肿瘤坏死因子与肿瘤的研究进展 发表时间：2018-02-09T09:45:50.713Z 来源：《医师在线》2017年11月下第22期作者：张林王哲 [导读] TNF-α表达水平的增高预示着炎症反应的发生以及进一步加重，并提示有癌变倾向，对诊断早期病变有指导性价值。 （毓璜顶医院检验科；山东烟台264000） 摘要：肿瘤坏死因子（TNF-α）是一种由单核一巨噬细胞系统分泌产生的多功能细胞因子, 具有调节机体的免疫功能和导致肿瘤细胞坏死的特性。近年来， TNF-α在抗肿瘤中的作用引起国内外学者的高度关注。本文通过对TNF-α与肿瘤的研究做一综述，为生物学和医学提供参考依据。 【关键词】肿瘤坏死因子；肿瘤坏死因子受体；肿瘤；关系 1. TNF-α的分子结构 人的TNF-α基因长约2.76kb，小鼠为2.78kb，结构非常相似，均由4个外显子和3个内含子组成，分别定位于第6对和第17对染色体短臂上。 2. TNF-α的分布 TNF-α来源非常广泛，如单核-巨噬细胞系统、淋巴细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。TNF-α在体内以两种形式存在：可溶性的TNF-α（sTNF-α）和膜相关的TNF-α（mTNF-α）。 3. TNF-α的生物学活性 TNF-α是一种多功能的细胞因子，具有广泛的生物学特性。TNF-α不仅对肿瘤细胞具有细胞毒性和生长抑制作用；同时在机体的细胞功能调节、免疫和炎症反应等过程中起重要作用[1]。 4. TNF-α与肿瘤 TNF-α是迄今发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子。它在体内、体外均对肿瘤细胞有明显的细胞毒性，能特异性杀伤或抑制肿瘤细胞，而对正常细胞无毒性作用[2]。近年来，越来越多的国内外学者开始研究肿瘤的发生机制，期望能够找到癌症作用过程的关键靶点，从而实现肿瘤的预防及治疗。 4.1 TNF-α与皮肤癌 目前，许多致癌化合物被广泛应用于建立各个靶器官的肿瘤模型，进而研究人类肿瘤发生发展过程中的关键分子机制。Masami Suganuma等学者建立了小鼠皮肤癌的模型。同时Marques CM等学者对TNF-α在皮肤黑色素瘤发生发展中的影响进行了研究[3]。他们的研究表明， TNF-α在小鼠皮肤癌的发生发展过程中起到非常关键的作用，提示TNF-α很可能在人类癌症发生过程中也起到相同的作用。 4.2 TNF-α与乳腺癌 乳腺癌是危害女性健康的常见恶性肿瘤，近年来在我国发病率呈上升趋势。有研究表明，高剂量的TNF-α处理引起肿瘤中血管退行性改变和出血性坏死，表明TNF-α可以作为抗癌物质应用。但是，也有研究表明，在体内，肿瘤细胞中内源性TNF-α的分泌并不杀伤肿瘤，反而通过诱导恶性乳腺上皮细胞等肿瘤细胞增殖，并促进血管再生、肿瘤细胞侵袭和转移等引起肿瘤发生发展[4]。因此，到目前为止TNF-α并未广泛用于乳腺癌治疗。随着对TNF-α研究的深入，对其在乳腺癌中发挥作用的了解更加清楚，可能有助于提高临床监测乳腺癌进展的水平，为治疗乳腺癌提供新的靶点。 4.3 TNF-α与肝癌 据流行病学调查显示，近年来肝癌的发病率急剧增高，尤其在患有非酒精性脂肪肝、肝纤维化、肝硬化的肥胖病人中更为突出。越来越多的研究表明，肝癌和炎症之间存在密切联系，许多分子机制被提出，它们对肝癌发展起到重要作用，包括最近报导的淋巴毒素信号肽。最近，Park等[5]证实IL6和TNF-α具有促肿瘤作用。TNF-α还能诱导依赖NF-κB基因编码的抗凋亡分子产生，促进细胞存活，从而发生致瘤作用。最后，通过对IL-6和TNF-α的研究，Park等为肝癌的预防和治疗提供了一个新的潜在靶点。 4.4 TNF-α与肺癌 在全球，肺癌的发病率和死亡率均癌症之首。近年来在我国发病率呈上升趋势，成为首位恶性肿瘤死亡原因。近年来发现炎症细胞因子在肺癌的发生、发展及转归中起重要作用。Yao LK1等[6]研究结果提示TNF-α在肺癌的发病和进展中起重要的调节作用，不仅将为肺癌的早期诊断提供可靠的理论基础，更为肺癌的治疗、药物的研制和筛查提供潜在的新靶点。 综上所述，TNF-α作为炎性因子，不仅只在炎症中表达增高，在肿瘤以及癌前病变中的表达也呈升高的趋势。TNF-α参与到全身各系统炎症与肿瘤性疾病的发生与发展之中。TNF-α在组织器官从炎症发展到癌变的过程当中，扮演了重要角色；并在恶性肿瘤的转移、浸润方面也具有关键作用。因此，TNF-α表达水平的增高预示着炎症反应的发生以及进一步加重，并提示有癌变倾向，对诊断早期病变有指导性价值。 参考文献： [1] Cosic I, Cosic D, Lazar K. Analysis of Tumor Necrosis Factor Function Using the Resonant Recognition Model. Cell Biochem Biophys. 2016 Jun;74(2):175-80. [2] Hu J, Yang T, Xu H. A novel anticancer agent icaritin inhibited proinflammatory cytokines in TRAMP mice. Int Urol Nephrol. 