大鼠心肌梗死模型制作图解 庄瑜制作 南京市第一医院 南京医科大学附属南京第一医院南京市心血管病医院心胸外科 https://www.doczj.com/doc/1319199466.html,/
制作前准备 1．器械：动物呼吸机，开胸制作心梗模型，维持呼吸至关重要。虽然据说某些牛人可以不用呼吸机，但是我想这是经验积累的结果，开始时必然要用；况且需要看此说明的人应该没有牛到这个程度。当然，如果你经费异常充足，不在乎死亡成千上万的大鼠也可以。 显微器械，最主要的是针持，大鼠胸腔、心脏均很小，常规器械无法进入胸腔缝扎。其他手术器械以眼科器械为主。 2．动物：应选择成年健康大鼠，耐受性较好。最重要的是要充分利用每一只动物，包括死亡的大鼠。许多人都知道制作大鼠模型需要多练习，但是练习不是买一大批大鼠，不停地缝扎，然后不停地扔掉死的大鼠；当然，制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。练习的前提是对大鼠解剖及操作过程的熟悉，如果可能的话，最好先找一份大鼠的解剖图谱，熟悉手术区域的解剖结构；同时研究实验流程，熟悉每一个实验步骤。大鼠死亡后，不要急着扔掉，利用它练习每一个你不熟悉的操作步骤，直到熟练为止。 3．实验者：实验者必须具有一种平和的、耐得住寂寞的心态，制作模型需要时间，尤其是早期，需要耐心、仔细的摸索；必须对每一个步骤进行认真地研究。最熟练的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分钟的时间，加上准备及扫尾的时间，制作十只模型就需要一天的时间，如果你废寝忘食多用用功也可能做到15只左右，这样一天下来腰酸背痛是必然的，你能坚持多久？不熟练的话，一只就要两、三个小时；同时还要看着大鼠在你的手中死亡，这是很揪心的事情。因此，实验者必须具备良好的心态，急于求成、难耐寂寞者不适合做此实验。 本人系气管切开插管，缝扎LAD制作模型。亦有人经口插管，液氮冷冻制作模型；不在本人讨论范围之内，哪位有经验的话可以传上来，一起讨论。最后祝各位早日成功！！
细胞凋亡与衰老 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【关键词】细胞凋亡；衰老 衰老是指增龄过程中机体出现的多器官渐进性功能减退，其确切机制并不清楚，有多种学说，如自由基学说、端粒学说和细胞凋亡学说等。以啮齿类动物为研究对象，肌肉、脑、心脏等多种衰老组织中均存在细胞凋亡异常〔1〕。细胞凋亡参与多种与衰老相关的病理过程，如骨质疏松、阿尔茨海默病等。目前细胞凋亡在衰老中的作用成为国内外研究热点，本文就二者的最新研究进展作综述。 1 细胞凋亡 细胞凋亡涉及一系列基因的激活、表达及调控，是机体为更好地适应环境采取的主动死亡，其参与许多重要生命活动，如胚胎发育、免疫防御和维持组织稳态等，对维持细胞增殖与死亡的平衡有重要意义。 1.1 细胞凋亡途径 1.1.1 外源性途径又称死亡受体途径，是由膜受体介导的细胞死亡过程。死亡受体是属于肿瘤坏死因子受体超家族的跨膜受体，其中研究较透彻的是Fas/FasL系统。Fas广泛分布于胸腺、肝、心、肾等
组织细胞表面。当Fas与其配体FasL结合后发生多聚化，与胞浆内死亡结构域结合蛋白（FADD）结合，活化胞浆caspase8，再活化凋亡执行者caspase3，水解蛋白质，启动核酸内切酶剪切DNA，造成凋亡。这是发育过程和免疫系统中最主要的凋亡途径。通过该途径可清除发育过程及免疫反应中活化的淋巴细胞。增龄过程中Fas表达呈上升趋势。衰老大鼠胸腺细胞和脾细胞凋亡速度加快，可能造成衰老机体免疫功能下降。 1.1.2 内源性途径以线粒体为核心，又称线粒体途径。该途径凋亡信号来自体内各种应激，如DNA损伤、氧化应激、紫外线、生长因子缺乏等。凋亡信号引起前凋亡蛋白Bax活化，Bax诱导线粒体释放细胞色素c（Cyt c）。进入胞质的Cyt c与凋亡蛋白激活因子（Apaf1）、caspase9前体组成凋亡体，激活caspase9，再活化caspase3引起细胞凋亡。线粒体也可释放凋亡诱导因子(AIF)和内切核酸酶G进入胞浆，二者转移到细胞核，断裂DNA。随着年龄增长，内源性凋亡途径逐渐变得活跃。 1.1.3 内质网应激介导的细胞凋亡内质网(ER)参与蛋白质合成及翻译后加工修饰。当非折叠或错折叠蛋白质在ER内堆积超过处理能力时，引起ER应激。ER应激的一个后果是细胞凋亡。位于ER膜上的Bak、Bax发生构象变化形成多聚体，使Ca2+进入ER，活化caspase12，引起下游级联反应，活化caspase9和caspase3。机体具有应对ER应激的保护措施，如使翻译起始因子eIF2去磷酸化，减少蛋白质合成。但衰老机体应对ER应激能力降低，eIF2磷
番茄红素对心肌细胞缺氧损伤的作用机制 目的探讨番茄红素对心肌细胞沉默信息调节因子1（Sirt1）-自噬通路的作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞予以无血清、无糖培养及缺氧干预，模拟心肌缺血，用番茄红素和Sirt1的抑制剂尼克酰胺干预。采用Western blot法检测Sirt1、自噬相关基因6（Atg6）Beclin1及自噬相关基因8LC3蛋白的表达；RT-PCR技术检测心肌细胞Sirt1的mRNA表达。结果①在心肌缺氧中，番茄红素提高了细胞Sirt1蛋白和mRNA的表达水平；②番茄红素增加了心肌缺氧时自噬相关基因Beclin1和LC3蛋白的表达；③Sirt1的抑制剂尼克酰胺阻断了番茄红素对自噬蛋白的作用。结论番茄红素可能通过Sirt1激活自噬，从而减少心肌缺氧损伤。 标签：心肌细胞；缺氧；番茄红素；沉默信息调节因子1；尼克酰胺；自噬相关基因 番茄红素（lycopene，Lyc）是一种天然生物色素，属于类胡萝卜素一族，富含于番茄、石榴、木瓜等红色水果和蔬菜中。