乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA临床研究监测结果相关性分析及临床应用
王凤岚1 黄朝芳2 冯万周3（1宝鸡市中心医院感染科 陕西 宝鸡 721008；
2旬阳县中医院检验科 陕西 旬阳 725700；3宝鸡市人民医院输血科 陕西 宝鸡 721000）
【摘要】 目的 分析了解乙肝血清免疫标志物的各种表达模式与乙肝病毒含量的相关性，为临床诊断、治疗提供
依据。方法 应用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）检测乙型肝炎免疫标志物，同时应用实时荧光定量聚合酶链反应
（FQ-PCR）技术定量监测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）。所有检测标本乙肝血清免疫标志物和乙肝病毒含量同时检测。
结果 乙肝血清免疫抗原标志物乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）阳性其HBV-DNA均为阳性，且含量较高；乙肝血清免疫标志物大三阳［HBsAg阳性乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性、乙型肝炎病
毒核心抗体（HBcAb）阳性］模式中其HBV-DNA阳性率为94.61%；乙肝血清免疫标志物小三阳［HBsAg阳性、HBeAb
阳性、HBcAb阳性］模式中其HBV-DNA阳性率为39.26%；乙肝血清免疫抗体标志物HBsAb+、HBcAb+模式中HBV
-DNA阳性率显著减少。结论 在乙肝检测中应联合应用两种方法进行检测，提高检出率，避免漏诊，为临床HBV感
染、复制及传染性的判断以及疗效分析提供更为可靠的判断依据。
【关键词】 荧光定量PCR HBV-DNA 时间分辨（TRFIA）
乙肝血清免疫标志物［乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb），乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb），乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg），乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb），简称两对半］测定与HBV-DNA监测是目前乙型肝炎临床早期诊断和疗效评估主要手段，其中乙肝两对半指标是反映机体感染后免疫状态的间接指标［1-2］，HBV-DNA则可准确反映机体感染乙肝病毒的现状，因为PCR能定量检测乙肝病毒核酸，是病毒是否存在、是否复制及其数量多少的最直接指标［3］。两种方法测定结果的相关性分析有助于为临床制定科学的乙肝防治方案［4］。作为感染性疾病科的专科实验室，我们自2004年引定了时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术和实时荧光定量（FQ-PCR）技术，多年来通过大量监测数据及相关性资料分析，为临床制订对不同感染阶段患者实施不同抗病毒或被动免疫方案提供了帮助，现总结如下。
1 资料与方法
1.1 资料来源 2010年7~12月本院感染性疾病科住院病人及门诊就诊者719例，每例被检测者同时进行乙肝两对半和HBV-DNA检测。
1.2 仪器试剂1.
2.1 时间分辨荧光免疫分析仪 型号：DR-6608、乙肝血清免疫标志物定量检测试剂盒（中山达安）。标准曲线拟合方式：FITTING，METHOD，最低检出量：0.5 ng/ml。
1.2.2 实时荧光定量扩增仪型号 DA-7600、乙型肝炎病毒定量检测试剂（中山达安公司）。PCR-荧光探针法，线性范围：1.0×103~1.0×109IU/ml。最低检出量：1.0×103IU/ml。
1.3 检测方法
1.3.1 TRFIA检测乙肝血清免疫标志物（两对半） 静脉采血2~3ml，4℃放置2h后分离血清备用（标本长期保存需将标本置于-20℃以下）；铕标记抗原（抗体）实验前1h用去离子水溶解、缓冲液稀释；经加样、洗剂、增强、荧光检测等依据标准曲线定量。记录乙肝血清免疫标志物模式。
1.3.2 FQ-PCR技术监测HBV-DNA含量 静脉采血2~3ml，室温放0.5~1h后分离血清于无菌离心管中备用（标本长期保存需将标本置于-20℃以下）。经DNA提取、PCR扩增、依据标准曲线定量检测HBV-DNA含量。
1.4 统计学处理 应用SPSS16.0
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统计软件包进行资
物及腰部练功的功效变得明显了，治疗组的总有效率明显优于对照组，而且药枕是外用的，未出现对照组中药物不良反应的现象。
通过两组疗效的比较，我们认为，加味葛根散药枕及腰部练功治疗腰肌劳损简便易行，患者容易接受，易于坚持治疗，疗效满意，并有很好解除腰肌疲劳的作用，对腰肌劳损有治疗及预防的双重作用，值得在临床中推广。
参考文献
［1］ 刘宝才，吴方俊.穴位注射自血疗法辅助治疗腰肌劳损临床观察［J］.湖北中医学院学报，2009，11（1）：57.