2016 Jun 9. [3] Marques CM, MacNeil S. Use of a Tissue Engineered Human Skin Model to Investigate the Effects of Wounding and of an Anti-Inflammatory on Melanoma Cell Invasion. PLoS One. 2016 Jun 7;11(6): [4] Yin Y, Chen X , Shu Y. Gene expression of the invasive phenotype of TNF-alpha-treated MCF-7 cells [J] . Biomed Pharmacother ,2009 ,63 (6) :421-428. [5] Eek Joong Park, Jun Hee Lee, etal. Dietary and genetic obesity promote liver inflammation and tumorigenesis by enhancing IL-6 and TNF expression. Cell, 2010, 140(2) :197-208. [6] Yao LK1, etal.Relationship between expression of HDAC2, IL-8, TNF-α in lung adenocarcinoma tissues and smoking. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2016 May 17;96(18):1410-3.
肿瘤坏死因子 摘要恶性肿瘤疾病目前仍是全世界需要共同面对的一个医学难题，其发病隐匿，早期容易被忽视，而临床患者多数已到中晚期，此时的疾病已很难治疗。肿瘤坏死因子是一种能使肿瘤出血，并能抑制、杀伤体外培养的肿瘤细胞的蛋白类物质，1984年TNF基因的克隆开辟了临床试验的时代，是第一个用于肿瘤生物疗法的细胞因子，但因其缺少靶向性且有严重的副作用，对该基因的研究和应用形成了很大的障碍，目前很多研究人员正致力于该基因改造与应用。 关键词TNF、肿瘤 1TNF的生物学特征 TNF按其结构可以分为两种：TNFα和TNFβ。TNFα是一种单核因子，主要由活化的单核细胞和巨噬细胞产生，TNFβ是一种淋巴因子，由活化的T细胞和NK细胞产生，目前研究多为TNFα。 人的TNFα位于第6号染色体短臂上，与MHC紧密连锁[1]，人的TNFα基因大小为2.76kb，由4个外显子和3个内含子组成。TNFα的蛋白质结构有多种形成，有二聚体、三聚体、五聚体，其中有生物活性的是三聚体。TNFβ位于TNF α的5’端，同样由4个外显子和3个内含子构成，其中第4个外显子与TNFα高度同源，编码80%-90%的成熟蛋白质。 2 TNFα的来源与表达 TNFα在人体内的来源途径有很多，如单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞等都可以在一定的条件下产生和释放TNFα。目前认为TNFα主要的生物合成场所有心、肝、肺、肾[2]。各种外来刺激如内毒素脂多糖(LPS)、肠毒素、霉菌抗原、某些寄生虫的溶解物、病毒颗粒等，均可以引起TNFα的表达与释放。 在正常情况下，TNFα只由心肌间质的巨噬细胞产生，在某些病理状态下，如感染或内毒素的刺激下，心脏可以产生TNFα，Giroir[3]等研究证实这一点，在这些应激状态下，成熟的心肌细胞同样可以产生TNFαmRNA及其蛋白质，且产生的量同巨噬细胞产生的差不多。 Kleine等[4]证实，在生理状态下，脑内在结构和功能方面与巨噬细胞相似的细胞如神经元、小胶质细胞、血管内皮细胞均可合成分泌TNF、IL-6等细胞因子。在炎症情况下，这些细胞因子的水平明显升高，且对中性粒细胞有明显趋化作用[5]。有研究表明，有大约20%的恶性肿瘤的发生与慢性炎症有关[6]。 3 TNFα受体 通过对TNFα分子一级结构的研究表明，C-末端在TNFα的生物学活性中起决定性作用。由于C-末端参与TNFα高级结构的构成，只要切掉1个氨基酸就可使TNFα丧失生物学活性。而N-末端的变化范围较大，适当改变其长度并不影响其生物学活性，N-末端还与TNFα对受体的结合能力密切相关，可能为与受体结合的部位。 TNFα生物学效应的发挥，有赖于其与靶细胞上的TNFR相结合，并通过受
检验主管理专业考试题及答案-----------------------作者：
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2001年检验主管技师资格考试试题（专业知识） 一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。 1.脑组织主要以什么为能源供给 A.葡萄糖 B.脂肪 C.蛋白质 D.氨基酸 E.核酸 答案：A 2.载脂蛋白B族中主要成分是 A.ApoB48 B.ApoB75 C.ApoB100
