆技术。
在进行细胞基因的功能研究是，单倍体生物是理想的实验材料，它可以单独的研究某个基因的功能。而真核生物中只有酵母菌是单倍体生物，而酵母菌跟人类的基因差别相差很大，不适合作为模式生物进行研究人类基因的功能，因此科学家们想到了制造单倍体的生物进行基
因的研究，相应的技术就是Semicloning技术。该技术是把精子在进行受精前用紫外线照射把胞内核酸结构破坏，但精子仍然可以游动，因为线粒体没有被破坏，所以可以进行受精作用，这样形成的受精卵便是单倍体。发育成成体后便可以进行基因的功能和作用的研究。69 克隆动物遗传上的相似性。
1>.供体的细胞质和受体的细胞质是不一样的。在克隆动物的实验中，胞质来源于受体，受体的质中线粒体DNA对细胞的发育必然会产生影响，这就不可能保证克隆动物100%遗传上的一致性。
2>.受体的胞质中还含有mRNA，蛋白质因子，这些mRNA、蛋白质因子不同于供体，同时，由于胞质对核的表达产生调控作用，这样，受体的mRNA、蛋白质因子对供体核产生影响
3>.供体细胞可以来源于不同的组织，它们之间存在细微差别
4>.即使是原代培养，每个细胞的生长状况也不尽相同
5>.一般情况下，克隆动物性状与供体相似，但也存在不少反例，如X光照片显示克隆鱼的肋骨构型与受体一致，这是‘克隆动物不是100%遗传上的一致’的最好证明。
70 动物克隆的潜在应用意义。
1>.在基础科研领域的应用：如核质关系研究，生长发育机理的研究
2>.在医学领域的应用：如利用克隆动物建立生物工厂
3>.在畜牧业方面的应用：如大量繁殖优良个体，挽救濒危动物
71 对动物克隆研究现状和新进展的认识。
研究现状：
72 设计一项动物克隆方案，证实细胞的全能性。
73 解释动物克隆效率低的原因。
克隆成功率低很有可能是在人工操作过程中使动物基因失去一个或多个甲基造成的，失去几个甲基对基因来说可能是一种微小的变化，但足以改变基因产生蛋白质的能力，造成克隆成功率低的原因。此外，核移植技术程序中，对细胞膜和细胞超显微结构产生了机械和电击损伤以及一些物质对细胞的化学毒害作用。
74 克隆动物食品能否食用？
75 从动物细胞工程课学习中，产生哪些对生命科学的新理解。
76 从动物细胞工程到产业化设计。
77 以人类或者动物细胞为材料，设计一个实验方案，以解决一个医学问题，或者为建立一个高盈利生物高技术企业提供核心技术.
78 谈学习动物细胞工程课程后的收获，体会。
79 动物细胞工程技术对生命科学研究的贡献。
80 英文术语，名词解释。
《动物细胞工程学案》 张建尚/江苏 【学习目标】站得高——明确学习目标。 1.简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 2.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 3.举例说出动物细胞融合的与单克隆抗体的原理和应用。 【重点和难点】 重点：1.动物细胞培养的过程及条件。 2.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 3.单克隆抗体的制备和应用。 难点：1.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 2.单克隆抗体的制备和应用。 【学法提示】 1.利用动物细胞培养过程示意图学习动物细胞培养过程，对每一步采取的措施要掌握其目的、原因，区分原代培养和传代培养，并与植物组织培养进行比较。 2.从植物原生质体融合入手，理解动物细胞融合的方法、过程；根据B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特点，理解单克隆抗体制备的方法、意义和利用。 【课前预习】起步稳——知识源于生活。 1.动物细胞工程常用的技术手段有①、②、③、 ④等，其中⑤技术是其他动物工程的基础。 2.动物细胞培养的流程：取动物组织块→剪碎→用①处理分散成②→制成③→放入培养瓶中进行④培养。对动物细胞进行培养时，要求培养瓶或培养皿内表面⑤。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的⑥。贴满瓶壁的细胞需要重新用 ⑦处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养称为⑧。 3.动物细胞培养的培养液应进行①处理，通常还要在培养液中添加一定量的②，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止③对细胞自身造成危害。合成培养基的成分主要有④等，通常还需加入⑤等天然成分。细胞培养中的O2是⑥所必需，CO2的主要作用是⑦。 4.动物细胞核移植是将动物的一个细胞的①，移入一个已经去掉细胞核的②中，使其重组并发育成一个新的③，并最终发育为动物个体。哺乳动物核移植可以分为④核移植（比较容易）和⑤核移植。 5.动物细胞融合也称①，融合后形成的具有原来②细胞遗传信息的单核细胞，称为③。动物细胞融合不同于植物原生质体融合的诱导方法是④。 6.将效应B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，经过筛选后得到①细胞，这种细胞既能大量②，又能产生③。将这样的细胞群在④条件下或注射到⑤内增殖，就可以获得大量的单克隆抗体。单克隆抗体最主要的优点是⑥，并可能大量制备。 答案1.①动物细胞培养②动物细胞核移植③动物细胞融合④生产单克隆抗体⑤动物细胞培养2.①胰蛋白酶或胶原蛋白酶②单个细胞③细胞悬液④原代培养⑤光滑、无毒、易于贴附
专题2细胞工程 一、选择题 1.运用下列各种细胞工程技术培育生物新品种,操作过程中能形成愈伤组织的是( )。 ①植物组织培养②植物体细胞杂交③动物细胞培养 ④转基因植物的培育 A.①②③ B.①②④ C.①③④ D.①②③④ 2.生物技术的发展速度很快,已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡,以下较易成功“复生”野驴的方法是( )。 A.将野驴的体细胞取出,利用组织培养技术,经脱分化、再分化,培育成新个体 B.将野驴的体细胞两两融合,再经组织培养培育成新个体 C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中,经孕育培育成新个体 D.将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体 3.下列关于细胞工程的叙述,错误的是( )。 A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D.某种植物甲、乙两品种的体细胞杂种与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目相同 4.用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织,下列叙述错误的是( )。 A.