［2］ 国家中医药管理局.中华人民共和国中医药行业标准：中医病证诊断疗效标准［S］.南京：南京大学出版社，1994.201-201.
［3］ 李超建.背伸肌锻炼治疗腰肌劳损480例［J］.中国社区医师（医学专业），2011，13（10）：63.
［4］ 张润洪.中药袋湿热敷配合推拿治疗慢性腰肌劳损48例临床疗效观察［J］.医学信息（上旬刊），2011，24（3）：1639-1640.
［5］ 阴继爱，戴岳，安树庞.葛根汤的药理和临床研究概况［J］.中华中医药学刊，2007，26（6）：1275-1278.
（收稿日期：2011-05-09）
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302
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临床和实验医学杂志 2012年2月 第11卷 第3期万方数据
料录入、整理及处理，计数资料行χ2检验，检验水准α=0.05。
2 结果
3例乙肝血清免疫标志物HBsAg阳性、HBeAg阳性其HBV-DNA均为阳性，含量分别为2.32×106IU/ ml、4.96×107IU/ml、1.96×108IU/ml。204例乙肝血清免疫标志物大三阳（HBsAg阳性，HBeAg阳性，HBcAb 阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为94.61%（193/ 204）。405例乙肝血清免疫标志物小三阳（HBsAg阳性，HBeAb阳性，HBcAb阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为39.26%（159/405）。经统计学处理大三阳组和
HBsAg（阳性）HBcAb（阳性）组与小三阳组差异显著（χ2 =170.38，P<0.05）。37例乙肝血清免疫标志物（HB?sAg阳性，HBcAb阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为70.27%（26/37）。乙肝血清免疫标志物全阴性模式中检出1例HBV-DNA阳性。乙肝血清免疫标志物HB?sAb阳性、HBcAb阳性模式中HBV-DNA阳性率显著降低。具体结果见表1耀2。
表1 乙肝血清免疫标志物（两对半）各种模式统计（719例）
乙肝血清免疫标志物（两对半）模式例数HBV-DNA+［n（%）］HBV-DNA含量平均值（IU/ml）HBsAg+HBsAb-HBeAg+HBeAb-HBcAb+204193（94.61）1.08×107 HBsAg+HBsAb-HBeAg-HBeAb+HBcAb+405159（39.26）2.78×104 HBsAg+HBsAb-HBeAg-HBeAb-HBcAb+3726（70.27）3.41×104 HBsAg+HBsAb-HBeAg+HBeAb-HBcAb-33（100.00）2.32×106，4.96×107，1.96×108 HBsAg-HBsAb+HBeAg-HBeAb+HBcAb+222（9.09）7.89×104，1.23×103 HBsAg-HBsAb-HBeAg-HBeAb+HBcAb+123（25.00）3.10×105，1.26×103，1.17×103 HBsAg-HBsAb+HBeAg-HBeAb+HBcAb-61（16.67）6.66×104 HBsAg-HBsAb+HBeAg-HBeAb-HBcAb+72（28.57）2.40×103，2.83×103 HBsAg-HBsAb+HBeAg-HBeAb-HBcAb-130（0）
HBsAg-HBsAb-HBeAg-HBeAb+HBcAb-10（0）
HBsAg-HBsAb-HBeAg-HBeAb-HBcAb+10（0）
HBsAg-HBsAb-HBeAg-HBeAb-HBcAb-81（12.5）2.56×103
