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盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及其纳米抗体的筛选

盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及其纳米抗体的筛选
盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立及其纳米抗体的筛选

快速检测方案

餐饮服务单位配置食品安全 快速检测设备实施方案 为继续深入推进餐饮服务环节“地沟油”、“瘦肉精”、“非法添加”、“假劣酒类”四项整治工作,加强餐饮服务单位自检能力建设,根据《餐饮服务食品安全监督管理办法》,按照市政府领导要求,经我局反复研究论证,决定在全市大型以上餐饮服务单位配置食品安全快速检测设备。 一、配备范围 大型餐馆(加工经营场所使用面积在500㎡至3000㎡或者就餐座位数在250座至1000座)、特大型餐馆(加工经营场所使用面积在3000㎡以上或者就餐座位数在1000座以上)及供餐人数500人及以上的集体食堂。 二、检测箱配置标准 餐饮服务单位配备的食品快速检测箱应包含生鲜肉的瘦肉精、熟肉制品的亚硝酸盐、食用油的酸价和过氧化值、酒类的甲醇、水发水产品的甲醛、果蔬的农药残留及消毒液的有效氯等7项必检项目和注水肉、木耳中的硫酸镁及双氧水等3项自选项目相应的配套装置及试剂试纸等。 三、快速检测场所要求 特大型餐饮服务单位要建立快速检测室,室内至少要有照明设施、操作台和试剂试纸的储存设施;其他餐饮单位要有相对固定的检测场所及试剂试纸的储存设施。快速检测场所应悬挂《食品安全快速检测管理制度》、《食品安全快速检测操作规范》、《食品安全快速检测工作相关人员职责》。快速检测室或检测场所要确保光线良好,照度不低于110lux。

四、快速检测要求 1、各相关餐饮服务单位要有1‐2名经培训合格的高中以上学历的专(兼)职快速检测人员。 2、各相关餐饮服务单位必须对生鲜肉、食用油、酒类、熟肉制品、水发水产品、果蔬及配比后的消毒液进行检测,可根据采购的实际情况适时增加检测项目。上述食品及食品原料和配比后的消毒液的检测率不低于30%。 3、各相关餐饮服务单位要做好《食品安全快速检测登记表》、《可疑(问题)食品处置登记》。记录表格由市局统一格式、统一要求,保存期不少于2年。 五、可疑食品的处理 经快速检测认为不合格的食品,餐饮服务单位要停止制售,按要求封存,并送有资质的检测机构检测,经检测合格的食品可继续使用,不合格的食品报相关部门查处。如经快速检测认为不合格的食品数量较少、价值较低且送检费用较高,餐饮服务单位应在单位负责人的监督下自行销毁,并做好登记。 六、工作推进步骤 1、各级餐饮服务监管部门于2011年11月16日前完成快速检测工作的动员部署,并将准确统计的配备食品安全快速检测设备的餐饮服务单位名单(包括单位名称、地址、联系人及电话)上报市食品药品监督管理局食品处,作为生产厂家订做设备及试剂试纸的数量依据,同时为售后服务提供方便。 2、各级餐饮服务监管部门于11月底前完成对辖区内相关餐饮服务单位食品安全快速检测设备、试剂试纸的配备及

盐酸克伦特罗的检测方法

盐酸克伦特罗的检测方法 科技信息职教与成教 盐酸克伦特骂硇楦测方法 河南科技大学林业职业学院刘荣森 [摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱 法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向. [关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展 中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥 用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称: Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯 苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式: ]}H31. l 盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减 少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该 药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦 特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉 精已成为重大的食品安全问题. 中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情 况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒 事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在 检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速, 方便,精确的检测方法. 检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高 效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法

(CE)等. 1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法 fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳 性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲 基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间 长,需贵重仪器等缺点. 吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱 克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化 条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸 克伦特罗添加浓度在1.O~5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%~88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%~5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓 缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯 洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦 特罗,方法回收率在89.3%~107%,相对标准偏差为7.3%~16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n. 2.高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合 大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是 检测精确度高,其最低检测限范围为1~15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵

