榄香烯诱导人喉癌Ｈｅｐ－２细胞凋亡及调控ｂｃ】２表达的研究
榄香烯诱导人喉癌Ｈｅｐ－２细胞凋亡及调控ｂｃｌ一２表
达的研究
摘要
ｒ
／背景：
Ｌ
近年来，通过对细胞凋亡＝及其机制的深入研究，人们逐渐认识到，肿瘤的发生可能由细胞增殖与凋亡的速度平衡失调造成的；
失调的程度可决定肿瘤发展的速度。正常的机体可通过凋亡机制清除体内受损伤而不予修复的细胞，也可清除那些有癌前病变、基因发生改变的细胞。当上述细胞不能通过细胞凋亡机制予以清除时，便可导致肿瘤发生。很多学者通过促进癌细胞凋亡来治疗肿瘤，同时发现许多抗癌药物能诱导或强化肿瘤细胞凋亡。
喉癌的治疗仍采用以手术为主的综合治疗。遗憾的是对于晚期喉癌患者，其五年生存率仍很低，传统的治疗手段没有突破。目前应用于喉癌的化疗药物，一方面疗效并不令人满意，另一方面缺乏理想的选择性，杀伤癌细胞的同时，往往对正常细胞，如骨髓造ｍ细胞等产生毒性作用，某些药物对心、肝、肾也有毒性。
所以，寻找高效、低毒的凋亡诱导剂是亟待解决的问题。
榄香烯是我国首先从姜科植物温郁金（又称温莪术）中提取的一种新结构类型的抗癌药，榄香烯的特点是副作用轻微，无明显肝、肾功能损害，不发生骨髓抑制，并具有提高免疫、缓解癌性疼痛的作用。榄香烯是一个有广泛应用前景的抗癌新药。），一７，／
揽吞烯诱母人蜈癌＇ｄｅｐ一２细胞凋亡及调控ｂｃ卜２袭达的研究
日的：
探讨橇番烯对久喉癌缨臌Ｈｅｐ～２绍耀生长的影响及｛乍用机制。探溥ｂｃ｛一２纂因在榄香烯诱导Ｂｅｐ一２细胞凋亡过程中的发达情况，进一步阐明拨香爝诱导Ｂｅｐ－２组胞凋亡的机制。
方法：
本研究厢ＭＴＴ法测定榄香烯对喉癌细胞的抑制作用；以透射电镜来观察其形态学变化；莉雨流式细胞仅研究不同浓度、不同时闯缅施凋亡的发生和辩缩脆周期的影稿；采用ＤＮＡ末端标记法磷究绍胞凋亡指数。用免疫缀化Ｅｎｖｉｓｉｏｎ二步法分据ｂｃｌ一２蛋白在Ｈｅｐ－２正卷缨骢秘拨霉烯｛乍蠼后的Ｈｅｐ－２细胞中的表达。
／结果：
揽香烯明显抑制Ｈｅｐ一２细胞的生长，对Ｈｅｐ一２细胞的半数生长的抑制剂量（Ｉｃｗ）值２４ｈ为６１．３¨ｇ／ｍｌ；透射电镜观察到染色质浓缩，沿着核膜筘｝葡，形成不同形状和大小的块袄；流式细胞术证实，凋亡细胞其有辩蠲稀药物浓度双樱依赖性。榄番烯阻滞Ｈｅｐ－２纲臆麸Ｓ期送入Ｇ。辩耀；ＤＮＡ末蠼标记法说明，凋亡缨胞数随药物浓度豹提裹逐渐增离；免疫组化结果撮示揽香爝能使喉癌纫胞癌基因ｂｃｌ～２表达降低。ｐ７ｙ／一
结论：
榄香烯能够抑制喉癌细胞的生长，其于印制作用与细施猗亡裔关，
俸用杌制可能与ｂｃｌ一２袭达降低有关。，，
关键词：喉瓣瘤榄香烯ｄｂｃ｛一２
榄香烯诱导人喉瘸Ｈｅｐ一２细胞凋亡及调控ｂｃ１—２表达的研究
ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＥｌｅｍｅｎｅｉｎｄｕｃｅｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄ
Ｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｃｌ一２ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＨｅｐ。２ｃｅｌｌｓ
Ａｂｓｔｒａｅｔ
Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ：
Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃａｒｃｊｎｏｇｅｎｅｓｉｓｗａｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｍｂａｌａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅａｔｈｒａｔｅｓｏｆｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｆｔｕｍｏｒｉｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｔｈｅｉｍｂａｌａｎｃｅ．Ｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅ，ｔｈｅｄａｍａｇｅｄｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｎｏｔｂｅｒｅｐａｉｒｅｄａｎｄｔｈｏｓｅｏｆｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓｌｅｓｉｏｎｏｒｍｕｔａｔｉｏｎｃａｎｂｅｃｌｅａｒｅｄｂｙａｐｏｐｔｏｓｉｓＯｔｈｅｒｗｉｓｅ，ｃａｎｃｅｒｗｏｕｌｄｄｅｖｅｌｏｐｆｒｏｍｔｈｅｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｎｏｔｂｅｃｌｅａｒｅｄｂｙａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｅａｃｈｅｒｓａｒｅｔｒｙｉｎｇｔｏｔｒｅａｔｔｕｍｏｒｂｙｅｎｈａｎｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄｉｔｉｓｗｅｌｌｋｎｏｗｎｔｈａｔｍｏｓｔａｎｔｉｔｕｍｏｒａｇｅｎｔｓｋｉｌｌｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｂｙａｐｏｐｔｏｓｉｓＡｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｓｕｒｇｅｒｙｒｅｍａｉｎｓｔｈｅｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅｓｏｆｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｔｈｅＬａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａＧｒｅａｔｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓｉｎｌａｔｅｒｓｔａｇｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｈａｖｅｎｏｔｏｃｕｒｒｅｄ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｆｏｒｔｈｅｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｉｓｎｏｔ
．３．
榄香烯诱导人喉癌Ｈｅｐ一２细胞凋亡及调控ｂｃｔ一２表达的｛｜Ｉｆ究
ｓａｔｉｓｆｉｅｄ，ｏｎｔｈｅｏｔｈｅｒｈａｎｄ，ｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｓｎｏｔｉｄｅａｌ．Ｉｔｉｓｔｈｅｓｅｔｔｌｅｑｕｅｓｔｉｏｎｔｏｆｉｎｄｈｉｇｈｅｆｆｉｃａｃｙｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｌｏｗｔｏｘｉｃｉｔｙ
ＥｌｅｍｅｎｅｉｓａｎｅｗａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｗｈｉｃｈｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｏｆＣｕｒｃｕｍａｚｅｄｏｒｉａ．Ｅｌｅｍｅｎｅｈａｓ１ｉｔｔｌｅｓｉｄｅ—ｅｆｆｅｃｔａｎｄｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｎｌｉｖｅｒ，ｋｉｄｎｅｙａｎｄｂｏｎｅ．ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｉｔｃａｎｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄａｌｌｅｖｉａｔｅｔｈｅｔｕｍｏｒｏｕｓｐａｉｎ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：
ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆＥｌｅｍｅｎｅｏｎｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｃｌ一２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆＥｌｅｍｅｎｅｉｎｄｕｃｅｄＨｅｐ－２ｃｅｌｌｓａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ＭｅｔｈｏｄＳ：
ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＥｌｅｍｅｎｅｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（ＴＥＭ）．ＴｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆＨｅｐ－２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．ＴｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＨｅｐ－２ｃｅｌｌｓｗａｓａｓｓｅｓｓｅｄｂｙｔｈｅｎｉｃｋｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄ（ＴＵＮＥＬ）．Ｂｃｌ－２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ
．４．
ＲｅｓｉｌｌＩｔｓ：
ＴｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆＨｅｐ一２ｃｅｌｌｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄ
ＭａｒｋｅｄｂｙＥｌｅｍｅｎｅ．ＴｈｅＩＣ５０ｖａｌｕｅｓｉｓ６１．３Ｕｇ／ｍ１．
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｕｎｄｅｒｎｕｃｌｅａｒｍｅｍｂｒａｎｅ
ｎｏｔｉｃｅｄ．ＦＣＭａｎｄａｒｒａｎｇｅｄａｎｄｃｏｎｄｅｎｓｅｄｃｈｒｏｍａｔｉｎｗｅｒｅ
ＴＵＮＥＬｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｃｅｉｌｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｄｒｕｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｅｌａｐｓｅｏｆｔｉｍｅ．ＣｅｌｌｃｙｃｌｅｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｒｒｅｓｔｅｄｆｒｏｍＳｔｏＧ２ＭｐｈａｓｅｗａｓｎｏｔｉｃｅｄＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔｂｃｌ－２ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｉｓｓｉｏｎｗａｓｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｂｙＥｌｅｍｅｎｅａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ
ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＳ：
ＥｌｅｍｅｎｅｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆＨｅｐ一２ｃｅｉｌｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｐｒｏｂａｂｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｏｗｎ?－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｂｃｌ?－２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎＨｅｐ－－２ｃｅｉｌｓ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｒｙｎｇｅａｌｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ｅｌｅｍｅｎｅ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｂｃｌ一２
．Ｓ．
引言
近年来，通过对细胞凋亡及其机制的深入研究，人们逐渐认识到，肿瘤的发生可能由细胞增殖与凋亡的速度平衡失调造成的：失调的程度可决定肿瘤发展的速度。正常的机体可通过凋亡机制清除体内受损伤而不予修复的细胞，也可清除那些有癌前病变、基因发生改变的细胞。当上述细胞不能通过细胞凋亡机制予以清除时，便可导致肿瘤发生。很多学者通过促进癌细胞凋亡来治疗肿瘤，同时发现许多抗癌药物能诱导或强化肿瘤细胞凋亡［１７。
喉癌的治疗仍采用以手术为主的综合治疗。遗憾的是对于晚期喉癌患者，其五年生存率仍很低，传统的治疗手段没有突破。目前应用于喉癌的化疗药物，一方面疗效并不令人满意，另一方面缺乏理想的选择性，杀伤癌细胞的同时，往往对正常细胞产生毒性作用，某些药物对心、肝、肾也有毒性。所以，寻找高效、低毒的凋亡诱导剂是亟待解决的问题。
榄香烯是近年来我国首先从姜科植物温郁金（又称温莪术）中提取的一种新结构类型的抗癌药，榄香烯的特点是副作用轻微，无明显肝、肾功能损害，不发生骨髓抑制，并具有提高免疫、缓解癌性疼痛的作用“１。所以，榄香烯是一个有广泛应用前景的抗癌新药。
目前还没有开展榄香烯治疗喉癌的研究，本文的目的是研究榄香烯治疗喉癌的可行性及作用机制，为榄香烯应用于喉癌的临床治疗提供实验和理论依据。
第一部分
榄香烯诱导喉癌细胞凋亡的实验研究
材料与方法
一、细胞株
喉癌细胞株Ｈｅｐ一２细胞引自中国科学院上海细胞生物学研究所。用含１０％灭活新生牛血清的ＲＰＭＩ一１６４０培养液培养。
二、药品
１、榄香烯乳注射液由大连金港制药公司生产，批号：０００９３０。
２、氨甲蝶蛉由上海华联制药有限公司生产，批号：０００９０３。
三、实验器材
ｌ、流式细胞仪（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ型，美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉＥＳＯＩｑ公司）２、透射电镜（Ｈ６００型，日本Ｈｉｔａｃｈｉ公司）
３、超薄切片机（ＬＫＢ２０８８，瑞典）
４、全自动酶标光度计（美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司）
５、微量移液枪ＨＴＬ（１０ｕ１，２００ｐ１，１０００ｕ１）
６、倒置相差显微镜（日本Ｎｉｋｏｎ公司）
７、Ｃ０２孵育箱（Ｆｏｒｍａｓ，购于生命科学有限公司）
８、超净工作台（上海净化设备厂）
９、离心机（８０—２型，购于上海手术器械』一）
ｌ０、９６孔、６孔培养板（丹麦ＮＵＮＣ公司，购于上海华美公司）
四、试剂
】、四氮甲基唑蓝（ＭＴＴ，Ｓｉｇｍａ产品，购于上海华美公司）
２、ＲＰＭＩｌ６４０（Ｇｉｂｃｏ产品，购于上海华美公司）
３、Ｒｎａｓｅ（ｓｉｇｍａ产品，购于上海华美公司）
４、新生牛血清（购于杭州四季青生物工程材料研究所）
５、胰蛋白酶（ＡｍｅｒｏＳＣＯ产品，购于上海华美公司）
６、ＴＵＮＥＬ试剂盒（购于德国宝灵曼公司）
７、ＤＡＢ显色剂（Ｆ１ｕｋａ，购于德国宝灵曼公司）
五、方法
（一）实验准备
１、培养瓶、试管、滴管等玻璃器皿经次强清洗液浸泡过夜，清水洗净，双蒸水冲洗两遍，烘干，经１６０℃烘烤消毒。
２、瓶塞、ＴｉＰ头等经１５磅２０分钟高压灭菌。
３、药物稀释：实验前用含血清培养液配成１０倍实验浓度保存液。
４、ＭＴＴ配制：用ｐＨ７．２的ＰＢＳ液配成５９／Ｌ溶液，过滤除菌，
榄香烯诱导人喉癌Ｈｅｐ一２细胞凋亡及调控ｂｅｌ＿２表达舶研究
４。Ｃ避光保存。
５、乙醇配制：用三蒸水将无菌过滤的无水乙醇配成０．０５％的工作液。
（＿．）细胞培养：
细胞在含ｌＯ％新生牛血清，５０ＩＵ／ｍｌ青霉素，５０ｍｇ／ｍｌ链霉索的ＲＰＭＩｌ６４０培养液，３７℃，５％Ｃ０。温箱中温育培养，４８小时换液一次，取对数生长期细胞进行实验。
（三）ＭＴＴ法：
１、取对数生长期的Ｈｅｐ一２细胞，以０．２５％胰蛋白酶消化，用含血清培养液配成３×ｌＯ４／ｍ１的细胞悬液，每孔９０“ｌ接种于９６孔培养板上。
２、置３７℃，５％Ｃ０：温箱孵育２４小时进入对数生长期后加１０“】不同浓度的药物稀释液，实验时分成２０、４０、６０、８０、】００、１２０、１６０“ｇ／ｍｌ７组药物浓度和溶剂对照、阳性对照及空白对照十组，每个浓度设６个复孔，分别于加药后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ进行ＭＴＴ测定。
