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中性蛋白酶水解核桃蛋白工艺
作者：范方字， 阚欢， 许善午， 郭琳， 和润喜， 韩志萍， FAN Fang-yu， KAN Huan， XU Shan-wu， GUO-Lin， HE Run-xi， HAN Zhi-ping
作者单位：范方字,阚欢,许善午,郭琳,和润喜,FAN Fang-yu,KAN Huan,XU Shan-wu,GUO-Lin,HE Run-xi(西南林业大学西南山地森林资源保育与利用省部重点实验室,云南昆明,650224)， 韩志萍,HAN Zhi-ping(中国热带农
业科学院农产品加工研究所,广东湛江,524001)
刊名：
食品研究与开发
英文刊名：Food Research and Development
年，卷(期)：2011,32(11)
参考文献(7条)
1.黄伟坤食品检验与分析 1993
2.石岗生物活性肽研究进展 2002(03)
3.寇文国;高洪庆核桃的综合加工与利用 2000(06)
4.王竹清;李八方生物活性肽及其研究进展 2010(04)
5.蒲首丞;王金水酶解蛋白制备生物活性肽进展 2005(03)
6.伍季;章银良付有利核桃的综合开发现状与利用前景 2006(04)
7.杨虎清核桃的营养价值及其加工技术 2002(02)
本文链接：https://www.doczj.com/doc/1f15536583.html,/Periodical_spyjykf201111023.aspx
酪蛋白磷酸肽的药理作用 【摘要】酪蛋白磷酸肽具有促进钙、铁、锌的吸收、利用，增强精卵的结合等作用。近年来对其进行了深入研究发现它在增强机体免疫力，促肿瘤细胞凋亡方面有潜在的药理作用，通过对其作用机制的研究，将为其用于临床提供理论依据。 【Abstract】Casein protein phosphorylation peptide with the promotion of calcium,iron,zinc absorption,utilization and enhance the integration of sperm，In recent years their has conducted in-depth study found that it enhanced immunity,and promote apoptosis of tumor cells have the potential pharmacological effects,through the mechanism of its role will be to provide a theoretical basis for clinical. 【Key words】Casein Phospho peptides; Pharmacological effects 英文：Casein Phospho Peptides(CPP) 别名：酪蛋白磷肽 化学结构：CPP的活性中心是成串的磷酸丝氨酸和谷氨酸族，其基本结构可表示为-serp-serp-serp-glu-glu-，相对分子质量约2000~4000。 性状：乳白色或淡黄色粉末，有轻微的芳香气味。易溶于水，水溶液呈中性，在酸性条件下不易沉淀。有良好的热稳定性。 来源与结构：Nato[1]最早用酪蛋白喂养大鼠,在肠内容物中发现CPP。Nicholas等[ 2-3]用胰酶或胰蛋白酶水解酪蛋白,精制、纯化制备CCP。CPPs有α和β两种构型[4]，其主要功能区是αSI-(59-79)5P和β(1-25)4P，不同条件下制备的CPP 都含有相同的核心构:-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-(Ser:丝氨酸,Glu:谷氨酸,P:磷酸基)。此结构中磷酸丝氨酸残基［-Ser(P)-］成簇存在,在肠道pH弱碱性环境下带负电荷,可阻止消化酶的进一步作用,使CPP不会被进一步水解而在肠道中稳定存在。同时,-Ser(P)-对CPP 的功能发挥起重要作用。冯凤琴等[5]研究了CPP的纯度、CPP 中氮与磷摩尔比值(N∶P)与其功能的关系,发现N∶P 越小,CPP的肽链越短,磷酸基密度越大,CPP 纯度越高,促进钙吸收和利用的作用越强。 1 酪蛋白磷酸肽的药理功能 1．1 促进小肠对钙的吸收25-(OH)2VitD3可促进钙吸收,其吸收率取决于小肠内游离的钙离子浓度。人日常膳食中,谷类等植物性食物中含有大量的植酸、肌醇六磷酸等高磷成分,它们在小肠下端pH 7~8 的环境下与钙结合成磷酸钙沉淀,因此影响钙离子的被动吸收。CPP[1] 能抑制磷酸钙沉淀的形成,使游离钙保持较高的浓度,促进钙离子的被动吸收,从另一个途径提高钙离子的吸收率。冯凤琴等[3]用pH-stat法观察实验室制得的CPP抑制磷酸钙沉淀的效果。结果发现0．11~0．12 g/L的CPP使磷酸钙沉淀的形成延缓5~40 min。相同条件下,不加
1. 前言 酸性蛋白酶是一类最适pH值为2.5?5.0的天冬氨酸蛋白酶，相对分子质量为30000 ?40000。酸性蛋白酶主要来源于动物的脏器和微生物分泌物,包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶。根据其产生菌的不同，微生物酸性蛋白酶可分为霉菌酸性蛋白酶、酵母菌酸性蛋白酶和担子菌酸性蛋白酶.根据作用方式可分为两类：一类是与胃蛋白酶相似，主要产酶微生物是曲霉、青霉和根霉等；另一类是与凝乳酶相似，主要产酶微生物是毛霉和栗疫霉等。细菌未发现产酸性蛋白酶的菌株.由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中。 国外关于酸性蛋白酶的生产研究从20世纪初就开始了。1908年，德国科学家从动物的胰脏中提取出胰蛋白酶，并将其用于皮革的鞣质。1911年美国科学家从木瓜中提取木瓜蛋白酶（在酸性，碱性和中性的条件下都能分解蛋白质的酶）并将木瓜蛋白酶用于除去啤酒中的蛋白质浑浊物。自1954年吉田首次发现黑曲霉可产生酸性蛋白酶以来，国外对微生物发酵生产酸性蛋白酶进行了广泛的研究。1964年外国科学家首次发现大孢子黑曲霉突变体能产生两种不同的酸性蛋白酶，即酸性蛋白酶和酸性蛋白酶。1965年又从血红色陀螺孔菌，中分离出了一种酸性蛋白酶，并对该酶进行了纯化和结晶。1968年从微小毛霉中筛选出了一种酸性蛋白酶，并对其进行了纯化和酶学性质分析。1995年外国科学家对烟曲霉酸性蛋白酶的基因进行了克隆和测序。2001年又从假丝酵母中筛选出了一种酸性蛋白酶菌株，并对该酶进行了核苷酸序列分析和功能分析。国外学者对曲霉酸性蛋白酶的结构和功能等己经研究的较为透彻。 与国外相比，我国对酸性蛋白酶的研究相对较晚些。1970年上海工业微生