盐酸克伦特罗的免疫检测技术

新疆农业大学 专业文献综述 题目: 肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术姓名: 郑峰 学院: 食品科学与药学学院 专业: 食品科学 班级: 2013级研究生 学号: 1340020279 成绩: 指导教师: 王子荣职称: 教授 200 年4月24日 新疆农业大学教务处制

肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术 郑峰指导老师:王子荣教授 摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗的理化特性和生理作用,分析了它在肉制品中残留对人体造成的危害,同时综述了肉品中残留盐酸克伦特罗的胶体金免疫检测技术和酶联免疫检测技术的原理和操作要点,分析了两种免疫检测技术的特点,总结了两种免疫检测技术的技术优势并提出自己的观点。 关键词:盐酸克伦特罗;生理;胶体金检测;酶联免疫 The detection of Clenbuterol hydrochloride residues Absttact:This paper describes the effects in physiology of the clenbuterol hydrochloride remained in meat products,and analyzes the harms which caused by the residues in meat; The artical also summarizes the characteristics of technology principles with gold and enzyme-linked immunoassay to analyze the residues in meat and the operation points in immunoassay technique,contrasting the two immunoassay techniques.Finally the advantages of both immunoassay techniques were summarized and views were put forward on. Key words:Clenbuterol;DIGFA;ELISA 目前食品安全问题已经成为国内最为关注的问题,其关系到每个人的将抗发展。畜产品在人类饮食结构中占有重要的地位,如何确保畜产品的安全是目前急需解决的问题。市面上畜肉产品的安全卫生主要由两方面因素决定,即宰前因素和宰后因素,宰前因素主要是由动物的养殖方式和病害控制对肉品质产生的影响;宰后因素主要表现在宰后检验、运输、加工、包装等方面。随着一系列由饲料问题引起的肉品安全问题的发生(二噁英、疯牛病、苏丹红和瘦肉精),人们渐渐认识到饲料安全在保障畜产品安全中的重要性。饲料安全性关系到畜产品的质量与人类的健康。 盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride,CL)俗称瘦肉精是国家违禁药物中的一种[1]。盐酸克伦特罗是一种β-肾上腺素受体激动剂,曾作为药物用于治

ELISA检测方法有哪些

ELISA检测方法有哪些? 酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合,然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么,它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗?跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型:直接法、间接法、竞争法、夹心法等,直接上图: 直接法(Direct ELISA)仅需要抗原和酶标一抗,操作简便,可避免交叉反应,然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求,同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见,它并不能对样本中抗体进行定量分析,因为样本中抗体是非酶标抗体,无法进行后续显色,但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法,见后文。 间接法(Indirect ELISA)使用了二抗增加信号强度,也使抗体的选择多样化,然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体,主要用于疾病的诊断,其优点是只需要改变包被抗原,酶标抗体是通用的。 夹心法(Sandwich ELISA)分为双抗体夹心法和双抗原夹心法: 双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体,结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上,检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗,而且对同一抗原结合位点不同,如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势,但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测,主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高,在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应(一步法),此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”,