目前国内外大量的研究证明番茄红素不仅有极强的抗氧化力，还有抑制炎症因子表达、抗癌，预防衰老等多种生物学效应[1-2]。近年有少量关于番茄红素防治心血管疾病、抗缺血缺氧、抑制动脉粥样硬化的报道[3-4]，但关于其作用机制的研究甚少。因此探索其内在机制，寻找有效的治疗靶点具有重要的临床实践意义。 沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，Sirt1）是机体调节能量代谢的重要因子，它通过对组蛋白/非组蛋白的去乙酰化作用影响基因转录，还能去乙酰化其他下游靶基因或与之相互作用，来调节能量代谢、细胞老化，最终延长细胞生存和寿命[5]。研究证实，Sirt1降低氧化应激反应、缓解心肌缺血再灌注损伤、减少心肌梗死面积和抑制心肌肥厚的作用[6-10]。 在前期研究中，笔者发现在心肌缺氧早期，番茄红素可以通过提高自噬水平达到保护心肌细胞的作用，但具体通路未明确。本研究旨在模拟心肌缺血缺氧中探讨番茄红素是否通过Sirt1调控自噬起到保护心肌的作用。 1 材料与方法 1.1 动物与试剂 SD乳鼠，清洁级，1～2 d龄，汕头大学医学院实验动物中心提供。 DMEM-F12、M199和胎牛血清（Hyclone），胰蛋白酶和I型胶原酶（Gibco），5-溴脱氧尿嘧啶核苷BrdU（Sigma），番茄红素（Sigma），沉默信息调节因子1（Sirt1）抗体（Cell Signaling Technology），Bclin1抗体（Cell Signaling Technology），尼克酰胺（Sigma），甘油醛-3-磷酸脱氢酶GADPH（Cell Signaling Technology），免疫印迹发光试剂盒（Millipore），缺氧密闭盒（Billups Rothenberg），RNA酶抑制剂，无核酶水，逆转录酶，脱氧核糖核苷酸混合物，随机引物（Takara）。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/1319199466.html, D-半乳糖衰老小鼠模型的建立 作者：刘佳 来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第04期 【摘; 要】目的：建立 D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型建立。方法：8周龄ICR小鼠，32只，雌性各半，10%D-半乳糖溶液500mg/（kg·d）颈后部皮下注射.连续注射 56天后后摘眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠，并通过检测小鼠血清中 SOD 活力和 MDA 含量，对此衰老模型做出生物学鉴定。结果：造模过程中模型小鼠逐渐变得不活泼，喜蜷缩，脊椎隆起，体形消瘦，皮肤松弛，毛发稀疏、竖起失去光泽等一系列衰老体征，而正常对照组未出现上述衰老体征;与正常对照组相比，模型组血清SOD活力明显降低（P<0.01），差异有显著性意义;与正常对照组相比，血清MDA含量明显升高（P<0.01），差异有显著性意义。结论：本课题组成功建立了 D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型。 【关键词】D-半乳糖 【中图分类号】R764;;;;; 【文献标识码】A;;;;; 【文章编号】1672-3783（2019）04-0031-01 【Abstract】Objective：To establish a D - galactose subacute aging mice model.Methods：8 weeks of ICR mice， 32， female and male in half，500 mg/D - galactose 10% solution （kg·D） at the back of the neck subcutaneous; injection . After 56days continuousinjection，blood were sampled from the eyes ，then the mice were executed.Through testing the SOD activity and MDA contentsin the serum， we can make biology identification of the aging mod.Results： The process of building model ，the model mice gradually became less active，liked curled， the spine upheavaled，body were thin ，skin were loose， hair were sparse，erecting and lost shineetc，a series of signs of aging，.However the normal control group did not appear the aging https://www.doczj.com/doc/1319199466.html,pared with the normal control group， the model group serum SOD activity decreased significantly （P < 0.01）;Compared with the normal control group， serum MDA contents increased significantly （P<0.01）.Conclusion：Our research group had established the D-galactose subacute aging model mice sucssessfully 【Key word】D- galactose 有文献报道选用D-半乳糖来建立衰老动物模型时发现，雄性大鼠相对于雌性大鼠更为敏感，可以首选雄性SD大鼠作为动物来源。但亦可选用Wistar大鼠、昆明小鼠、ICR小鼠等。目前D-半乳糖致衰老动物模型所需剂量及时间尚无统一规定，剂量范围从50-1250mg/（kg·d）不等。有学者认为，在制备D-半乳糖衰老大鼠或小鼠模型时，给D-半乳糖 50-500mg/（kg·d），连续6-8周比较合适。