酪蛋白水解物 一、中文名称：酪蛋白水解物 二、拉丁文名称/或英文名称：Lactium 三、主要成分：多肽 四、酪蛋白水解物（Lactium）的来源 酪蛋白水解物（Lactium）是以脱脂牛奶为原料，经过分离酪蛋白、水解、喷雾干燥等程序得到的一种酪蛋白水解产物。其典型化学成分为：蛋白质75%，脂肪1%，水分5%，灰分15%，乳糖1%。可溶解于水，无苦味，pH2-9时稳定，热稳定，可耐180℃高温50min。 酪蛋白水解后得到的αs1-Cn （f91-100），是一种含10个氨基酸的三维结构多肽，在Lactium中的典型含量为1.8%，其氨基酸序列为：Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg。 五、酪蛋白水解物（Lactium ）生产工艺流程图和简述 1.工艺流程图： 脱脂牛奶 酪蛋白分离 碱化 胰蛋白酶水解
酸化 热处理 巴氏杀菌 浓缩、喷雾干燥 过筛 包装 2. 工艺说明 1.）以脱脂牛奶为原料，沉淀分离酪蛋白 2.）使用氢氧化钠将其碱化到pH为7.5-8.5之间 3.）在40-55℃下用胰蛋白酶进行水解。得到的产物中，游离10肽在干物质中的含量最低为1.8%。 4.）用盐酸进行酸处理，将pH降到3.0- 5.0 5.）在90℃下热处理1.5分钟 6.) 85℃进行巴氏杀菌、浓缩，此步骤为关键控制点 7.）喷雾干燥（进风温度180-200℃），得到粉末产品。 8.）过筛得到粒度在1mm以下的均匀粉末，其中游离10肽的含量最低为1.8%。此过程为关键控制点。
3. 拟公告的生产工艺简述：以脱脂牛奶为原料，经过酪蛋白分离、水解、浓缩、喷雾干燥等工艺制成。 六、酪蛋白水解物（Lactium）对酸奶的促进作用 酸奶具有促进肠道蠕动与消化和机体物质的代谢，并具有提高人体免疫力、防衰老、抗肿瘤等作用。酸奶中的大量乳酸菌及乳酸代谢产物能调节人体肠道微生态平衡，达到补充营养、防病、治病和保健的目的。 将酪蛋白水解物(含蛋白质7.6%)以2%(w/w)添加到奶液中混合发酵,做空白样对照。研究了二者发酵过程中各发酵参数的变化,并对二者的质构进行了分析比较。研究结果表明:酪蛋白水解物能明显促进酸奶发酵;促发酵作用随所添加的水解物水解程度提高而增强;添加酪蛋白水解物改变了酸奶发酵过程中的 pH 下降速度,在发酵中期二者的 pH 下降速度之间存在最大差距;质构分析表明添加2%酪蛋白水解物对酸奶整体质构有所改善。 七、酪蛋白水解物（Lactium）的作用 1、增强记忆力 2、提高精神状态、集中注意力 3、提高睡眠质量下降 4、缓解压力 5、控制体重 6、美容养颜 八、酪蛋白水解物（Lactium）的适应人群 1、记忆力下降者 2、注意力不集中精神状态不佳者 3、失眠、睡眠质量下降者 4、工作、生活、学习压力大者 5、肥胖人群 6、需要美容养颜者 九、酪蛋白水解物（Lactium）的社会及经济效益 在现代社会，生活节奏加快，人们面对的各种各样的压力越来越大。由于个体差异，
第六节酸性蛋白酶生产工艺 07040642 47 李继江 1 蛋白酶、蛋白类酶、酸性蛋白酶 1.1 蛋白酶的定义 蛋白酶是催化肽键水解的一类酶，它可迅速水解蛋白质为胨、肽类，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。同时大多数微生物蛋白酶都是胞外酶。 1.2 微生物蛋白酶分类 微生物蛋白酶按其作用的最适pH可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶三类。 碱性蛋白酶为透明褐色液体，能与水混溶，最适温度50~60℃，最适pH8.5。 中性蛋白酶为金属酶，褐色颗粒或液体，易溶于水，最适温度45~55℃，最适pH5.5~7.5。 酸性蛋白酶为近乎白色至浅黄色无定型粉末或液体，易溶于水，最适温度45℃，最适pH2.5。 1.3 蛋白类酶 蛋白类酶主要是指由蛋白质组成的酶（P酶）；而主要由核糖核酸组成的酶称为核酸类酶（R酶）。 蛋白类酶分为氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、合成酶（或称连接酶）。 1.4 酶的生产方法 酶的生产方法主要有：提取分离法、生物合成法、化学合成法。 酶的微生物合成法主要有：液体深层发酵、固体培养发酵、固定化细胞培养、固定化原生质发酵。 酸性蛋白酶用微生物发酵法生产，采用液体深层发酵。 液体深层发酵是指液体培养基在发酵罐中灭菌冷却后，接入产酶细胞，一定条件下发酵，适用于微生物细胞、动植物细胞的培养。具有机械化程度高、技术管理严格、酶产率高、质量稳定，产品回收率高的特点，是目前酶发酵的主要方式。 1.5 酸性蛋白酶制剂的性能 1.5.1 酸性蛋白酶的作用机理 酶是一种蛋白质，它是活细胞产生的生物催化剂，生物体的新陈代谢活动都离不开酶的作用。酶的种类很多，酸性蛋白酶是水解酶类的一种，能够在微酸环境下（pH2．5～4．0）