D.ApoB41 E.ApoB36 答案：C 3.高钾血症是指血清钾高于 A.3.5mmol/L B.4.0 mmol/L C.4.5 mmol/L D.5.0 mmol/L E.5.5 mmol/L 答案：E 4.“胆酶分离”通常是哪种疾病的征兆 A.急性心肌梗死 B.肝癌 C.脂肪肝 D.肝坏死 E.胆石症 答案：D
5.-羟丁酸脱氢酶检测，主要是反应下列乳酸脱氢酶同功酶中哪一种的活性 A.LD1 B.LD2 C.LD3 D.LD4 E.LD5 答案：A 6.关于血肌酐和尿素叙述错误的是 A.尿素的浓度取决于机体氮的分解代谢和肾脏的排泄能力 B.Scr和尿素浓度可反映肾小球滤过功能 C.血尿素测定比血肌酐测定更能准确地反映肾小球滤过功能 D.尿素酶法测定尿素反应专一，特异性强 E.酶偶联法测定肌酐特异性高，但价格昂贵 答案：C 7.对原发性甲状腺功能亢进病人，下列哪项是正确的 A.TT3 TT4下降，TSH升高 B.TT3 TT4下降，TSH下降
大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α）再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：360ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
第18卷 第1期医学研究生学报Vol.18 No.1 2005年1月Journal of Medical P ostgraduates Jan.2005 ?综 述?热休克蛋白在肿瘤治疗领域中的研究进展 颜士岩综述, 张东生, 郑 杰审校 (东南大学基础医学院病理与病理生理学系,江苏南京210009) 摘要: 热休克蛋白(HSP)是一个成员庞大的多肽类蛋白质家族。大量资料表明,HSP作为分子伴侣,参与其他蛋白质的折叠、转运、合成等过程,并可与细胞内的其他肽类蛋白质结合,参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程。近来随着对热休克蛋白研究的不断深入,HSP在肿瘤发病学、治疗和预防医学中的意义已引起广泛关注,成为近年来最活跃的研究领域之一。 关键词: 热休克蛋白; 肿瘤; 诊断; 治疗 中图分类号: R739.5 文献标识码: A 文章编号: 100828199(2005)0120059204 Advance in research on heat shock proteins in therapeutic field of tumor Y AN Shi2yan reviewing,ZH ANG D ong2sheng,ZHE NGJie checking (Department o f Pathology and Pathophysiology,School o f Basic Medical Science,Southeast Univer sity,Nanjing 210009,Jiangsu,China) Abstract: Heat sh ock protein(HSP)is a family of poly2peptdic2proteins with many members.A great deal of data sh ow that heat sh ock proteins act as m olecular chaperones to regulate protein folding,translocation and as2 sembly,it can combine with other peptidic2proteins existing in cells and participating in the process of anti2dam2 age,repair and therm otolerance of cells.In recent years,with the progress of research in this field,it has arisen extensive attentions of the application of heat sh ock proteins in etiology,therapeutics and prevention of tum or. HSP becomes one of the m ost active research field. K ey w ords: Heat Sh ock Protein; T um or; Diagn osis; Therapy 0 引 言 热休克蛋白(heat sh ock protein,HSP)是所有原核细胞和真核细胞在生理、病理及环境因素(高温、缺氧或病毒感染)下均可产生的一组高度保守的蛋白质分子家族。最近的研究发现,HSP与肿瘤的发生、发展、肿瘤免疫与治疗以及机体对肿瘤治疗药物耐药性的发生和肿瘤的预后等都有密切关系。本文仅就HSP 在肿瘤治疗领域中的新进展作一综述。