一、灰色关联分析 灰色关联分析是系统态势的一种量化比较分析，其实质就是比较若干数列所构成的曲线到理想数列所构成的曲线几何形状的接近程度，几何形状越接近，其关联度就越大。可见，灰色关联分析是一种趋势分析，它对样本的大小没有太高的要求，一般情况下比较适合小样本，贫信息的数据，并且样本数据不需要典型的分布规律，因而，具有广泛的适用性。 灰色关联分析模型的建立： (1)确定比较数列与参考数列; 设Xi={xi(1)，xi （2），…xi(n)}为创业板上市公司的财务指标形成的比较数据列，其中，i=1,2…17.同时，把每项指标中的最优值作为最优指标集X0，可得到参考数列:X 0={x 0(1),x 0(2),…x 0(n)} (2)无量纲化处理；无量纲化的处理方法通常有初值化、均值化、规范化三种方法，而本文采用的是不同指标的标准化处理方法，如前文所示。 (3)各个指标权重的确定w （k ）； (4)计算关联系数δi(k); (5)计算关联度r i 设参考数列为:X 0={x 0(1),x 0(2),…x 0(n)}，关联分析中被比较数列记为X i ={x i (1)，x i （2），…x i (n)}，i=1,2,…28；n=1,2,3…12. 对于一个参考数列X 0，比较数列Xi ，可用下述关系表示各比较曲线与参考曲线在各点的差： |(k)x -(k) x |ρm ax m ax |(k)x -(k)x | | (k)x -(k)x |m ax m ax ρ |(k)x -(k)x |m inm in (k)δi o i o i o i o i ++=
式中，δi(k)是第k 个时刻比较曲线x i 与参考曲线x o 的相对差值，这种形式的相对差值称为x i 对x 0在k 时刻的关联系数。ρ为分辨系数，ρ∈(0,1)，引入它是为了减少极值对计算的影响。在实际计算使用时，一般取ρ=0.5. 若记：Δmin=minmin|x o (k)-x i (k)|, Δmax= maxmax|x o (k)-x i (k)|,则Δmin 与Δmax 分别为各时刻x o 与x i 的最小绝对差值与最大绝对差值，从而有 ρΔm ax |x -x |ρΔm ax Δm in δi(k)0(k)）k i(++= 根据关联系数计算关联度，得到灰色关联模型为： r i = ∑=n 1i )(*)(k w k i δ 二、层次分析法构建经营绩效评价模型 层次分析法(Analytic Hierarchy Process 简称AHP)是美国运筹学家匹茨堡大学教授Saaty 于二十世纪70年代初期提出的。层次分析法（AHP ），它是系统工程中对非定量事件作定量分析的一种简便方法，也是人们对主观判断进行客观描述的一种有效方法。它将复杂问题分解成若干个层次，逐步进行分析。这种做法，首先要求把问题层次化，根据问题的性质和要得到的目标，将问题分解为不同的组合因素，并将问题按不同的层次聚集组合，形成一个多层次的分析结构模型。通过两两比较的方法，确定层次中诸因素的相对重要性，然后组合人们的判断以决定诸因素相对于总目标的相对重要性数值或相对优劣次序的排序。 层次分析法的核心思想可以归纳为“先分解后综合”，应用层次分析法进行上市公司经营绩效评价进，应包括如下基本步骤[27]: （1）建立层次结构 应用层次分析法进行综合经营绩效评价时，首先建立评价问题的层次结构(Hierarchy)。层次结构是应用层次分析法把复杂问题分解简化的关键，必须建立在对决策问题深刻分析和对决策目标以及决策主体意图的充分理解之上。层次结构的建立过程是首先确定决策目标，其次罗列出与该目标相关的各种因素，然后
荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制 1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log(起始浓度)与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 * 由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 * 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 * 标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计） * 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） * 在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值
标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。倍比梯度稀释方法： 1v原液（标准品i）+9v稀释缓冲液，得标准品ii 1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii 1v标准品iii+9v稀释缓冲液，得标准品iv 1v标准品iv+9v稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4. 实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700 测得其拷贝数1.55×108copy /ul 标准曲线的绘制（1cycle=1min）