木瓜蛋白酶最适PH值和温度 木瓜蛋白酶﹙Papain﹚是由种植的番木瓜未成熟果实中割取乳液经采用生物技术提取、微滤、超滤、冷冻干燥提练而得的纯天然、健康、安全、高效的生物酶制剂。本品是蛋白酶混合物，含木瓜蛋白酶、木瓜凝乳酶、木瓜肽酶。有很强的蛋白水解催化活性及凝乳、溶菌活性，还具备脂解能力及蛋白合成能力，主要是催化蛋白质水解，切割分解点很多，优先分解精氨酸，苯丙氨酸的肽鍵。木瓜蛋白酶是由212个氨基酸组成，分子量为21000，属于含疏基﹙—SH﹚肽链内切酶，由于木瓜蛋白酶具有酶活高，热稳定性好，可广泛应用于食品、医药、日化、饲料、皮革及纺织等行业。 一、酶解原理 在一定温度，PH值及底物浓度下，木瓜蛋白酶能够分解蛋白质生成蛋白胨，多肽及氨基酸等物质。 二、活力定义 紫外光分光度法：在测定条件（37±0.2℃；PH值7.0）每分钟水解酪蛋白释出的三氯乙酸可溶物在275nm波长有吸光度与1微克酪氨酸的吸光度相当时，所需的酶量即为一个活力单位，用u/g表示。 三．木瓜酶最适PH值 木瓜蛋白酶的最适pH值：每个酶都有最适pH，在此pH下催化反应的速率是它的最高值。木瓜蛋白酶可进行催化反应的pH作用范围是3.5~9，最适pH范围是5~7。 四、木瓜酶最适温度 木瓜蛋白酶的最适温度：木瓜蛋白酶最佳温度是50~60℃，最佳的温度必然受作用时间的影响，较短的作用时间必须有较高的最适温度，较长的作用时间必须有较低的最适作用温度，这是木瓜蛋白酶与其他酶类的共同特点。 木瓜蛋白酶的有效作用温度范围是20~80℃。这个温度范围既适合木瓜乳汁生产粗酶的温度，也适合木瓜蛋白酶在一定条件下的活性反应作用。超过80℃时，木瓜蛋白酶活性会下降，当温度升到90℃时木瓜蛋白酶会钝化。
木瓜蛋白酶实验记录 2016.11.3 实验前准备： 所需试剂的配制： 饱和硫酸铵：取150ml蒸馏水，放入冰桶中，不断加入硫酸铵固体，直至沉淀不能溶解，过滤取滤液，保存在4℃冰箱中。 酶保护剂：准确称量1.21g的半胱氨酸于100ml蒸馏水中，调节PH 至9.0，溶解半胱氨酸，再加入0.1871g的EDTA，定容至250ml，转入棕色瓶中。 预实验：确定实验的可行性 酶液提取： ①用薄的不锈钢刀片沿未成熟的番木瓜的纵线将果皮割破，深度为2~3mm，根据果实大小的不同，每个果实可以5~10条刀口。 ②将木瓜放于一个大烧杯中，使木瓜乳汁流入大烧杯中。 ③收集5ml乳汁加入95ml蒸馏水水，匀速轻柔搅拌1h，得浆液。 ④浆液用8层纱布进行过滤,将所得液分装到离心管中，用离心机在3500r/min的条件下，离心15min。 ⑤收集上清液至一洁净的试管中，既得木瓜蛋白酶原液，-20℃存取10ml酶原液。 ⑥分装木瓜蛋白酶原液，加入2ml酶保护剂（0.04mol/L的半胱氨酸和0.002mol/L的EDTA），混匀后如下表加入试剂。
对静置的酶液继续处理
2016．11.4 试剂配制 考马斯亮蓝G-250染液（0.01%）：称取0.1g考马斯亮蓝G-250固体粉末，溶于50mL 95%乙醇中（95%乙醇取实验室无水乙醇47.5mL加2.5mL蒸馏水）再加入86% 磷酸100mL，倒入1000mL容量瓶加蒸馏水定容至1000mL。静置1h后，取棕色试剂瓶用乙醇清洗干净用滤纸过滤溶液后封存。 重提木瓜蛋白酶 实验设置对照 一组开始即加入酶保护剂编号酶B*、一组加硫酸铵之前才加酶保编号酶*。 ①用薄的不锈钢刀片沿未成熟的番木瓜的纵线将果皮割破，深度为2~3mm，根据果实大小的不同，每个果实可以5~10条刀口。 ②将木瓜放于一个大烧杯中，使木瓜乳汁流入大烧杯中。 ③收集10ml乳汁加入190ml蒸馏水水，匀速轻柔搅拌1h，得浆液。 ④浆液用8层纱布进行过滤,将所得液分装到离心管中，用离心机在3500r/min的条件下，离心15min。 ⑤收集上清液至一洁净的试管中，既得木瓜蛋白酶原液，-20℃存取
1. 前言 酸性蛋白酶是一类最适pH值为的天冬氨酸蛋白酶，相对分子质量为30000 40000。酸性蛋白酶主要来源于动物的脏器和微生物分泌物,包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶。根据其产生菌的不同，微生物酸性蛋白酶可分为霉菌酸性蛋白酶、酵母菌酸性蛋白酶和担子菌酸性蛋白酶.根据作用方式可分为两类：一类是与胃蛋白酶相似，主要产酶微生物是曲霉、青霉和根霉等；另一类是与凝乳酶相似，主要产酶微生物是毛霉和栗疫霉等。细菌中尚未发现产酸性蛋白酶的菌株.由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中。 国外关于酸性蛋白酶的生产研究从20世纪初就开始了。1908年，德国科学家从动物的胰脏中提取出胰蛋白酶，并将其用于皮革的鞣质。1911年美国科学家从木瓜中提取木瓜蛋白酶（在酸性，碱性和中性的条件下都能分解蛋白质的酶）并将木瓜蛋白酶用于除去啤酒中的蛋白质浑浊物。自1954年吉田首次发现黑曲霉可产生酸性蛋白酶以来，国内外对微生物发酵生产酸性蛋白酶进行了广泛的研究。1964年外国科学家首次发现大孢子黑曲霉突变体能产生两种不同的酸性蛋白酶，即酸性蛋白酶和酸性蛋白酶。1965年又从血红色陀螺孔菌，中分离出了一种酸性蛋白酶，并对该酶进行了纯化和结晶。1968年从微小毛霉中筛选出了一种酸性蛋白酶，并对其进行了纯化和酶学性质分析。1995年外国科学家对烟曲霉酸性蛋白酶的基因进行了克隆和测序。2001年又从假丝酵母中筛选出了一种酸性蛋白酶菌株，并对该酶进行了核苷酸序列分析和功能分析。国外学者对曲霉酸性蛋白酶的结构和功能等己经研究的较为透彻。 与国外相比，我国对酸性蛋白酶的研究相对较晚些。1970年上海工业微生物研究所首先从黑曲霉中筛选出一株产酸性蛋白酶菌株，并和上海酒精厂协作进行中试生产，填补了我国酸性蛋白酶制剂的空白.近年来国内在酸性蛋白酶上的研究大都致力于选育产酶活力高、抗逆性好的菌种，并获得了一些很有应用前途的产酶菌株。目前用于酸性蛋白酶生产的高产菌株主要有黑曲霉、宇佐美曲霉和青霉及它们的突变株。李永泉等，对宇佐美曲霉所产的酸性蛋白酶进行了发酵过程动力学研究.戚淑威等对青霉产酸性蛋白酶的适宜条件和酶学性质进行了分析。谢必峰等，采用硫酸铵盐析法和离子交换层析法分离纯化了黑曲霉产酸性蛋