注：+为阳性，-为阴性。
3 讨论
TRFIA检测乙肝两对半是临床诊断HBV感染继传统手段酶联免疫吸附试验（ELISA）法外又一新的免疫分析法，具有敏感、特异性强、能准确定量等优点［5］。其准确反映人体对HBV的免疫反应状态。抗原的减少或消失、抗体的产生或增加都准确反映了机体感染的不同阶段，是指导临床诊断治疗的依据。利用实时FQ-PCR技术对HBV-DNA监测分析，可准确反映机体感染现状，因为PCR能定量检测乙肝病毒核酸，是病毒是否存在、是否复制及其数量多少的最直接指标，优于传统的生化检验和免疫学检验指标［6，7］。陈兆鹏等［8］采用荧光定量PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物2005例，其中FQ-PCR阳性率达13.1%，并且发现126例HBeAg阳性者FQ-PCR均为阳性，阳性率100%，HBV -DNA平均拷贝数为3.1×107，证实两种方法均具有较好的相关性。
本研究通过同时使用两种方法检测患者血清乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA，其中乙肝血清免疫标志物大三阳（HBsAg阳性、HBeAg阳性、HBcAb阳性）模式中HBV-DNA阳性率为94.61%而且HBV-DNA含量平均值为1.08×107IU/ml呈较高的拷贝量，经统计学处理大三阳组和HBsAg（阳性）HBcAb（阳性）组与小三阳组有显著性差异（P<0.05），说明这些患者HBV具有较高的复制水平，是具有传染性的重要标志。乙肝血清免疫标志物小三阳（HBsAg阳性、HBeAb阳性、HBcAb 阳性）模式中其HBV-DNA阳性率为39.26%。且HBV-DNA含量平均值为2.78×104虽然其拷贝数和阳性率均低于大三阳组，但仍然具有传染性，说明HBe?Ab的存在并不表示患者体内没有病毒复制。乙肝血清免疫标志物8例全阴性模式中检出1例HBV-DNA阳性，说明乙肝血清免疫标志物全阴性的病人不能排除HBV感染。因此FQ-PCR技术定量监测HBV-DNA 其高灵敏度可为乙肝病毒感染窗口期早期诊断HBV感染提供依据，同时检测乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA是乙型肝炎病毒感染、诊断、治疗及预后分析的重要措施。
参考文献
［1］ 徐兆珍，关伟，张淑静，等.乙型肝炎表面抗原/抗体同时存在的血清模式与病毒血症的关系［J］.临床输血与检验，2010，7（12）：216-218.
［2］ 李小月，张祖平，李宗光，等.HBV前S1抗原与HBV DNA联合检测的临床意义［J］.临床输血与检验，2011，13（1）：25-27.
［3］ 张健，李宁，吕维红，等.HBV DNA定量测定对乙肝五项的评价意义［J］.华中医学杂志，2001，38（1）：15-17.
［4］ 成军，孙长贵，谢钰，等.3种方法4种试剂检测HBV血清标志物结果比较［J］.临床检验杂志，2006，24（2）：144-145.
［5］ 杭建峰，吴英松，李明.时间分辨荧光免疫分析的研究进展及应用［J］.热带医学杂志，2004，26（3）：340-343，304.
［6］ 曾宏辉.PCR荧光定量检测乙肝病毒核酸的结果分析［J］.医学临床研究，2006，23（9）：1462-1463.
［7］ 易冬英，周春骏，祁妍，等.实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义［J］.江西医学院学报，2006，51（6）：172-
173，175.
［8］ 陈兆鹏，黄瞻云，张文芳，等.荧光定量PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物2005例结果分析［J］.同济大学学报（医学版），2003，24
（2）：138-139.
