Vector Map: pENTR/D-TOPO
NAME: pENTR/D-TOPO
RESISTANT MARKER: Kanamycin resistant; 25 μg/ml
Technologies SOURCE: Invitrogen
Life
vector
V_TYPE: Gateway
entry
SEQUENCING PRIMERS:M13(-21), M13 reverse, T7
POLYLINKER SEQUENCE:
TAACGCTAGCATGGATGTTTTCCCAGTCACGACGT TGTAAAACGACGGCC
AGT CTTAAGCTCGGGCCCCAAATAATGATTTTATTTTGACTGATAGTGAC
CTGTTCGTTGCAACAAATTGATGAGCAATGCTTTTTTATAATGCCAACTT
TGTACAAAAAAGCAGGCTCCGCGGCCGCCCCCTTCACC-ORF-AAGGGTG
GGCGCGCCGACCCAGCTTTCTTGTACAAAGTTGGCATTATAAGAAAGCAT
TGCTTATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAAT
CATTATTTGCCATCCAGCTGATATC CCCTATAGTGAGTCGTATTAC ATGG
TCATAGCTGTTTCCTGGCAGCTCTG
Sequence:
1 CTTTCCTGCG TTATCCCCTG ATTCTGTGGA TAACCGTATT ACCGCCTTTG AGTGAGCTGA 60
61 TACCGCTCGC CGCAGCCGAA CGACCGAGCG CAGCGAGTCA GTGAGCGAGG AAGCGGAAGA 120
121 GCGCCCAATA CGCAAACCGC CTCTCCCCGC GCGTTGGCCG ATTCATTAAT GCAGCTGGCA 180
181 CGACAGGTTT CCCGACTGGA AAGCGGGCAG TGAGCGCAAC GCAATTAATA CGCGTACCGC 240
241 TAGCCAGGAA GAGTTTGTAG AAACGCAAAA AGGCCATCCG TCAGGATGGC CTTCTGCTTA 300
301 GTTTGATGCC TGGCAGTTTA TGGCGGGCGT CCTGCCCGCC ACCCTCCGGG CCGTTGCTTC 360
361 ACAACGTTCA AATCCGCTCC CGGCGGATTT GTCCTACTCA GGAGAGCGTT CACCGACAAA 420
421 CAACAGATAA AACGAAAGGC CCAGTCTTCC GACTGAGCCT TTCGTTTTAT TTGATGCCTG 480
481 GCAGTTCCCT ACTCTCGCGT TAACGCTAGC ATGGATGTTT TCCCAGTCAC GACGTTGTAA 540
541 AACGACGGCC AGTCTTAAGC TCGGGCCCCA AATAATGATT TTATTTTGAC TGATAGTGAC 600
601 CTGTTCGTTG CAACAAATTG ATGAGCAATG CTTTTTTATA ATGCCAACTT TGTACAAAAA 660
661 AGCAGGCTCC GCGGCCGCCC CCTTCACCAA GGGTGGGCGC GCCGACCCAG CTTTCTTGTA 720
721 CAAAGTTGGC ATTATAAGAA AGCATTGCTT ATCAATTTGT TGCAACGAAC AGGTCACTAT 780
781 CAGTCAAAAT AAAATCATTA TTTGCCATCC AGCTGATATC CCCTATAGTG AGTCGTATTA 840
841 CATGGTCATA GCTGTTTCCT GGCAGCTCTG GCCCGTGTCT CAAAATCTCT GATGTTACAT 900
901 TGCACAAGAT AAAAATATAT CATCATGAAC AATAAAACTG TCTGCTTACA TAAACAGTAA 960
961 TACAAGGGGT GTTATGAGCC ATATTCAACG GGAAACGTCG AGGCCGCGAT TAAATTCCAA 1020
1021 CATGGATGCT GATTTATATG GGTATAAATG GGCTCGCGAT AATGTCGGGC AATCAGGTGC 1080
1081 GACAATCTAT CGCTTGTATG GGAAGCCCGA TGCGCCAGAG TTGTTTCTGA AACATGGCAA 1140
1141 AGGTAGCGTT GCCAATGATG TTACAGATGA GATGGTCAGA CTAAACTGGC TGACGGAATT 1200
1201 TATGCCTCTT CCGACCATCA AGCATTTTAT CCGTACTCCT GATGATGCAT GGTTACTCAC 1260
1261 CACTGCGATC CCCGGAAAAA CAGCATTCCA GGTATTAGAA GAATATCCTG ATTCAGGTGA 1320
1321 AAATATTGTT GATGCGCTGG CAGTGTTCCT GCGCCGGTTG CATTCGATTC CTGTTTGTAA 1380
1381 TTGTCCTTTT AACAGCGATC GCGTATTTCG TCTCGCTCAG GCGCAATCAC GAATGAATAA 1440