瘦肉精快速检测

瘦肉精快速检测

瘦肉精快速检测 2011年04月20日11:00 阅读次数:13 来源:食品安全快速检测网 [字号:大中小] 瘦肉精是一类药物,而不是一种特定的物质,是指能够促进瘦肉生长的饲料添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。 目前,能够实现这种功能的物质是一类叫做β-兴奋剂(β-agonist)的药物,比如在中国造成中毒的克仑特罗(clenbuterol)和美国允许使用的莱克多巴胺/又译雷托巴胺(Ractopamine)。 瘦肉精在上海曾经引发了几百人的中毒事件。而在台湾,由于从美国进口的猪肉里含有瘦肉精,几乎挑起一场政治争端。由于西方国家一般不消费动物内脏(猪肉一般不含瘦肉精,但内脏特别是肝脏则会残留瘦肉精),因而在美国、加拿大、新西兰等国,瘦肉精这类物质的使用是合法的。其它这样类似药物还有沙丁胺醇(Salbutamol)和特布他林(erbutaline)等,同样能起到“瘦肉”作用、却对人体健康危害过大,因而造成安全隐患。它们也因而在全球遭到禁用。 早在2002年,农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就公告,明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克伦特罗和莱克多巴胺等7种瘦肉精。而据有关专业人士透露,各地在进行瘦肉精检测中基本都只检测盐酸克伦特罗,莱克多巴胺只有个别地方有检测。而正因为如此,一些不法养殖户就选择回避盐酸克伦特罗,改用莱克多巴胺等其他品种的瘦肉精。 为了较彻底排查检测“瘦肉精”,最好检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种“瘦肉精”。 排查常用的方法是胶体金快速检测卡法,该方法操作方便、快捷,整个检测过程只需几分钟;检测灵敏度高;结果直观;胶体金本身为红色,不需加入发色剂,对人体无害;标记物稳定,携带、储存方便;成本低,无需仪器设备。非常适合于基层执法部门对“瘦肉精”的快速筛查。 胶体金速测卡原理: 胶体金速测卡的检测原理是竞争性免疫层析。将着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1)相偶联,沉积在结合区。而检测区处固相化的是待测抗原或待测抗原的类似物。若样品中含有待测抗原,则样品中的抗原和带有标记物的Ab1形成Ag-Ab1复合物。随后在通过固相化有待测抗原或其类似物的检测区时,由于竞争抑制,不再发生反应,检测线处不显色;样品继续前移, Ag- Ab1 复合物被固相化在质控线处的抗Ab1 抗体(Ab2)所结合,形成Ab1- Ag- Ab2 复合物,使质控线显色。 食品安全快速检测技术研究中心根据此原理成功研发出盐酸克伦特罗速测卡、莱克多巴胺速测卡和沙丁胺醇速测卡,为基层执法部门对“瘦肉精”的快速筛查提供了简便、快捷、经济、适用的快速检测手段。 瘦肉精快速检测法-盐酸克仑特罗快速检测卡 2011年04月11日16:44 阅读次数:6 [字号:大中小] 盐酸克仑特罗(瘦肉精)速测卡使用说明书