３、测定前倒置显微镜下观察、拍照。
４、每孔加ｌ０ｕ１５９／ＬＭＴＴ，培养４小时后，每孔再加入１００ｕ１ＤＭＳＯ，在摇床上振荡ｌＯｍｉｎ，结晶充分溶解后，置酶标仪上测定各孔在４９０ｎｍ波长处吸光度０Ｄ值。
５、按方差分析（Ｓｔｕｄｅｎｔ—Ｎｅｗｍａｎ～Ｋｅｕｌｄ法）进行数据统计，按下列公式计算生长抑制率：生长抑制率＝（１一ＯＤ月自ｍ／ＯＤ日月ｍ）Ｘ１００％。
用直线回归方程统计Ｉｃ。。值。
（四）透射电镜观察
１、取对数生长期的Ｈｅｐ一２细胞，以０．２５％胰蛋白酶消化，用含血清培养液配成３×１０４／ｍｌ的细胞悬液，传２个培养瓶，每瓶各加细胞悬液２．７ｍｌ，置３７℃，５％Ｃ０。温箱孵育２４ｈ。
２、一瓶加６００ｐｇ／ｍｌ榄香烯３００ｐｌ（终浓度为６０ｐｇ／ｍ１），另一加含ｌ０％新生牛血清培养液３００ｕｌ作对照。置３７℃，５９６Ｃ０：温箱孵育２４ｈ。
３、取出培养的ｌｔｅｐ一２细胞，将培养液倒入两支标记好的试管。离心１５００ｐｒｍ、５ｍｉｎ，弃上清，将沉淀细胞吸出，放回原培养瓶。４、在每个培养瓶中加入２％戊二醛固定液４ｍｌ，置４℃冰箱中固定２ｈ以上。
５、用自制细胞刷将全部细胞从瓶壁刮下，收集在试管中，离心１５００ｐｒｍ、５ｍｉｎ，置４℃冰箱中储存、备检。
６、用０．０１Ｍｏｌ／ＬｐＨ７．２ＰＢＳ洗涤２次，每次１０ｍｉｎ。
７、１％锇酸固定液固定２ｈ以上。
８、Ｏ．０ｌＭ０１／ＬｐＨ７．２ＰＢＳ洗涤两次，每次ｌＯｍｉｎ。
９、３０％一５０％一７０％乙醇逐级脱水，每次ｌＯｍｉｎ。４％醋酸双氧铀快染过夜。８０％一９５％一１００％一１００％逐级脱水，每次ＩＯｍｉｎ。
１０、环氧乙烷置换两次，每次１０ｍｉｎ。
ｌｌ、６１８包埋液与环氧丙烷（１：１）混合液浸透，２ｈ。６ｌ８包埋液与环氧丙烷（２：１）混合液浸透，过夜。纯６１８包埋液浸透，６ｈ。
ｌ２、６１８环氧树脂包埋，６０℃烘箱内４８ｈ。超薄切片机（ＬＫＢ２０８８瑞典）切片，醋酸钠一枸橼酸铅染色。
１３、透射电镜观察、摄片。
（五）流式细胞仪检测
１、取对数生长期的Ｈｅｐ－２细胞，以０．２５９６胰蛋白酶消化，用含血清培养液配成３×ｌＯ４／ｍｌ的细胞悬液，传９个培养瓶，每瓶各加细胞悬液２．７ｍｌ，置３７℃５％Ｃ０。温箱孵育２４ｈ。
２、取其中４个培养瓶，分别标记“对照”、“１２ｈ”、“２４ｈ”、“４８ｈ”对照瓶加含ｌＯ％新生牛血清培养液３００ｕｌ，其余各瓶加８００ｕｇ／ｍ］榄香烯３００ｕ１（终浓度为８０ｕｇ／ｍ］），如下处理。另外５个培养瓶分别标记“对照”、“４０ｐｇ／ｍ］”、“６０ｕｇ／ｍｌ”、“８０ｐｇ／ｍｌ”、“１００ｐｇ／ｍｌ”，除对照加含ｌＯ％新生牛血清培养液３００ｕ１外，其余各瓶依次加４００ｕｇ／ｍ］（终浓度为４０ｐｇ／ｍ１）、６００ｕｇ／ｍ１（终浓度为６０ｕｇ／ｍ１）、８００ｕｇ／ｍｌ（终浓度为８０ｕｇ／ｍ１）、１０００ｕｇ／ｍｌ（终浓度为ｌＯｏｕｇ／ｍ］）榄香烯３００ｔｔ１。置３７℃，５％Ｃ０。温箱孵育２４ｈ。３、Ｈｅｐ一２细胞上清倒入标记的试管中，培养瓶中加０．２５％胰蛋白酶消化，消化的Ｈｅｐ一２细胞加入对应的试管中，离心１５００ｐｒｍ、５ｍｊｎ，去上清。
４、０．０１Ｍ０１／ＬｐＨ７．２ＰＢＳ洗两次１５００ｐｒｍ、５ｍＪｎ。
５、将２ｍ１柠檬酸钠缓冲液缓慢滴入试管中，边滴边摇动试管，使Ｈｅｐ一２细胞分散、固定，置４℃冰箱中储存、备检。
６、上述固定ｔ｜ｅｐ一２细胞离心去上清，０．０１Ｍ０１／ＬｐＨ７．２ＰＢＳ洗两
榄香烯诱导人喉癌ＨｅＰ一２细胞凋亡及调控ｂｃ１—２表达的研究
次ｌ５００ｐｒｍ、５ｍｉｎ。
７、加入１８００ｕ１胰酶消化液，充分作用。
８、加入１５００“１ＲＮａｓｅ数分钟。
９、加入１５００ＩｔｌＰＩ作用１５ｍｉｎ。
１０、用２００目尼龙网过滤。
１１、上机进行细胞凋亡分析和细胞周期分析。
（六）ＤＮＡ末端标记法：
１、取对数生长期的Ｈｅｐ一２细胞，以０．２５％胰蛋白酶消化，用含血清培养液配成３×１０４／ｍ］的细胞悬液，接种在内置１×１ｃｍ大小盖玻片的６孔培养板中，每孔接种２．７ｍｉ，置３７℃５％Ｃ０：温箱孵育２４ｈ。
２、在培养板的盖上分别标记“对照”、“４０ｕｇ／ｍｌ”、“６０ＩＩｇ／ｍｌ”、“８０ｕｇ／ｍ１”、“１００¨ｇ／ｍｌ”，除对照加含１０％新生牛血清培养液３００ｕ１外，其余各瓶依次加４００ｕｇ／ｍ１（终浓度为４０ｕｇ／ｍ１）、６００ｕｇ／ｍｌ（终浓度为６０ｕｇ／ｍ１）、８００ｕｇ／ｍｌ（终浓度为８０ｕｇ／ｍ１）、１０００１１ｇ／ｍＩ（终浓度为１００ｕｇ／ｍ１）榄香烯０．３ｍ］。置３７℃，５％Ｃ０。温箱孵育２４ｈ。
３、倒去培养液，取出盖玻片，丙酮中固定３０分钟以上。
４、０．０５ｍｏｌ／ＬＴＢＳｐＨ７．６漂洗３次，每次５ｍｉｎ。
５、ＴＵＮＥＬ反应混合液５０ｐｌ，３７℃，２ｈ。
６、０．０５ｍｏｌ／ＬＴＢＳｐＨ７．６冲洗３次。
７、０．０５ｍ０１／ＬＴＢＳｐＨ７．６漂洗３次，每次５ｍＪｎ。
－１２．
榄香烯诱导人喉癌ＨｅＰ２细胞凋ＬＬ及凋控ｂｃｌ?２表达的研究
８、４０—６０“ｌ复盖液，室温，１ｈ。
９、０．０５ｍｏｌ／ＬＴＢＳｐＨ７．６冲洗３次。
】０、０．０５ｍｏｌ儿ＴＢＳｐＨ７．６漂洗３次，每次５ｍｊｎ。
１１、ＤＡＢ显色１５－３０ｍｉｎ，镜下控制。
１２、０．０５ｍｏｊ／ＬＴＢＳｐｉｔ７．６漂洗３次，每次５ｍＪｎ。
１３、苏木素复染ｌｍｉＩｑ，中性树胶封片。
１４、光学显微镜下观察并拍照。
】５、阳性细胞评定标准”１：有凋亡特征细胞核的形态：核染色质浓缩，边聚，细胞体积缩小；核染色质裂解，但细胞完整性好；核酸外溢，胞浆嗜酸性变：细胞外空隙；凋亡小体，细胞裂解小块，其周围有明显空隙。
１６、计数和分析：切片选择表达清楚并癌细胞丰富的１０个高倍镜视野，共计数ｌ０００个癌细胞中阳性细胞数，计算染色阳性细胞占肿瘤细胞的百分数。
凋亡指数＝凋亡细胞数／，０细胞数Ｘ１００％
数据运用ＳＰＳＳ统计软件分析。
喉癌手术前后护理常识 喉癌手术前后怎样护理最好？术前家属应着重关注病人的心理状态，术后同样需要心理护理，不过还应时刻关注病人术后的身体状况。 基本护理 (1)心理护理：做好病人及家属的安慰、解释工作，关心、体贴病人，满足其合理需求，使病人以良好的心理状态迎接手术。 (2)出现局部突然肿胀、呼吸极度困难、脉搏增快等症状时，应考虑癌肿坏死出血压迫气管，需及时通知医生，并立即做好救治准备。 (3)术前需放疗或化疗者，按放、化疗护理常规进行。 术后护理 (1)病人清醒后，即取半卧位，以利呼吸和引流。 (2)颈部放置冰块，预防切口出血。 (3)应注意保持引流通畅，防止皮瓣坏死；定时观察并记录引流液性状和量，发现异常及时通知医生处理。 (4)术后放、化疗者，按常规进行护理。 (5)加强心理护理。 喉癌手术期术后护理 喉癌治疗的方式很多，手术治疗是癌症治疗中常用的一种，主要是围绕远期疗效和功能的恢复而设计的，同时也随着人们对喉癌认识不断进步而改进。 1体位护理 未清醒患者取去枕平卧位，清醒后抬高床头30～40°角，有利于术后患者呼吸和头面部减轻水肿，同时使头颈轻度前屈，可减少颈部皮肤切口张力，24～48h后改为半坐卧位。但应避免头颈过度前屈，防止颈部造瘘口受敷料遮盖。 2呼吸道护理 注意保持气管导管通畅，及时抽吸导管内分泌物;注意每日气管内分泌物的量、颜色、气味及粘稠度等;按时气管内滴入生理盐水加抗生素和化痰药或行雾化吸入，导管口盖两层
湿纱布，可湿化气道，防止灰尘吸入。保持室温22℃左右，相对湿度90%以上。部分喉切除术后留置气管套管，应定时清洗消毒气管内套管及气管导管，一般4～6h清洗1次，必要时增加清洗次数;及时更换脏的气管垫，防止痰液等污染伤口。全喉切除术后，应保持颈部造瘘口周围清洁，随时擦净造瘘口周围的分泌物。 3颈部引流管的护理 部分喉切除或喉癌联合根治术后，术腔放置1～2条负压引流管，引流管能将术腔内的分泌物及淤血等引流出来，促进伤口愈合，防止术后感染。术后保持引流管负压及通畅、防止脱出非常重要。准确记录每天的引流量，观察引流液的颜色、性质。一般于术后2～3d、24h引流量小于10ml时可拔管。 4营养护理 喉癌病人大多术前存在营养不良，加之手术引起的高分解代谢，营养缺乏极易发生。术后给予足够的营养支持是促进伤口愈合、减少咽瘘的重要措施。胃肠功能恢复正常后1d 鼻饲5～6次，每次200ml，同时还应根据病人的体质情况，静脉补充营养，如白蛋白、脂肪乳、氨基酸等。若伤口愈合良好杨教授特别指出，未并发咽瘘或下咽狭窄，术后10d可拔除胃管，恢复经口进食。若并发咽瘘，鼻饲应保留到咽瘘愈合。鼻饲时及鼻饲后1h病人取坐位或右侧卧位或床头抬高45°角，有预防发生吸入性肺部感染的作用。在鼻饲过程中，严格按饮食卫生要求进行操作，防止污染营养液，并注意固定好胃管，防止脱落。 5口腔护理 常规口腔护理。嘱患者把口内分泌物吐出或吸出，手术后7～10d内不作吞咽动作，避免牵拉或将口内分泌物咽下污染喉部伤口，引起伤口出血，感染而形成咽瘘。 6观察病人有无呕血、黑便等应激性溃疡的表现，以便及时发现，及时处理。 7预防外源性感染 嘱病人不要穿高领衣服;避免过于干燥或湿度太大的气流刺激;加强呼吸功能锻炼，鼓励有效排痰。咳痰时用手指轻压套管，防止套管随气流波动而产生摩擦，引起气管粘膜损失、出血[2];沐浴时气管吻合口防水罩扣在气管套外口的柄盘上，沐浴后取下，可有效避免污水进入吻合口的弊端，又不影响呼吸和排痰[3]。 8心理调整