1441 CGGTTTGGTT GATGCGAGTG ATTTTGATGA CGAGCGTAAT GGCTGGCCTG TTGAACAAGT 1500
1501 CTGGAAAGAA ATGCATAAAC TTTTGCCATT CTCACCGGAT TCAGTCGTCA CTCATGGTGA 1560
1561 TTTCTCACTT GATAACCTTA TTTTTGACGA GGGGAAATTA ATAGGTTGTA TTGATGTTGG 1620
1621 ACGAGTCGGA ATCGCAGACC GATACCAGGA TCTTGCCATC CTATGGAACT GCCTCGGTGA 1680
1681 GTTTTCTCCT TCATTACAGA AACGGCTTTT TCAAAAATAT GGTATTGATA ATCCTGATAT 1740
1741 GAATAAATTG CAGTTTCATT TGATGCTCGA TGAGTTTTTC TAATCAGAAT TGGTTAATTG 1800
1801 GTTGTAACAC TGGCAGAGCA TTACGCTGAC TTGACGGGAC GGCGCAAGCT CATGACCAAA 1860
1861 ATCCCTTAAC GTGAGTTACG CGTCGTTCCA CTGAGCGTCA GACCCCGTAG AAAAGATCAA 1920
1921 AGGATCTTCT TGAGATCCTT TTTTTCTGCG CGTAATCTGC TGCTTGCAAA CAAAAAAACC 1980
1981 ACCGCTACCA GCGGTGGTTT GTTTGCCGGA TCAAGAGCTA CCAACTCTTT TTCCGAAGGT 2040
2041 AACTGGCTTC AGCAGAGCGC AGATACCAAA TACTGTCCTT CTAGTGTAGC CGTAGTTAGG 2100
2101 CCACCACTTC AAGAACTCTG TAGCACCGCC TACATACCTC GCTCTGCTAA TCCTGTTACC 2160
2161 AGTGGCTGCT GCCAGTGGCG ATAAGTCGTG TCTTACCGGG TTGGACTCAA GACGATAGTT 2220
2221 ACCGGATAAG GCGCAGCGGT CGGGCTGAAC GGGGGGTTCG TGCACACAGC CCAGCTTGGA 2280
2281 GCGAACGACC TACACCGAAC TGAGATACCT ACAGCGTGAG CATTGAGAAA GCGCCACGCT 2340
2341 TCCCGAAGGG AGAAAGGCGG ACAGGTATCC GGTAAGCGGC AGGGTCGGAA CAGGAGAGCG 2400
2401 CACGAGGGAG CTTCCAGGGG GAAACGCCTG GTATCTTTAT AGTCCTGTCG GGTTTCGCCA 2460
2461 CCTCTGACTT GAGCGTCGAT TTTTGTGATG CTCGTCAGGG GGGCGGAGCC TATGGAAAAA 2520
2521 CGCCAGCAAC GCGGCCTTTT TACGGTTCCT GGCCTTTTGC TGGCCTTTTG CTCACATGTT 2580
All ORF clones are provided in Entry Vectors for the Invitrogen Gateway? cloning system. Invitrogen offers a whole range of Destination Vectors for a wide range of applications. Refer to the homepage of Invitrogen for further information on the Gateway? cloning system and related Invitrogen products at:
https://www.doczj.com/doc/0118128503.html,/content.cfm?pageid=4072
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国家秘密载体保密管理制度 1 主题内容与适用范围 本文规定了国家秘密载体的制作、收发、传递、使用、保存、销毁等管理要求。 本文适用于我公司各部门国家秘密载体的管理。 2 引用文件 《中华人民共和国保守国家秘密法》(1989年5月1日起施行) 《中华人民共和国保守国家秘密法实施办法》(1990年5月25日起施行) 《国家秘密保密期限的规定》(1991年1月1日起施行) 《国家秘密设备、产品的保密规定》(1993年3月1日起施行) 3 定义 国家秘密载体(以下简称秘密载体) 指载有国家秘密信息的物体，包括密件和密品两类。 密件 指以文字、数据、符号、图形、图像、声音等形式载有国家秘密信息的物件，包括纸介质、磁介质、光介质等物件，如文件、资料、磁盘、磁带、光盘、录像带等。我公司密件为涉密的文件、记录、磁盘（U盘、硬盘）、光盘。 密品 指直接含有国家秘密信息的设备或者产品。这种设备或者产品通过观察或者测试、分析手段能够获得国家秘密信息。 4 密件的保密管理 密件的制作及标定