v1.0 可编辑可修改 1、公共管理：是一门研究公共组织尤其是政府组织的管理活动及其规律的学科。公共管理研究的内容：①公共组织的结构、功能、环境和运行机制；②行政管理体制改革、中央与地方的关系；③市场经济条件下政府的职能与作用、政府与市场、政府与企业、政府与社会的关系；④公共人力资源的开发与利用；⑤公共管理中的规划、计划与决策、监督与控制，公共项目评估，行政立法、司法和执法；⑥公共信息管理和咨询服务；⑦财政管理、教育管理、科技管理和文化管理。 2、定量分析方法的主要内容 系统模型与系统分析、线性回归预测分析、社会调查程序与方法、统计分析方法、线性回归预测分析、马尔可夫预测方法、投入产出分析方法、最优化方法（线性规划、运输问题、动态规划、资源分配问题）、评价分析方法、层次分析法、对策论、风险型决策与多目标决策、管理系统模拟、排队论、系统动力学方法、网络计划方法 3、为什么在系统分析中广泛使用系统模型而不是真实系统进行分析人类认识和改造客观世界的研究方法，一般有实验法和模型法。实验法是通过对客观事物本身直接进行科学实验来进行研究的，因此局限性比较大。公共管理问题大多是难以通过实验法直接进行研究，广泛使用系统模型还基于以下五个方面的考虑：①系统开发的需要只能通过建造模型来对系统或体制的性能进行预测；②经济上的考虑对复杂的社会经济系统直接进行实验，成本十分昂贵；③安全性、稳定性上的考虑对有些问题通过直接实验进行分析，往往缺乏安全性和稳定性，甚至根本不允许；④时间上的考虑使用系统模型很快就可得到分析结果；⑤系统模型容易操作，分析结果易于理解 4、系统分析的要点和步骤 要点(1)任务的对象是什么即要干什么(what)； (2)这个任务何以需要即为什么这样干(why)； (3)它在什么时候和什么样的情况下使用即何时干(when)； (4)使用的场所在哪里即在何处干(where)； (5)是以谁为对象的系统即谁来干(who)； (6)怎样才能解决问题即如何干(how)。步骤 (1)明确问题与确定目标。当一个有待研究分析的问题确定以后，首先要对问题进行系统的合乎逻辑的阐述，其目的在于确定目标，说明问题的重点与范围，以便进行分析研究。 (2)搜集资料，探索可行方案。在问题明确以后，就要拟定解决问题的大纲和决定分析方法，然后依据已搜集的有关资料找出其中的相互关系，寻求解决问题的各种可行方案。 (3)建立模型。为便于对各种可行方案进行分析，应建立各种模型，借助模型预测每一方案可能产生的结果，并根据其结果定性或定量分析各方案的优劣与价值。(4)综合评价。利用模型和其他资料所获得的结果，对各种方案进行定性与定量相结合的综合分析，显示出每一种方案的利弊得失和效益成本，同时考虑到各种有关因素，如政治、经济、军事、科技、环境等，以获得对所有可行方案的综合评价和结论。（5）检验与核实。 5、简述霍尔三维结构与切克兰德“调查学习”模式之间的区别。 1）霍尔三维结构将系统的整个管理过程分为前后紧密相连的六个阶段和七个步骤，并同时考虑到为完成这些阶段和步骤的工作所需的各种专业管理知识。三维结构由时间维、逻辑维、知识维组成。霍尔三维结构适用于良结构系统，即偏重工程、机理明显的物理型的硬系统。2）切克兰德“调查学习”模式的核心不是寻求“最优化”，而是“调查、比较”或者说是“学习”，从模型和现状比较中，学习改善现存系统的途径，其目的是求得可行的满意解。适用于不良结构系统，偏重社会、机理尚不清楚的生物型的软系统。3）处理对象不同：前者为技术系统、人造系统，后者为有人参与的系统；4）处理的问题不同：前者为明确、良结构，后者为不明确，不良结构；5）处理的方法不同：前者为定量模型，定量方法，后者采用概念模型，定性方法；6）价值观不同：前者为一元的，要求优化，有明确的好结果（系统）出现，后者为多元的，满意解，系统有好的变化或者从中学到了某些东西。 6、定性分析的方法：目标--手段分析法、因果分析法、KJ 分析法 7、社会调查的含义：是人们有意识、有目的地通过对社会现象的考察、了解和分析，来认识社会生活的本质机器发展规律的实践活动和认识活动。 基本原则①客观性原则，核心是实事求是，这是社会调查
气相色谱定量分析 1.常用的气相定量分析方法 1. 归一化法 归一化法是常用的一种简便、准确的定量方法。使用这种方法的条件是样品中所有组分都出峰，将所有出峰组分的含量之和按100%计，当测量参数为面积时，计算式如下： （10） 式中i的百分含量； i的校正因子； i的峰面积。 如果测量参数为峰高，计算式如下： （11） 式中i的峰高校正因子； i的峰高。 如果样品中组分是同分异构体或同系物，若已知校正因子近似相等，就可以不用校正因子，将面积直接归一化，即可按下式计算： （12） 或（13） 归一化定量的优点是方法准确，进样量的多少与结果武官，仪器与操作条件对结果影响小。缺点是某些组分在所用检测器上可能不出峰，如H2O在氢焰离子化检测器上等；样品中含有沸点高，出峰很慢的组分（如果用其它定量方法，可用反吹法除去），不需定量的个别组分可能分离不好，重叠在一起，影响面积的测量，使其应用受到一定程度的限制。在使用选择性检测器时，一般不用该法定量。 2. 内标法 当分析样品不能全部出峰，不能用归一化法定量时，可考虑用内标法定量。