实验目的： 1.了解凋亡细胞的形态学特征，加深对于细胞凋亡现象及本质的理解。 2.了解并掌握细胞凋亡检测的方法和基本原理。 实验原理： 细胞凋亡时，出现一系列形态学变化，包括凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状，染色质的DNA出现缺口甚至断裂，出现DNA碎片，并逐渐形成凋亡小体等，经相应的染色后可以在普通光学显微镜和荧光显微镜下观察到这些变化。从而把凋亡的细胞和正常的细胞区分开来。
细胞凋亡是指细胞对环境的生理、病理性刺激信号、环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。细胞凋亡是一个主动过程，涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下的自体损伤，而是为更好地适应生存环境的一种死亡过程。 1．细胞凋亡与细胞程序性死亡： 细胞程序性死亡的概念是指一个多细胞生物体中某些细胞的死亡是个体发育中一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。例如蝌蚪变成青蛙，其变态过程中尾部的消失伴随大量细胞死亡，高等哺乳类动物指间蹼的消失、颚融合、视网膜发育以及免疫系统的正常发育都必须有细胞死亡的参与。这些形形色色的在机体发育过程中出现的细胞死亡有一个共同特征：即散在的、逐个地从正常组织中死亡和消失，机体没有炎症反应，而且这种死亡对整个机体的发育是有利和必须的。因此认为动物发育过程中存在的细胞程序性死亡是一个发育学概念，而细胞凋亡则是一个形态学的概念，但是一般认为这两个概念可以交互使用，具有同等意义。2．细胞凋亡与坏死的区别： 虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似，但它们的过程与表现却有很大差别。坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大、胞膜破裂、细胞内容物外溢、核变化较慢、DNA降解不充分、有局部严重的炎症反应。坏死是一个被动的过程，其细胞及组织的变化与凋亡有明显的不同。
喉癌 概念 喉癌(carcinomaofthelarynx)就是来源于喉粘膜上皮组织的恶性肿瘤,最常见的喉癌为 喉鳞状细胞癌。多见于中老年男性。 分型与分期 分型,按癌肿所在部位:(一)声门上型(二)声门型(三)声门下型。 分期,I期、II期、III期、IV期。 病因 (1)吸烟:烟草燃烧可产生烟草焦油其中苯芘可致癌且烟草的烟雾可使纤毛运动停止或迟缓也引起粘膜水肿与出血使上皮增生变厚鳞状化生成为致癌基础。 (2)饮酒过度:长期刺激粘膜可使其变性而致癌。 (3)慢性炎症刺激,如慢性喉炎或呼吸道炎症。 (4)空气污染:气有害体如二氧化硫与生产性工业粉尘如铬砷的长期吸入易致喉癌。 (5)病毒感染,一般认为病毒可使细胞改变性质发生异常分裂;病毒可附于基因上传至下代细胞发生癌变。HPV-16、18已被认为与喉癌的发生发展有关。 (6)癌前期病变:喉部角化症与喉部良性肿瘤如喉乳头状瘤反复发作可发生癌变。 (7)放射线:用放射线治疗颈部肿物时可致癌。 (8)性激素:有关实验表明喉癌病人雌激素受体阳性细胞百分率明显增高。 临床表现 1、声音嘶哑,因肿瘤累及声带或因感染而使声带水肿,都可引起声哑或间歇声哑。 2、咽喉部有异物感、紧迫感或吞咽不适,为声门上癌的首发症状。 3、咳嗽,由分泌物刺激所致,咳嗽时痰中带血,间断脓血臭痰,或刺激性干咳。 4、疼痛,因感染或肿瘤所累侵犯组织及软骨而引起疼痛,可向同侧耳部放射痛,喉节处痛或胀。 5、呼吸困难,喉部肿瘤增大压迫气管或气管狭窄,早期呼吸困难。 6、肺部感染,多由喉头反向功能减退,易将食物误咽入气管或坏死瘤组织流入气管,引起吸入性肺炎。 7.颈部肿块,为主诉就诊,常在上颈部、下颌角后方扪及包块。 按分型 声门型:声嘶,喉鸣,呼吸困难,血痰,喉阻塞 声门上型:异物感,咽部不适,咽疼,耳疼,痰中带血,声嘶,呼吸困难 声门下型:早期无症状,后咳嗽,血痰,呼吸困难 扩散转移 喉癌按其分化程度与原发部位可有以下3种方式的扩散转移: 1、扩散:晚期喉癌常向粘膜下浸润扩散。位于会厌之声门上型癌,可向前侵入会厌前隙、厌谷与舌根。杓状会大庆襞部癌向外扩散至梨状窝、喉咽侧壁。声门型癌可向前侵及前连合,扩散至对侧声带;亦可向前破坏甲状软骨,使喉体膨大,并有颈前软组织浸润。声门下型癌向下蔓延至气管、亦可穿破环甲膜至颈前肌层,向两侧发展,侵及甲状腺;向后累及食管前壁。 2、转移:转移部位多见于颈深上组的颈总动脉分叉处之淋巴结,然后再沿颈内静脉向上、下部之淋巴结发展。声门下型癌常转移至气与旁淋巴结组。 3、转移:可循血循环向全身转移至肺、肝、肾、骨、脑垂体等。
喉癌患者围手术期护理 喉癌是头颈外科常见恶性肿瘤之一，其以手术治疗为主，目前5年生存率在70%左右[1]。喉癌患者的围手术期护理在减少并发症、提高治愈率、提高患者生存质量等方面有重要意义。其内容包括术前的心理、饮食及各项准备工作，术后患者心理、气管切开、进食护理等。针对性地开展全方位的护理工作，采取合理的护理措施，并引导他们适时进行心理调节，可以增强战胜疾病的信心，并顺利度过术后康复期。现将其护理体会报告如下。 1 临床资料 2 护理措施 2.1术前护理 2.1.2术前饮食护理：了解患者的饮食习惯及营养状态，根据实验室检查结果，全面评估患者全身营养状况，纠正患者不良饮食习惯，并根据术后饮食需要来制定饮食营养方案。因术后患者鼻饲半流质饮食，需要进食高蛋白、高营养、高维生素、高纤维含量的食物，对不习惯饮用牛奶的患者，手术前应逐步锻炼饮用牛奶，以适应手术后的膳食需求。 2.1.3麻醉前护理：术前3天用呋喃西林溶液漱口，保持口腔清洁，预防术后切口感染，术前1日洗澡、理发、剃须，备皮。术前1天晚睡前口服镇静安眠药，术前8h禁食水，遵医嘱留置鼻饲管及尿管，术前让患者排空大小便，做好抗生素及麻醉药皮肤过敏试验，床边备好急救药品、氧气、吸引器及吸痰器用物等。 2.1.4术前生活习惯宣教：向患者和家属说明治疗方法和配合要点，
取得患者和家属的理解和配合。做好常规检查，嘱咐患者戒烟，加强营养，练习在床上大小便，指导患者注意休息，保证充足的睡眠，进高蛋白、高维生素、高热量、易消化的清淡饮食，保证充足的营养物质供给，以提高机体免疫力和术后组织修复能力。教会患者学习简单的手势以备术后表达基本的疼痛、饥饿、咳痰、呕吐等，对高龄及文盲患者，可制作一些卡通片，分别表示上述需要，教会患者熟练使用；对患者及家属宣教留置气管套管的目的、意义以及常见的问题的处理方法，消除患者及家属对术后留置气管套管的惧怕心理。 2.2术后护理 2.2.1全麻术后护理：全麻手术护理，一般术后送重症监护室监护治疗，待病情平稳安返病房。患者置单间病房，按气管切开术后护理，备好抢救物品，予心电监护、吸氧，严密监测呼吸、血压、脉搏、血氧饱和度，每6h监测体温一次，严密观察患者的意识反应，观察患者清醒后的精神状态。注重患者术部出血情况，如出血量多及时报告医生处理，观察有无显性出汗，并记录尿量的多少，为补充液体提供依据。 2.2.2气管切开术后护理，严密注重呼吸变化，注重气管套管的位置是否正常，套管是否通畅，有无分泌物，分泌物的颜色及量，如有新鲜血性分泌物，并且量较多，应注重是否咽喉腔活动性出血。 2.2.4术后基础护理：注重病房通风换气，保持病室的环境清洁卫生；注重保持患者身体卫生，鼓励下床活动以利于肺功能的恢复，鼻饲的患者做好口腔护理。限制病房的探视人数，防止交叉感染；做好患者的皮