4.1.1 制作密件必须依照我公司定密程序确定密级和保密期限。密件内容一经审核批准，密 件内容原稿就不应再做文字和数据的修改补充，如需进行修改补充，必须重新履行审批手续。 4.1.2 密件要严格按照批准的数量进行制作，任何部门和个人不准多制、私留。 4.1.3 密件形成过程中产生的原始材料和中间材料，包括草稿、废稿、讨论稿和审议稿等应 当由承办人负责，存放在密码文件柜中保管。不需要保存的，应及时销毁，不能随意丢失或泄密。 4.1.4 密件制作完成后，在封面或首页的左上角标明密级和保密期限。承办人员对密件密级 和保密期限的标识是否正确负有确认责任。 4.1.5 制作密件的场所应当配备密码文件柜。使用电子设备的应当采取防电磁泄露的保密措 施。 4.1.6 需外部制作的密件应当在省(市)保密工作部门审查批准的单位制作。 4.1.7 涉密U 盘、光盘由保密办公室负责统一编号、标识、签收和登记工作。 密件的收发与传递 4.2.1 收发密件，承办人必须严格履行清点、签收、登记、编号等手续。 涉密部门收到涉密载体后，由保密办主任根据秘密载体的密级和制发机关、单位的要求及工作的实际需要，依据最小化原则确定我公司知悉该国家秘密人员的范围，任何部门及个人不得擅自扩大国家秘密的知悉范围。 传阅密件，应使用“密件传阅登记本”，履行登记、签收手续，密件原则上应在两天内阅毕归还。 因工作需要对外单位提供或传递密件，由承办人填写“外发涉密载体审批表”(见附表二)，履行审批手续，审批后按照国家有关规定，经机要途径(机要通讯、机要交通)传递或指派专人递送。由专人递送的密件须办理《呈报密级文件交接单》，由对方单位签收确认后，将该交接单带回公司归档。
涉密载体管理制度 1. 涉密载体管理总则 1) 本制度所称国家秘密载体是以文字、数据、符号、图形、图像、声音等方式记载国家秘密信息的纸介质、磁介质和光盘等各类物品。磁介质载体：包括计算机硬盘、软盘、U盘、移动硬盘、磁带、录音带、录像带等。 2) 我所国家秘密载体分为两类，一类是各级党政机关和其他相关单位制发的国家秘密载体，一类是我所内部在研发、管理工作中产生的国家秘密载体。 3) 本制度适用于负责制作、收发、传递、使用、保存和销毁国家秘密载体的各部门。 4) 各涉密部门和担负涉密工程任务的项目组，要明确专人负责本部门国家秘密载体的制作、收发、传递、归档、保存、移交和销毁等日常管理工作。 5) 涉密载体的接触范围及知悉程度：单位各部门收到秘密载体后，根据秘密载体密级、制发单位要求及工作需要，确定知悉该国家秘密的人员范围。任何部门和个人不得擅自扩大国家秘密的知悉范围。 2. 载体密级、期限和标志 1) 国家秘密载体密级确定 a) 国家秘密载体的密级，应为其所承载的国家秘密的最高密级。 b) 国家秘密的密级分为“绝密”、“机密”、“秘密”三个等级。 c) 我所确定、变更国家秘密载体密级的依据是，国家保密局会同相关中央、国家机关有关部门制定的国家秘密及其密级的具体范围（即保密范围）的规定及其说明。 d) 我所内部在工作中产生的，属于“国家秘密及其密级具体范围”内的事项，以及承载这一事项相关信息的各类秘密载体，应按照本规定确定相应的密级。 e) 我所内部产生的国家秘密载体密级的确定方法： （1）依据新产生载体参照的背景确定。新产生载体参照的背景为国家秘密，并包含全部或部分背景信息的，该载体应确定为国家秘密载体，其密级根据参照的背景信息的密级确定。一般情况下，背景信息的密级即为新产生国家秘密载体的密级。
精品文档 六、国家秘密载体的使用 1. 保密办收到秘密载体后，由公司主管领导根据秘密载体的密级和制发机关的要求及工作需要，确定知悉该国家秘密人员的范围，保密办按有关规定，严格履行秘密载体登记、阅读（见附件21《涉密文件资料借阅审批单》、附件22《涉密文件资料借阅登记》）使用、归还等手续，管理人员要随时掌握秘密载体的去向。任何部门和个人不得擅自扩大国家秘密的知悉范围。 2. 阅读和使用秘密载体，应在符合保密要求的办公场所进行；确需在办公场所以外阅读和使用秘密载体的，应当遵守有关保密规定。对于绝密级秘密载体，必须按照规定的范围在档案室阅读，不准带出。确因工作需要摘抄有关内容，必须在保密本上记载并由保密办对摘抄内容进行记载。保密办必须对接触和知悉绝密级秘密载体内同的人员作出文字记载。 3. 传达国家秘密时，凡不准记录、录音、录像的，应事先申明。 4. 摘录、引用国家秘密内容形成的秘密载体，按原件的密级、保密期限和知悉范围管理。 5. 任何个人不准擅自将秘密载体带出公司。 6. 因工作确需携带秘密载体外出，应当符合下列要求：1) 使用秘密载体始终处于携带人的有效控制之下；2) 携带绝密级秘密载体应在公司主管领导批准，并有两人以上同行；3) 参加涉外活动不得携带秘密载体，因工作确需携带的，应经公司主管领导批准。禁止携带绝密级秘密载体参加涉外活动。 7. 禁止将绝密级秘密载体携带出境；因工作需要携带机密级、秘密级秘密载体出境的，应当按照有关保密规定办理批准和携带手续并采取严格的保密措施。 8. 各部门对工作过程中必须使用的归档涉密技术文件、资料要集中统一保管并对这些涉密文件、资料的使用执行严格的借用和归还制度 可编辑