抑郁症大鼠模型的建立与评价 发表时间：2012-04-13T09:52:27.670Z 来源：《中外健康文摘》2012年第6期供稿作者：康志龙肖志成周新富[导读] 抑郁症是一种常见的影响人们日常生活和健康的精神疾病。 康志龙肖志成周新富（昆明医学院分子临床医学研究院云南昆明 650500）【中图分类号】R749【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）6-0048-02 【摘要】抑郁症是一种常见的影响人们日常生活和健康的精神疾病，主要表现有持续情绪低落，兴趣减低，悲观，思维迟缓，缺乏主动性，饮食、睡眠质量差，全身多处不适感，更有甚者可出现自杀念头和行为，重症抑郁有近15%的自杀率[1,2,3]。世界卫生组织研究表明，抑郁症已经成为中国疾病负担的第二大疾病，到2020年，抑郁症可能成为仅次于心血管疾病的全球第二大疾患[4]。动物模型能帮助人们更好的认识抑郁症，对抑郁症的治疗起到了非常良好的促进作用。本文对常用的一些抑郁症造模方法及其评价做一阐述。【关键词】抑郁症抑郁模型脑源性神经营养因子 BDNF 抑郁症是一类严重危害人们身心健康的精神障碍疾病。它的发病率很高，几乎每7个成年人中就有1个抑郁症患者，目前全球有3.4亿精神抑郁症患者，相当于精神分裂患者的7至8倍，并且这一数字仍在上升，抑郁症也成为医学工作者研究的热点。 1 动物模型的建立 动物抑郁模型对于抑郁症的治疗和抗抑郁药的开发有重要的作用，主要的抑郁模型有以下几种： 1.1药物诱发抑郁模型 利血平拮抗,5-羟色氨酸诱导的甩头行为,小鼠育亨宾诱导的致死试验,大鼠色胺惊厥增强实验。这些药物诱导模型可以用于早期评价抗抑郁药物作用或用来初筛未知化合物的药理作用特性[5]。 1.2应激模型 1.2.1 绝望模型 即大、小鼠强迫性游泳(forced swimm ing test)模型，该模型是将大鼠(或小鼠) 放入盛水的环形玻璃缸内强迫游泳。动物最初在水中拼命游动、挣扎、试图逃脱,随之感到逃脱是不可能的,便不再挣扎和游动,仅将头部露出水面,肢体漂浮,维持一种不动状态,将此状态称为“行为绝望”。此种模型已广泛用于抗抑郁剂的筛选和评价，国内昆明种小鼠和Wistar大鼠可以作为这种模型的首选动物[6]。 1.2.2 获得性无助 Seligman 等在1975年模拟抑郁症建立了获得性无助动物模型。经动物放在笼子中，给予动物连续的电击刺激，使其不能逃避，经多次实验后，即使将动物置于可逃避性的环境,如穿梭逃避，它也表现为完全不能或极缓慢的逃避行为,称之为“获得性无助”,该模型可作为内源性抑郁症代表性的动物模型[7]。 1.2.3 慢性轻度不可预见性的应激 (chronic unpre dictable mild stress，CUMS) 动物模型 目前认为慢性、长期的日常压力是引发抑郁症的主要原因，近年来，通过改变周围环境使动物行为异常而建立的抑郁症模型，为抑郁症的研究拓宽了思路[8]。 因此，这种模型目前应用广泛，它是Willner等[9],对Katz[10]等的模型的改良,相对于Katz的研究，它使应激因子的强度明显降低，并且以快感缺乏的测量作为模型是否成功的关键，该动物模型与人类抑郁症的发生机制更为接近。CUMS抑郁模型的制作包括以下几种不同的应激因子[11]：①黑白颠倒12h/12h;②禁食，禁水24h; ③垫料潮湿;④行为束缚;⑤强迫游泳;⑥电击足底;⑦高温环境;⑧噪音干扰;⑨陌生气味。将几种不同的应激刺激在实验全程中应用,顺序随机,连续两天不能出现同一刺激，在造模过程中每个应激刺激最多出现三次，使动物不能预料刺激的发生。 1.3其他：如：切除双侧嗅束，分离模型，自身脑刺激。 1.3.1 嗅球切除模型引起的行为学改变与抑郁症相似，表现为被动逃避能力下降、学习记忆能力下降，应激反应增强，进食行为改变等，切除嗅球引起的大脑内结构与神经递质的变化与抑郁症的病理生理改变相似［12，1,3］。 1.3.2 分离模型[14] 将幼年大鼠在断乳之前与母鼠分开,隔离喂养10-12个月以后，由于分离而致动物烦躁,睡眠减少,随之出现自发活动下降,群居障碍,食欲下降,愁容,萎缩一团。 1.3.3 自身脑刺激 研究表明，抑郁与中枢奖赏系统之间有着非常密切的关系，而当后者功能低下时,可表现为抑郁、自卑感强及自信心不足。根据这一设想,将电极埋入鼠脑的奖赏区,训练其踏杆自我刺激,以踏杆频数和阈电流强度为指标,观察药物的影响。此种模型的可信性还有待更广泛的实验证明[15]。 2 动物抑郁模型有效性的评价 2.1旷场实验（open-field test） 2.1.1 方法：将动物置入80cm×80cm×40cm周壁、箱底为黑色的箱内，且其底面由25块相等的16cm×16cm正方形组成，以白线划分。将动物放入正中央格后开始测定，每次测定5分钟，测试过程采用摄像机记录,每只大鼠只进行一次行为测定，测定完毕，粪便清理干净后，用75%酒精擦拭干净箱底，再进行下一只测定，采用单盲法，每周测定1次，每组动物大于7只有统计学意义。 2.1.2 结果 我们主要从以下几个方面来评价模型组的抑郁程度，研究发现相对于对照组，模型组中会出现以下变化： 2.1.2.1 水平运动减少，这个指标反映动物的活动度降低。直运动减少，它反映了动物对新鲜环境的好奇程度降低。以穿越底面积块数为水平活动得分，直立次数为垂直活动得分[16]。 2.1.2.2 体重和摄食量下降，说明抑郁大鼠的食物奖赏和欣快感缺乏。 2.1.2.3 运动时间减少及不动时间增加。 31%蔗糖水偏好实验(1% sucrose preference test）