该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的 B.该愈伤组织的细胞没有全能性 C.该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成的 D.该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构 5.名为“我的皮肤”的生物活性绷带自从在英国诞生后,给皮肤烧伤病人带来了福音。该活性绷带的原理是先采集一些细胞样本,再让其在特殊的膜片上增殖。5~7天后,将膜片敷在患者的伤口上,膜片会将细胞逐渐“释放”到伤口,并促进新生皮肤层生长,达到加速伤口愈合的目的。下列有关叙述中,不正确的是( )。 A.“我的皮肤”的获得技术属于动物细胞工程 B.人的皮肤烧伤后会因人体第二道防线的破坏而导致免疫力下降 C.种植在膜片上的细胞样本最好选自患者本人 D.膜片能否把细胞顺利“释放”到伤口,加速患者自身皮肤愈合与细胞膜上的糖蛋白有关 6.既可用于DNA重组技术又可用于细胞融合技术的是( )。 A.病毒 B.纤维素酶 C.聚乙二醇 D.质粒 7.培育农作物新品种的过程中,常利用植物组织培养技术。下列叙述正确的是( )。 A.培育转基因的外植体得到的新个体属于基因突变个体 B.在植物组织培养过程中用理化因素诱导可获得大量有益突变体 C.单倍体育种中经减数分裂和组织培养两个过程能获得纯合二倍体 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 8.下列与细胞工程技术相关的表述中,不正确的是( )。 A.植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍 B.动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基成分基本相同 C.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 9.经植物组织培养技术培养出来的植物一般很少有植物病毒危害,其原因在于( )。 A.在组织培养过程中经过了脱分化和再分化,进行的是快速分裂和分化
名称解释 细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。 组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。有时泛指所有的体外培养。 器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。 合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。 无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。 完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。 接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。 无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。 不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。原因：培养条件变化使分化发生阻抑 细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量 细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。 2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。 3）体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化（脱分化）②不适应 1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法 要求：1）培养前准备2）操作间消毒3）洗手和着装4）火焰消毒 培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制 动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理 方法：1）操作程序规范2）试剂设备专人负责3）培养用品定点存放 2、平衡盐溶液（BBS）：（1）成分：无机盐和葡萄糖，少量酚红。（2）作用：维持渗透压、缓冲和调节酸碱度（3）常用：Hanks液、PBS等 消化液（1）作用：分散组织或细胞团。2）常用：胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液、蜗牛酶等2、消化液中的胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液作用的原理是什么？ 胰蛋白酶消化液主要作用是水解细胞之间的蛋白质，使细胞相互分离。 EDTA-2Na液：是一种化学螯合剂，其溶液又称Versen液，对细胞有一定的离解的作用。EDTA-2Na液的主要作用是通过结合（螯合）细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞之间的细胞连接。达到分散细胞的目的。 胶原酶溶液：胶原酶是从细胞中提取的一种酶，对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用，而对培养细胞一般不产生损伤，常在上皮类细胞原代培养时用来离散细胞与胶原组织。
动物细胞工程12月20日 动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养 1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 分散成单个细胞， 制成细胞悬液 注意： ①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。 ③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答： ⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养? 答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么? 答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 ⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高） ⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?