腺病毒载体操作手册中文版 腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章 AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况 3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程 3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 克隆的一般原则 4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体 5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生 5 4.2.1 共转化的一般原则 5 4.2.2 共转化方法 5 4.2.3 预期结果 5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A 细胞 6 4.4.1 细胞铺板 6 4.4.2 磷酸钙转化技术 7 第五章常用技术 8 5.1 QBI-293A细胞培养 8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖 8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存 8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生 9 5.2.1 感染QBI-293A细胞 9 5.2.2 病毒空斑形成 9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞 9 5.3 MOI测定 10 5.4 腺病毒感染力测定 10
5.4.1 X-Gal染色 11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化 11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送 11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交 13 5.5.4 Southern杂交和点杂交 13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定 14 5.5.7 功能测定 14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增 15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒 16 5.7.1 不连续密度梯度离心 17 5.7.2 连续密度梯度离心 17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集 17 5.8 病毒滴度测定 18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法 20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法 20 第六章疑难解答 22 6.1 QBI-293A细胞培养 22 6.2 感染力测定 22 6.3 转移载体克隆 23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞 25 6.6 筛选和测定 25 6.7 在QBI-293A细胞中表达 26 6.8 重组腺病毒的扩增 26 6.9 纯化 26 6.10 病毒滴度测定 27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒 Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒 AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素 β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶 bp Base Pair 碱基对
国家秘密载体管理制度 [YHNB/B 20006-2016] 第一条国家秘密载体（以下简称秘密载体）是指以文字、数据、符号、图形、图像、声音等方式记载国家秘密信息的纸介质、磁介质、光盘等各类物品。磁介质载体包括计算机硬盘、软盘和录音带、录像带等。 第二条国家秘密载体主要有以下几类： （一）以文字、图形、符号记录国家秘密信息的纸介质载体。如国家秘密文件、文稿、文书、档案、电报、信函、数据统计、图表、照片、书刊及其他图文资料等。 （二）以磁性物质记录国家秘密信息的载体。如记录着国家秘密信息的计算机磁盘（含软盘、硬盘）、磁带、录音带、录像带等。 （三）以电、光信号记录传输国家秘密信息的载体。如U盘、光盘和电波、电缆、光纤等。 （四）含有国家秘密信息的设备、仪器、产品等载体。 第三条国家秘密载体的管理原则：国家秘密载体的保密管理，要遵循“严格管理、严密防范、确保安全、方便工作”的原则。 第四条纸介质载体，在封面或首页明显处（一般为左上角）以“密级★保密期限”的形式进行标识，没有标明期限的，按该密
级最长保密期限计算。 第五条可反复、长期使用的存储国家秘密的计算机（含便携式计算机、移动硬盘、U盘）及其它设备，按存储信息的最高密级进行标识，没有标明保密期限的，按该密级最长保密期限计算。密级标识方法是在显著位置粘贴公司涉密设备标签，由公司保密办公室统一编号管理。 涉密设备标签：编号密级使用人 第六条一次使用的存储国家秘密的光盘、软盘、录音带、录像带等在显著位置以“密级★保密期限”的形式进行标识，按存储信息的最高密级进行标识，没有标明保密期限的，按该密级最长保密期限计算。 第七条收发秘密载体，应当履行清点、登记、编号、签收等手续。 第八条传递秘密载体，应通过机要途径，不准通过普通邮政、特快专递等传递秘密载体。传递秘密载体，应填写《对外传递国家秘密载体审批表》，经公司主管领导批准，由保密办办理相关登记签收手续后，派人护送。 第九条公司职能部门根据上级主管机关或使用方机关要求上报的涉密材料，必须标明密级，交由保密办办理相关收、发文登记手续，由机要途径传递。因工作急需个人携带，须经公司主管领导批准，在保密办办理相应携带手续，送达后将对方保密部门签收的回执单带回本公司交还保密办。
腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介1 第二章应用重组腺病毒的优点2 第三章AdEasyTM技术3 3.1技术概况3 3.2AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程3 第四章主要流程4 4.1将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 缩写英文全称中文全称 AdAdenovirus腺病毒 Ad5Adenovirusserotype5血清5型腺病毒AdVAdenoviralVector腺病毒载体 AmpAmpicillin氨苄青霉素 β-Galβ-Galactosidaseβ-半乳糖苷酶 bpBasePair碱基对 BSABovineSerumAlbumin小牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互补DNA cccDNAClosedCircularCoiledDNA闭环螺旋DNA CPECytopathicEffect细胞病理效应CsClCesiumChloride氯化铯 DMEMDulbecco’sModifiedEagleMediumDMEM培养基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DTTDithiothreitol二硫苏糖醇EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸EtBrEthidiumBromide溴化乙锭FBSFetalBovineSerum胎牛血清 HrHour小时 ITRInvertedTerminalRepeat反向末端重复KanKanamycin卡那霉素 kbKilobases千碱基对 KDaKiloDaltons千道尔顿LBLuria-Bertani(broth)LB培养基MCSMultipleCloningSite多克隆位点 MinMinute分钟 MOIMultiplicityofInfection(Virus/Cell)感染复数mRNAMessengerRNA信使RNA MWCOMOIecularWeightCut-off PAGEPolyAcrylamideGelElectrophoresis聚丙烯凝胶电泳PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液PFUPlaqueFormingUnit空斑形成单位 piPostInfection感染后RCAReplicationCompetentAdenovirus增殖性腺病毒RITRRightInvertedTerminalRepeat右侧反向末端重复SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基硫酸钠TBETrisBorate/EDTA三羟甲基氨基甲烷硼酸盐/乙二胺四乙酸 TCID50TissueCultureInfectiousDose5050%组织培养感染剂量 TCPTotalCellularProtein细胞总蛋白 TETris/EDTATE溶液 wtWildType野生型 X-Gal5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-Galactopyranoside5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 第一章简介 当今基因输送技术的发展日趋复杂，一些治疗药物（生长激素、干扰素、抗病毒和抗癌复合物）和诊断性蛋白（单克隆抗体）的设计、发展与合成需要更高效的基因输送工具。人类基因组计划和正不断发展的基因治疗同样急需发展快速有效和治疗性的分析工具。为解决这一问题，基因输送技术(通常使用病毒载体如增殖缺陷的腺病毒)通过基因工程不断发展，致力于生产基因表型药物。重组腺病毒提供了一类在基因转移系统发展中有极大潜力的新的生物治疗剂。 1953年对普通感冒病因的探索和研究导致了腺病毒的发现。迄今为止已发现了40多种不同血清型和93种不同种类的腺病毒，它们通常感染眼、呼吸道或胃肠上皮（Fields等，1996）。1977年，FrankGraham博士建立了一种细胞株，可在无辅助病毒的情况下产生重组腺病毒（Graham等，1977）。此后，腺病毒载体作为极具潜力的哺乳动物基因转移载体而得到广
国家秘密载体管理办法 第一章总则 第一条为加强国家秘密载体管理，依据国家有关法律法规和公司保密管理规定，制定本办法。 第二条本办法所称国家秘密载体是指以文字、数据、符号、图形、图像、照片、声音等方式记载国家秘密信息的纸介质、磁介质、光盘和密品等各类物品。磁介质载体含计算机硬盘、录像带等。 本办法所称涉密过程文件是指各种密件草稿、初稿、送审稿、征求意见稿、未归档的文稿等。 第三条本办法适用于公司国家秘密载体的制作、收发、传递、借阅、使用、复制、保存和销毁等过程。 第四章涉密载体密级的拟定、审核、审批寓于涉密载体的审批的各环节中，体现承办人拟定，审核人核定，定密责任人审批的定密工作流程。 第五条国家秘密载体的保密管理，遵循严格管理、严密防范、确保安全、方便工作的原则。 第六条公司涉密载体实行归口管理，其中设计文件、工艺文件、质量文件等技术类文件、资料、行政公文、函件、文书及光盘由公司综合部资料管理员负责管理；移动存储介质由计算机管理员负责管理。 第七条各部门指定专人建立涉密载体台帐，个人保管的涉密载体须统一登记建账，做到底数、账目清楚，并与部门的台帐相符（见附表1）。台帐实行动态管理，随时更新和备案。 第二章密件管理 第八条本办法所称密件是指：纸介质国家秘密载体（含过程文件）。密件必须统一登记、底数清楚。 第九条密件的制作