木瓜蛋白酶的提取、分离纯化及其生物学研究综述及实验方法 13生物技术第二大组第二小组 组员：王玓玥（组长）、王子贺、王思瑶、王宇涛、王守鑫、谭国栋一、研究背景： 在经济飞速发展的今天，人们的生活水平已远远不只在于吃饱穿暖，食品的安全和营养问题受到人们越来越多的关注，绿色健康的生活也成为大家共同的追求，木瓜蛋白酶以它自身耐热及特殊结构等特点被广泛的用于食品行业，如何分离纯化得到高纯度低成本的木瓜蛋白酶则是人们现在研究的重点，本小组便也以此为研究主题展开实验。 二、木瓜蛋白酶基本介绍：木瓜蛋白酶，又称木瓜酶，是一 种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，这种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，当Cys25被氧化剂氧化或与金属离子结合时，酶的活力被抑制，而还原剂半胱氨酸（或亚硫酸盐）或EDTA能恢复酶的活力木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观
为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液为无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶 的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，但几乎不能分解蛋白胨。木瓜蛋白酶的最适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI）为8.75；木瓜蛋白酶的最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。。另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）
实验胰蛋白酶活力测定 一、原理 福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。 蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。 二、实验仪器 试管 7220分光光度计 恒温水浴锅 三、实验试剂 福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中) 0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml 10%三氯乙酸溶液 0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)： 0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml湿润，再
加少量0. 2mol/L 磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml ，冷藏在(冰箱)里。 500ug/L 酪氨酸溶液 胰蛋白酶溶液(冰箱中) 四、实验步骤 标准曲线的制作：按下表加入试剂： 0.20.40.60.81.0蒸馏水 1.0 0.80.60.40.20500ug/L 酪氨酸溶液6 54321管号 各管中加0.5%酪素2ml ，于37℃水浴中反应15分钟，然后加入10%三氯乙酸3ml ，过滤除去沉淀，取清液1ml ，加入0.55mol/L 碳酸钠5ml ，再加入福林试剂1ml ，于37 ℃水浴中显色15分钟，测OD 680。 以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。 样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂
0 OD6801 1福林试剂B 5.0 5.0 0.55mol/L碳酸钠溶液 37水浴中显色15分钟1 1上清液 过滤3.0 3.0 10%三氯乙酸溶液1.0 0 2mg/ml胰酶溶液0 1.0 0. 2mol/L磷酸缓冲液 37水浴中酶解15分钟2.0 2.0 0.5%酪素溶液 备注2 1 管号 五、结果计算 酶活力：在37℃下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。样品中含酶活力单位=A/15 ╳F A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数 F—酶液稀释倍数 原始数据：（注：7号为待测液） 液体编 号 0 1 2 3 4 5 7 分光光 度计值 0 0.057 0.172 0.201 0.255 0.373 0.919 分光光 度计值 0 0.057 0.173 0.194 0.263 0.386 0.928 分光光 度计值 0 0.068 0.174 0.194 0.271 0.391 0.934
年产1500m3蛋白酶的工厂设计 摘要 蛋白酶是催化肽键水解的一类酶，它可迅速水解蛋白质为胨、肽类，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。同时大多数微生物蛋白酶都是胞外酶。微生物蛋白酶按其作用的最适pH可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶三类。酸性蛋白酶是一种羧基蛋白酶，它的分子质量为30-40kD，等电点（pH3.0-5.0） 酸性蛋白酶现已广泛应用于食品、饲料、酿造、毛皮与皮革、医药、胶原纤维等各个行业之中。本设计采用豆饼粉、玉米粉、淀粉为主要的培养基原料，并选用黑曲霉（Aspergillus niger ）3.350菌种发酵。其中豆饼粉3.75%，玉米粉0.625%，鱼粉0.625%，氯化铵1%，氯化钙0.5%，磷酸氢二钠0.2%。 本设计利用通风搅拌式发酵罐进行发酵，同时利用离子交换树脂对母液进行提取，提高了酸性蛋白酶的生产效率，减少了生产成本。设计还包括发酵罐，全厂平面图，车间平面布置图，工艺流程图。 关键词：酸性蛋白酶发酵工厂设计