答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。 ⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 4、重要概念 ①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 产生原因：培养贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。 培养要求：培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒，易于贴附。 ②细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 ③原代培养：动物组织消化后的初次培养 ④传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。 5、培养条件： ⑴无菌无毒环境：无菌——对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素。；无毒——定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。 ⑵营养： 成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分。 培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基） ⑶温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 ⑷气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养。O2：是细胞代谢所必需的CO2主要作用是维持培养液的pH。 6、应用：生产有重要价值的生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。基因工程中受体细胞的培养。用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。科学家培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据。
植物细胞工程练习 学校:___________姓名：___________班级：___________座号：___________ 一、非选择题 1．草莓是人们经常食用的一种水果，有较高的营养价值。草莓是无性繁殖的作物，长期种植会使病毒积累在体内，产量降低，品质下降。下图是利用植物组织培养技术培育草莓脱毒苗的过程，请据图回答： （1）外植体能够形成幼苗所依据的原理是____________。培育脱毒苗时，一般选取_________作为外植体，其依据是__________________。 （2）①是脱分化过程，细胞脱分化是指已经分化的细胞，经过诱导后，失去其__________而转变为未分化细胞的过程。②是_______________过程。 （3）研究表明，多倍体草莓产量高于二倍体，利用组织培养技术获得多倍体草莓的方法有两种:一是使用__________〔药剂）处理草莓的愈伤组织，再经培养获得多倍体植株；二是利用_________(药剂)诱导草莓体细胞融合形成杂种细胞后，再经组织培养获得多倍体植株，这种育种技术被称为___________技术。 2．选取A、B植株的细胞进行如下图操作，请回答问题: (1)实现图中的①过程最常用的方法是________。 (2)②过程的发生，必须进行____________,其方法有____________法和____________法。 (3) 若细胞A内含a个染色体，细胞B内含b个染色体，则“杂种细胞”内含________个染色体；若A、B植株采用常规杂交育种方法成功的话，得到的后代含_____个染色体，必须用______________来处理幼苗，才能得到可育的杂种植株，其中含有_____个染色体。这两种方法相比，体细胞杂交方法的优点是：__________________________________。 (4)如果原生质体A为小鼠的浆细胞，原生质体B为小鼠的骨髓瘤细胞，诱导二者融合时，独特的方法是用_______处理。 3．细胞工程是一门新兴的生物工程技术。在动、植物的育种；药物提取；药物生产等领域的应用十分广泛。利用所学知识回答以下关于细胞工程的相关问题。 （1）釆用植物细胞工程育种的方法如下：
2.2动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 基础巩固 W i 下列不属于动物细胞培养必需条件的是（） A. 无菌、无毒的环境 B. 适宜的温度和pH C. O 2等气体环境 D. 适宜的光照条件 答案 D 下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是（） A. 动物细胞培养技术的原理是细胞的全能性 B. 传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞 C. 癌细胞在培养瓶中不会出现接触抑制现象 D. 动物细胞培养一般需要使用 CO 2培养箱 解析动物细胞培养的原理是细胞增殖。 答案A ? 3在动物细胞培养过程中 ，使用胰蛋白酶的目的是（） A. 使动物组织分散为单个细胞 B. 去掉细胞壁，使其成为原生质体 C. 去掉细胞膜，暴露岀原生质体便于细胞融合 D. 促进蛋白质水解为多肽 解析在进行动物细胞培养前 ，先用胰蛋白酶使组织块中的细胞相互分散开 ，以增加细胞与培养液的接触面积 便于培养。 4下列有关核移植的说法，错误的是（ ） A. 用核移植得到的动物称为克隆动物 B. 核移植的受体细胞最好是受精卵 C. 核移植可以充分发挥优良种畜的繁殖潜力 D. 核移植得到的克隆动物属于无性生殖 解析核移植的受体细胞应该是 M n 中期的卵母细胞，相对受精卵来说 ，M n 中期的卵母细胞细胞质所含的物 ? 5用于动物体细胞核移植的供体细胞一般选用（） A. 受精卵