1 H SP的概念、种类和功能 1962年Ritossa研究果蝇唾液腺染色体时发现,将在25℃状态下培养的果蝇幼虫置于30℃～32℃的环境中时,果蝇巨大的唾液腺染色体上出现了新的膨突,其后正常蛋白质的合成被抑制,但却合成了一组特殊的蛋白质,由于这组特殊的蛋白质是在热刺激下产生的,故称其为HSP[1]。HSP通常可分为小分子HSP(相对分子质量为40000)、HSP60、HSP70、 ? 9 5 ? 收稿日期: 2004206224; 修订日期: 2004209208 基金项目: 国家863计划资助项目(批准号:2002AA302207);国家自然科学基金资助项目(批准号:30371830);江苏省自然科学基金资助项目(批准号:BK2001003);江苏省中医药中西医结合重点项目(批准号:H027);东南大学科学基金资助项目(批准号: 9223001162) 作者简介: 颜士岩(19732),男,江苏淮安人,助教,医学硕士研究生,从事肿瘤病理学专业。 通讯作者: 张东生(19512),男,河南罗山人,教授,医学硕士,博士生导师,从事肿瘤病理专业。
注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白使用说明书 【药品名称】 通用名：注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白 商品名：强克 英文名：Recombinant Human TNF Receptor-Ig Fusion Protein for Injection 汉语拼音：Zhusheyong Chongzu Ren Erxing Zhongliuhuaisiyinzi Shouti －Kangti Ronghedanbai 【性状】 本品为无菌白色冻干粉针剂。 【主要成分】 每瓶含重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白25毫克，甘露醇40毫克，蔗糖10毫克，三羟甲基氨基甲烷1.2毫克。用1毫升灭菌注射用水溶解。【药理毒理】 1.药理重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白是一个二聚体的融合蛋白，包含人75KDa肿瘤坏死因子受体（TNFR）（p75）的细胞膜外配体结合部分与人IgG1的Fc片段，包含934个氨基酸，表观分子量约为150K道尔顿（KDa）。 TNF是机体自然产生的一种细胞因子，参与正常的炎症和免疫反应。在强直性脊柱炎关节病变的炎症反应中，TNF起着重要的作用。TNF存在55KDa蛋白（p55）和75KDa蛋白（p75）两类受体，它们均以单体的形式存在于细胞表面。TNF的生物学活性取决于它与细胞表面两类受体分子的结合。 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白的作用机制是竞争性地与TNF 结合，阻止TNF与细胞表面TNF受体的结合，抑制TNF的生物学活性。 2.毒理小鼠急性毒性试验结果显示，静脉注射1.09g/kg剂量的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，未见毒性反应。猴长期毒性试验结果显示，每周2次连续皮下注射180天15.0 mg/kg剂量的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，未见有明显的毒性。 【药代动力学】
免疫学复习题 一、简答题 1、试述IgG、IgM、IgA的结构特点和生物学特性 2、机体内的抗毒素可通过哪些途径获得使用抗毒素应注意什么问题 3、某人服用磺胺后，出现溶血性贫血的症状，试用免疫学知识解释其发生机制。 4、HIV 感染后是如何损伤免疫系统的 5、肿瘤是怎样逃逸机体免疫系统的杀伤作用的 二、单选题 1、免疫对机体是： E A．有害的 B．有利的 C．有利也有害 D．有利无害 E．正常条件下有利，异常条件下有害 2、免疫细胞产生、发育、分化成熟的场所是： B A．淋巴结和脾脏 B．胸腺和骨髓 C．淋巴结和胸腺 D．骨髓和粘膜相关淋巴组织 E．淋巴结和骨髓 3、决定抗原特异性的分子基础是 A A.抗原表位 B.抗原的大小 C.抗原的电荷性质 D.载体的性质 E.抗原的物理性状 4、 TD-Ag是指 E A 是指在胸腺中加工处理的抗原 B 可直接激活B细胞产生抗体 C不能诱导产生免疫记忆 D只能诱导产生IgM类抗体 E 既能引起细胞免疫应答，又能引起体液免疫应答 5、与蛋白质载体结合后才具有免疫原性的物质是 D
A.完全抗原抗原抗原 D.半抗原 E.超抗原 6、接种牛痘疫苗后机体产生了对天花病毒的免疫力,反映了这二种抗原分子的 B A. 特异性 B. 交叉反应性 C. 分子大 D. 异种性 E. 化学结构复杂 7、超抗原A A.可以多克隆激活某些T细胞或B细胞 B.需经抗原提呈细胞加工处理 C.与自身免疫病无关 D.有严格的MHC限制性 E.只能 活化一个相应的T细胞克隆 8、特异性与抗原表位结合的抗体的部位是C A VL B VH C HVR D CH E CL 9、在脐带血可测到的抗体是A A IgG、IgM B IgM、IgA C IgA、IgG D IgD、IgM E IgE、IgM 10、3—6个月婴儿易患呼吸道感染是因为粘膜表面哪一类Ig不足A B. IgM C. IgG E. IgE 11、介导NK细胞发挥ADCC效应的Ig主要是：C B. IgM C. IgG E. IgE 12、补体： A A.是一组具有酶活性的蛋白质 B. 对热稳定 C. 具有溶菌作用，但无炎症介质作用 D.参与免疫病理作用 E．C1 在血清含量最高 13、三条补体激活途径的共同点是： E A.参与的补体成分相同 B. 所需离子相同转化酶的成分相同