胶体金法与酶联免疫法相结合快速检测克伦特罗

胶体金法与酶联免疫法相结合 快速检测克伦特罗 苏存举,陈福生3,高志贤3①,苗颂②,刘楠①,冯屹 (华中农业大学食品科技学院,武汉430070) 摘要:目的研究胶体金免疫层析法(GIC A)与酶联免疫吸附法(E LIS A)相结合,以建立对饲养、屠宰、流通各环节的畜尿克伦特罗(Clenbutero1,C L)定性和定量检测的方法。方法用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备20nm粒径的胶体金,胶体金标记单抗后喷涂到玻璃纤维膜上,特异性抗原(C L2BS A)以线状包被在硝酸纤维素膜上,制成快速检测试纸条。用E LIS A进行定量。结果对 G C2MS不确定的36份阴性样品和24份阳性样品用GIC A方法检测,其阴性符合率为97%,阳性 符合率为96%。同样样品用E LIS A方法检测,其符合率为100%。最低检测限为5.0ng/m L;用GIC A法只需在试纸条上滴加4~5滴样液5~10min就可出结果;在2个月的随机抽查中,试纸条的检测结果没有变化。结论本方法准确性高、稳定性好,操作过程简单,适合于作现场大规模、高通量检测。因此本方法具有广泛的应用及推广价值。 关键词: 胶体金; 克伦特罗; 酶联免疫吸附法 中图分类号:R155.5 文献标识码:A 文章编号:1001-5248(2008)03-0176-04 克伦特罗(Clenbutero1,C L)俗称“瘦肉精”,是β2肾2上腺受体激动剂。在家畜养殖中加入C L可以提高瘦肉率或者加速动物的生长。C L作为药物使用时可以治疗哮喘等疾病,但是如果用作家畜生长调节剂,其剂量通常是治疗疾病剂量的5~10倍,这样就可能残留于食品中而引起人体的不良反应,主要包括心跳过快和四肢肌肉颤动等中枢神经中毒后的失控症状,甚至导致死亡〔1〕。目前已有多种方法用于对C L的残留分析,主要包括酶联免疫检测法(E LIS A)、高效液相色谱法(HP LC)、气相色谱2质谱联用法(G C2MS)、液相色谱2质谱联用法(LC2MS)等,主要是依靠特殊仪器进行分析,不能适应市场监督需要快速、简便、价廉的要求。而E LIS A分析法操作简便、检测快捷、灵敏度高、特异性强,适用基层日常应用〔2〕。胶体金免疫层析法(GIC A)解决了以往在现场不能进行快速和定性检测的难题。因此, 基金项目:国家科技支撑计划(2006BAK02A09) 天津市科技攻关基金项目课题(N o.06VFG ZSH02200) 作者简介:苏存举(1981-),男,硕士研究生。从事食品安全快速检测研究。 3通讯作者 ①军事医学科学院卫生学环境医学研究所 ②山东大学将E LIS A和GIC A相结合应用于C L筛选检测已成为各地开展C L检测工作的主要技术手段。 1 材料与方法 1.1 材料 氯金酸为上海化学试剂厂产品;克伦特罗标准品为Sigma公司产品;克伦特罗单克隆抗体为浙江台州金芯生物工程公司产品;硝酸纤维膜(NC)、玻璃纤维膜、吸水纸、PVC背板均为美国Mill2 pore公司产品;克伦特罗检测试剂盒为江苏微生物研究所产品;其他试剂为国产分析纯。 1.2 仪器 紫外可见光分光光度计,Du2530型, Beckman公司;透射电镜,H27500型,日本HIT ACHI 公司;原子力显微镜,SPM29500型,日本岛津公司;磁力恒温搅拌器,79.3型,上海市曹行无线电元件厂;点膜机,Bio2Dot公司;普通离心机,TG L21613型,上海安亭科学仪器公司;纯水制备装置,AS D型,军事医学科学院卫生装备研究所。 1.3 方法 1.3.1 胶体金的制备 按照文献〔324〕采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒〔5〕。取0.01%氯金酸水溶液100m L,用恒温电磁搅拌器加热至沸腾,一次性加入l%柠檬酸三钠水溶液 2.52m L,再加热

《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》

ICS 备案号: DB34 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 —胶体金免疫层析法 Determination of clenbuterrol residue in animal tissues Colloidal gold immunochromatographic method (征求意见稿) 安徽省市场监督管理局 发布

DB34/T 824—2008 II 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替DB/T 824-2008《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》,除编辑 性修改外主要技术变化如下: ——修改了范围(见1); ——修改了规范性引用文件(见2); ——修改了检测步骤(见5); ——修改了结果判断(见6); ——修改了结果确认(见7)。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:安徽省兽药饲料监察所。 本标准起草人:许世富、。 本标准2008年8月发布,本次为第一次修订。

DB34/T 824—2008 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。 本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。 本标准检测限为3μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本试验采用胶体金竞争抑制法。将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒,标记抗体。硝酸纤维素膜为载体,利用了微孔膜的毛细管作用,将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端,使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中,会发生相应的抗原抗体反应,并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制了抗体和硝酸纤维素(NC)膜检测线上的盐酸克伦特罗人工抗原的结合,使检测线不显颜色,结果为阳性;反之,检测线显紫红色,结果为阴性。 4 试剂和材料 4.1 除非另有说明,本法所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682规定的二级水。 注:不同检测卡制造商间的产品组成和操作会有细微的差别,应严格按说明书要求规范操作。 4.2 胶体金免疫层析快速检测卡组成 4.2.1 盐酸克伦特罗抗体单克隆抗体。 4.2.2 胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备,应为带负电的紫红色疏水胶体金溶液,金颗粒大小应在30 nm~60 nm之间。 4.2.3 硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净,没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮状或其他肉眼能见的瑕疵,无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤维素膜宽度为(2 5.4±0.5)mm,长度在(100±2)mm,厚度在(185±19)μm,毛细流速度为(180±45)s/40 mm。 4.2.4 聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形,无明显歪斜现象。色泽好,白色,表面洁净,均匀度好,无破损,无起皱,无污点,无色斑,无霉点,无异味,无杂质及灰尘。聚酯纤维膜重量在(98.3±10.0)g/m2,厚度在(0.42±0.07)mm,长度为(30 5.0±2.5)mm,宽度为(254.0±2.5)mm。 4.2.5 吸水纸。 4.2.6 底板。 4.2.7 塑料盒。 4.2.8 塑料吸管。 4.2.9 提取液。 4.3 电子天平:感量分别为0.01mg和1mg。 1

猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法

龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/1d14015333.html, 猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法 作者:宋瑞张彩云何立宁张蕾 来源:《科技资讯》2011年第15期 摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。 关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法 中图分类号:S859.84 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)05(c)-0104-01 1 盐酸克伦特罗的性质 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔 丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃~176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。 2 危害性 2.1 对猪的影响 在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采 食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。 2.2 对人的影响 人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头 痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列 腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。

ELISA检测

ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体 在病原体急性感染的诊断中,通常需检测IgM抗体,如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的,如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用间接法测IgM抗体时,由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体,其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合,从而干扰IgM抗体的检测。 因此,在使用间接法测定IgM抗体时,通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理,以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐,而且影响测定的特异性和灵敏度。目前,常用的IgM抗体检测方法为捕获法,即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体,当加入血清标本时,其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获,再加入特异抗原,其与固相上捕获的IgM抗体结合后,加入酶标抗特异抗原的抗体,最后加入底物显色。具体操作步骤如下: 1.首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。 2.加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等,温育一定时间后洗板;此时,待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。 3.加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等,温育一定时间后洗板;此时,特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。 4.加入酶标记的抗特异抗原的抗体,温育一定时间后洗板;此时,在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。 5.加入酶底物,温育显色测定 本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合,并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应,从而导致假阳性反应。而非特异IgM由于其

盐酸克伦特罗快速检测

盐酸克伦特罗快速检测 摘要 本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为3ng/mL(3ppb)。 关键词盐酸克伦特罗快速检测卡定性检出限 前言 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O?HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。 1实验步骤 (1)使用前将待测样本溶液恢复至室温 (2)取出检测卡平放,用移液枪吸取待测样品溶液100ul,垂直加于加样孔,开始计时 (3)结果应在3~5min读取,其他时间判读无效,根据示意图判定结果。

【结果判断】 2 实验结果 实验结果如下图 1 由图可知,左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于 3 ng/mL ,或不含有盐酸克伦特罗;右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 3结果与讨论 3.1实验原理 若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线); 测试端多余的金标盐酸克伦特阴性(-):两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL ,或不含有。 阳性(+):检测T 线无显色,则表示样品中盐 酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 无效:未出现质控C 线,表明操作过程不正确 或检测卡已失效。

ELISA检测方法

ELISA(酶联免疫吸附测定,enzyme linked immunosorbent assay)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 基本原理: ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。 ③在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。 双抗夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体; ②加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结; ③洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进行键结; ④洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一次抗体键结; ⑤洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果。 间接法 间接法常用于检测抗体,一般的操作步骤为: ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原。

②加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗体,与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酶呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体; ②加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结; ③加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,当检体中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少,显色也就越浅。 注:当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。