（收稿日期：2011-09-20）
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402
·Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol.11，No.3 Feb.2012万方数据
乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA监测结果相关性分析及临床应用
作者：王凤岚， 黄朝芳， 冯万周
作者单位：王凤岚(宝鸡市中心医院感染科,陕西,宝鸡,721008)， 黄朝芳(旬阳县中医院检验科,陕西,旬阳,725700)， 冯万周(宝鸡市人民医院输血科,陕西,宝鸡,721000)
刊名：
临床和实验医学杂志
英文刊名：JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINE
年，卷(期)：2012,11(3)
参考文献(8条)
1.陈兆鹏;黄瞻云;张文芳荧光定量PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物2005例结果分析 2003(02)
2.易冬英;周春骏;祁妍实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义[期刊论文]-江西医学院学报 2006(06)
3.曾宏辉PCR荧光定量检测乙肝病毒核酸的结果分析[期刊论文]-医学临床研究 2006(09)
4.杭建峰;吴英松;李明时间分辨荧光免疫分析的研究进展及应用[期刊论文]-热带医学杂志 2004(03)
5.成军;孙长贵;谢钰3种方法4种试剂检测HBV血清标志物结果比较[期刊论文]-临床检验杂志 2006(02)
6.张健;李宁;吕维红HBV DNA定量测定对乙肝五项的评价意义[期刊论文]-华中医学杂志 2001(01)
7.李小月;张祖平;李宗光HBV前S1抗原与HBV DNA联合检测的临床意义[期刊论文]-临床输血与检验 2011(01)
8.徐兆珍;关伟;张淑静乙型肝炎表面抗原/抗体同时存在的血清模式与病毒血症的关系 2010(12)
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1.高娅.王婷.GAO Ya.WANG Ting电化学发光法测定HBV标志物与荧光定量PCR-HBV-DNA结果的分析比较[期刊论文]-中国医药科学2011,01(17)
2.田沂.唐晓鹏.杨旭.罗开忠.黄力.TIAN Yi.TANG Xiao-peng.YANG Xu.LUO Kai-zhong.HUANG Li HBV标志物定量与病毒载量关系探讨[期刊论文]-第三军医大学学报2007,29(13)
3.李爱武.蒋霞.李芳.郭萍HBV-DNA、乙肝前S1抗原与HBV血清标志物相关性的研究[期刊论文]-陕西医学杂志2011,40(6)
4.于广名血清HBV-DNA与HBV免疫标志物相关性探讨[期刊论文]-中医临床研究2010,2(2)
5.杨小蓉.陈小明.丁彩屏.秦建川.陈少莲.YANG Xiaorong.CHEN Xiaoming.DING Caiping.QIN Jianchuan.CHEN Shaolian HBV-DNA实时荧光定量检测与HBV免疫标志物结果相关性分析[期刊论文]-临床医学工程2010,17(11)
6.赵岩.赵颖HBsAg阳性人群HBV-DNA定量测定的调查研究[期刊论文]-中国社区医师(医学专业)2010,12(8)
7.韩晋昂.戴金华HBV感染者pre-s1、HBV-DNA检测及其临床意义[期刊论文]-现代预防医学2007,34(6)
8.于笑难.薛采芳.郭大文.胡晓芳.左伟免疫-PCR检测HBsAg方法的建立及临床应用[期刊论文]-中国公共卫生2001,17(3)
9.米海珍.张庆.周永玲.王芳.杨高峰乙型肝炎血清标志物与HBV-DNA定量结果对比分析[期刊论文]-检验医学与临床2007,4(3)
10.叶剑荣.袁利群.陆建国.YE Jian-rong.YUAN Li-qun.LU Jian-guo FQ- PCR技术在儿童尿液巨细胞病毒检测的临床应用[期刊论文]-实用预防医学2012,19(1)
本文链接：https://www.doczj.com/doc/1811899338.html,/Periodical_lchsyyxzz201203025.aspx