肿瘤坏死因子α 文章目录*一、肿瘤坏死因子α的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、肿瘤坏死因子α的 正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、肿瘤坏死因子α 的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、肿瘤坏死因子α的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、肿瘤坏死因子α的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应 肿瘤坏死因子α的基本信息 1、定义α肿瘤坏死因子(TNF α)是一种主要由巨噬细胞和 单核细胞产生的促炎细胞因子,并参与正常炎症反应和免疫反应。α肿瘤坏死因子在许多病理状态下产生增多,包括败血症、恶性 肿瘤、心脏衰竭和慢性炎性疾病。在重症类风湿关节炎患者的血液及关节中都可发现肿瘤坏死因子增多。 2、专科分类肿瘤科 3、检查分类免疫检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹空腹
肿瘤坏死因子α的正常值和临床意义 1、正常值 4.3±2.8ng/ml 2、临床意义测定血清或其他体液中TNF浓度,对原发性或继发性肾小球疾病、器官移植性排异、肿瘤、重症感染等疾病有诊断意义。 肿瘤:许多肿瘤细胞可产生TNF,因此在多种肿瘤时机体内TNF表达明显升高。TNF又可通过细胞毒作用,杀死肿瘤细胞或抑制某些肿瘤细胞增殖。 风湿性关节炎患者的滑膜中有大量TNF。 在脓毒败血症、感染性肺炎等严重炎性疾病时血清中TNF含量明显增高。许多寄生虫病患者中TNF也显著改变。艾滋病患者体液中TNF也高于正常人。疟疾抗原、病毒和细菌均可诱导TNF 产生,TNF又反过来具有抗病毒、抗细菌、抗疟疾作用。 TNF与移植排斥反应密切相关,在患者的血清或尿液中TNF 的表达与排斥反应程度呈正相关。 肿瘤坏死因子α的检查过程及注意事项 1、检查过程用双抗体夹心酶免疫分析法。将TNF α单克隆抗体包被于PVC板上,样品种的TNF α和单抗体结合后再与辣根过氧化物酶标记免抗TNFα多克隆抗体结合,过氧化物酶与TMB
人肿瘤坏死因子-αELISA试剂盒 产品编号：SEKH0047 适用于人血清、血浆或细胞培养上清液等样本 仅供研究，不用于临床诊断
目录 背景介绍 (01) 检测原理 (01) 注意事项 (02) 安全提示 (02) 试剂盒组成及储存 (03) 自备实验器材 (03) 样品收集及储存 (03) 试剂准备 (04) 检测步骤 (06) 结果判断 (06) 参数表征 (07) 参考文献 (09) 常见问题分析及解决办法 (10)
背景介绍： TNF-α是一种主要由单核细胞和巨噬细胞产生的单核因子。人的TNF-α约2.76kb，由4个外显子和3个内含子组成。人TNF-α分子量为17kDa。在氨基酸水平上，人与鼠的TNF-α有79％同源性，TNF-α的生物学作用无明显的种属特异性。人类多种细胞均可表达TNF-α，包括B细胞，结肠柱状上皮细胞，NK细胞，巨噬细胞，单核细胞，肥大细胞，中性粒细胞等。TNF-α的生物学活性非常复杂，包括对造血、免疫和炎症的调节；对血管和凝血的影响和对多种器官（肝、心脏、骨、软骨、肌肉和其它组织）的作用。 检测原理： 本ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗人TNF-α单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的人TNF-α会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗人TNF-α抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的人TNF-α发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的人TNF-α，则HRP会使无色TMB变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450 nm（OD=450nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的人TNF-α浓度与OD成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人TNF-α的浓度。 原理图：