B. 传代10代以内的细胞 C. 传代10?50代以内的细胞 D. 处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞 解析培养的动物细胞一般当传代至10~50代时，部分细胞核型可能会发生变化，而传代10代以内的细胞一般 能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞作为供体细胞。 W6在进行核移植时，通常将整个体细胞而不是细胞核注入去核卵母细胞中，下列有关叙述错误的是() A. 体细胞太小因而去除细胞核较困难 B. 细胞质中遗传物质少因而对遗传的影响很小 C. 直接将体细胞注入卵母细胞中简化了操作程序 D. 体细胞的核离开了原来的细胞质将不能存活 解析体细胞太小因而去除细胞核较困难，因此可将整个体细胞注入去核卵母细胞中，A项正确；DNA主要位于细胞核中，细胞质中遗传物质少，因而对遗传的影响很小，B项正确；将整个体细胞注入去核卵母细胞中，简化了操作程序，C项正确；体细胞的核离开了原来的细胞质，注入去核的卵母细胞依然能存活，D项错误。 ? 7下列关于动物细胞培养过程的叙述，错误的是() A. 制作细胞悬液时可以使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B. 悬液中分散的细胞很快贴附在细胞壁上，细胞贴壁体现了细胞的适应性 C. 细胞进行有丝分裂，数量增加到相互接触时可以使用胃蛋白酶处理后分瓶培养 D. 传代10代以内的细胞一般保持细胞正常的二倍体核型 解析将相互接触的动物细胞分散开需使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。答案C j 8甲羊的去核卵细胞与乙羊体细胞的细胞核组装”成一个新的细胞，该细胞多次分裂后植入丙羊的子宫 内发育，产下羊羔的毛色和性别分别与哪只羊保持一致(决定毛色的基因位于细胞核中)?() A. 甲、丙 B.甲、甲 C.乙、乙 D.丙、甲 解析决定毛色和性别的基因都位于细胞核中，因而产下的羊羔的毛色和性别与提供细胞核的乙羊相同。答案C 1—9某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有 甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞、乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题。 (1) 将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，会观察到甲细胞数量比乙细胞数量______________ 。 (2) 在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因 是______________________________________________ 。细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是___________________________ 。 (3) 在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长 ____________ 。药物试验需要大量细胞，两种细胞频 繁传代，甲细胞比乙细胞传代的次数更 ____________ 。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用______ 处理。 (4) 为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_____________ 。 (5) 已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验
细胞工程第一讲 一、概述 1、细胞工程（cell engineering ）定义 应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的原理方法与技术，按照人们的需要，在细胞水平上进行遗传操作，包括细胞融合、核质移植等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。 2、细胞工程的研究内容 （1）动植物细胞和组织培养 植物细胞培养主要用于育种和代谢产物制备，日本等国家用生物反应器培养人参细胞生产有效药用成分。 动物细胞培养用于制备单克隆抗体、疫苗、生长因子等。 （2）细胞融合 改良性状，培育新品种 （3）染色体工程 细胞工程 动植物细胞和组织培养 细胞融合 染色体工程 胚胎工程 细胞遗传工程 器官培养 组织培养 细胞培养 （快速繁育和产物大量制备） （改良性状，培育新品种） （培育新品种，单倍体和多倍体） （获得人们需要的成体） （无性繁殖，改变性状） 克隆 转基因技术
主要用于培育单倍体或多倍体新品种，如四倍体小麦，八倍体小黑麦 （4）胚胎工程 主要是获得人们需要的成体 如：胚胎分割技术、胚胎融合技术、卵核移植技术、体外授精技术等最成功应用于畜牧业获得优良品种与胚胎保存 对人类来说主要用于不孕症获得试管婴儿 （5）细胞遗传工程 克隆：无性繁殖，动物克隆指经无性繁殖而产生遗传性状完全相同的后代个体。 转基因技术：将外源基因整合到生物体内，能够表达并稳定遗传给后代的实验技术。 3、细胞工程的优势 （1）避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将细胞遗传物质直接转移到受体细胞中就能够形成杂交细胞。 （2）不仅可以在植物与植物之间、动物与动物之间、微生物与微生物之间，甚至可以在三者之间形成前所未有的杂交物种。 4、细胞工程发展 （1）萌芽阶段---理论渊源和早期的尝试（20世纪初-30年代中期）德国植物生理学家Haberlandt在1902年提出植物细胞的全能性。认为植物细胞有再生出完整植株的潜在能力。 美国生物学家Harrison 是公认的动物组织培养的创始人，1907年，以淋巴液为培养基观察了蛙胚神经细胞突起的生长过程，