β-榄香烯的分析检测方法及制备技术研究进展 黄汉昌a,b，姜瑞瑞a,b，张明贤c*(北京联合大学，a.生物活性物质与功能食品北京市重点实验室，b.应用文理学院，c.生物化工程学院，北京 100191) 摘要：目的介绍β-榄香烯的分析检测方法及制备技术研究进展。方法本文对榄香烯的双键异构及β-榄香烯的光学异构体分子结构、分析检测方法及制备技术进行了综述；进一步评述从天然植物中提取及分离β-榄香烯的方法及技术的优缺点。结果与结论气相或液相色谱结合核磁、质谱等光谱技术能较好地检测β-榄香烯成分及含量；众多植物挥发油富含β-榄香烯，采用真空精馏及柱层析联用技术能获得高纯度的β-榄香烯。 关键词：β-榄香烯；提取；分离；分析 中图分类号：R284.2; R917 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2011)02-0116-06 The Progress on Analytical Methods and Isolated Techniques on the Development of β-Elemene HUANG Hanchang a,b, JIANG Ruirui a,b, ZHANG Mingxian c*(Beijing Union University, a.Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances and Functional Foods, b.College of Arts and Science, c.College of Biochemical Engineering, Beijing 100191, China) ABSTRACT:OBJECTIVE To review the progress of β-elemene on the analytical methods and isolated techniques. METHODS This article provides an overview about the structures of elemene’s cis-trans isomers and optical isomers of β-elemene, the analytical methods and isolated techniques of β-elemene, and further comment of advantages and disadvantages on the extraction and isolation of β-elemene from natural products. RESULTS and CONCLUSION β-elemene will be well detected by gas or liquid chromatography plus spectrum techniques, like nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrum (MS). β-elemene is contained on a host of essential oils and will be well isolated by the combined techniques of vacuum distillation and column chromatography. KEY WORDS:β-elemene; extraction; separation; analysis 基金项目：北京市教育委员会科技计划项目(KM201011417002) 作者简介：黄汉昌，男，硕士，助理研究员 Tel: (010)62004534-8105 E-mail: hanchang@https://www.doczj.com/doc/1a6216851.html, *通信作者：张明贤，男，硕士，副教授Tel: (010)52072047 E-mail: zhangmx@https://www.doczj.com/doc/1a6216851.html, ·116·Chin JMAP, 2011 February, V ol.28 No.2 中国现代应用药学2011年2月第28卷第2期
细胞凋亡实验步骤及注意事项 一、实验目的 1、掌屋凋亡细胞的形态特征 2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法 二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。 在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触，细胞变园，细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体，凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外，不会影响其它细胞，因而不引起炎症反应。 在生物化学上，多数细胞凋亡的过程中，内源性核酸内切酶活化，活性增加。核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断，降解为180-200bp 或它的整倍数的各种片断。如果对核DNA进行琼脂糖电泳，可显示以180-200bp为基数的DNA ladder（梯状带纹）的特征。 相比之下，坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早期即丧失质膜完整性，各种细胞器膨胀，进而质膜崩解释放出其中的内容物，引起炎症反应，坏死过程中细胞核DNA虽也降解，但由于存在各种长度不等的DNA片断，不能形成梯状带纹，而呈弥散状。 一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡，通常这些因素在诱导凋亡的同时，也可产生细胞坏死，这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。 三尖杉酯碱（HT）是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病，急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时，即可诱导HL-60细胞凋亡，并表现出典型的凋亡特征。本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡，同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死及正常细胞。细胞膜是一选择性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。当细胞坏死时，质膜不完整，PI就进入细胞内部，它可嵌入到DNA或RNA 中，使坏死细胞着色，凋亡细胞和活细胞不着色。而一些活细胞染料由于为亲脂性物质，可跨膜进入活细胞，因而可进行活细胞染色。
β-榄香烯的合成与衍生化研究进展 摘要：本文综述了β-榄香烯的天然提取、合成和衍生物的研究进展，因为β-榄香烯衍射物的活性较β-榄香烯母体有较大的提高，所以研究的较多。并且经过对文献进行分析归纳，在保持β-榄香烯整个分子骨架和双键的前提下，在13、14位引入含氮、含氧基团合成的大多数β-榄香烯衍生物的体外抗瘤活性高于β-榄香烯，水溶性也有所改善。 关键词：β-榄香烯天然提取合成衍生物 1.β-榄香烯的概况 1981 年我国学者首次报道了从传统活血化淤的中草药温莪术挥发油中分离的β-榄香烯具有抗肿瘤活性，1995 年，以β-榄香烯为主要成分的榄香烯乳注射液被国家批准为二类抗癌新药，用于临床。榄香烯与紫杉醇、喜树碱、长春碱、鬼臼毒素、靛玉红、三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱等一起被列为重要的植物源抗肿瘤药物。榄香烯作为天然中草药的有效提取成分，有着资源丰富、价格相对低廉等化学合成药物不具备的优良特性，其具有抗肿瘤与免疫调节的双重作用。研究结果表明，β-榄香烯注射液具有广谱的抗癌活性。 β-榄香烯是从中草药温莪术中提出出来的一种倍半萜烯化合物，结构如图1，榄香烯有5种异构体，目前已全部分离出来。 2.β-榄香烯的合成 2.1从天然产物提取 目前β-榄香烯的获取主要是从中草药莪术挥发油中分离提取。在提取莪术挥发油中，水蒸气蒸馏法（SD）、索氏提取法（SX）、超临界流体萃取法（SFE）及微波萃取法（MAE）等是文献报道的主要方法。将药材和水混合，水蒸气带着蒸馏出的药材挥发性组分溜出，溜出组分通过冷凝液化后，再分离和提取出挥发性成分，这种浸润提取的方法叫做水蒸气蒸馏法，这种方法主要有通水蒸气蒸馏法、共水蒸馏法和水上蒸馏法，其