文章编号: 1007-6611(2006)03-0311-04 肿瘤坏死因子的研究进展 吕志敢, 郭 政 (山西医科大学第二临床医学院麻醉科, 太原 030001) 关键词: 肿瘤坏死因子; 肿瘤坏死因子受体; 病理学; 免疫学 中图分类号: Q71,R392,R73 文献标识码: A 1975年,Carswell发现被细菌感染后的小鼠血清中有一种蛋白类物质可致肿瘤出血,并能抑制、杀伤体外培养的肿瘤细胞,被命名为肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TN F),又叫恶病质因子(cachectin)。从此对它的研究进入了一个新的时期,至今方兴未艾,几十年来取得了巨大的进展。本文对近年来有关TN F2α的研究进展作简要的综述。 1 TNF2α的生物学特性 人类TNF2α基因大小为2.76kb,由4个外显子和3个内含子组成,与MHC紧密连锁,定位于第6对染色体短臂上,小鼠的基因为2.78kb,与人的结构非常相似,定位于第17对染色体短臂上。TNF按其结构分两型:TNF2α和TNF2β,其中由活化的巨噬细胞、单核细胞和T细胞产生的能使肿瘤坏死的因子称为TN F2α(旧称TN F),又称恶病质因子(cachectin);而把由活化的T细胞和N K细胞产生的淋巴毒素(lymphotoxin,L T)称为TN F2β,目前对其功能所知有限。目前研究较多的是TN F2α,它是一种由157个氨基酸组成、相对分子质量为17000的可溶性多肽,以二聚体、三聚体或五聚体的形式存在于溶液中,成熟型TN F2α的活性形式为三聚体。TN F2β基因位于TN F2α基因的5′端,相隔1.2kb,每个基因约有3000个碱基对,有4个外显子和3个内含子,其中第4个外显子与TN F2α高度同源,编码80%-90%的成熟蛋白质,这些均提示这两个基因来自同一个祖先。但前3个外显子和3个内含子都是不同源的,调节基因复制的5′端也有很大区别,这些说明这两个基因是不同的[1]。 2 TNF2α的来源与表达 TN F2α来源极广泛,体内的多种细胞,如单核/巨噬细胞、淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、表皮细胞、角质细胞、星形细胞和成骨细胞等均具有产生和释放TN F2α的能力。目前认为心、肝、肺、肾是TN F2α的生物合成场所[2]。TN F2α的主要刺激因素是脂多糖(L PS)、病毒、真菌、过敏毒素、IL21和免疫复合物等。 在正常情况下TN F2α仅在心肌间质的巨噬细胞中产生。G iroir等[3]的研究表明,成熟的心肌细胞在某些应激状态下也具有产生TN F2αmRNA及其蛋白质的能力,此时产生的TN F2α可直接影响心功能,参与了多种心脏病的病理过程。感染和内毒素血症是心脏产生TN F2α的重要刺激因素。Kapa2 dia等[2]证明在内毒素的刺激下心肌细胞和巨噬细胞几乎产生同样多的TN F2α。 体内TN F2α的表达具有高度的组织特异性。在生理条件下,脾、肝、肺、胸腺及肾脏的组织均有TN F2αmRNA的表达;而在脂多糖刺激后,心脏、胰腺、子宫及输卵管等多脏器均快速合成表达TN F2αmRNA及蛋白质[4]。 K leine等[5]证实,脑内多种在结构和功能方面与巨噬细胞相似的细胞如神经元、小胶质细胞、血管内皮细胞在生理状态下均可合成分泌TN F、IL26等细胞因子,在炎症情况下这些因子水平多显著升高,并对中性粒细胞有明显趋化作用。 3 TNF2α受体(TNFR)的分类及表达 3.1 TN F2α的生物学活性主要是通过细胞膜上的特异受体传递信号而实现的,TN F2α受体(TN FR)广泛存在于肝、肺、肾、肠道及肌肉组织中。TN F2α与靶细胞膜上的TN FR结合产生生物学效应,通过受体后效应将信息传递到胞核,使mRNA表达并进而合成蛋白质。Douzinas等[6]认为,TN F2α等细胞因子一方面与脏器细胞膜上的受体结合产生效应;另一方面,细胞因子与循环中的可溶性受体结合,使循环中的细胞因子减少,但在组织中的表达却增加,其在局部中的过度生成导致脏器损害。 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30471656)
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 药品名称： 通用名：人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。 试剂盒组成 120倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（450ng/L）0.5ml×1瓶 3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液2ml×1瓶 4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行实验。 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