学校：临清市第二中学学科：生物编写人：黄丽平审稿人：于振玲 专题二细胞工程——.动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 课前预习学案 一、预习目标 预习动物细胞培养的过程、条件及应用和核移植的过程及应用前景。 二、预习内容 （一）、动物细胞培养 1、动物细胞培养的概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中；让这些细胞生长和增殖。 2、动物细胞培养的过程：取动物组织块-----------剪碎组织；--------------胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理-------------分散成单个细胞；------------制成细胞悬液-------原代培养（贴壁生长）-----------------------分瓶----------传代培养10代以内，遗传物质未改变。------细胞株---------10~50代，遗传物质改变----------细胞系。 3、条件：（1） （2） （3） (4) 4、应用：（1）生产生物制品。（2）———————————————— （3）检测有毒物质。 （二）：动物体细胞核移植技术 1、概念：将动物一个细胞的_________________,移入一个______________________________中，使其重组并发育成一个新的________________这个新的胚胎最终发育为新的个体。 2、过程： (1)取供体_________________ →供体细胞培养。 (2)从卵巢中采集_________________ →在体外培养到_______________________ →去核。 (3)将供体细胞注入_____________________ →使两细胞____________→供体核进人受体卵母细 胞→构建_________________。 (4)将胚胎______________到代孕母体内→生出与供体遗传物质基本相同的个体。 3、应用：(1)加速家畜_________________进程，促进优良畜群繁育。 (2)保护_________________物种。 (3)生产_________________。 (4)作为异种移植的_____________。 (5)用于_________________的移植。
，能够用 于杀死人类的某些 第I 卷（选择题） 1 .下列关于现代生物技术的叙述中不正确的是（ A. 植物细胞去除细胞壁获得的原生质体仍然具有全能性 B. 动物细胞培养过程中需用胰蛋白酶处理获取单个细胞 C. 需使用特定的选择培养基筛选杂交瘤细胞 D. DNA 连接酶将DNA 分子碱基对之间的氢键连接起来 2 .将特定药物与单克隆抗体相结合制成的“生物导弹” 胞，其 过程如下图所示。下列相关叙述不正确的是（ A. ①过程的原理和植物原生质体融合的原理基本相同 B. 经①形成的杂交瘤细胞能无限增殖并产生单一抗体 C. ②过程需要筛选并克隆单个杂交瘤细胞 D. 抗体的靶向作用使③过程具有高度特异性 3 .图示利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的过程，分析错误 的是 A. ①经胰蛋白酶处理可得到③ B. 图中涉及基因工程、细胞核移植等技术 C. 常用PCR 技术扩增② D. 把⑤送入⑥的最佳时期是囊胚和原肠胚 4 .下表为动、植物细胞工程的有关内容比较，你认为错误 的有 植物细胞工程 动物细胞工程 持殊处理 酶解法去除细胞壁 胰蛋白酶处理配制细胞悬液 融合方法 物理方法，化学方法 物理方法，化学方法，生物方法 典型应用 人工种子，种间杂种植物 单克隆抗体的制备 培养液的区别 麦芽糖是离体组织赖以生长的成分 动物血清不可缺少 A. 0处 B . 1处 C . 2处 5.对细胞全能性的表述正确的有 A. 没有离体植物细胞也能表现出全能性 B. 动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现 C. 单克隆抗体的制备原理依据是细胞的全能性 D. 花粉可培育成单倍体，是细胞全能性的体现 脾细胞- 话髓痼细胞- 4 ■杂左痢 细胞 抗瘵药物 |结律 _ ；辺.单克隆一生物③十 抗体 导弹「 癌细胞 ① Q) III
动物细胞工程试题 1用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（C）A都须用液体培养基 B都需用培养箱 C都要在无菌条件下进行 D都可体现细胞的全能性 解析：动物细胞离体培养主要是获得细胞的代谢产物，植物体细胞离体培养体现的是全能性。植物体细胞是固体培养基。动物体细胞培养需要二氧化碳培养箱。 动物细胞培养： 1、动物细胞的培养：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 2、动物细胞培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。 3、动物细胞培养液的特点：液体培养基含动物血清。 4、动物细胞培养需要满足以下条件 (1)充足的营养供给——微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。 (2)适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。 (3)无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 (4)气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 5、动物细胞培养的过程： 取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 2下列关于细胞工程的叙述，错误的是（D） A. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D. 某种植物甲乙两品种的体细胞杂交与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同 解析：A正确诱导原生质体融合的方法有物理法（离心振动电刺激）化学法（聚乙二醇PEG）生物方法（灭活的病毒）. B正确去除植物细胞壁需要纤维素酶和果胶酶，将动物组织分散成单个细胞需要胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间。C正确小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合既可以无限增殖，又可产生特异性抗体。D错误，假设甲植物体细胞是2N,乙植物体细胞是2M，甲乙体细胞杂交染色体数目为2N+2M；而甲乙品种杂交染色体数目是N+M。 3制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括（A） ①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植 A．①②B．①③C．②③D．③④ 解析：单克隆抗体的制备过程是人工诱导经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再经筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，经过培养获得的杂交瘤细胞获得单克隆抗体。 4利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（D） A. 用纯化的核衣蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体 B. 体外培养单个浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体
自我小测 1．下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是（） A．动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开来 B．通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 C．细胞的癌变通常发生在原代培养向传代培养的过渡过程中 D．传代培养的细胞在传至10～50代左右时，部分细胞的核型可能发生变化 2．在动物体细胞克隆技术中，不一定涉及（） A．卵母细胞的培养 B．细胞核移植 C．早期胚胎培养 D．导入外源基因 3．下列关于动物细胞培养液的叙述，不正确的是（） A．为了防止培养过程中出现细菌污染，可以在培养液中添加抗生素 B．细胞培养液中必须有糖、氨基酸等化合物以及动物血清等天然成分 C．含95%空气中再混入5%的CO2主要作用是维持培养液的pH D．培养液应该定期更换，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害 4．下列关于动物细胞培养的过程的叙述，错误的是（） A．制作细胞悬液时可以使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B．悬液中分散的细胞很快贴附在细胞壁上，细胞贴壁体现了细胞的适应性 C．细胞进行有丝分裂，数量增加到相互接触时可以使用胃蛋白酶处理后分瓶培养 D．10代以内的细胞保持细胞正常的二倍体核型 5．在动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。下图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果，从该图中不能获得的信息是（） A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同 B．有无血清对正常细胞培养的影响不同 C．培养基中补充血清有助于正常细胞的培养 D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大
6．甲羊的去核卵细胞与乙羊体细胞的细胞核“组装”成一个新的细胞，该细胞多次分裂后植入丙羊的子宫内发育，产下羊羔的毛色和性别分别与哪只羊保持一致（决定毛色的基因位于细胞核中）？（） A．甲、丙B．甲、甲C．乙、乙D．丙、甲 7．若在克隆牛的培育过程中，将牛M（基因型为Aa）的体细胞核移入牛N（基因型为aa）的去核卵母细胞中，然后在雌牛L（基因型为AA）体内发育成熟。产出的犊牛基因型为（） A．AA B．Aa C．aa D．Aaa 8．以下细胞工程中所用技术与原理不相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理植物细胞——酶的专一性 B．动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交——细胞膜的流动性 D．植物组织培养——植物细胞的全能性 9．动物细胞培养的特点是（） ①细胞贴壁②有丝分裂③分散生长④接触抑制⑤减数分裂 A．①②④B．②④⑤C．①③④D．③④⑤ 10．乙马的卵细胞核被甲马的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂发育成重组胚胎，再植入丙马的子宫内发育，结果产下一只小马。下列叙述正确的是（）A．直接在体外对甲马的体细胞进行诱导也能培养出胚胎来 B．小马的性状完全与甲马相同 C．此项技术可用于保护濒危物种 D．该过程可以很好地证明动物细胞的全能性 11．动物细胞培养过程的顺序是（） ①原代培养②传代培养③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液 A．①②③B．①③②C．②①③D．③①② 12．