方法：准确称取样品，选择适宜的组分作为欲测组分的参比物，在此称为内标物。加入一定量的内标物，根据被测物和内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比按下式求组分的含量。 （14） 式中i的含量； i的峰面积； 对内标物的要求是：不能与样品或固定相发生反应；能与样品完全互溶；与样品组分很好的分离，又比较接近；加入内标的量要接近被测组分的含量；要准确称量。 如果用峰高作为测量参数，上式也可将面积改为峰高，将面积校正因子改为峰高校正因子进行定量。 内标法定量也比较准确，而且不象归一化法有使用上的限制。主要缺点是：每次需要用分析天平准确称量内标和样品，日常分析使用很不方便，样品中多了一个内标物，显然对分离的要求更高些。 3. 外标法 外标法又称校正曲线法。用已知纯样品配成不同浓度的标准样进行试验，测量各种浓度下对应的峰高或峰面积，绘制响应信号-百分含量标准曲线。分析时，进入同样体积的分析样品，从色谱图上测出面积或峰高，从校正曲线上查出其百分含量。 在一些工厂的常规分析中，样品中各组分中的浓度一般变化不大，在检量线通过原点（O 点）时可不必做校正曲线，而用单点校正法来分析。即配制一个和被测组分含量十分接近的标准样，定量进样，由被测组分与外标组分峰面积或峰高比来求被测组分百分含量。 （15） 式中i的含量； i的含量； i的峰面积。
案例 3-1 美国联合食品公司（Cosolidated Foods）在新墨西哥州、亚利桑那州和加利福尼亚州经营连锁超市。一项促销活动通知连锁店提供一项新的信用卡政策，使联合食品的顾客除了通常的支付现金或个人支票选择外，还有用信用卡（如Visa、MasterCard卡）进行购买支付的选择权。新的政策正基于试验基础而执行，希望信用卡选择权将会鼓励顾客加大采购量。 在第一月经营之后，在一周期间内选择了有100名顾客的随机样本。100名顾客中的每一个的支付方式和消费多少的数据被收集上来。样本数据列示在下表中。在新的信用卡政策出现之前，大约50％的联合食品顾客用现金支付，约50％用个人支票支付。 表：联合食品100个顾客的随机样本的购买金额和支付方式（单位：美元）
管理报告: 使用描述性统计的表格法和图形法来汇总表中的样本数据。你的报告应该包括诸如下列的摘要： 1. 支付方式的频数分布和频率分布； 2. 支付方式的柱形图或饼形图； 3. 每一支付方式下花费金额的频数和频率分布； 4. 每一支付方式下花费金额的直方图和茎叶点。 你对联合食品的消费金额和支付方式有了什么样的初步了解？ 1. 支付方式的频数分布和频率分布
2．支付方式的柱形图或饼形图 （1）柱形图 （2）饼形图 3．每一支付方式下花费金额的频数和频率分布
4．每一支付方式下花费金额的直方图和茎叶图 （1）直方图 （2）茎叶图 注：将支付金额四舍五入化为保留一位小数。 现金支付方式茎叶图： 茎叶 1139 249 3037 438 5129 609 7022449 889 90 11258 121 131
定量PCR分析的相对定量法 预先研读科研文献，提出问题。拟用60Co-γ射线照射HeLa细胞，经0，2，4，8，10Gy不同吸收剂量照射4小时后，研究60Co-γ射线对GRP78 mRNA表达水平的剂量影响关系。 设计拟扩增GRP78以及GAPDH（内参基因）引物序列，稀释合成后引物，验证是否合格能用，储存备用。上下引物可以考虑预混，储存备用。 准备总RNA提取试剂盒，熟悉实验方法，即熟悉基本步骤与相应所用耗材，准备所用耗材。知道经该试剂盒方法提取后实际剩下的总RNA体积数。 先培养二瓶细胞，长满后消化后混合，细胞计数，分成6瓶细胞，接种培养至第二天早晨。编号。送去钴源室60Co-γ射线照射，无菌操作，放回培养4小时。 按试剂盒程序提取各瓶细胞总RNA。编号，测定并记录各管总RNA含量与体积数。当天反转录成cDNA，并编号，测定总cDNA含量与体积数。预约定量PCR仪器使用时间。 做5X6X2=60份定量PCR反应计划，因有5个剂量组，每一个剂量组做6次平行，2个基因。考虑额外需要，故预混试剂拟按70份反应计划去准备。做好96孔板中各孔排布图。 配制除样品cDNA和引物外的预混液，按计划加入96孔板中各孔指定位置内。再有规律地依次加入规定量的cDNA样品，然后在排布图指定孔位置中加入指定量和指定种类的引物。核实或做好加样记录。 定量PCR仪器分析开机预热、设定定量PCR仪器基本参数、位置参数和循环参数等；再次混匀96孔板中样品，将样品96孔板放入仪器中，检查后运行PCR仪器。 设计原始资料表格样式，记录各组实际扩增后所得CT值。 根据前面介绍的绝对定量法得到的标准曲线如下图，结合上表查找相应的基因含量数，转录如下表中，然后计算相应的平均数与标准差。
利用实时定量和－△△法分析基因相对表达量 , – () －△△ . * . ? * , , California 94404; ? , , Washington State University, Pullman, Washington 99164-6534 摘要： 现在最常用的两种分析实时定量实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。－△△方法是实时定量实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。另外，在本文中我们还介绍了两种－△△衍生方法的推导和应用，它们在实时定量数据分析中可能会被用到。 关键词：反转录定量相对定量实时 反转录（）是基因表达定量非常有用的一种方法（）。实时技术和的结合产生了反转录定量技术（）。实时定量的数据分析方法有两种：绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝数；相对定量方法则是用来确定经过不同处理的样品目标转录本之间的表达差异或是目标转录本在不同时相的表达差异。 绝对定量通常在需要确定转录本绝对拷贝数的条件下使用。通过实时进行绝对定量已有多篇报道（），包括已发表的两篇研究论文（）。在有些情况下，并不需要对转录本进行绝对定量，只需要给出相对基因表达差异即可。显然，我们说基因在经过某种处理後表达量增加倍比说该基因的表达从拷贝细胞增加到拷贝细胞更加直观。 用实时对基因表达进行相对定量分析需要特殊的公式、假设以及对这些假设的验证。－△△方法可用于定量实验来计算基因表达的相对变化：－△△公式的推导，以及实验设计，有效性评估在（）中有介绍。用－△△方法分析基因表达数据在文献中也有报道（）。本文介绍了该方法的推导、假设以及应用。另外，本文还介绍了－△△两种衍生方法的推导和应用，它们在实时定量数据分析中都可能被用到。 . －△△方法