1.公司内密件制作 （1）制作密件，需办理审批和登记手续，按规定准确标明密级和保密期限，统一编号，加盖印章标志，指定专人进行管理，严格履行收发、登记、签收手续。密级和保密期限的标注为：密件左上角“密级★保密期限”（已有固定格式、模板的,以固定格式和模板标注的为准）。并根据工作需要确定发放范围和制作数量，编排顺序号。禁止雇佣临时人员参与密件制作。 （2）打印密件必须填写《国家秘密资料打印审批登记表》（见附表2），经部门领导审批后，方可打印。登记内容包括打印时间、文件名称（全名）、页数、份数、密级、密件去向、承办人等。《国家秘密资料打印审批登记表》须交公司综合部资料室存档，保存3年后方可销毁。打印密件必须加盖密件印制专用章。 （3）密件制作过程中形成的材料以及工作中形成的过程文件，无保存价值的，按规定办理手续后交保密办统一销毁。 2．在公司外部制作密件须经主管公司领导审批（见附表3），并到资料室管理员处办理登记、备案手续，在有保密资质的单位进行，并与制作单位签订保密协议，其它同公司内密件制作规定。 每年12月底前，各部门须将上年度产生的涉密载体全部核对，建立完善《年度定密工作台账》并报资料室备案。 第十条密件的收发和传递 1.各种形式传递的密件，一律经公司综合部部长拆封登记后方可使用。 2.综合部资料管理员负责做好密件接收、发放、传递、回收、登记等管理工作。公司内设计、工艺、质量等密件的发放、传递、回收、登记等管理工作由制作、产生部门负责。 3.密件传送方式分为机要方式或专人专送方式，机要传送需填写《机要发送申请单》（见附表4），专人传递需填写《国家秘密载体外出携带审批表》（见附表5）。 第十一条密件的保存 1.密件须存放在密码文件柜中，不准在无保密保障的场所保存密件，严禁将密件存放在家中。
腺病毒中文操作手 册
腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况 3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程 3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体 4 4.1.1 克隆的一般原则 4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生5 4.2.1 共转化的一般原则 5 4.2.2 共转化方法 5 4.2.3 预期结果 5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增 6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A 细胞 6 4.4.1 细胞铺板 6 4.4.2 磷酸钙转化技术7 第五章常见技术8 5.1 QBI-293A细胞培养8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生9 5.2.1 感染QBI-293A细胞9 5.2.2 病毒空斑形成9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞9 5.3 MOI测定10 5.4 腺病毒感染力测定10
5.4.1 X-Gal染色11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表示和基因输送11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交13 5.5.4 Southern杂交和点杂交13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定14 5.5.7 功能测定14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒16 5.7.1 不连续密度梯度离心17 5.7.2 连续密度梯度离心17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集17 5.8 病毒滴度测定18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法20 第六章疑难解答22 6.1 QBI-293A细胞培养22 6.2 感染力测定22 6.3 转移载体克隆23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞25 6.6 筛选和测定25 6.7 在QBI-293A细胞中表示26 6.8 重组腺病毒的扩增26 6.9 纯化26 6.10 病毒滴度测定 27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶bp Base Pair 碱基对BSA Bovine Serum Albumin 小牛血清
产品手册│ MirAd TM MicroRNA前体腺病毒表达系统 本产品仅限用于研究，严禁用于任何动物或人类疾病诊断。 本产品仅供购买方内部研究使用，未经ViGene生物科技有限公司书面许可，严禁转售。