目录 引言 (1) 研究对象与方法 (3) 结果 (7) 讨论 (11) 结论 (15) 参考文献 (16) 综述 (20) 附录 (29) 中英文对照缩略词表 (31) 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文 (32) 致谢 (33)
重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性胸腔积液或腹腔积液的临床研究引言 引言 恶性胸腔积液（malignant pleural effusion, MPE）是指由肺癌或其他部位恶性肿瘤累及胸膜或胸膜原发性肿瘤所致的胸膜腔积液[1]，是中晚期恶性肿瘤患者的常见并发症之一，常见于肺癌、乳腺癌和淋巴瘤[2]。肿瘤类型在男性和女性之间存在一定差异，男性常见为肺癌、淋巴瘤、胃肠道肿瘤；女性常见为乳腺癌、生殖道肿瘤、肺癌、淋巴瘤[3]。恶性胸腔积液的发生机制主要是肿瘤阻塞引起壁层胸膜血管和淋巴系统引流障碍，或肿瘤转移至纵隔淋巴结而导致胸腔积液吸收减少，或原发肿瘤和转移性病变直接侵犯和伴随的炎症增加毛细血管通透性所导致[4,5]。恶性胸腔积液常常进展迅速，且积液量较多，易并发肺不张和肺部反复感染[6]，影响心肺功能，造成严重的呼吸困难和循环功能障碍。恶性胸腔积液不仅严重影响患者的生活质量，而且大大降低了患者行进一步治疗的机会，甚至会促进患者死亡。及时诊断和治疗恶性胸腔积液能在很大程度上改善患者的症状及体征、提高其生活质量并且延长生存时间，对患者的后期治疗有着重要意义。目前治疗恶性胸腔积液的主要目的是缓解患者的各种严重症状、改善其生活质量[7], 并防止积液再次产生[8]。恶性腹腔积液是恶性肿瘤扩散转移至腹腔引起的腹腔内异常体液潴留[9]，它的出现往往也预示肿瘤已到晚期，据相关文献报道[10]，其一年生存率低于10%。恶性腹腔积液绝大部分是由于继发性恶性肿瘤侵犯腹膜引起的，如胃癌、卵巢癌、肠癌、胰腺癌等，极少数是由于原发的腹膜癌引起的。恶性腹腔积液的临床症状主要表现为腹胀、消化功能严重障碍、乏力消瘦，体检可发现腹围增大、移动性浊音阳性等。恶性腹腔积液具有顽固、难治、易复发的特点,不仅加快疾病进展,更严重影响患者的生存质量[11]。 关于恶性胸腔积液或恶性腹腔积液治疗的文献报道及临床研究颇多，主要涉及到外科手术治疗、全身化疗、放射治疗、胸腔穿刺和置管引流、局部腔内药物灌注治疗、中医治疗等方法[12-21]，各治疗手段均具有一定的疗效、适应症、禁忌症以及毒副反应，适用于不同的病例及肿瘤不同临床阶段。但总体上对恶性胸腔积液的治疗仍停留在姑息治疗阶段，通常是以胸腔的局部治疗为主[22]。胸腔局部用药如硬化剂、抗肿瘤药物、生物免疫制剂等，可直接抑制或杀伤肿瘤细胞以及促进胸膜粘连闭锁，从而抑制胸腔积液形成，疗效均比较好[23]。近年来， 1
一、名词解释 1．M蛋白2．ASO 3．肥达反应4．类风湿因子 5．抗核抗体6．肿瘤标志物7．C-反应蛋白 二、填空题 1．血清M蛋白阳性提示单克隆免疫球蛋白增殖性疾病，可见于、、、重链病和半分子病等。 2．血清中最多的一种Ig为，大多数抗细菌、抗病毒、抗毒素抗体为类免疫球蛋白，含量最少的免疫球蛋白为。 3．补体C3作为急性时相反应蛋白，在、、、和移植物排斥反应时增高。 4．检查梅毒抗体的定性试验有快速血浆反应素试验（RPR）、不加热血清反应素玻片试验（USR）和性病研究实验室试验（VDRL），VDRL法为WHO推荐使用，这类试验敏感性高、特异性。 5．TORCH是一组病原微生物英文名称的第一个字母缩写组成的，它们是孕期感染的主要病原微生物。T代表，O代表，R代表，C代表，H代表单纯疱疹病毒。 6．确有溶血型链球菌感染，但ASO不见增高可因该溶血型链球菌株不产生或产生很少量的链球菌溶血素O，此时应联合检查或以提高阳性率。 7．类风湿因子检测主要用于的辅助诊断，但并不是该病独有的特异性抗体，其它的自身免疫性疾病，如、、等亦可阳性，还可见于某些感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、结核病等。 8．某30余岁女青年，面部及手部出现不规则形红斑，并有严重关节疼痛及胸闷，做ASO检测，阴性，?RF阳性（中等滴度），抗核抗体阳性，可初步诊断为。 9．器官移植的成败主要取决于供者和受者的组织相容性，其中型别是否相符起关键作用。 10．传统的方法和细胞学分型方法有许多不足之处，随着科技的进展，技术已经成为HLA分型的主流。 三、判断题 1．IgG是唯一能通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。（） 2．慢性活动性肝炎、肝硬化患者的血清Ig呈多克隆性增高。（） 3．补体C3、C4的水平可用于反映系统性红斑狼疮的活动程度，在活动期增高。（）4．AIDS患者CD4+细胞减少，CD4/CD8比值降低，甚至倒置（<1）。( ) 5．T淋巴细胞表面有多种特异性抗原，称白细胞分化抗原（CD），例如CD3代表总T 淋巴细胞，CD4代表T抑制细胞（T S），CD8代表T辅助细胞（T H）等。( ) 6．由于A群溶血型链球菌感染后，血清中ASO持续数月到半年才下降至正常水平，故一次测定结果偏高，不一定就是近期感染的佐证。( ) 7．早期使用抗生素或免疫抑制剂治疗者，在伤寒沙门菌感染时，肥达反应可出现假阴性。（） 8．肥达反应单次效价增高，判断的可靠性较差，动态观察对诊断伤寒沙门菌感染意义更大。（） 9．检查梅毒螺旋体特异性IgG抗体，可用于观察判断疗效。（）