第1章定量分析概述 思考题答案 1.正确进行试样的采取、制备和分解对分析工作有何意义？ 答：正确的采样，能使分析结果代表被分析对象的平均组成，不会给出错误结论，使定量分析失去意义；正确的制备和分解方法，不仅使试样中各种形态存在的被测组分都转入溶液呈可测定的状态，而且能使被测组分的测定和杂质的分离都易进行。 2. 在进行农业试验时，需要了解微量元素对农作物栽培的影响。某人从试验田中挖一小铲泥土试样，送化验室测定。试问由此试样所得的分析结果有无意义。如何采样才正确？ 答：取样的关键是保证所取试样具有高度的代表性，即用作分析的试样应能代表被分析对象的平均组成。从试验田挖一小铲泥土，取样不具备代表性，分析结果会导致错误结论。应于不同地段采集足够量的原始平均试样，经研磨、过筛、缩分后，送化验室测定。 3. 为了探讨某江河地段底泥中工业污染物的聚集情况,某单位于不同地段采集足够量原始试样，混匀后取部分试样送分析室。分析人员用不同方法测定其中有害化学组分的含量.这样做对不对?为什么？ 答：采集的原始平均试样混匀后，取部分试样送交分析部门，样品不具代表性。采集的原始平均试样混匀后，还须研磨、过筛、缩分，才能使送交分析部门试样代表所采集样品的平均化学成分。 4. 怎样溶解下列试样：锡青铜（Cu：80%，Sn：15%，Zn：5%）、高钨钢、纯铝、银币、玻璃（不测硅）、方解石。 答：锡青铜：用热H2SO4溶解；高钨钢：用HNO3+HF溶解；纯铝：用HCl溶解；银币：用HNO3溶解；玻璃（不测硅）：用HF溶解 5. 欲测石灰石（CaCO3）和白云石[CaMg(CO3)2]中钙、镁的含量，怎样测定才能得到较准确的结果？答：①根据原料的堆放情况，从不同的部位和深度选取多个取样点，采取一定量矿石样品；将试样进行破碎、过筛、混匀和缩分。②采用适当的溶剂（如HCl），将试样溶解后制成溶液。③对常量组分的测定，选择准确度高的方法（如配位滴定法）进行测定。 6．半熔融法分解试样有何优点？ 答：半熔法又称烧结法。该法是在低于熔点的温度下，将试样与熔剂混合加热至熔结。由于温度比较低，不易损坏坩埚而引入杂质，但加热所需时间较长。 7．选择分析方法应注意哪些方面的问题？ 答：选择分析法应从测定的具体要求、被测组分含量、被测组分的性质、实验室设备和技术条件 及干扰物质的影响等方面综合考虑，选择准确、灵敏、迅速、简便、选择性好、自动化程度高的、合适的分析方法。 8．什么叫滴定分析？它的主要分析方法有哪些？ 答：滴定分析是将已知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质的溶液中，直到所加的试剂溶液与被测物按滴定反应式中的化学计量关系定量反应为止，然后根据所用试剂溶液的浓度和体积，计算被测物质的含量。主要有酸碱滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法、氧化还原滴定法。 9．能用于滴定分析的化学反应必须符合哪些条件？
荧光定量P C R 之绝对定量分析——标准曲线的绘制 1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT 值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log（起始浓度）与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 *由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 * 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 *标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计）* 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） *在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值 标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA也可以是比扩增片段长的纯化 后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA甚至cDNA但前提是所有的作为标准品的核酸