常见大鼠心肌梗塞模型建立方法对比 心肌梗塞是危害人类健康的主要疾病之一，主要是由于某支冠状动脉持续缺血，其所支配的心肌发生不可逆转坏死而形成的病理过程。90%以上的心肌梗塞是由于冠状动脉粥样硬化病变基础上血栓形成而引起的，较少见于冠状动脉痉挛，少数由栓塞、炎症、畸形等造成管腔狭窄闭塞，使心肌严重而持久缺血达1小时以上即可发生心肌坏死。心肌梗塞的发生常有一些诱因，包括过劳、情绪激动、大出血、休克、脱水、外科手术或严重心律失常等。美国每年约有150万人发生心肌梗塞。而在中国，近年来心肌梗塞发生率呈明显上升趋势，每年新发至少50万名患者，现存至少200万名患者。 为了更好地筛选有效治疗心肌梗塞的药物并研究心肌梗塞的发病机理，实验人员常以大鼠、兔和实验用小型猪来建立标准化的心肌梗塞模型。相对于其他动物，大鼠有许多优势： 1.大鼠的品系纯正，组内差异较少； 2.大鼠饲养成本低，造模前后管理较容易； 3.大鼠的冠脉系统侧支循环比较少，结扎后易出现一个比较固定的缺血区，能很大程度上提高造模的成功率； 4.大鼠心肌梗塞模型手术较小，单人就能操作。 下面我们将就较常见的几种大鼠心梗造模方法来进行一一详细介绍。 a.传统冠状动脉结扎法 冠状动脉结扎是最常选用的大鼠心肌梗塞造模方法，其具体操作步骤为：将大鼠用氯氨酮麻醉后接上小动物呼吸机，经左侧第4肋间剪开皮肤，钝性分离肌肉组织，打开胸腔并剪开心包膜，挤压出心脏，在左心耳与肺动脉圆锥之间穿线，结扎左冠状动脉前降支（于分支的起点处约1～2mm），用Ⅱ导生理记录仪记录心电
图，心电图ST段弓背抬高示心肌梗塞造模成功。然后迅速将心脏放回胸腔，随即缝合胸腔及皮肤。假手术组（阴性对照组）除不结扎冠状动脉外，其余操作与手术动物相同，术后给予庆大霉素局部处理。 b.异丙肾上腺素注射法 除冠状动脉结扎法之外，药物注射法也常用于大鼠的心肌梗塞模型的建立。将大鼠用1%的戊巴比妥钠20～25mg/kg体重给予大鼠腹腔注射麻醉，直接按5mg/kg 体重，皮下注射4%异丙基肾上腺素（ISO），或直接将药物注入腹腔均可造模，每天注射1次，连续注射2-8天，可造成心梗、心衰、冠状动脉痉挛。一般在注射后4-8周发病。 c.反复冷冻法 沿大鼠胸骨左缘前外侧第4肋间进入胸腔打开，充分暴露心脏，用浸过液氮的直径6mm铜棒充分接触左室游离壁，持续时间5s/次，随即闭合胸腔，待自主呼吸恢复正常后，按分组情况再次原位反复共3、5次或8次进行心肌冷冻损伤。 这三种大鼠的心肌梗塞模型的建立方法各有优缺点，通过对这三种方法所建立疾病类型、手术实验技术要求、实验室仪器要求、术后死亡率及造模稳定性等方面的对比，我们对比总结了这三种造模方法(如表1所示)。 表1.三种心肌梗塞造模方法对比 模型类型造模类型实验技能要求仪器要求死亡率造模稳定性 冠状动脉前降支结扎法急性心梗高需要小动物 呼吸机 较高高 冷冻法急性心梗较高需要小动物 呼吸机 较高低 药物注射法慢性心梗低无要求低较高从上表可见，冠状动脉前降支结扎法与冷冻法类似，均会造成大鼠的急性心肌
?论著? （OSID码） 左卡尼汀对自然衰老模型大鼠的心脏保护作用 及其分子机制研究 张珍1，张霞2，刘春3，蔡文升4，李雪辉1，邢艳秋1 【摘要】 背景 左卡尼汀是重要的线粒体能量代谢调节物，其对衰老心脏是否具有保护作用尚不明确。目的 以自然饲养的24月龄大鼠来构建自然衰老动物模型，研究左卡尼汀对自然衰老模型大鼠的心脏保护作用，并深入分 析其分子机制。方法 2017年1月—2019年6月，选取3月龄SPF级雄性大鼠30只。将在标准饲养环境下自然饲养 至4月龄的大鼠作为青年对照组（n=10）。将在标准饲养环境下自然饲养至24月龄的大鼠随机分为左卡尼汀组（n=10） 和老年对照组（n=10）。左卡尼汀组大鼠给予左卡尼汀300 mg?kg-1?d-1，老年对照组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液， 均连续灌胃4周。记录并比较各组大鼠心脏收缩、舒张功能指标〔包括左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩 末期内径（LVESD）、左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）、左心室射血分数（LVEF）、 左心室短轴缩短率（LVFS）〕，血清丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性，线粒体超微结构，心肌组 织三磷酸腺苷（ATP）、磷酸化-AMP依赖的蛋白激酶（p-AMPK）、肉毒碱脂酰转移酶1（CPT-1）水平。结果 老 年对照组LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV大于青年对照组（P<0.05）；左卡尼汀组LVESD、LVESV小于青年对照组，LVEF、LVFS高于青年对照组（P<0.05）；左卡尼汀组LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV小于老年对照组，LVFS高 于老年对照组（P<0.05）。