表面等离子体共振生物芯片快速检测克伦特罗

表面等离子体共振生物芯片快速检测克伦特罗 李莹1,2,齐攀1,3,马骁1,4,钟金钢1,4,陈江韩5,张冠文5 (1.暨南大学光电信息与传感技术广东普通高校重点实验室,广东广州510632)(2.暨南大学预科部,广东广州510610)(3.广东交通职业技术学院电子工程系,广东广州 510650)(4.暨南大学光电工程系,广东广州 510632) (5.中国广州分析测试中心,广东广州 510070) 基金项目:国家自然科学基金资助项目(41206081);海洋赤潮灾害立体监测技术与应用国家海洋局重点实验室资助项目(MATHAB20120208);粤港关键领域重点突破招标资助项目(2005A20501001) 作者简介:李莹(1976-),女,博士,副教授,主要从事生物医学信息技术研究 通讯作者:钟金钢(1964-),男,博士,教授,博导,主要从事生物医学信息技术研究又称“瘦肉精”,属于β2-肾上腺素受体激动剂(β2-addrenoeeptor agonists)。克伦特罗引起的食物中毒事件近年来在国内外时有发生,1983年西班牙首次发生克伦特罗食物中毒事件,1998年和2006年分别在香港和上海发生克伦特罗食物中毒事件。1997年,中华人民共和国农业部下达文件,严禁β-肾上腺素类激素在饲料和畜牧生产中使用,在禁用激素类列表中, 2747

盐酸克伦特罗高居榜首。克伦特罗既不是兽药,也不是饲料添加剂,但是可明显促进动物生长,并增加瘦肉率,抑制脂肪的合成,因此一些饲养者或者饲料厂仍在非法使用克伦特罗,提高肉用动物的瘦肉率,残留在动物性食品中的克伦特罗严重危害人类健康。与其它β-兴奋剂相比,克伦特罗的生物利用度高,更易出现中毒反应。食用含有盐酸克伦特罗的食品可能会出现血糖升高、心律失常、腹痛、腹泻、过敏等不良反应,其毒性高于具有相同功能的莱克多巴胺,所以,必须要对克伦特罗在动物养殖过程中的非法使用进行监控和检测。2002年9月10日农业部、卫生部、国家药品监督管理局发布了《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》,盐酸克仑特罗和莱克多巴胺等7种“瘦肉精”被列为禁用药品。目前,检测盐酸克伦特罗的主要方法是气相色谱-质谱法(Gas Chromatograph-Mass Spectrometer-computer,GC-MS)[1]、高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)[2~3]、酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)[4]、液相色谱-质谱/质谱法(HPLC-MS/MS)[5]。这些方法的缺点是样品处理时间长,检测过程烦琐、难于操作,污染环境,仪器价格昂贵,在实际应用中受到限制[6]。表面等离子体共振生物芯片不需要标记就可对分子间的相互作用进行实时监测,已被广泛用于药物分析、食品分析、环境监测等许多领域[7~14]。 本研究利用自行研制的便携式表面等离子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)生物传感器,根据免疫反应的特异性,研究克伦特罗抗原、抗体的相互作用,分析动力学反应过程,建立标准曲线,并提出克伦特罗的连续检测法和快速检测法。连续检测法是连续检测多个样品后再对生物芯片表面通入再生液,实现芯片再生,从而简化了检测过程,提高了芯片的使用寿命。快速检测法是通过动态设置检测参数,在免疫反应阶段提高单次检测速度,获取更多数据,提高灵敏度;在芯片制备阶段延长单次检测时间,去除冗余数据。与传统生化分析方法相比,本研究利用便携式仪器,提出的方法操作简便,无需标记,非破坏性,成本低,可进行现场大量样品的实时连续检测和快速筛选,适用于超市、集市、工厂等需要实时检测的场所,进行质量监控。 1 实验部分 1.1 仪器、试剂与材料 自行研制了便携型SPR检测仪,由光路系统、机械扫描系统、样品输送系统、生物传感芯片、控制及分析软件组成,用电学方法控制入射光角度的改变,由光电池检测反射光光强的变化,灵敏度高,方法简便易行。 盐酸克伦特罗标准品(Clenbuterol Hydrochloride,100 g/mL的乙醇溶液)由农业部环境保护科研监测所提供,分子量为313.7;克伦特罗-牛血清白蛋白(CLB-BSA)耦联物、克伦特罗抗体(anti-CLB)购于广州弗赛生物科技有限公司;猪肉中提取的克伦特罗样品由中国广州分析测试中心提供;巯基十一酸(HS(CH2)10COOH)、巯基己酸(HS(CH2)6OH)、N-羟基琥珀酰亚胺(N-Hydroxysuccinimide,NHS)、碳二亚胺(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N’-ethylcardbodiimid hydrochlorid, EDC)、乙醇胺(Eth)、十二烷基硫酸钠(SDS)购于美国Sigma公司;其它试剂购于北京化学试剂公司。免疫反应的缓冲液是PBS缓冲液(2 mmol/L NaH2PO4, 2 mmol/L Na2HPO4, 150 mmol/L NaCl, pH 7.4),盐酸克伦特罗标准品(CLB)、克伦特罗衍生物(CLB-BSA)、克伦特罗抗体用PBS缓冲液稀释成相应浓度的溶液。 1.2 生物芯片制备 图1 克伦特罗免疫检测示意图 Fig.1 Scheme of Clenbuterol(CLB) immune detection 在直径20 mm厚度1 mm的圆形玻璃片上沉积50 nm的金。将镀有金膜的传感芯片固定到仪器上,安装好流通系统,通入PBS缓冲液,基线稳定几分钟后进行生物芯片的自组装,流通池中通入1 mM的HS(CH2)10COOH(巯基十一酸)和HS(CH2)6OH(巯基己酸)的乙醇溶液,质量比(M/M)是1:9,对金膜表面进行化学修饰2 h,然后通入PBS缓冲液清洗。基线稳定后加入0.1 mol/L的NHS和0.1 mol/L的EDC 混合液(1:1, V/V),活化芯片表面15 min,之后用PBS 冲洗2 min,这时的基线比活化前略有升高。然后进行生物探针的固定。连续检测法和快速检测法,均在生物芯片表面固定克伦特罗衍生物(CLB-BSA),作为生物探针,固定时克伦特罗衍生物浓度为83 mg/L,此时SPR响应值明显升高,30 min后通入PBS冲洗2 min,响应值只有小幅下降,说明探针固定效果较好。 2748

盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书

盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡说明书 【产品名称】 产品名称:盐酸克伦特罗快速检测卡(胶体金法) 英文名称:Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold) 【产品简介】 盐酸克伦特罗(瘦肉精主要成分)是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物,在动物可食性组织中蓄积,危害食用者的健康,我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。 本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留,检测过程只需20分钟,适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。 【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡(5条);200μL刻度吸管(5支);提取瓶(内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL,5瓶);小勺(1个)。 【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。 【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。 【使用方法】 1、取一小块瘦肉,用刀切成碎肉,用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内,高度与瓶盖相平(约 2.0g)。 2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内,盖紧瓶盖后振荡,使碎肉与提取液充分混匀,放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出,冷却至室温。 3、从包装袋中取出检测卡,平放在桌面,用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液,垂直滴加2-3滴于加样孔(S孔)中。 4、室温环境计时5分钟,对照结果判断示意图判定检测结果,其他时间判定无效。 【结果判断】 阴性(-):C线和T线都显色,表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。 阳性(+):C线显色,T线不显色,表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。 无效:C线未出现,表明操作过程不正确或检测卡已失效。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的检测卡重新测试。 【注意事项】 1、请按照使用方法进行测试,检测卡打开包装后1小时内使用,检测前将检测卡恢复至室温。 2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面,检测时避免阳光直射。 3、本检测卡为一次性产品,请勿重复使用。 4、提取瓶内液体不可食用,避免儿童接触,检测完后可倒入下水道,瓶体可丢在垃圾桶。 5、本产品检测结果仅供参考,如需确证,请参照国家相关标准方法。 【储存及有效期】 原包装应储存于4~30℃,阴凉避光干燥处,切勿冷冻;有效期12个月。

快速检测方案

精心整理 餐饮服务单位配置食品安全 快速检测设备实施方案 为继续深入推进餐饮服务环节“地沟油”、“瘦肉精”、“非法添加”、“假劣酒类”四项整治工作,加强餐饮服务单位自检能力建设,根据《餐饮服务食品安全监督管理办法》,按照市政府领导要求,经我局反复研究论证, ㎡ 、《食品安全快速检测操作规范》、《食品安全快速检测工作相关人员职责》。快速检测室或检测场所要确保光线良好,照度不低于110lux。 四、快速检测要求 1、各相关餐饮服务单位要有1‐2名经培训合格的高中以上学历的专(兼)职快速检测人员。 2、各相关餐饮服务单位必须对生鲜肉、食用油、酒类、熟肉制品、