喉癌患者术后护理 喉癌患者术后护理 摘要：目的探讨喉癌患者术后的护理减少并发症的发生。方法通过对我院25例喉癌患者术后伤口、饮食及心理护理，促使患者早日康复，预防并发疽有重要的意义。结果通过对25例喉癌患者术后进行以上护理，有利于患者早日康复，无并发症发生。结论针对患者的病情、心理特。皇、术后要注意和需要解决的护理问题，从而采取不同的护理措施，有效预防并发症发生。关键词：喉癌、术后护理喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤，主要以鳞状上皮癌多见。占耳、鼻、咽、喉恶性肿瘤的l1～22%，居第三位。手术为最根本的治疗，但手术创伤大，出血较多益引起多种并发症，可能会导致患者呼吸改道，发音功能丧失，外形破坏及各种心理问题，因此术后护理和并发症的防止是促进患者早日康复的关键。现总结我科2008年3月至2010年2月收治的25例喉癌患者，谈谈其术后护理要点。1资料与方法 1.1一般资料25例患者中男性21例，女性4例，年龄42～60岁，平均年龄52岁，病理检查为鳞状细胞癌。均无术后并发症，并于住院第20～25d好转出院。 1.2方法在全麻下行垂直或水平半喉切除术，在取尽肿瘤的基础上尽量保留部分软骨达到既根治肿瘤有保留发全喉音功能，但全喉切除术只有在术中或术后进行发音重建2术后护理2、1减轻疼痛、合理体位、充分休息术后疼痛既不利于患者配合治疗，又影响患者的休息质量，不利于患者恢复。疼痛的程度因手术方式、麻醉及患者个体对疼痛耐受力的差别而不同。在护理上以保持患者正确舒适的卧位，抬高床头3O～45.，减轻颈部切口张力利于呼吸和减轻头面部水肿，有预防发生肺部感染的作用。教会患者起床时保持头部和颈部在同一平面上，避免头部过度牵屈，防止剧烈咳嗽等。必要时可遵医嘱使用止痛药物。同时辅以心理疏导，解释疼痛的原因及可能持续的时间，做好基础护理，让患者有一个舒适的休息环境，是减轻患者疼痛感的有效措施。 2.2做好气管切口的护理防止呼吸道阻塞、切口出血和肺部感染气管切开是喉手术必须实施的治疗手段，也是术后感染，发生咽瘘的直接诱因；喉全切和次全切除后，严格无菌操作，防止伤口感染，保持呼吸道通畅，做
浅析喉癌患者围手术期的整体护理体会 发表时间：2016-10-17T14:06:57.017Z 来源：《航空军医》2016年第18期作者：安淑晶段凤芹[导读] 做好围手术期的护理，实施有效的护理措施，可以减少并发症的发生，保证喉癌患者的治疗效果。 鹤岗市人民医院 154101 【摘要】目的：研究分析喉癌围手术期的护理效果观察。方法：此次研究的对象是选择82例喉癌切除患者。将其资料进行回顾性分析。结果：所有喉癌患者经过采取有效护理措施，精心护理，全部治愈出院。结论：做好围手术期的护理，实施有效的护理措施，可以减少并发症的发生，保证喉癌患者的治疗效果，促进患者身心健康。【关键词】喉癌；围手术期；护理[Abstract] Objective：To study the effect of perioperative nursing on patients of laryngeal cancer.Methods：the study was performed in 82 patients with laryngeal cancer.The data were retrospectively analyzed.Results：all patients with laryngeal cancer after taking effective nursing measures，careful nursing，all cured and discharged.Conclusion：good perioperative care，the implementation of effective nursing measures can reduce the incidence of complications，ensure the treatment effect of patients with laryngeal cancer，and promote the physical and mental health of patients. [Key words] laryngeal cancer；perioperative period；nursing 喉癌是耳鼻喉科常见的头颈部恶性肿瘤，好发于50～70岁，是起源于喉黏膜上皮组织的恶性肿瘤，以鳞状上皮癌多见，常向颈部转移，晚期还可以转移至骨髓、肺、肝等器官[1]。治疗方法以手术为主，手术切除范围广，创伤大，术后易发生多种并发症，术后常出现失音，永久性气管造瘘口等问题，患者自身形象受到影响，还要适应造瘘口呼吸带来的不便[2]。围手术期也称手术全期，指护士从迎接患者进入病房到患者术后痊愈出院这段时期。围手术期护理是喉癌患者外科治疗中极为重要的一个环节，不但有利于手术的顺利进行，还有利于患者术后疾病的恢复，提高患者的生活质量。现将2008年1月-2012年10月82例喉癌患者围手术期整体护理体会总结如下。 1 临床资料 选取2008年1月-2012年10月本科手术喉癌患者82例，年龄38～78岁，平均51.6岁，男74例，女8例，有吸烟史63例，饮酒史72例。临床症状主要为声音嘶哑，病理诊断为喉鳞癌73例，乳头状瘤癌变6例，腺癌3例。部分喉切除术41例，全喉切除术19例，次全喉切除术22例。 2 围手术期护理 2.1 术前护理 2.1.1 入院宣教及心理护理患者入院时，热情迎接，由责任护士送入病房，介绍病区环境，病区设施，作息时间，主治医师，责任护士，同病室病友，科主任和护士长的名字及联系方式，帮助他们尽快熟悉环境。详细向患者介绍各项检查的名称，目的，注意事项，留取标本的方法，完善相关检查，了解患者心、肝、肾等重要器官的功能，及早发现对手术有影响的重要情况。大多数患者有吸烟饮酒的习惯，耐心向患者介绍烟酒的危害性，劝其主动戒烟戒酒，注意保暖，常规拍胸片了解肺内情况，对有异常的患者，除应用抗生素外，要鼓励其咳嗽排痰[3]。向患者及家属解释喉癌的病因及诱因，介绍喉癌治疗的方法及治疗效果，只要早期发现，早期治疗，大多数患者可以长期生存，请成功手术的患者现身说教。向患者介绍手术大约所需时间，主刀医生技术，住院全程大体费用，药费报销比例，打消患者的经济顾虑。鼓励患者多与家人联系，取得亲情帮助。与患者、家属一起制定术后有效沟通方式，如饿了想吃饭指指嘴巴；渴了，舔舔嘴唇；饱了，拍拍肚子；吸痰，用手指气管切开处等；介绍术前行鼻饲、留置导尿管的目的和意义，术后常见并发症的预防，吞咽功能及语言康复训练的实施和方法。责任护士通过与患者语言沟通和观察，从认知，情绪，生理等方面对患者进行评估并制定相应的护理措施，通过心理分析和心理指导，鼓励患者面对现实，树立战胜疾病的信心。 2.1.2 术前准备注意保持口腔卫生，指导患者正确刷牙早晚各一次，术前3 d用用复方氯已定含漱液漱口，每日3次，观察患者口腔内有无感染。指导患者听轻缓音乐，注意休息，保证充足的睡眠。指导患者食用高蛋白、高维生素、高热量、易消化的清淡饮食，少吃辛辣刺激油腻的食物，保证充足的营养物质供给，以提高机体免疫力和术后组织修复能力。术前1 d备血，洗澡，术区备皮。备皮范围从颈部乳突尖及下颌骨下缘起，两侧达颈侧后方，下至第3肋骨及肩部[4]。术前禁食8 h，置胃管，置尿管，遵医嘱应用镇静药，备麻醉床，吸氧装置，吸痰装置，多参数心电监护仪，麻醉护理盘。 2.2 术后护理 2.2.1 环境准备保持病室安静，减少陪护和探视。室内空气清新，使用加湿器，控制室温在18～22 ℃，湿度在60%～80%，每日湿式打扫，用500 mg/L的84消毒液拖地2次，用紫外线灯照射消毒2次，定时开窗通风，减少空气中的细菌繁殖。 2.2.2 体位护理患者取去枕平卧位，保持呼吸道通畅，持续吸氧，检测呼吸、脉搏、血压、血氧饱和度至病情稳定，记录24 h出入量。完全清醒6 h后改为半卧位，头下垫高枕使头前倾位，减轻吻合口张力，避免皮瓣和喉部张力过大，导致吻合口撕裂。 2.2.3 口腔护理保持口轻清洁，术后3 d每日3次用生理盐水棉球擦洗口腔，用时棉球水分不宜过多，嘱患者将口腔内分泌物吐出，口腔有异味时，用1%过氧化氢棉球擦洗。术后第4 d，协助患者用小头软毛刷刷牙[5]。术后全喉切除患者10 d，部分喉切除患者3 d内禁做吞咽动作，以避免喉部牵拉或将分泌物咽下引起喉部切口疼痛或者感染。 2.2.4 饮食护理患者术后8 h内禁饮食，8 h后如无特殊情况可给予高热量、高蛋白、高维生素易消化的鼻饲流质。热量每天2558.13～3295.01 kJ/kg，温度38～40 ℃，100～300 ml/次，每日5～8次，鼻饲前充分吸痰，床头摇高30度，为防止反流，鼻饲以30 ml/min的速度，不可过快。胃管留置10～14 d，妥善固定，避免脱出，在前鼻孔周围凃金霉素眼药膏，以防管壁压迫坏死感染[6]。术后10 d试饮温开水，观察1～2 d无不适可停鼻饲，拔除胃管时，要先注入少量气体，以防管头的食物在拔出时落入气管。若无呛咳可开始经口进食，进食时保持坐位，头稍前倾或用手指轻轻按颈前区，减少呛咳。给予高能量、高维生素、富含蛋白质的易消化食物，如牛奶、果蔬汁、肉羹、蛋羹等。禁用干硬、刺激性强、大块食物，以免引起窒息。进食速度应缓慢，进食时不能说笑，避免引起呛咳等不适。若进食后呛咳剧烈，立即停止进食，通知医师给予处理。