老年对照组血清MDA水平高于青年对照组，SOD活性小于青年对照组（P<0.05）；左卡 尼汀组血清MDA水平高于青年对照组（P<0.05）；左卡尼汀组血清MDA水平低于老年对照组，SOD活性大于老年对 照组（P<0.05）。与青年对照组大鼠相比，老年对照组大鼠线粒体形态各异，部分线粒体肿胀明显，基质出现多个局 灶性空泡；与老年对照组相比，左卡尼汀组大鼠心肌细胞线粒体体积明显缩小，偶见空泡变性，线粒体嵴排列整齐致密。 老年对照组心肌组织ATP水平低于青年对照组（P<0.05）；左卡尼汀组心肌组织ATP水平高于老年对照组（P<0.05）。 老年对照组心肌组织p-AMPK、CPT-1水平低于青年对照组（P<0.05）；左卡尼汀组心肌组织p-AMPK、CPT-1水平 高于老年对照组（P<0.05）。结论 左卡尼汀可改善自然衰老模型大鼠心脏功能，提高其抗氧化能力，保护衰老心肌 线粒体结构和增加衰老心肌ATP生成，其机制可能与上调AMPK/CPT-1信号通路有关。 【关键词】 衰老；左卡尼汀；大鼠；心脏；AMP依赖的蛋白激酶；肉毒碱脂酰转移酶1 【中图分类号】 R 33 【文献标识码】 A DOI：10.3969/j.issn.1008-5971.2020.11.012 张珍，张霞，刘春，等.左卡尼汀对自然衰老模型大鼠的心脏保护作用及其分子机制研究［J］.实用心脑肺血管 病杂志，2020，28（11）：66-70.［https://www.doczj.com/doc/1319199466.html,］ ZHANG Z，ZHANG X，LIU C，et al.Protective effect of levocarnitine on the heart of natural aging rats and its molecular mechanism［J］.Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2020，28（11）：66-70. Protective Effect of Levocarnitine on the Heart of Natural Aging Rats and Its Molecular Mechanism ZHANG Zhen1，ZHANG Xia2，LIU Chun3，CAI Wensheng4，LI Xuehui1，XING Yanqiu1 1.Department of Geriatric Medicine，Qilu Hospital of Shandong University/Key Laboratory of Cardiovascular Disease Proteomics of Shandong Province，Jinan 250012，China 2.Department of Cardiology，Rizhao Central Hospital，Rizhao 276800，China 3.Department of Internal Medicine-Cardiovascular，the Fourth People's Hospital of Jinan，Jinan 250031，China 4.Department of Vascular Surgery，Rizhao Central Hospital，Rizhao 276800，China Corresponding author：XING Yanqiu，E-mail：xingyanqiu@https://www.doczj.com/doc/1319199466.html, 【Abstract】 Background Levocarnitine palys an important role in mitochondrial energy metabolism，but whether it possesses protective effects on aging heart is unclear.Objective A natural aging animal model was constructed with 24 基金项目：国家自然科学基金资助项目（81570356，81700725）；山东省重点研发计划项目（2017GSF218014， 2017GSF218101） 1.250012山东省济南市，山东大学齐鲁医院老年医学科山东省心血管疾病蛋白质组学重点实验室 2.276800山东省日照市中心 医院心内科 3.250031山东省济南市第四人民医院心内科 4.276800山东省日照市中心医院血管外科 通信作者：邢艳秋，E-mail：xingyanqiu@https://www.doczj.com/doc/1319199466.html,
抑郁模型大鼠海马内环境的研究 发表时间：2011-07-13T16:28:59.267Z 来源：《中外健康文摘》2011年第16期供稿作者：郑晓霓1 单德红2 [导读] 海马神经元所处的细胞外液属于机体内环境，其成分和理化特性相对稳定是神经元发挥功能的前提。 郑晓霓1 单德红2 （1辽宁省沈阳市沈和区第二中医院110015；2辽宁省沈阳市中医药大学基础医学院110032）【中图分类号】R74【文献标识码】A【文章编号】1672-5085 (2011)16-0144-02 【摘要】目的研究海马内环境稳态在抑郁症中的作用。方法20只雌性Wistar大鼠分为对照组、模型组。ELISA法检测血清皮质醇、雌二醇，光镜和电镜观察海马CA3区形态学变化，免疫组化法检测海马脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达。