The Process Design of the Protease used for Section with the Capacity of 1500m3 Annually Abstract protease is a kind of Peptone and peptide. It has been discover across in animal giblets ,the stem of plant,fruit , microbial and so on.Most of the Microbial protease are ectoenzyme .According to its best Optimum pH function ,Microbial protease Can be divided into Acid protease ,Neutral protease and alkaline protease .Acid protease is a kind of Carboxyl protease , Its molecular weight is 30-40 kd, lower isoelectric point (pH3.0-5.0) Acid protease in food, medicine, textile, leather, feed, cosmetics, washing industries have applications, natural health, avirulent and harmless, quite safe. So in this paper the basic content of more acid protease, production process and application development were introduced. This design USES the bean cake powder, corn flour, starch as the main medium of raw materials, and selects the Aspergillus Niger, Aspergillus Niger) 3.350 bacterial fermentation. With bean cake powder 3.75%, corn flour 3.75%, 0.625% fish meal, 1% ammonium chloride, calcium chloride 0.5%, disodium hydrogen phosphate 0.2%. This design using the ventilation agitator in fermentor, using ion exchange resin in mother liquid was extracted at the same time, improve the efficiency of the acid protease production, reduce the production cost. The design also includes Fermentor, The factory plan, Shop floor plan, Flow Chart. Key Words: Acid protease ; fermentation; plant-design;
发酵工程与设备课程论文 题目木瓜蛋白酶 班别学号 姓名 成绩
木瓜蛋白酶 摘要：木瓜蛋白酶是一种能分解蛋白质的蛋白酶。先了解木瓜蛋白酶的制备及保存，接着分析它的化学修饰和酶活力的影响。最后，木瓜蛋白酶的固定化及方法以及它在各个行业的应用。Abstract: Papain is a protease that breaks down proteins.To understand the preparation and preservation of papain and then analyzed its chemical modification and enzyme activities.Finally, the immobilized papain and the method and its application in various industries 关键字：木瓜蛋白酶化学修饰酶活力固定化行业的应用Keywords:papain Chemical modification enzyme immobilization industry applications 木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。它是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。它是一种含疏基肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。 作为植物来源的蛋白酶来说，此酶研究进展的最快。此酶主要是以内肽酶的形态起作用。活性的产生，而半胱氨酸残基是不可缺少的，所以是硫基蛋白酶的一种，底物的特异性不太严格，分子量为23400，氨基酸残基数212。 一、木瓜蛋白酶的制备及保存 木瓜蛋白酶的制备是将未成熟番木瓜果实割取乳液去杂，在室温下，入半胱氨酸溶液在研钵中充分磨匀，静置后取上清液即