水发水产品、果蔬及配比后的消毒液进行检测,可根据采购的实际情况适时增加检测项目。上述食品及食品原料和配比后的消毒液的检测率不低于30%。 3、各相关餐饮服务单位要做好《食品安全快速检测登记表》、《可疑(问题)食品处置登记》。记录表格由市局统一格式、统一要求,保存期不少于2年。 速检测工作。 七、相关要求 1、各级餐饮服务监管部门要高度重视,加强组织领导,做好辖区内餐饮服务单位食品安全快速检测工作的动员及培训工作,指导各餐饮服务单位按时购置设备及试剂试纸。 2、快速检测设备及试剂试纸的选择,由市局选定三家备选厂家,并

从资质、质量、服务、价格四个方面考察后,经研究确定一家企业,并从实际需要出发,统一设备配置标准。 3、各级餐饮服务监管部门应定期、不定期对食品安全快速检测工作及可疑(问题)食品的处置情况进行检查指导,及时纠正检测工作中的不规范行为。 4、快速检测工作开展前,对快速检测人员的培训工作,由各级餐饮

瘦肉精(盐酸克伦特罗)快速检测卡

猪瘟抗体快速检测试剂盒 ——(胶体金法)使用说明书 一、原理:本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)上,兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线(C)上,用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。当血清加入加样孔内,由于层析的原理,血清开始沿纸条移动,当遇上干燥的金标抗原,将其溶解,并带着金标抗原继续往上移动,至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有猪瘟抗体存在时,会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原,在检测上形成一个夹心的免疫复合物,呈一条紫红色线。样品中的抗体越高,色线颜色越深,判定为阳性。如果样品中没有猪瘟抗体,检测线(T)线上没有色带出现,判定为阴性。样品和金标抗原继续往上移至质控线时,此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合,在质控线(C)上形成一条紫红色线,证明本试纸有效。整个试验仅需20分钟。操作简便、快速、准确、灵敏度高,直观、结果容易判定。 二.产品组成:1、检测卡(1个):由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内,卡面上设有加样孔和观察孔。加样孔作为加入待检血清,观察孔内为试剂检测线(T),试剂质控线(C)。一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装,内装干燥剂。2、吸样管1个;3、5份塑料手套;4、使用说明书一份。 三.操作方法:1.用1.5ml样品管,采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右,使血清析出。2.将检测卡平置于桌面上,用吸样管吸取被检血清,在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。在室温下反应20分钟判定结果。(检测卡如在4℃保存,必须恢复至室温后方可进行检测) 四.结果判断:1.阳性:在检测线(T)处,质控线(C)处,各出现一条紫红色条带,判定为阳性;检测线(T)处条带色泽的深浅,依检测样品中猪瘟抗体效价的高低而变化,效价越高色带越深,反之越浅。2.阴性:在质控线(C)处,出现一条紫红色条带,检测线(T)处未出现一条紫红色条带,说明检测样品中无猪瘟抗体存在。3.无效:在检测线(T)处,质控线(C)处,都无明显条带出现,判定为试纸条无效。 五.诊断参考:被检样品加样后20分钟可与对照卡的色带滴度进行参考比较。1.当被检样品检测线(T)条带的色泽≥对照卡中1:16效价时,说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高,暂不需要进行猪瘟疫苗的接种免疫。2.当被检样品检测线(T)条带的色泽<对照卡中1:16效价时,说明检测样品中猪瘟抗体效价不能抵御猪瘟强毒攻击的最低保护滴度,为进行猪瘟疫苗接种时间。3.当被检样品检测线(T)处无明显色带出现,说明被检测样品中没有猪瘟抗体。如果猪群健康,应当及时进行猪瘟疫苗接种。

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