都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的 准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。倍比梯度稀释方法： 1v 原液(标准品i ) +9v 稀释缓冲液，得标准品ii 1v 标准品ii+9v 稀释缓冲液，得标准品iii 1v 标准品iii+9v 稀释缓冲液，得标准品iv 1v 标准品iv+9v 稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4. 实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700测得其拷贝数1.55 X 108copy /ul 标准曲线的绘制( 1cycle=1min ) 设置对照：浓度为 1.55X107、1.55X106、1.55X105、1.55X104、1.55X103、1.55X102、1.55 X 101的标准样品各一个，设空白对照
第四章 滴定分析概论 §4.1概述 定量分析的任务是测定物质中组分的含量。定量分析的分析方法有滴定分析法、重量分析法和仪器分析法等。 一、定量分析的一般要求 根据定量分析的任务和特点，定量分析的一般要求是： 1、测定结果的准确度 准确度高是定量分析的最基本要求。 对于常量组分（≥10%）一般要求测定误差不超过0.2% 对于半微量组分（1%~10%） 对于微量组分（0.01%~1%） 2、测定结果应具有代表性 测定所用试样只是待测物质中的很小部分，这些少量物质称为分析试样或样品。 3、分析方法应可靠和可行 4、分析结果应正确计算和合理报告 （1）、被测组分的化学表示形式 a 以被测组分实际存在形式表示。如测得食盐试样中Cl 含量后，以NaCl%表示分析结果。 b 以氧化物或元素形式表示（实际存在形式不清楚）如硅酸盐水泥Fe Al Ca Mg 、、、含量常以2323Fe O Al O CaO MgO 、、、的含量表示。分析铁矿石以23%%Fe Fe O 或表示。 c 金属材料和有机分析中，常以元素形式（如Fe 、Zn 、N 、P ）的含量表示。 d 电解质溶液的分析，以所存在的离子形式表示含量。 （2）、被测组分含量的表示方法 a 固体试样 常量组分常以质量分数表示B B s m W m = 微量组分以1g g μ-?或6(10)-，1ng g -?9(10)-，1pg g -?12(10)-表示。 b 液体试样 ①物质的量浓度： B n V ?-1单位mol L ②质量摩尔浓度：?-1单位mol kg (kg 溶剂的质量)
③质量分数：待测组分的质量除以试样的质量，即B m m 试样。 ④体积分数：B V V 试液表示。 ⑤摩尔分数：待测组分的物质的量除以试液的物质的量，量钢为1即B n n 试液 ⑥质量浓度：常以11111mg L g L g mL ng mL pg mL μμ-----?????、或、、等表示。对于极稀的水溶液，视其密度为1，此时1mg L -?（或1g mL μ-?），与11()mg kg g g μ--??在数值上相等，但概念不同。 （3）、分析结果的数据表示 a 应符合有效数字规则，分析结果的有效数字，其位数要与测定方法和仪器的准确度一致。 b 不仅要表明数值的大小，还应该反映出测定的准确度、精密度以及测定次数。通过一组测定数据来反映该样本所代表的总体时采用置信区间是表示分析结果的方式之一。 如碱灰中的总碱量，分析结果报告为： 22(40.150.02)%0.40150.0002 Na o Na o W W =±=±或22(40.150.02)% 0.40150.0002 Na o Na o W W =±=±或 二、滴定分析法概述 1、滴定分析对化学反应的要求 （1）反应定量的完成，这是定量计算的基础.反应按反应方程进行，反应定量，无副反应。 （2）反应速度快。 （3）能用简便方法确定终点。 若反应不能完全符合上述要求，可以采用间接滴定法 2、滴定方式 （1）直接滴定 （2）返滴定法 当被测组分与滴定剂反应较慢或被测组分为固体时，加入滴定剂后不能立即完成，可先准确地加入过量标准溶液（滴定剂），待反应完成后，再用另一标液或滴定剂滴定剩余的标液。 有时无合适的指示剂也可用返滴定法。 例1 称取0.3800g 3CaCO 试样，溶解于25.001mol L -?的Hcl 溶液中，待反应完全后， 用10.2000mol L NaOH -?返滴定过量的HCL 溶液，用去25.00ml ，问3caco W 多少？ 解：有关反应式： 3222CaCO HCl CaCl H O CO +=++↑
红外光谱的定量分析 红外光谱法在分析和另一应用是对混合物中各组分进行定量分析。红外光谱定量分析是借助于对比吸收峰强度来进行的，只要混合物中的各组分能有一个持征的，不受其他组分干扰的吸收峰存在即可。原则上液体、圆体和气体样品都对应用红外光谱法作定量分析：1．定量分析原理 红外定量分析的原理和可见紫外光谱的定量分析一样，也是基于比耳-朗勃特（Beer-Lambert)定律。 Beer定律可写成：A=abc 式和A为吸光度(absorbance)，也可称光密度(optical density)，它没有单位。系数a称作吸收系数(absorptivity)，也称作消光系数(extinction coeffieient)，是物质在单位浓度和单位厚度下的吸光度，不同物质有不同的吸收系数a值。且同一物质的不同谱带其a值也不相同，即a值是与被测物质及所选波数相关的一个系数。因此在测定或描述吸收系数时，一定要注意它的波数位置。当浓度c选用mol·L-1为单位，槽厚b以厘米为单位时，则a值的单位为：L·cn-1·mol-1，称为摩尔吸收系数，并常用ε表示。吸收系数是物质具有的特定数值，文献中的数值理应可以通用。但是，由于所用仪器的精度和操作条件的不同，所得数值常有差别，因此在实际工作中，为保证分析的准确度，所用吸收系数还得借助纯物质重新测定。 