薄层扫描法测定肠泰合剂中白头翁皂苷B 4的含量
史学慧1, 尚卫平1, 郭 岩1, 汝秋明1, 赵春香1, 王卫红2
(1.吉林省药品检验所,吉林长春130062;2.长春中医学院,吉林长春130051)
关键词:肠泰合剂;白头翁皂苷B 4;薄层扫描法
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:100121528(2002)0120071202
Aassay of Anemoside B 4in Changtai Mixture by T LC 2scanning
SHI Xue 2hui 1, SHAN G Wei 2ping 1, GUO yan 1, RU Qiu 2ming 1, ZHAO Chun 2xiang 1, WAN G wei 2hong 2
(1.Jili n Provi ncial Instit ute f or Drug Cont rol ,Changchun 130062,Chi na ; 2.Changchun College of T raditional Chi nese Medici ne ,Changchun 130051,Chi na )
K ey w ords :Changtai Mixture ;Anemoside B 4;TLC scanning
收稿日期:2001201224
作者简介:史学慧(1952～),女,吉林省长春市人,副主任药师,研究方向:药品检验及质量标准研究,电话:0431-*******。
肠泰合剂是由白头翁、马齿苋等5味中药组成,具有迅速消除结肠及直肠充血、水肿,适用于慢性溃疡性结肠炎,直肠炎等疾病。本品目前无含量测定方法。本文拟对其进行定量测定。因方中白头翁为君药,本文运用薄层扫描法对肠泰合剂中的白头翁皂苷B 4的含量进行测试,所得结果满意。1 仪器与材料
薄层扫描仪 瑞士CAMA G ,定量毛细管,双槽
层析缸,白头翁皂苷B 496.8%(南京药科大学提供),肠泰合剂:长春东方先锋制药厂提供批号:971117;990504;0000402。2 色谱系统
展开剂:氯仿-甲醇-水(65:35:10)下层液,显色剂:5%硫酸乙醇溶液,105°C 烘至斑点清晰,上覆盖同样大小的玻璃板,周围用胶布封固。
扫描波长的选择:在同1块薄层板上,分别点供
试品溶液1
μL 和白头翁皂苷B 4对照品1μL ,3μL ,依法展开,显色扫描。在350～700nm 波长范围内,对白头翁皂苷B 4对照品斑点和供试品色谱中相应的斑点分别进行光谱扫描,结果2者均在455nm 波
长处有最大吸收,故选择λ=455nm 作为测定波长。3 方法与结果3.1 对照品溶液的配制
取白头翁皂苷B 4对照品,加甲醇制成5mg/mL
的溶液,作为对照品溶液。
3.2 线性关系
于硅胶G 薄层板上,分别点对照品溶液1.0,
2.0,
3.0,
4.0,
5.0μL 依法展开,显色,扫描测定。以
斑点峰面积积分值为纵坐标,点样量(
μg )为横坐标,绘制标准曲线,得一不通过原点的直线。结果表明,白头翁皂苷B 4在4.555～22.78
μg 之间与峰面积积分值具有良好的线性关系,回归方程为:C =751.9A +3185.7r =0.9994。3.3 稳定性试验
取对照品溶液点于薄层板上,展开,显色,每隔
25min 扫描测定1次。结果2.5h 内测定结果稳定。3.4 精密度考察
在同一块薄层板上,点相同量对照品溶液共6个点,展开后依法测定,结果珔x =11021.8,RS D =2.8%(n =6);异板精密度珔x =11253.9RS D =1.7%(n =5)。3.5 回收率试验
精取已知含量的样品,准确加入白头翁皂苷B 4对照品一定量,照供试品溶液的制备方法操作,用所建立的方法进行测定,计算回收率。结果平均回收率为珔x =98.4%,RS D =2.4%(n =5)。
1
7
表1 回收率测定结果
测定次数样品中含白头翁
皂苷B4量(mg)
加入白头翁皂
苷B4量(mg)
实测
值(mg)
回收率
(%)
1 3.90 3.5857.4599.0
2 3.90 3.5857.3997.4
3 3.90 3.5857.3295.4
4 3.90 3.5857.4398.5
5 3.90 3.5857.55101.8
3.6 样品测定
样品溶液制备 取本品适量离心,精取上清液5mL,水浴上蒸去乙醇,加水20mL,用水饱和正丁醇提取3次(25,20,20)合并正丁醇提取液,用氨溶液(1→20)20mL洗涤,弃去水层继用正丁醇饱和的水洗涤,弃去水层,蒸干正丁醇溶液,残渣加甲醇溶解并定容至5mL,作为供试品溶液。
阴性对照品溶液的制备 按处方制得缺白头翁的样品、照“样品溶液制备”同法操作,制得阴性对照品溶液。
对照品溶液的制备 取白头翁皂苷B4对照品,加甲醇制成6mg?mL-1的溶液,作为对照品溶液。
吸取供试品溶液1μL,白头翁皂苷B4对照品溶液1μL、3μL,阴性对照品溶液1μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,按上述色谱条件展开,显色,扫描测定,计算即得。3批样品测定结果分别为:0.78%, 0.71%,0.82%。阴性对照无干扰,见薄层色谱图。表2 样品测定结果
批号含量%
9711170.780.78
0004020.810.83
9905040.710.
71
1.阴性对照 2,4对照品 3.供试品
4 讨论
为将白头翁皂苷B4提取完全,进行了各种提取方法的实验。(1)样品直接提取,不好分层,故取适量离心后,取上清液。(2)用水饱和正丁醇提取,并用氨溶液(1→20)洗涤,分离效果好。以尽可能减少干扰,保证待检样品的纯度。
本法为薄层扫描法测定,很大程度上,排除了其它成分和杂质的干扰,使得测定结果准确,满意,可作为肠泰合剂的质控方法之一。
参考文献:
[1] 吴振洁等,中药白头翁的甙类成分[J].中国药科大学学报,
1991,22(5):2652269.
[2] 朱华旭等,白头翁汤汤剂化学成分的分离研究[J].中成药,
1999,21(6):3132317.
[3] 叶文才等,中药白头翁化学成分的研究(I)[J].中国药科大学
学报,1990,21(5):2642266.
[4] 张秀琴等,白头翁中毛莨甙及合成毛莨甙的高效液相色谱测定
法[J].药学学报1990,25(12):9322935.
27