喉癌护理常规 【相关知识】 喉癌发生于喉腔，是头颈部常见的恶性肿瘤之一，占头颈部恶性肿瘤的 3.3%~8.1%。近年来，喉癌的发生率有增高的趋势，好发年龄多集中在50~70岁，其中以男性多见，男、女比例为4:1。喉癌的发生与吸烟、饮酒有密切的关系，与职业环境中存在的致癌物质、离子辐射、性激素以及饮食中缺乏维生素A、微量元素等有关。也与遗传因素有关。一些癌前病变如慢性增生性喉炎及息肉样声带炎、喉角化症、喉乳头状瘤等喉上皮增生症易致癌变。喉癌病理类型以鳞癌多见，其次为未分化癌、腺癌、肉瘤。 一、一般护理 1.执行放疗内科一般护理常规。 2.各种治疗、护理及检查均相对集中在日间，动作轻柔，尽量减少对患者的刺激和影响。 3.指导头颈部功能锻炼。 二、评估 【初始评估】 1.评估现病史、既往史、用药史、药物过敏史。评估病人有无声嘶、喉部异物感、咽下疼痛等症状。询问患者有无慢性炎症刺激与病毒感染，如慢性喉炎或呼吸道炎症。一般认为病毒可使细胞改变性质发生异常分裂，病毒可附于基因上传至下代细胞发生癌变。HPV-16、18已被认为与喉癌的发生发展有关。有无喉部角化症和喉部良性肿瘤如喉乳头状瘤等癌前期病变症状，反复发作可发生癌变。 2.评估生活方式：评估患者有无吸烟及饮酒史，烟草燃烧可产生烟草焦油其中苯芘可致癌且烟草的烟雾可使纤毛运动停止或迟缓也引起粘膜水肿和出血使上皮增生变厚鳞状化生成为致癌基础。饮酒过度会长期刺激粘膜可使其变性而致癌；评估其生活及工作环境有无空气污染：有害气体如二氧化硫和生产性工业粉尘如铬砷的长期吸入易致喉癌。 3.评估家庭、社会支持情况：了解其家庭、朋友、工作单位等社会家庭支持系统对病人的关心、理解支持程度，提高家庭及社会支持水平。 4.评估患者目前意识状态、生命体征、营养状况、心理状态。 5.风险评估：评估患者有无压疮、跌倒坠床、DVT、自杀倾向、营养不良等高危风险。 【持续评估】 1.专科疾病症状、体征：最常见的是声音嘶哑，为声门型的首发症状；声门上型的首发症状为咽喉部异物感，但常被忽视。其次有刺激性干咳、痰血。肿瘤向深层浸润或表面发生溃疡时出现喉痛，晚期可出现呼吸困难。有淋巴结转移时可出现颈部肿块。观察患者声嘶、喉部异物感、咽下疼痛的程度，评估喉造口部位及放疗区的皮肤是否完整，有无充血水肿，术后造口的病人应观察伤口愈合情况，喉造口病人套管的类型等。 2. 风险评估：危重病人、特殊检查或治疗的病人以及年老体弱、行动不便者应特别关注，动态评估压疮、跌倒坠床、DVT、自杀等风险因素，并采取针对性的干预措施。 三、护理问题/观察要点 护理问题：①知识缺乏②功能障碍性悲哀③语言沟通障碍④清理呼吸道无效⑤有皮肤完整性受损的危险⑥疼痛⑦低效性呼吸型态⑧有窒息的危险。 观察要点：有无呛咳、干咳、呼吸不畅、呼吸困难等症状，患者全身的情况有无乏力体重下降等；观察放疗区皮肤情况；观察气切套管的情况以及分泌物的颜色、性状、量；患者的血象；患者对疾病的认知及心理承受程度； 四、护理措施 1.体位与活动保证充足的休息和睡眠，避免疲劳和情绪波动。根据病情取舒适体位休息，可
喉癌全喉切除术患者围手术期护理 发表时间：2019-07-01T11:22:55.477Z 来源：《医师在线》2019年4月7期作者：丰爱华孔令红 [导读] 喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一。老年喉癌患者多合并高血压、糖尿病、心脏病、肺疾病等全身慢性病，麻醉、手术的风险大，容易出现相关的并发症。 丰爱华孔令红 （空军特色医学中心.干部病房九区；北京100142） 喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一。老年喉癌患者多合并高血压、糖尿病、心脏病、肺疾病等全身慢性病，麻醉、手术的风险大，容易出现相关的并发症。患者行喉全切除术后失去发音功能，难以正常社交，往往造成患者身心障碍。针对以上特点，我科对老年喉癌全喉切除术患者加强护理，有效地降低了并发症的发生，保证了患者的顺利康复。现将护理体会总结如下。 1护理 1．1术前护理 1．1．1 心理护理细心观察患者，及时发现患者的心理问题，针对患者的恐惧、悲观、绝望的心理，向患者介绍成功的病例，消除患者对癌症是不治之症的误解，增强患者战胜疾病的信心。 1．1．2完善术前各项常规检查遵医嘱完成常规血化验、胸片、心电图、血压、血糖、肺功能等检查，如有异常，调整到正常水平才能手术，尤其是血压、血糖、电解质。据报道[1]，围手术期高血压的发生已占老年手术患者的30％～60％，高血压增加了麻醉、手术的风险，尤其是增加围手术期心脑血管意外及其他并发症的发生。临床上一般主张择期手术的老年患者血压降至140／90 mmHg为宜，对伴有糖尿 病的患者降压的目标为130／85 mmHg。围手术期糖尿病患者血糖未控制，术中术后可能会发生低血糖、昏迷、酮症酸中毒、代谢紊乱等并发症，另外，血糖高会影响术腔的上皮化，增加感染机会。血糖以 控制于6．7～10．0 mmol／L为宜[1]。 1．2术中护理密切监测生命体征变化，发现异常及时汇报医生处理。保持负压吸引通畅，及时吸出喉部血性液体，以防窒息。 1．3术后护理 1．3．1 早期活动麻醉清醒后予头高位，平卧，术后第1天开始床上活动，第2天协助下床活动，鼓励病人在补足液体、气道湿化的情况下，自行咳嗽、咳痰，将痰液自然咳出，减少反复吸痰造成的感染和损伤。鼓励患者早期活动，增加肺活量，促进血液循环，增强消化道功能，防止血栓及肩周炎的发生。 1．3．2呼吸道护理术后保持相对稳定的室温和湿度非常重要，一般室温保持在22℃左右，相对湿度60％"--70％。术后24 h持续监测病人心率、呼吸、血压、血氧饱和度，持续面罩吸氧，流量2 L／min，以保持足够的氧气供给。加强气道护理，保持呼吸道通畅，定时翻身拍背，并及时吸痰，预防肺部并发症的发生[2]。吸痰时压力不宜过大，吸痰管插入不能过深，尽量避免深部抽吸，以免损伤气道黏膜。术后常规雾化吸入，保持呼吸道湿润，减少术后刺激性咳嗽，有利于伤口痊愈。鼓励病人多饮水，以稀释呼吸道分泌物，勤吸痰，预防呼吸道感染和堵塞。由于痰液分泌物的刺激，术后病人颈部切口易 感染，需及时清洁切口周围皮肤和更换纱布垫，保持切口敷料干燥。 1．3．3饮食护理喉癌术后早日行胃肠道营养支持，有利于术后恢复，尤其对老年喉癌患者，术后的营养支持甚为重要。鼻饲流食应少量多餐，每3 h一次，每次400 ml，给予高蛋白、高热量及富含维生素的食物，如牛奶、鸡蛋花、鸡汤、鱼肉泥、果汁、蔬菜汁等。鼻饲时可将高蛋白、高热量的食物与高维生素饮食交替进行，以利于各种营养素的均衡摄人。两餐之间适当补充水分以利于消化。本组患者中，我们采用新的管饲法，即每3 h一次，每次400 ml，代替传统的管饲法即每2 h一次，每次200 ml，增加管饲量不仅符合喉癌术后患者的营养需要，而且可以减少鼻饲患者胃肠道并发症的发生，更有利于患 者康复。 1．4并发症的观察与护理 1．4．1乳糜漏进行颈廓清创术，若术中损伤胸导管，可发生乳糜漏或淋巴漏，多数患者乳糜漏发生于术后2～3 d将拔引流管时，此时会发现引流量渐多，每天总量超过250 ml，最多每天可达500 ml，外 观初为淡黄色，以后则为乳白色，伴有锁骨上皮肤肿胀明显、凹陷压迹等现象，若发现乳糜漏，立即通知医生，停止负压吸引，局部加压包扎。由于食物中含有大量长链甘油三酯，经肠道吸收后进人淋巴系统增加乳糜液的形成，停止鼻饲1周后，乳糜漏多可自愈。本组患者给予蛋白质、脂肪、碳水化合物、电解质，胰岛素全肠道外营养，维持机体生理需要量[3] 1．4．2肺栓塞术后患者若出现面色苍白、血压下降、呼吸循环障碍，应考虑肺栓塞的发生，尽快报告医生查明原因，纠正休克，护理上应严密监测生命体征，待生命体征稳定后在补足血容量的情况下，再行 结扎。 1．4．3气胸或纵隔气肿发生气胸或纵隔气肿多为损伤胸膜顶所致，少量气体进人纵隔无任何症状，多可自行吸收；若合并气胸时，少量积气行胸腔穿刺排气，若呈张力性气胸，必须做胸腔闭式引流，排除 积气。 1．4．4误吸与进食呛咳误吸、进食呛咳往往与手术切除部位大小、精神因素、食物粘稠度、进食体位有关。护士要主动向病人进行健康饮食指导，指导病人第一次经口进食时，选择糊状的半流质食物，如 烂糊面，避免进食流质食物。进食时的最佳体位是让患者取端坐位、头低30度下颌内收，尽量不吃米饭、馒头等。帮助其改变进食过热、过快等不良习惯。通过护士的耐心指导，本组患者无一例发生误 吸与呛咳。 1．4．5健康指导本组老年患者大多文化程度不高，因此，加强健康指导尤为重要。嘱患者合理休息，调配饮食．少量多餐，适当进行体育锻炼。坚持颈肩部的康复训练，定期复诊，有问题随时就诊，教会患者简单的自检方法。告知患者要长期接受随访，并解释长期随访的重要性。患者需终身带管，指导患者及家属掌握消毒套管的方法，学会更换喉垫，必要时家中备吸痰器。防止异物落人造瘘口发生意