结果与对照组比较，模型组皮质醇水平显著升高，雌二醇水平明显下降，海马CA3区神经元损伤严重，脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达明显降低。结论抑郁状态下，海马内环境稳态被破坏。【关键词】抑郁症海马内环境稳态脑源性神经生长因子血管内皮生长因子【Abstract】 Objective: To study the action of hippocampal internal enviroment in deprssion. Methods: 20 femal wistar rats were divided into the control, model group. Serum cortisol and estradiol were measured with ELISA. Hippocampal CA3 morphology were observed by light and electron miroscope. BDNF and VEGF expressions were detected by immunohistochemistry. Results: compared with those in the control, in the model group, the serum cortisol level increased obviously, serum estradiol level decreased significantly, and the CA3 neurons had severious structure damage, and the expressions of BDNF and VEGF decreased markedly. Conclusion: The homeostasis of hippocampal internal enviroment is disrupted in depression. 【Key words】 depression hippocampal internal enviroment homeostasis brain-derived neurotrophtic factor vascular endothelial growth factor 海马内环境指海马神经元的细胞外液，其理化性质和各种成分应保持相对稳定的状态，即稳态。海马内环境的理化特性包括温度、渗透压、酸碱度等，成分有各种离子、激素、递质、细胞因子等。海马内环境稳太破坏均会损伤海马功能和结构，进而影响行为、情绪和内脏功能。现代医学认为海马损伤在抑郁症发病中起重要作用[1-2]，但抑郁状态下，海马内环境出现何种变化目前尚没有系统研究，这就是本课题的研究目标，而本文主要对海马内环境中相关成分进行初步观察。 1 材料和方法 1.1实验动物的选取和分组健康Wistar雌性大鼠，清洁级，体重226±20g,中国医科大学动物实验中心提供，合格证号：医大动物合格证SCXK(辽)2008-0005。适应性饲养1周后，选择行为学得分相近的20只大鼠，随机分为对照组、抑郁症模型组（模型组），每组10只。室温20℃～25℃，湿度40%～50%。 1.2抑郁症模型的建立模型组大鼠建立慢性不可预见性应激模型，即在21d内随机施加电击足底（36V交流电，5min）、冰水游泳（4℃,5min）、摇晃（1min）、夹尾（1min）、禁水（24h）、禁食(24h)等刺激，每种刺激4次。 1.3血清雌二醇和皮质醇检测在实验的d22，2组大鼠均腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（0.4mL/100g）麻醉后，腹主动脉取血，离心后取血清，低温冻存。采用ELISA方法检测皮质醇和雌二醇(Estradiol，E2)，此项工作由沈阳军区总医院内分泌实验室完成。 1.4海马组织学观察首先是HE染色：取完成1.3后2只大鼠，立即断头取双侧海马，置于10%甲醛中固定，石蜡切片，HE染色，观察海马CA3区神经元的形态学变化。其次电镜观察：取完成1.3后的2只大鼠，升主动脉插管，150ml生理盐水快速冲去血液，快速灌入4℃ 2.5%戊二醛固定液，取双侧海马，修块，再于戊二醛中固定2h，PBS反复清洗后，再经1%锇酸固定2h，双蒸水冲洗，梯度乙醇脱水，临界点干燥，离子溅射真空渡膜，扫描电镜下观察超微结构。 1.5脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达取完成1.3的6只大鼠开胸，升主动脉插管，生理盐水快速冲去血液，取双侧海马，4%多聚甲醛固定4～6h，30%蔗糖溶液沉底。做海马石蜡冠状切片，片厚25μm，隔4片取1片，采用免疫组化SABC法检测脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophtic factor，BDNF)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor ,VEGF)表达，相关抗体和试剂盒均购于武汉博±德试剂公司，阴性对照选用PBS。利用BI-2000医学图像分析系统，测定海马CA3区BDNF和VEGF表达的平均灰度值。 1.6数据处理数据以x-±s表示，采用SPSS13.0中ANOVA检验进行统计学处理。 2 实验结果 实验过程中没有实验动物死亡及脱失现象。 2.1海马形态学变化 光镜下，对照组CA3区有大量致密锥体细胞，排列整齐，细胞完整，边缘清晰；模型组细胞层次减少、稀疏、排列紊乱，大量细胞坏死。电镜下，对照组细胞器丰富，轮廓清晰，细胞核呈圆形，核膜清晰光滑完整，核染色质分布均匀；模型组细胞器减少，线粒体空泡化，细胞核变小，不规则，且核膜增厚，核周电子密度降低。 2.2海马内环境相关成分变化 与对照组比较，模型组皮质醇显著升高，E2明显下降。BDNF和VEGF免疫阳性反应产物呈棕黄色，前者分布神经元胞浆内，后者主要分布于血管内皮细胞内。对照组BDNF和VEGF表达较多，模型组较少，二者灰度值均升高。具体数据见表1。表1 各组海马内环境相关成分的变化 注：与对照组比较：a P<0.05, b P<0.01