在定量分析中须注意下面两点： 1)吸光度和透过率是不同的两个概念、透过率和样品浓度没有正比关系，但吸光度与浓度成正比。 2)吸光度的另一可贵性使它具有加和性。若二元和多元混合物的各组分在某波数处都有吸收，则在该波数处的总吸光度等于各级分吸光度的算术和：但是样品在该波数处的总透过率并不等于各组分透过率的和； 2．定量分析方法的介绍 红外光谱定量方法主要有测定谱带强度和测量谱带面积购两种。此外也有采用谱带的一阶导数和二阶导数的计算方法，这种方法能准确地测量重叠的谱带，甚至包括强峰斜坡上的肩峰。 红外光谱定量分忻可以采用的方沦很多，下面我们介绍几种常用的测定方法。 (1)直接计算法 这种方法适用于组分简单、特征吸收带不重叠、且浓度与吸收度呈线性关系的样品。 应用(4-35)式，从谱图上读取透过率数值，按A＝ln(I0/I)(I0为入射光强度，I为透射光强度)的关系计算出A值，再按(4-35)式算出组分含量c，从而推算出质量分数。这一方法的前提是需用标准样品测得a值。分析精度要求不高时，可用文献报导的a值。 (2)工作曲线法 这种方法适用于组分简单．特征吸收谱带重叠较少，而浓度与吸收度不完全呈线性关系的样品。 将一系列浓度的标准样品的湾液．在同一吸收池内测出需要的谱带，计算出吸收度值作为纵坐标，再以浓度为横坐标，作出徊应的工作曲线。由于是在同一吸收池内测量，故可获得A～c的实际变化曲线。
利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量 METHODS 25, 402–408 (2001) Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitati ve PCR and the 2－△△CT Method Kenneth J. Livak* and Thomas D. Schmittgen?,1 *Applied Biosystems, Foster City, California 94404; and ? Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, Washington State University, Pullman, Washington 99164-6534 摘要： 现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2－△△CT方法是实时定量P CR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。另外，在本文中我们还介绍了两种2－△△CT衍生方法的推导和应用，它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到。 关键词：反转录PCR 定量PCR 相对定量实时PCR Taqman 反转录 PCR （RT-PCR ）是基因表达定量非常有用的一种方法（1 - 3 ）。实时PCR 技术和RT-PCR 的结合产生了反转录定量 PCR 技术（4 ,5 ）。实时定量 P CR 的数据分析方法有两种：绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝数；相对定量方法则是用来确定经过不同处理的样品目标转录本之间的表达差异或是目标转录本在不同时相的表达差异。 绝对定量通常在需要确定转录本绝对拷贝数的条件下使用。通过实时 PCR 进行绝对定量已有多篇报道（6 - 9 ），包括已发表的两篇研究论文（10,11 ）。在有些情况下，并不需要对转录本进行绝对定量，只需要给出相对基因表达差异即可。显然，我们说 X 基因在经过某种处理後表达量增加 2.5 倍比说该基因的表达从1000 拷贝/ 细胞增加到2500 拷贝/ 细胞更加直观。
定量分析概论 一.选择题1,下列贮存试剂的方法中哪些是错误的？A A，硝酸银密封于塑料瓶中B，五氧化二磷存放于干燥器中 C，二氯化锡密封于棕色玻璃瓶中D，氢氧化钾密封于塑料瓶中2，用25 毫升移液管移出的溶液体积应该标注为（C）A，25 毫升B，25.0 毫升C，25.00 毫升D，25.000 毫升E，25.0000 毫升3,容量瓶的用处有（D）A，量取一定体积溶液B，储存溶液C，转移溶液D，将准确容积的浓溶液稀释成准确容积的稀溶液4,定量分析工作要求测定结果的误差（E）A，越小越好B，等于零C，没有要求D，略大于允许误差E，在允许误差范围之内5，选出下列错误的叙述：D A，误差是以真值为标准的，偏差是以平均值为标准的。实际工作中获得的所谓误差，实质上仍然是偏差B，对于某项测定工作来说，它的系统误差大小是可以测量的C，对于偶然误差来说，大小相近的正误差和负误差出现的机会是均等的D，某个测定工作的精密度越好，则该测定工作的准确度越好6, 汽油等有机溶剂着火的时候，不能使用以下那种灭火剂：D A，沙子B，二氧化碳C，四氯化碳D，泡沫灭火器7,下列做法中正确的是： B A，将乙炔钢瓶放在操作的时候有电弧和火花发生的实验室里B，在使用玻璃电极前，将其在纯水中浸泡过夜C，在电烘箱中蒸发盐酸D，当汽油等有机溶剂着火的时候，用水来扑灭E，将耗电在两千瓦以上的设备接在照明用电线上8, 下列何种物质不能在烘箱中烘干？C A，碳酸钠B，重铬酸钾C，苯甲酸D，邻苯二甲酸氢钾9, 实验室中常用的铬酸洗液是用哪两种物质配制而成的？