学杂志,2000,20(9):544-5451 [18]吴永宁,陈东生,付磊,等1菝葜三种提取物活血化瘀 药理作用研究1中国药科大学学报,2001,32(6):448- 4501 [19]吕永宁,陈东生,邓俊刚,等1菝葜对小鼠佐剂性关节 炎作用的研究1中国现代应用药学杂志,1998,15 (5):5-71 [20]马世平,卫敏,郭健,等1菝葜对小鼠血糖和肝糖元的 影响1中国现代应用药学杂志,1998,15(5):5-71 [21]K i m Y oung M,i et al1E ffects o f nat ura l products on t he i nducti on o fNAD(P)H:qu i none reductase i n hepa lclc7 ce lls for t he deve l op m ent o f cancer che m opreventi ve a- gents1N at1P rod1Sc,i1997,3(2):811[22]Song J H,Kwon HD,L eeW K,et a l1A nti m i crobial acti v- it y and co m po siti on of ex tract fro m S m ilax china roo t1J1 K orean Soc1Food Sc i1Nu tr11998,27(4):5741 [23]K i m S W,Son KH,Chung KC1M u tagenic e ffect of Ste r- o i da l Saponi ns from S m ilax ch i na R hizomes1Y akhakH ee- ch,i1989,33(5):2851 [24]文朝阳,丰平,丁相海,等1复方菝葜抑瘤机理的实验 研究1北京中医,2001,4:44-451 [25]Si Eun L ee,Eun M i Ju,Jeong H ee K i m1F ree rad i ca l scaveng i ng and anti ox i dant enzyme f o rtifying activ i ties of ex tracts from S m ilax ch i na root1Exper i m ental andM o l ec- ular M ed i c i ne,2001,33(4):263-2681 (2005-06-08收稿) B-榄香烯抗肿瘤作用的基础与临床研究 花文峰,蔡绍晖 (暨南大学药学院临床药理教研室,广东广州510632) 摘要B-榄香烯是温莪术抗肿瘤作用的主要活性成分,具有抗瘤谱广泛,疗效确切,毒副作用轻微,能明显提高肿瘤患者生存质量等突出优点。本文就B-榄香烯抗肿瘤作用的基础研究与临床应用的现状及其亟待解决的问题作一综述。 关键词B-榄香烯;温莪术;抗肿瘤作用 中图分类号:R282171文献标标码:A文章编号:1001-4454(2006)01-0093-05 榄香烯(E le m ene)是从姜科植物温莪术(Curcu-m a aro m atica Salisb1)中提取的萜烯类化合物。基于上世纪70年代莪术挥发油局部治疗宫颈癌有良好效果的发现,近二十多年来人们围绕温莪术的抗肿瘤作用及其相关活性成分和作用机制等展开了系统深入的研究。基础及临床实验等研究结果表明:B-榄香烯(其结构见图1)是温莪术抗肿瘤作用的主要物质基础,具有抗瘤谱广泛,疗效确切,毒副作用轻微等突出优点〔1~3〕。以B-榄香烯为其主要成分的榄香烯乳注射液是我国自主研发成功的二类抗肿瘤新药,目前在临床广泛用于恶性浆膜腔积液、肺癌、消化道肿瘤、脑瘤以及其它浅表性肿瘤的治疗。本文就B-榄香烯抗肿瘤作用的基础研究与临床应用的现状及其亟待解决的问题作一综述。 1B-榄香烯抗肿瘤作用的基础研究 111体外抗肿瘤活性研究体外细胞增殖活性实验表明,B-榄香烯对多种肿瘤细胞的增殖活性具有选择性抑制作用。表1显示用MTT法所测得的B-榄香烯抑制部分细胞株在体外增殖的实验结果。由此可见,尽管不同肿瘤细胞对B-榄香烯抑制作用的敏感性存在差异,但是相对于正常细胞而言,B-榄香烯对肿瘤细胞的抑制作用呈现出明显的选择性。肖立森〔4〕等采用MTT法检测并比较了B-榄香烯与5-F U、ADM、ADD、VCR、MTX、Vp-16、MM C等7种抗癌药物的敏感性。结果表明:B-榄香烯对食道癌、大肠癌、胃癌、胰头癌及乳腺癌体外细胞毒性与这些抗癌药物相近。39例临床癌症患者,其中19例(占4817%)体外实验显示对B- 榄香烯敏感。 图1B-榄香烯的化学结构(1-甲基-1-乙 烯基-2,4-二异丙基环己烷)
细胞凋亡(Apoptosis) 是生物界广泛存在的一种现象,与其它的生命现象一样具有同等重要的生理学或病理学意义。尽管其最终结果也是导致细胞死亡,但其诱导因素、发生机制和过程及意义均明显不同于一般的病理性细胞死亡(即细胞坏死性死亡,简称细胞死亡) 。 细胞凋亡的形态特征与细胞坏死性死亡的形态特征不同。细胞坏死性死亡是被动的病理性死亡,其形态特征首先是膜通透性增加,细胞外型发生不规则变化,内质网扩张,核染色质不规则移位,进而线粒体及核肿张,溶酶体破坏,细胞膜破裂,胞浆外溢,这种死亡过程常常引起炎症反应。细胞凋亡则是在某些因素的诱导下,由细胞内在的有规律的机制引起的,是主动的生理性细胞自杀。其特征是细胞首先变圆,随即与邻近细胞脱离,失去微绒毛,胞浆浓缩,内质网扩张呈泡状并与细胞膜融合,线粒体无明显变化,核染色质浓缩成块并凝聚在核膜周边,胞膜内陷将细胞自行分割为多个有外膜包裹、内涵物不外溢的凋亡小体,后被吞噬细胞或邻周细胞所识别、吞噬。由于细胞凋亡过程不导致溶酶体破坏及胞膜破裂,没有细胞内容物外泄,故不引起炎症反应,在生理条件下,生物体内细胞存活与死亡是由自身发育阶段提供的遗传信息,或由邻近细胞和其微环境提供的信号决定的,其中包括细胞相互接触提供的信号以及周围环境中活性物质、激素等。 这些刺激信号的增加或减少调节着细胞产生和凋亡,维系着机体细胞的有序状态 细胞凋亡的检测细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人细胞凋亡形态学检测方法。 细胞凋亡( apoptosis)的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。 目前对细胞凋亡的认识不断得到深化，检测凋亡细胞的方法也逐渐增多，但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。 光学显微镜观察 凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。在HE染色的组织切片中细胞积缩小.胞质致密、嗜酸性染色增强，并可形成凋亡小体。在组织中凋亡细胞以分散单个形式存在，凋亡细胞与周围细胞分离，不引起炎症反应。 检测方法：细胞涂片或组织石蜡切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物镜下观察凋亡细胞的形态改变，结合显微镜测量工具可作凋亡计数。 本方法简便易行，但在细胞密集的组织中对于改变不典型的细胞判断较困难，常缺乏较为特征的指标，具有较强的主观性，重复性差。本方法.可用于凋亡现象的初步观察，作为分析指标之一。 视频时差显微技术（video time-lapse microscopy） 本方法用于细胞培养，通过相差显微镜可动态观察细胞凋亡的变化过程，尤其是观察细胞表和外形的变化。凋胞与基质分离，胞体变圆、收缩、出泡，有的细胞拉长，出现钉状突起，持续数小时后细胞膜破裂，细胞溶解，通过连续观察，本方法可检测培养基中凋亡细胞，但不能用于病理组织。 检测方法：收集2x105细胞/ml培养，置于多空培养板，加入凋亡诱导剂，在带有自动摄像装置的相差显微镜下观察凋亡细胞的动态改变，每隔30秒作序列摄影，连续24小时。如同时进行荧光染色，可参荧光显微镜下观察和摄影。