目录│ 产品简介 4 产品组成 5 保存条件 5 使用安全注意事项 6 pMirAd 载体图谱 6 质粒扩增 6 病毒载体扩增 7 常见问题解答 8
产品有限责任担保 Vigene生物保证您收到的产品符合产品目录上的规格。本担保规定了Vigene 更换产品的责任。Vigene生物不提供其他任何形式的对于产品商业或健康用途的保证。Vigene生物不对任何由于使用或不正确使用本公司产品造成的直接、间接的、衍生的或偶然的损害所产生的后果负责。 产品订购和技术支持 山东维真生物科技有限公司暨美国ViGene Biosciences公司中国办事处 美国地址：12111 Parklawn Dr. Rockville, MD 20852 US 北京办事处：北京市海淀区北三环西路43号青云里满庭芳园D座1206室上海办事处：上海市徐汇区肇家浜路201弄11号602室 广州办事处：广州市天河区骏景花园骏景路棋乐街33号404室 山东办事处：济南市高新区开拓路2350号留学人员创业园717室 Email: service@https://www.doczj.com/doc/0118128503.html, Phone: 400-077-2566 https://www.doczj.com/doc/0118128503.html,(美国) https://www.doczj.com/doc/0118128503.html,（中国） 欢迎您致电或发邮件，咨询产品技术信息。
产品简介 MicroRNAs（miRNAs）是一类长度为18-24个核苷酸的非编码RNA分子。MiRNA通过与靶基因mRNA上的互补序列结合，降解mRNA或抑制mRNA的翻译。MiRNAs在细胞分化、增殖、凋亡和癌细胞发生中发挥重要的调控作用。MiRNAs来源于具有60-80个核苷酸茎环结构的microRNA前体（premir）和序列更长一些的microRNA初级转录产物（primir）。MiRNA在核内由RNA聚合酶II（polII）转录生成，最初产物primir具有帽子结构和多聚腺苷酸尾巴。 ViGene生物的mirAD-腺病毒microRNA前体表达系统包括三个相关产品：microRNA前体穿梭载体、microRNA前体腺病毒载体和预制microRNA前体腺病毒。 重组腺病毒是进行基因转移和表达的工具，功能强大且易于操作。腺病毒独特的生物学特征使它成为“载体的首选”，被科研工作者广泛应用。首先，它能够感染包括分裂、非分裂细胞和干细胞在内的多种细胞。第二，病毒滴度高。第三，高滴度的病毒可获得高感染效率和高表达量。第四，病毒进入细胞后，病毒基因组不整合到细胞染色体上，因此瞬时表达外源基因的重组腺病毒不会诱导宿主细胞中染色体的变化。ViGene生物选用的是应用最广泛的复制缺陷型的人类血清5型腺病毒，该腺病毒载体缺失E1和E3基因。E1基因在组装感染性病毒颗粒时必不可少，可在HEK293T细胞病毒包装过程中得到补充，而E3基因可有可无。由于E1和E3基因的缺失，腺病毒载体可插入高达7.5kb的外源基因。 pMir-microRNA precursor是基于microRNA前体表达系统的质粒。microRNA前体天然的茎环结构被克隆到质粒的SgfI和MluI双酶切位点。为了保持推测的发卡结构和诱导正确的内源性反应，miRNA茎环结构的两侧具有它的150-200bp的天然序列。MicroRNA前体在CMV启动子启动下表达，其上游有GFP荧光标记，并具有SV40 poly（A）加尾信号。穿梭载体含有SV40启动子启动的puromycin嘌呤霉素标记，可以用来进行稳转细胞株的筛选。穿梭载体还含有两个腺病毒ITR序列和两个与腺病毒Ad5同源的序列，可
国家秘密载体管理制度 一、总则 1、本规定所称国家秘密载体（以下简称秘密载体），是指以文字、数据、符号、图形、图像、声音等方式记载国家秘密信息的纸介质、磁介质、光盘等各类物品。磁介质载体包括计算机硬盘、软盘和录音带、录像带等。 2、秘密载体的保密管理，遵循严格管理、严密防范、确保安全、方便工作的原则。 二、秘密载体的制作 1、制作秘密载体，必须依照有关规定标明密级和保密期限，注明发放范围及制作数量，绝密级、机密级的应当编排顺序号。 2、纸介质秘密载体应当在本单位内部文印室或保密工作部门审查批准的定点单位印制。 3、磁介质、光盘等秘密载体应当在本单位内或保密工作部门审查批准的单位制作。 4、制作秘密载体过程中形成的不需归档的材料，应当及时销毁。 5、制作秘密载体的场所应当符合保密要求。使用电子设备的应当采取防电磁泄漏的保密措施。 三、秘密载体的收发与传递 1、收发秘密载体，应当履行清点、登记、编号、签收等手续。
2、传递秘密载体，应当选择安全的交通工具和交通路线，并采取相应的安全保密措施。 3、传递秘密载体，应当包装密封；秘密载体的信封或者袋牌上应当标明密级、编号和收发件单位名称。使用信封封装绝密级秘密载体时，应当使用由防透视材料制作的、周边缝有韧线的信封，信封的封口及中缝处应当加盖密封章或加贴密封条；使用袋子封装时，袋子的接缝处应当使用双线缝纫，袋口应当用铅志进行双道密封。 4、传递秘密载体，必须通过机要交通、机要通信或者指派专人进行，不得通过普通邮政或非邮政渠道传递。 5、传递绝密级秘密载体，必须按下列规定办理： （1）送往外地的绝密级秘密载体，通过机要交通、机要通信递送。 （2）在本地传递绝密级秘密载体，由发件或收件单位派专人直接传递。 （3）传递绝密级秘密载体，实行二人护送制。 6、采用现代通信及计算机网络等手段传输国家秘密信息，应当遵守有关保密规定。 四、秘密载体的使用 1、收到秘密载体后，由主管领导根据秘密载体的密级和制发机关、单位的要求及工作的实际需要，确定本单位知悉该国家秘密人员的范围，不得擅自扩大国家秘密的知悉范围。收到绝密