C A，铬酸钾和浓盐酸B，重铬酸钾和浓盐酸C，重铬酸钾和浓硫酸D，重铬酸钾和浓硝酸10,现在需要配制0.2 摩尔每升的盐酸溶液，请从下列仪器种选择一种最合适的仪器量取浓酸：C A，容量瓶B，移液管C，量筒D，酸式滴定管E，碱式滴定管11,定量分析之中，常常用作准确测量流出液体体积的量器有：B A，容量瓶B，移液管C，量筒D，烧杯12,准确度，精密度，系统误差，偶然误差之间的关系,下列说法中正确的是：B A，准确度高，精密度一定高B，精密度高，不一定能保证准确度高C，系统误差小，准确度一般偏高D，偶然误差小，准确度一定高2 E，准确度高，系统误差，偶然误差一定小13, 用挥发法测定某试样的吸湿水，结果偏高，可能是由于：A A，加热温度过高B，加热温度过低C，加热后冷却时间过长D，加热时间不足14,在滴定分析中出现以下情况，导致系统误差出现的是：D A，试样未经过充分混匀B，滴定管的读数读错C，滴定时有液滴溅出D，所用试剂中含有干扰离子二，判断题1,可以通过增加平行试验的次数减小测定过程中的偶然误差。T 2,汽油着火的时候，可以用水来扑灭。F 3，容量瓶的用处是将准确容积的浓溶液稀释成准确容积的稀溶液，或是将经过称量得一定物质配成一定容积的已知准确浓度的溶液。T 4,某测定的精密度越好，则该测定的准确度越好。F 5,对于某项测定结果来说，系统误差的大小是可以测量的。T 6,定量分析工作要求测定结果的误差越小越好。F 7,系统误差在同一条件下重复测定中，正负误差出现的机会相等。F 三，填空
K 哼 / \ ---------------------- * ----- 荧光定量PCR 之绝对定量分析一一标准曲线的绘制 1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR 反应。以标准品拷贝数 的对数 值为横坐标，以测得的CT 值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行 定量时，根据未知样品的CT 值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log （起始浓度）与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标 准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 *由样品CT 值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 *必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 *标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是 ASP-3700紫外光/可见光微 量分光光度计） *标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） *在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定 CT 值 标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒 DNA ，也可以是比扩增片 段长的 纯化后的PCR 产物，当然也可以是基因组 DNA ，甚至cDNA ，但前提是 所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保 证定量 RNA- d>NA PCR< *4
的准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。 倍比梯度稀释方法： 1v原液(标准品i) +9v稀释缓冲液，得标准品ii 1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii 1v标准品iii+9v稀释缓冲液，得标准品iv 1v标准品iv+9v稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4.实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700测得其拷贝数1.55X 8 10 copy /ul 标准曲线的绘制(1cycle=1mi n) 设置对照：浓度为 1.55X 107、1.55X 106、1.55X 105、1.55X 104、1.55X 103、1.55X 102、1.55X 101的标准样品各一个，设空白对照 PCR反应：以不同浓度标准品作为模板 标准品的扩增曲线
绪论 一、化学（Chemistry）的含义 化学是一门自然科学的基础课程，值在原子和分子水平上研究物质的组成、结构、性能及其变化规律和变化过程中能量关系的学科。 二、化学的分支（按照研究对象或研究目的划分）： 1.无机化学（inorganic chemistry）： 研究无机物的组成、结构、性质和无机化学反应与过程的化学。 2.有机化学（organic chemistry） 研究碳氢化合物及其衍生物的化学，又称“碳的化学”。 3.分析化学（analytical chemistry） 测量和表征物质的组成和结构的化学。 4.物理化学（physical chemistry） 研究所有物质系统的化学行为的原理、规律和方法的学科。 第一章定量分析概述 1.1 定量分析概述 一、分析化学的任务和作用: 1.分析化学的含义： 是“表征和量测的科学”，是研究物质的化学组成和结构信息的分析方法及相关原理的科学，是化学学科的一个重要分支。 2.分析化学的任务： 按照分析化学的任务，可将其分为定性分析、定量分析和结构分析三部分。（1）定性分析： 确定物质是由哪些组分（元素、离子、官能团或化合物）组成。即研究物质中有哪些元素或基团。 （2）定量分析： 确定物质中有关组分的含量。即每种成分的数量或物质纯度如何。 （3）结构分析： 确定物质的结构（化学结构、晶体结构、空间分布）和存在形态（价态、配位态、结晶态）及其与物质性质之间的关系等。即确定原子如何结合成分子，以及在空间如何排列等。 分析三者之间的关系 3.分析化学的作用： 分析化学对工、农业、国防和科技发展起着重要作用，是生产的“眼睛”。此处举例说明。 4.实验在分析化学中的地位