某研究小组进行药物实验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。 请回答下列有关动物细胞培养的问题。 （1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。 （2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是______________。 细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是______________。 （3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长________。药物实验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更________。若用动物的肝
学习指导案 课题 动物细胞培养 授课时间 课型 新授 主备人 教材分析 动物细胞培养是其他动物细胞工程的基础，打好基础很重要。通过设计六道讨论题，在预习的基础上解决讨论题后，大部分学生能够掌握动物细胞培养的过程。 学情基础分析及预习导学 在植物组织培养的基础上，学习动物细胞培养，要通过对比，理解过程，结果、应用和条件 课程目标 知识与技能： 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 情感态度和价值观 了解生物技术，关注实际生活 能力方面 通过讨论，了解动物细胞培养的过程。 学习重点 动物细胞培养的过程及条件。
学习难点 动物细胞培养的过程 教具准备 多媒体课件和学案 学习过程 学习内容 学习形式 教师指导 时间 （一）引入新课 利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程。 （二）进行新课 [问题]动物细胞工程的常用技术手段有哪些？最基础的技术手段是什么？ 动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。最基础的技术手段是动物细胞培养。 1．动物细胞培养 1.1概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。[来源:学_科_网] [分析]（1）需分散成单个细胞；（2）需要在培养基上培养；（3）动物细胞培养的实质是细胞增殖——原理 1.2动物细胞培养的过程： [问题]什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在有丝分裂，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 [问题]如何打破接触抑制？需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖。 [问题]细胞传代培养代数有什么特点？ 传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般来说，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能发生变化，当继续传代培
生物专题细胞工程之动物细胞工程题库详解 一、单项选择题（共80小题；共160分） 1. 动物细胞融合的原理是 A. 动物细胞没有识别能力 B. 动物细胞易被病毒感染 C. 细胞膜具有流动性 D. 动物细胞膜易被击穿 2. 能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 A. 离心 B. 灭活的病毒 C. 电刺激 D. 振动 3. 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与 骨髓瘤细胞融合的是 A. 经过免疫的B淋巴细胞 B. 不经过免疫的T淋巴细胞 C. 经过免疫的T淋巴细胞 D. 不经过免疫的B淋巴细胞 4. 动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 A. 动物细胞培养 B. 动物细胞融合 C. 生产单克隆抗体 D. 胚胎移植、核移植 5. 进行动物细胞培养时，选用的材料是 A. 衰老退化的动物细胞 B. 成熟动物个体的体细胞 C. 动物的受精卵 D. 动物胚胎或幼年个体的细胞 6. 动物细胞融合与植物原生质体融合的理论基础是 A. 细胞膜的流动性 B. 细胞膜的选择透过性 C. 细胞质的流动性 D. 细胞质中酶的活性 7. 用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因 是这样的组织细胞 A. 容易产生各种变异 B. 具有更强的全能性 C. 取材十分方便 D. 分裂增殖的能力强 8. 为了让用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬液，选取来的动物组织应选 用下列哪种物质处理 A. 胃蛋白酶 B. 胰蛋白酶 C. 盐酸 D. 胰脂肪酶 9. 动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 A. 动物细胞培养 B. 动物细胞融合 C. 单克隆杭体 D. 胚胎、核移植 10. 动物细胞培养的细胞来自于 A. 任何个体的细胞 B. 只能取自动物胚胎细胞 C. 只能取自幼龄动物的组织细胞 D. 胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
《动物细胞培养技术》复习思考题 动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。你认为精确配制各种溶液？ 答： 配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答：L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质； b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源； d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