酸性蛋白酶与碱性蛋白酶生产工艺的不同之处？ 酸性蛋白酶是一种在酸性环境下（pH 2.5-4.0）催化蛋白酶水解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动植物蛋白质。可用于毛皮软化，酒精发酵，啤酒、果酒澄清，动植物蛋白质水解营养液，羊毛染色，废胶片回收，饲料添加剂等等。本品在酸性条件下有利于皮纤维松散，且软化液可连续使用，是当前理想的毛皮软化酶制剂；在酒精发酵中，添加酸性蛋白酶，能有效水解原料中的蛋白质，破坏原料颗粒粒间细胞壁的结构，有利于糖化酶的作用，使原料中可利用碳源增加，从而可提高原料出酒率；另一方面，蛋白质的水解提高了醪液中α-氨基态氮的含量，促进酵母菌的生长与繁殖，提高发酵速度，从而缩短发酵周期和提高发酵设备的生产能力。 碱性蛋白酶碱性蛋白酶是在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类,是一类非常重要的工业用酶,最早发现于猪胰脏。碱性蛋白酶广泛存在于动、植物及微生物中。微生物蛋白酶均为胞外酶,不仅具有动植物蛋白酶所具有的全部特性,还有下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单、快速、易于实现工业化生产等诸多优点。1945年瑞士M等在地衣芽孢杆菌中发现了微生物碱性蛋白酶。 碱性蛋白酶是由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌2709，经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，其主要酶成分为地衣芽孢杆菌蛋白酶，是一种丝氨酸型的内切蛋白酶，它能水解蛋白质分
子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力，广泛应用于食品、医疗、酿造、洗涤、丝绸、制革等行业。 1、碱性蛋白酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，属于丝氨酸型内切蛋白酶，应用在食品行业可水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，形成具有独特风味的蛋白质水解液。 2、碱性蛋白酶成功应用于洗涤剂用酶工业，可添加在普通洗衣粉、浓缩洗衣粉和液体洗涤剂当中，既可用于家庭洗衣，也可用于工业洗衣，可以有效的去除血渍、蛋类、乳制品、或肉汁、菜汁等蛋白类的污渍，另外也可作为医用试剂酶清洗生化仪器等。 3、在生物技术领域，碱性蛋白酶可作为工具酶用于核酸纯化过程中的蛋白质（包括核酸酶类）去除，而对DNA无降解作用，避免对DNA 完整性的破坏。 酸性蛋白酶如何灭活第一种方法几乎所有酶都适用，就是加热。第二种，既然是酸性酶，加入强碱应该也是可以的。 酸性蛋白酶产生菌的筛选方法？酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类，其最适作用pH值为2.5-5.0。由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中。目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶，此类酶的最适作用pH值为3.0左右，当pH值升高时，酸性蛋白酶的酶活会明显降低，且此类酶不耐热，当温度达到50℃以上时很不稳定，从而限制了酸性蛋白酶的应用范围。因此，本研
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910279654.5 (22)申请日 2019.04.09 (71)申请人 滁州学院 地址 239000 安徽省滁州市丰乐大道1528 号 (72)发明人 张汆 刘洋 陈志宏 何晓伟 张萌 刘宁 武宁杰 (74)专利代理机构 安徽省合肥新安专利代理有 限责任公司 34101 代理人 乔恒婷 (51)Int.Cl. A23C 11/10(2006.01) (54)发明名称 一种高纯度核桃蛋白粉和核桃饮料的同步 加工方法 (57)摘要 本发明公开了一种高纯度核桃蛋白粉和核 桃饮料的同步加工方法，以核桃油加工的副产 物——脱脂核桃饼粕为原料，针对其中主要营养 组分，如蛋白质、碳水化合物的基本特点，采用酶 解方法水解其中的碳水化物，将其从水不溶性变 为水溶性，然后利用酵母或乳酸发酵的方法在对 淀粉水解后产生的葡萄糖进行发酵利用，最后采 用传统的方法进行固液分离，得到纯度较高的核 桃蛋白粉和核桃饮料两种产品。采用该方法可以 将脱脂核桃粉的利用率从57％提高到100％。权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 109924262 A 2019.06.25 C N 109924262 A
权 利 要 求 书1/1页CN 109924262 A 1.一种高纯度核桃蛋白粉和核桃饮料的同步加工方法，其特征在于包括如下步骤： 步骤1：糊化处理 将脱脂核桃饼粕粉碎并过60-100目筛网，所得脱脂核桃粉中加水，在95-100℃下加热糊化15-30min； 步骤2：糖化处理 待步骤1糊化的核桃粉冷却至50-60℃时，依次加入淀粉脱支酶和糖化酶，进行酶解； 步骤3：发酵处理 待步骤2糖化处理结束后，加入酿酒酵母，在25-30℃下发酵3-6天；或者加入活性乳酸菌，在25-30℃下发酵6-10h； 步骤4：固液分离 待步骤3发酵结束后，采用离心或过滤的方法进行固液分离，所得沉淀经水洗、干燥后即可获得高纯度核桃蛋白粉，其中蛋白质含量在80％以上；液相经高温杀菌和常规的糖、酸等调味后，得到核桃饮料。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 步骤1中，向脱脂核桃粉中加水的质量比为1:8-15。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 步骤2中，淀粉脱支酶和糖化酶的添加量分别为核桃粉质量的0.8％-1.2％。 4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于： 步骤2中，酶解温度为50-60℃，酶解时间为2-4h。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 步骤3中，酿酒酵母的添加量为核桃粉质量的1％-2％；活性乳酸菌的添加量为核桃粉质量的0.5％-1.5％。 2