肿瘤坏死因子（ＴＮＦ—Ｑ）及肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ—Ｉ） 在胆管癌中的表达 硕士研究生：贾友鹏 指导教师：王忠裕教授 专业名称：外科学 摘要 胆管癌是消化系统的一种高度恶性肿瘤，来源于胆管上皮细胞。在我国。胆管癌的发病睾逐年增加。由于缺乏有效的早期诊断方法以及对化疗药物敏感性差，胆管癌的预后也较差。目前认为细胞因子失衡与胆管癌的发病有关，关于胆管癌与细胞因子的关系的研究也得到了广泛重视。肿瘤坏死因子（咖ｏｒ艄＝ｌＤｓｉｓ正托ｃｏｆｌｎ疆）是细胞因子家族中最重要的成员之一，具有多种生物学功能。它参与肿瘤细胞的生长、增殖和分化调控，同时在诱导肿瘤细胞调亡、杀伤胂癌细胞方面也具有特殊意义。曰晤可分为两类；ｎ匹．ａ和曰哪艮墨。在诱导肿瘤缅穗强亡的过程牵．ＴＮＦ．Ｑ的作用明显强于ｎ师．Ｂ。ｎ盯的生物学功能主要是通过其相应的细胞膜受体嗍（ｎｌｍｏｒ姗ｓｉｓ纽自ｏｒ唧ｔｏｆ）介导的。１ＮＦＲ也可分为两类：ｎ旺Ｒ—Ｉ和眦．ＩＪ．目前认为ｎ晒．口的细胞毒活性主要是由耵盯Ｒ．Ｉ介导的。现在。利 用ｎ妤治疗恶性肿瘤的研究较多，但１ｒｒ师与胆管癌之间的关系尚不明确。 目的探讨ｎ吓．ｑ及１ＮＦＲ－Ｉ在胆管癌中表达的情况，与胆管癌分化程度、漫润、转移倍况之间关系。以及在胆管癌和先天性胆总管囊肿中ＴＮＦ．ｑ及ｎ昨Ｒ．Ｉ表达的差异． 方法选取经外科手术切除的胆管癌病例４８鲷，先天性胆总管囊肿病例１９例，采用ｓＰ免疫组织化学方法，检测ＴＮＦ，８取嘲．１镪表达镶况。 结果ＴＮＦ．ｎ主要在胞浆中表达。了砸Ｒ．Ｉ在胞成和胞浆中均有表达。胆罾癌的ｎ旺，ｄ表达阳性率为２５％（１２，４８），ｎ晒Ｒ．１的表达阳性率为７５％（３６，４８），ｎ虾．ｑ的表达明显低于１ＮＦＲ．Ｉ的表达，二者比较具有显著性差异。Ｐ值＜ｏ．００５。耵旺．ｄ的表达强度在胆臂痦不同的分化程度、不同的漫润深度。有无淋巴结转移等情况中均无明显差异．ｐ值均＞Ｏ．０５：１Ｎｎｌ．Ｉ的表达强度与胆管癌的分化程度、淋巴结转移与否亦无相关性，Ｐ值均＞ｏ．０５，但在浸润深度方面?１－ＮＦＲ－Ｉ在未侵出浆膜（Ｔ沁ｋ）的癌组织中韵表达殇疑强于己侵出蓑谈‘．ｒ，）鲍癌组织，Ｐ值＜Ｏ，Ｏ晒。在先天性靼总管囊肿的病例孛。也见到ｎ丑乙口和删Ｆ舡２的表达。其中
肿瘤坏死因子 1975年E.A. Carswell等人发现接种卡介苗的小鼠注射细菌脂多糖后，血清中出现一种能使多种肿瘤发生出血性坏死的物质，将其命名为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF)。八十年代人们发现其在消耗症中起了重要作用，又称恶液质素。TNF主要由活化的巨噬细胞，NK细胞及T淋巴细胞产生。1985年Shalaby把巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α，把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT)命名为TNF-β。虽然TNF-α与TNF-β仅有约30%的同源性，但它们却拥有共同的受体。TNFα的生物学活性占TNF总活性的 70 %～95 %，因此目前常说的TNF多指TNF-α。1984年TNF基因的克隆开辟了临床试验的时代，是第一个用于肿瘤生物疗法的细胞因子，但因其缺少靶向性且有严重的副作用，目前仅用于局部治疗。 1.别名:恶液质素（Cachectin）巨噬细胞毒素（Macrophage cytotoxin）坏 死素（Necrosin ）细胞毒素(Cytotoxin) 肿瘤坏死因子α(Tumour necrosis factor-α) 出血因子(Hemorrhagic factor) 巨噬细胞毒性因子(Macrophage cytotoxic factor) 分化诱导因子(Differentiation-inducing factor) 2. 来源:巨噬细胞(Macrophages) 自然杀伤细胞(Natural killer cells) T淋巴细胞(T-lymphoblastoid Cells) B淋巴细胞(B-lymphoblastoid Cells) 肥大细胞(Mast cells) 成纤维细胞(Fibroblasts) 平滑肌细胞(Smooth muscle cells) 乳腺肿瘤细胞(Breast tumor cells) 卵巢肿瘤细胞(Ovarian tumour cells) 星形胶质细胞(Astrocytes) L-929细胞(L-929 cells) 枯氏细胞(Kupffer’s cells) 上皮细胞(Epidermal cells) 颗粒细胞（Granulosa cells）