§2-2“动物细胞培养和核移植技术”第一课教学设计 （青龙县木头凳高中秦维华066505） 【设计思路】 采用135互动课堂的教学模式，以问题为主线，通过一个个问题的解决，达到推动新课进行的目的。教学的思路问题——讨论——展示——质疑——答疑。教学中设计了自主探究、合作探究、课堂巩固、课堂检测、课后总结五个环节。自主探究部分，学生阅读课本P44-47，课前独立完成。合作探究部分，学生以小组为单位进行讨论完成。课堂巩固每个学生独立完成后，在小组内进行核对答案，讨论，会的教不会，然后展示，如果都不会，可向其它小组求助。课堂检测，以小组为单位，以抢答题的形式出现，并计分。总之，学生能说的让学生说，学生能做的让学生做，学生能思考的让学生思考，使学生始终能主动地参与学习，成为学习的主人。 【教材分析】 本节课为人教版新课程教材选修3第二章第二节的教学内容,本节内容设计2课时，本节课为第1课时。教学过程可以归纳成3个问题:(l) 什么是动物细胞培养? (2) 怎样进行动物细胞培养? (3)为什么要进行动物细胞培养?第3个问题是本节的重点。本节旨在通过这些问题让学生充分理解和认识生物工程的前沿技术,以此激发学生热爱科学、努力学习、积极探索的精神。 【学情分析】 高二年级多数学生已经掌握了一定的生物学基础知识,具备了独立思考和判断的能力,合作性学习能力较强,但是个体之间还是存在着较大的差异。因此本节课以学生的学习为主,以教师的组织和引导为辅。加强教材与生活的联系,引导和调动学生的情感体验,关注学生的心理变化,培养学生对事物有正确的情感态度。 【教学目标】 知识目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用 2、简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景 能力目标：运用细胞的基础知识，分析细胞工程的理论基础 情感目标：关注细胞工程研究的发展和应用前景。 【教学重点难点】
选修三动物细胞工程习题 一、单选题： 1. 下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是（） A.动物细胞培养选用的培养材料大多是动物的受精卵细胞 B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清 C.动物细胞培养过程中要用胰蛋白酶处理使细胞分散 D.“海拉”细胞系在实验室中被广泛传代使用是因为其遗传物质保持了长时间的稳定 2. 关于细胞工程的说法不正确的是（） A.培养动物细胞和植物细胞的重要区别在于培养基的不同 B.单克隆抗体与血清抗体相比，前者特异性强、灵敏度高，产量大 C.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行，而植物细胞培养则需要在无菌条件下进行 D.在生物体内细胞没有表现出全能性，与基因表达的选择性密切相关 3. 小鼠骨髓瘤细胞与某一种B淋巴细胞融合成为杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞（） A.发生了基因突变 B.只能在体外大量增殖 C.只能在体内大量增殖 D.能产生特定的抗体 4. 下列关于细胞工程的叙述中，正确的是（） A.克隆羊“多莉”的培育技术主要包括核移植和胚胎移植两方面 B.植物细胞工程中，融合叶肉细胞时，应先去掉细胞膜，制备原生质体 C.植物细胞工程中，叶肉细胞经再分化过程可形成愈伤组织 D.单克隆抗体制备过程中，采用不经免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合从而获得杂交瘤细胞 5. 生产单克隆抗体时，在培养基中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，该试剂的作用是（） A.能选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.能抑制淋巴细胞的DNA复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成 6. 对比植物体细胞杂交和动物细胞融合，以下论述完全正确的是（） A.两者都必须经过人工诱导，但方式不同 B.两者细胞融合的基本原理都是细胞的全能性 C.两者都必须用灭活的病毒进行诱导 D.两者的用途都是为了培养新品种 7．下列关于哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（） A．卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增加 B．胚胎分割时需将原肠胚的内细胞团均等分割 C．胚胎干细胞具有细胞核大、核仁小和蛋白质合成旺盛等特点 D．胚胎干细胞是一类未分化细胞，可从早期胚胎中分离获取 8．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是（） A．都需用CO2培养箱B．都须用液体培养基 C．都要在无菌条件下进行D．都可体现细胞的全能性 9、下列关于细胞工程的叙述，错误的是（） A．电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C．小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D．某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同 10、通过特定方法，科学家将小鼠和人已分化的体细胞成功地转变成了类胚胎干细胞。有关分化的体细胞和类胚胎干细胞的描述，正确的是（） A．人类胚胎干细胞能够分化成多种细胞B．分化的体细胞丢失了某些基因 C．二者功能有差异，但形态没有差异。D．二者基因组相同，且表达的基因相同