1前言 1.1研究目的和意义 高血压是一种常见的心脑血管疾病，会引起心血管、大脑、肾脏的病变[1]。降压肽是一种ACE抑制剂，通常用于高血压患者的治疗[2]。目前，对高血压患者的治疗通常使用化学合成的药物，然而，这些合成药物有一些副作用,包括咳嗽和皮疹[3]。食源性降压肽来源于天然植物，无副作用，易被人体吸收[4]。不同的植物来源，降压功效作用也是不同的。 核桃(核桃) 蛋白质的具有广阔应用前景的新产品和强化身体的好来源[5]。核桃粕是核桃经过提取油后的副产物，含有29.65%蛋白质，提油后的核桃粕多数被用作饲料，资源造成了一定的浪费，酶解核桃粕蛋白制备降压肽可以促进核桃粕的深加工，实现资源的综合利用。本文采用两种不同的蛋白酶共同作用水解蛋白，采用双酶复合水解可以增加蛋白酶的特异性催化位点[6]，可以提高可溶性蛋白含量及功能性多肽的产量和转化率[7]，并且增大了蛋白的水解度，也一定程度上增大了蛋白原料对肽的转化率，进而可以改善蛋白质水解液中功能性多肽的特性。本实验将两种蛋白酶分两步进行酶解，全面研究双酶分步酶解工艺制备核桃粕降压活性肽的工艺及参数，然后用响应面法对其工艺进行优化。 1.2降压肽的研究进展 日本是对食源性降血压肽研究最多的国家，且已经有此类降血压肽的商品上市，以其天然无毒的特性受到了广大消费者的信赖，而我国在此项的研究才刚刚起步[8]，目前临床上的高血压的药物治疗尽管有效可是也存在弊端，如降压过度、泌尿系统发生病变、持续性咳嗽、味觉失真和血管神经性水肿等，而通过蛋白酶的水解获得的具有降血压活性的多肽不仅可以对高血压患者起到降血压的作用，对身体体质没什么影响，适合患者长期服用。随着国民生活水平的提高，人们的自我保健意识和安全意识也在逐渐加强，这种降血压肽会逐渐被人们接受，成为预防，缓解和治疗高血压的一个有效手段。 2 材料与方法 2.1 材料和设备 核桃粕，康福寿核桃油加工有限公司；2709碱性蛋白酶(Alcalase)购于北京博奥拓达科技有限公司；风味蛋白酶购于sigma公司；FAPGG，呋喃丙烯酰三肽，
酪蛋白磷酸肽的概况 第一节：酪蛋白磷酸肽的基本概况 中文名称：酪蛋白磷酸肽 英文名称：Casein Phosphopeptides 钙是人体内含量最丰富的元素之一，对人体健康起着十分重要的作用，然而它也是最易缺乏的矿物质元素之一。当今世界上缺钙已成为一大营养问题，即使经济很发达的国家也未能幸免，在我国表现得尤为突出。据报道，我国老年人因缺钙引起的骨质疏松发病率高达30%-50%，儿童因缺钙引起的佝偻病高达40%，妊娠妇女缺钙比例也非常高，严重威胁着人们的健康。因此，补钙是众所需求。 现代研究已证实钙缺乏的主要原因并不是食物不足，而是由于吸收率低下。如何提高钙的吸收率，是人们长期以来一直在进行的研究。而今从牛奶中分离的一种生物活性肽——酪蛋白磷酸肽（CPP），由于具有很强的促钙吸收活性，正成为功能性食品添加剂的开发和研究热点。 酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides），简称CPP，是以牛奶酪蛋白为原料，经单一酶或复合酶水解，再对水解产物进行分离纯化而得到的含有簇磷酸丝氨酚的多肽。专家们认为，将钙和CPP应用于各类食品中，作为一种食品基料，可提高食品的附加值，使人们长期存在的钙摄取量不足的问题得以解决，有效地预防骨质疏松症和儿童缺钙症。 CPP具有促进成长期儿童骨骼和牙齿发育的作用，并能预防和改善骨质疏松症，促进骨折患者的康复，预防和改善缺铁性贫血；还具有抗龋齿作用。 CPP可添加于各类食品。包括饮料、烘烤食品、冷饮、乳制品、发酵食品、快餐食品、糖果、果酱、儿童咖喱饭、口香糖及保健品和调料中，可满足各种年龄段人群的需要。CPP还可用于动物饲料中，促进动物体外受精。纯CPP和高纯CPP可应用于制药工业，能进一步促进钙质吸收，防止矿物质流失。
1. 前言 酸性蛋白酶是一类最适pH 值为2.5? 5.0 的天冬氨酸蛋白酶，相对分子质量为30000 ? 40000。酸性蛋白酶主要来源于动物的脏器和微生物分泌物,包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶。根据其产生菌的不同，微生物酸性蛋白酶可分为霉菌酸性蛋白酶、酵母菌酸性蛋白酶和担子菌酸性蛋白酶.根据作用方式可分为两类：一类是与胃蛋白酶相似，主要产酶微生物是曲霉、青霉和根霉等；另一类是与凝乳酶相似，主要产酶微生物是毛霉和栗疫霉等。细菌未发现产酸性蛋白酶的菌株.由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中。 国外关于酸性蛋白酶的生产研究从20 世纪初就开始了。1908 年，德国科学家从动物的胰脏中提取出胰蛋白酶，并将其用于皮革的鞣质。1911 年美国科学家从木瓜中提取木瓜蛋白酶（在酸性，碱性和中性的条件下都能分解蛋白质的酶）并将木瓜蛋白酶用于除去啤酒中的蛋白质浑浊物。自1954 年吉田首次发现黑曲霉可产生酸性蛋白酶以来，国外对微生物发酵生产酸性蛋白酶进行了广泛的研究。1964 年外国科学家首次发现大孢子黑曲霉突变体能产生两种不同的酸性蛋白酶，即酸性蛋白酶和酸性蛋白酶。1965 年又从血红色陀螺孔菌，中分离出了一种酸性蛋白酶，并对该酶进行了纯化和结晶。1968 年从微小毛霉中筛选出了一种酸性蛋白酶，并对其进行了纯化和酶学性质分析。1995 年外国科学家对烟曲霉酸性蛋白酶的基因进行了克隆和测序。2001 年又从假丝酵母中筛选出了一种酸性蛋白酶菌株，并对该酶进行了核苷酸序列分析和功能分析。国外学者对曲霉酸性蛋白酶的结构和功能等己经研究的较为透彻。 与国外相比，我国对酸性蛋白酶的研究相对较晚些。1970 年上海工业微生 物研究所首先从黑曲霉中筛选出一株产酸性蛋白酶菌株，并和上海酒精厂协作进行中试生产，填补了我国酸性蛋白酶制剂的空白.近年来国在酸性蛋白酶上的研究大都致力于选育产酶活力高、抗逆性好的菌种，并获得了一些很有应用前途的产酶菌株。目前用于酸性蛋白酶生产的高产菌株主要有黑曲霉、宇佐美曲霉和青霉及它们的突变株。永泉