模型的背景，心肌缺血模型分全心缺血和左心室缺血两种，全心缺血主要靠注射药物（如异丙肾上腺素等），左心室缺血主要靠手术对动物的冠状动脉左降支进行紧扎实现。由于左心室缺血对临床的意义更大，所以研究心肌缺血药物时这个模型是必须的。 （1）术前12小时给动物禁食 （2）将动物注射10%水合氯醛（0.4mL/100g）麻醉后固定在手术台上 （3）用笔型静脉置留针进行气管插管，插好后可用手术刀柄靠近气管，如果见气雾，就证明成功，连接动物呼吸机，参数为：呼吸频率85；呼吸比1：1；潮气量为18ml （4）胸部被毛、酒精棉消毒，在胸部左侧3~4肋间剪开皮肤，如图1 （5）分离肌肉露出肋骨，切口位置有两块肌肉，胸浅肌和胸深肌，注意按照肌肉的纹路分离可以避免将肌肉扯烂，如图2
（6）在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开，然后左手用止血钳挑住肋骨，右手持剪刀剪开第三根肋骨，如图3
（7）用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开，放入开睑器，用止血钳剥离心包膜，如图4
（8）用止血钳将胸腺（心脏上面白的像脂肪一样的东西）夹住拉出，如图5 （9）在左心耳与肺动脉圆锥间穿6~0号线，拉紧丝线，形成心肌缺血，观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌是发白色的，如图6
（10）闭合胸腔，注意将胸腔内的空气挤出（这点非常关键，这个模型最容易失败导致大鼠死亡的就是这个地方），对肌肉和皮进行缝合，挤空气的手法如图7
（11）结扎术后6小时可进行TTC染色：将大鼠脱颈处死，打开胸腔，将心脏剪下，用生理盐水将心脏清洗干净并排出心脏内的淤血，沿冠状沟将心房切除留下心室，用刀片将心脏切成1mm厚的切片，放入0.1%的TTC磷酸盐缓冲液（pH 7.4）37℃水浴7~10分钟，取出切片用生理盐水冲洗数次，观察结果。非梗死区因脱氢酶还原TTC而呈红色，梗死区因脱氢酶流失而呈白色，将梗死区和非梗死区分离并分别称重，梗死范围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。下图是染色的结果，图8 结扎位置，梗死的地方其实肉眼大致能看出，和其他地方相比发白，图9：
第六章第3节《细胞的衰老和凋亡》教学计划李艳2011/10/17 16:32:18 宁夏固原市西吉二中30 0 一、教材分析 细胞像生物体一样也要经历出生、生长、成熟、繁殖、衰老、死亡的过程，所以细胞的分裂、分化、衰老、死亡是生命的必然。那么个体衰老与细胞衰老的关系呢？细胞衰老有哪些表现呢？细胞衰老的原因是 什么？细胞的衰老和凋亡是生命活动中必不可少的过程，衰老和凋亡有什么关系?这一连串的问题构成本节内容的主线。对于细胞衰老和凋亡的学习，能使学生对细胞的整个生命过程有个完整的认识。同时细胞衰 亡机制的研究与生物科技的发展息息相关。对细胞衰亡知识的学习，有助于培养学生的科学兴趣，培养学 生的创新意识。 二、教学目标 1．知识与技能 （1）个体衰老与细胞衰老的关系。 （2）描述细胞的衰老的特征和原因。 （3）简述细胞凋亡的含义及与细胞坏死的区别。 2．过程与方法 （1）培养学生联系实际灵活应用知识的能力。 （2）学会进行与社会老龄化相关问题的分析。 3.情感态度与价值观 （1）探讨细胞的衰老和凋亡与人体健康的关系，关注老年人健康状况和生活状况 （2）通过有关衰老问题的讨论，树立科学的发展观。 三、教学重点难点 学习重点：1.细胞衰老的概念及特征。2.细胞凋亡的含义。 学习难点：细胞衰老与细胞凋亡的区别和联系。 四、学情分析 学生已经学习了细胞的增殖、分化的内容，对本节的内容已经有了初步的认识和理解，明确了细胞的分化、衰老和凋亡是一个自然的生命过程。本节的内容接近现实生活，可利用现实生活中的例子加以说明， 培养学生知识的应用能力和知识的迁移能力。 五、课型：新授课教学方法：教学基本环节：情境导入、展示目标→合作探究、精讲点拨→反思总结、 当堂检测→布置作业及预习 六、课前准备 布置学生在课前通过上网、查报纸杂志、看电视等途径收集与细胞衰老与凋亡有关的资料。教师制作课件。 七、课时安排：1课时 八、教学过程 【情景导入、展示目标】 教师展示“问题探讨”老年人晨练图片：随着社会的发展，人民生活水平的提高，医疗的完善等，人的寿命 在延长，老年人的比例上升。那如何能延缓衰老，保持身体健康显得尤其重要。 问题1：人的一生必然要经历哪些生命历程：出生→生长→成熟→繁殖→→的生命历程。（学生思考回答） 对于人的一生来说，出生，衰老，死亡都是非常重要，活细胞也一样。衰老和死亡是细胞不可忽视的部分。今天我们来学习第六章第3节《细胞的衰老和凋亡》的内容。 小组讨论：完成问题2和问题3 （3分钟） 问题2：我们学过的单细胞生物有：（举一例） 单细胞生物的衰老（= 或≠）细胞的衰老。 问题3：人的生命系统结构层次有哪些？