荧光定量P C R之绝对定量分析标准曲线的绘 制 Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】
荧光定量P C R之绝对定量分析——标准曲线的绘制1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log(起始浓度)与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 * 由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 * 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 * 标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计） * 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） * 在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值
标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。 倍比梯度稀释方法： 1v原液（标准品i）+9v稀释缓冲液，得标准品ii 1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii 1v标准品iii+9v稀释缓冲液，得标准品iv 1v标准品iv+9v稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4. 实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700 测得其拷贝数×108copy /ul 标准曲线的绘制（1cycle=1min）
利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量METHODS 25, 402–408 (2001) Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2－△△CT Method Kenneth J. Livak* and Thomas D. Schmittgen?,1 *Applied Biosystems, Foster City, California 94404; and ? Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, Washington State University, Pullman, Washington 99164-6534 摘要： 现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。2－△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法，即相对定量的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。另外，在本文中我们还介绍了两种2－△△CT衍生方法的推导和应用，它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到。 关键词：反转录PCR 定量PCR 相对定量实时PCR Taqman 反转录 PCR （RT-PCR ）是基因表达定量非常有用的一种方法（1 - 3 ）。实时PCR 技术和RT-PCR 的结合产生了反转录定量 PCR 技术（4 ,5 ）。实时定量PCR 的数据分析方法有两种：绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝数；相对定量方法则是用来确定经过不同处理的样品目标转录本之间的表达差异或是目标转录本在不同时相的表达差异。 绝对定量通常在需要确定转录本绝对拷贝数的条件下使用。通过实时 PCR 进行绝对定量已有多篇报道（6 - 9 ），包括已发表的两篇研究论文（10,11 ）。在有些情况下，并不需要对转录本进行绝对定量，只需要给出相对基因表达差异即可。显然，我们说 X 基因在经过某种处理後表达量增加 2.5 倍比说该基因的表达从1000 拷贝/ 细胞增加到2500 拷贝/ 细胞更加直观。 用实时PCR 对基因表达进行相对定量分析需要特殊的公式、假设以及对这些假设的验证。2－△△CT方法可用于定量PCR 实验来计算基因表达的相对变化：2－△△CT 公式的推导，以及实验设计，有效性评估在Applied Biosystems User Bulletin