核桃不能和9种食物同吃核桃是食疗的最好食物，因为不论是配药食用，还是单独生吃、水煮以及烧菜都有着补血养气、补肾填精、止咳平喘、润燥通便等良好功效。核桃可是好东西，但不注意饮食搭配小心变“毒药”。那么核桃与什么不能同吃呢?下面为您介绍核桃与什么不能同吃，这些饮食禁忌要牢记。 核桃与什么不能同吃?
1、核桃+白酒 据宋代马志的《开宝本草》记载：“饮酒食核桃令人咯血。”核桃含有丰富的蛋白质、脂肪和矿物质，但核桃性热，多食燥火，白酒甘辛火热;两者一起吃易致血热，轻者燥咳，严重时会出鼻血。特别是有咯血宿疾的人，更应注意禁忌。 2、核桃+野鸡肉 明·李时珍《本草纲目》：“野鸡不可与胡桃、蘑菇同食。”核桃不能和野鸡肉一起食用。尤其那些患有肺炎，支气管扩张等疾病的人，更应该加强这方面防范和注意，一定切忌不要同时食用核桃和野鸡肉，因为这样不但不利身体健康，而且还容易患上其他各种疾病。 3、核桃+浓茶
因为核桃中含有丰富的蛋白质与铁元素，茶叶中含有鞣酸，鞣酸会与核桃中的铁、蛋白质结合，生成不溶性的沉淀物，不易被消化吸收，所以食核桃忌饮浓茶。 4、核桃+鳖肉 鳖能提高人体免疫功能，促进新陈代谢，增强人体的抗病能力，有养颜美容和延缓衰老的作用。但你要注意了，核桃与鳖肉相克。核桃与鳖肉同食，会致中毒，影响身体健康。
5、核桃+黄豆 黄豆有“豆中之王”之称，被人们叫做“植物肉”、“绿色的乳牛”，营养价值最丰富。但你知道，黄豆不能和核桃一起吃，同食可致腹胀、腹痛、消化不良。 6、核桃+野鸭 核桃与野鸭相克。核桃与野鸭同食，会使身体不适，易生病。 7、核桃+地塞米松 核桃与地塞米松相克。核桃与地塞米松同食，会降低药物疗效。
Papain Papain [9001-73-4] Papain is a purified proteolytic substance derived from Carica papaya Linné(Fam.caricaceae).papain,when assayed directed herein, contains not less than 6000 units per mg. Papain of a higher digestive power may be reduced to the official standard by admixture with papain of lower activity ,lactose,or other suitable diluents. One USP Unit of papain is the activity that releases the of 1μg of tyrosine from a specified casein substance under the conditions of the Assay， using the enzyme concentration that liberates 40μg of tyrosine per mL of test solution. Packaging and storage－Preserve in tight,light-resistant containers in a cool place. USP reference standards (11)—USP papain RS. pH<791>:between 4.8 and 6.2 in a solution (1 in 50). Loss on drying <731>—Dry it in a vacuum oven at 60℃ for 4 hours : it losses not more than 7.0% of its weight. Assay (casein digestive power)— Dibasic sodium phosphate.,0.05M—dissolve 7.1g of anhydrous dibasic sodium phosphate in water to make 1000mL.add 1 drop of toluene as a preservative. Citric acid,0.05M—dissolve 10.5g of citric acid monohydrate in water to make 1000mL. Add 1 drop on toluene as a preservative. Casein substrate—Disperse 1 g of Hammersten-type casein in 50 mL on 0.05M Dibasic sodium phosphate. Place in a boiling water bath for 30 minutes with occasional stirring.Cool to room temperature ,and add 0.05 M Citric acid to adjust to a pH of 6.0±0.1.stir the solution rapidly and continuously during the addition of the 0.05M Citric acid to prevent precipitation of the casein. Dilute with water to 100 mL .prepare fresh daily. Buffer solution (Phosphate-Cysteine Disodium ethylenediaminetetraacetate Buffer)