6、3《细胞的衰老和凋亡》教案设计 导入 每个生物个体都要经历出生、生长、成熟、繁殖、衰老直至最后的死亡，生物体内的细胞也是一样，要经过增殖、分化、衰老和凋亡。前面我们已经学习了细胞的增殖和细胞的分化，今天我们就来学习第三节，细胞的衰老和凋亡。 问题一：婴儿体内有没有衰老细胞为什么老人表现出衰老，但是婴儿却没有表现出衰老 答案：有。老人体内的衰老细胞非常多，而婴儿体内很少。 个体衰老与细胞衰老的关系有什么关系呢 对于单细胞生物体来说，因为是整个生物体是由一个细胞构成的，因此细胞的衰老或死亡就是个体的衰老或死亡。但对于多细胞生物体来说，组成生物体的细胞总是在不断更新着，总有一部分细胞处于衰老或走向死亡的状态，也有一些是幼嫩的细胞，但从总体上看，个体衰老的过程也是组成个体的细胞普遍衰老的过程。 一、个体衰老与细胞衰老的关系 1.单细胞生物体 2.多细胞生物体 现在请同学们想一下，在45十以后，我们来参加同学聚会，你的同学会有变化吗大家现在就来想一下我们老了之后会变成什么样 答案：（1）那时候，我们的头发都会变白，这主要是由于人体内酶的活性降低。黑色素是酪氨酸酶催化酪氨酸造成的，酶的活性降低，黑色素合成减少。 （2）那时候，我们脸上可能已经出现了老年斑。这主要是由于色素的积累。 （3）大家有没有发现老年人特别怕冷。在冬天的时候，我们年轻人只穿了2-3 件衣服，但是老年人却要穿4-5件衣服。主要是由于人体的能量主要是由于呼吸 作用提供的，呼吸作用减弱了，人体得到的热能就少了。而人体的呼吸作用主 要是在线粒体内进行的，所以衰老的细胞线粒体的数量也是减少的。 （4）大家有没有注意到老年人的皮肤皱巴巴的，这主要是由于什么原因呢 这主要是由于老年人体内的水分减少的原因。而体内许多化学反应都要在水中 进行，所以水分的减少，必然导致人体的新陈代谢的减慢。 （5）有的老人还会出现“救生圈”，这也主要是由于老年人新陈代谢减慢的引 起的。在吃进相同的食物后，他们消耗能量的能力下降了，自然就化成脂肪堆 积了。 总结：个体衰老是由于细胞的衰老引起的，现在就让我们来总结一下细胞衰老的特点： 二、细胞衰老的特征 （1）水分减少，体积变小，新陈代谢速度减慢。 （2）酶的活性降低。头发会变白，这主要是由于人体内酶的活性降低。黑色素是酪氨酸酶催化酪氨酸造成的，酶的活性降低，黑色素合成减少 （3）细胞的通透性有所改变，使物质的运输功能下降 （4）细胞核体积变大，核膜内折，染色质收缩，染色加深 （5）线粒体内呼吸速率变慢
心肌细胞缺氧与室性心律失常的关系 发表时间：2014-08-25T15:08:39.297Z 来源：《医药前沿》2014年第10期供稿作者：国瑞婧常静[导读] 室性心律失常是导致心源性猝死的主要原因之一，由于心室的节律紊乱所致，它包括室早、室速、室颤等。 国瑞婧常静 （重庆医科大学 400016） 【中图分类号】R54 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）10-0096-02 前言 室性心律失常是导致心源性猝死的主要原因之一，由于心室的节律紊乱所致，它包括室早、室速、室颤等，可引起心脏猝死等严重后果。许多临床研究发现，合并有睡眠呼吸暂停综合征、肺源性缺氧等情况时，室性心律失常的发生率明显增加。不难发现由于动脉血氧含量减少等原因而导致心肌细胞处于缺氧状态，此时可引起心脏内分泌因子、自主神经功能的改变，导致室性心律失常的发生。 1. 心肌细胞缺氧与室性心律失常的相关性 心肌细胞缺氧时，室性心律失常的发生率明显增加。而心肌细胞缺氧可由外周血氧浓度降低和心肌细胞缺血等情况导致，下面就由睡眠呼吸暂停综合征合并室性心律失常、心肌梗死合并室性心律失常为例进行讨论。 1.1睡眠呼吸暂停综合征合并室性心律失常 研究证据表明，OSAS患者睡眠时存在的心率变异性大，而低通气指数可以作为一个独立的夜间睡眠呼吸暂停引起严重心律失常的风险因素，并且其与心律失常的严重程度具有显著的相关性[1]。 1.2心肌梗死合并室性心律失常 心肌梗死患者由于心肌细胞缺血以及坏死，易发生室性心律失常。越来越多的研究发现，心肌梗死后有不同程度的心律失常的发生，其中有20%～25%的患者因室性心动过速或心室纤颤而发生心源性猝死。 2. 发生机制 目前主要认为室性心律失常的发生机制主要有内分泌因子的变化、自主神经功能的改变以及电生理的改变等方面。无论是外周氧浓度降低还是心肌细胞缺血，都可使心肌细胞处于缺氧状态，下面就以心肌细胞缺氧为基础条件，对上述三方面进行阐述。 2.1内分泌因子的变化 当心肌细胞缺氧时，体内的内分泌因子如白介素-l(IL-l)、白介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、神经生长因子（NGF)、等都存在明显的变化，其变化影响心脏自主神经重构和电重构，最终导致室性心律失常的发生。 2.1.1白介素-17（Interleukin-17，IL-17） 白介素-17是由Th17细胞分泌的炎症前细胞因子，它是一种特殊的辅助性CD4+T细胞，具有十分重要的免疫调节作用，对心血管疾病的发生和发展过程中具有重要意义。 通过腹主动脉缩窄法对144只实验大鼠模拟心力衰竭模型，分为心衰组、IgG组（小鼠同型IgG1）、Ab组（注入人IL-17单克隆抗体）和假手术组（不缩窄腹主动脉），在术后，4、8、16周时分别用免疫组化染色法、激光共聚焦法、Western Blot法检测IL-17在心肌组织的表达含量[2]，结果发现：①与假手术组相比，其它组大鼠心肌IL-17的表达水平明显高于同期假手术组水平；②与心衰组和IgG组相比，Ab 组大鼠心肌IL-17的表达水平明显低于心衰组和IgG组（见图1）；③本实验中，心衰组和IgG组的室性心律失常的诱发率无明显差别，但明显高于Ab组，而Ab组的室性心律失常的诱发率又明显高于假手术组（见图2），可见大鼠心肌IL-17表达水平高的实验组的室性心律失常诱发率明显高于IL-17表达水平低的，且IL-17的表达水平与室性心律失常成正相关的关系（见图3）。