国家秘密载体保密管理制度 国家秘密的制作、收发、传递、使用、复制、保存、维修和销毁，应当符合国家保密 规定。具体规定如下： 制度是个社会的游戏规则，更规范的讲，它们是为人们的相互关系而人为设定的一些 制约。为此，我们一般要求大家共同遵守办事规程或行动准则来提高办事效率，才设定一 些制度。下面是我们应届毕业生求职网提供的制度文章供您参考： 一、制作 定期进行库存档案的清理核对工作，做到账、档、卡相符，对破损或载体变质的档案 要进行修补和复制，保证档案的完整。 1、制作秘密载体，应当依照有关规定标明密级和保密期限，注明发放范围及制作数量，绝密级、机密级和秘密级的应当编排顺序号。 2、纸介质秘密载体应当在本机关、单位内或保密工作部门审查批准的定点单位印制。禁止将纸介质秘密载体委托不属定点的社会行业，如私营或者个体企业、外商独资企业或 合资、合作企业印刷、制作。 定期组织本单位食品从业人员学习《食品安全法》、《浙江食品流通许可实施细则 (暂行)》等，及时掌握和了解国家及地方的各项食品安全法律、法规，做知法守法的模范。 3、磁介质、光盘等秘密载体应当在本机关、单位内或保密工作部门审查批准的单位 制作。 4、制作秘密载体过程中形成的不需归档的材料，应当及时销毁。 5、制作秘密载体的场所应当符合保密要求。使用电子设备的应当采取防电磁泄漏的 保密措施。 第十条属于公司秘密的文件、资料和其他物品的制作、收发、传递、使用、复制、 摘抄、保存和销毁，由公司秘书和行政部专人执行。采用电脑技术存取、处理、传递的公 司秘密由电脑使用者负责保密。 考试内容增加中国特色社会主义法治理论，着重考查宪法法律知识、法治思维和法治 能力，以案例分析、法律方法检验考生在法律适用和事实认定等方面的法治实践水平。 加大法律职业伦理的考查力度，使法律职业道德成为法律职业人员入职的重要条件。考试 以案例题为主，每年更新相当比例的案例，大幅度提高案例题的分值。 二、收发
慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。 基本概述 慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。 慢病毒的应用 目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体, 然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3’端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA和～50ntRNA茎环结构（stem loop）。在siRNA表达载体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA), 载体包含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4～5T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个U 3 ’ 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法，寻找高效的siRNA，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入siRNA表达载体。 慢病毒载体
慢病毒生产及使用操作手册 一、实验流程 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。以下内容由汉恒生物科技（上海）有限公司精心整理总结。 二、实验材料 （一）慢病毒载体、包装细胞和菌株 该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pHBLV TM系列质粒。 1、载体信息（见附录） 2、细胞株293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。 3、菌株大肠杆菌菌株DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。 三、包装细胞293T细胞的培养 （一）293T细胞的冻存 随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降、突变等。为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。 1、去掉上清液，加入PBS洗去残留的培养基； 2、加入%的胰酶，消化1～2min后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。 3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入3mL 37 ℃预热的10％DMEM，用10mL 移液管进行吹打，较大力吹打6～8 次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL 离心管中，取50ul 混匀后的细胞于eppendorf 管中，加入450ul 10％DMEM，即为10 倍稀释，混匀，取10ul 细胞于计数板中计数。计数板上共 4 大格，每大格16 小格。计数时，4 大格均计数，总数除以4（得每大格细胞数），再乘以10（10 倍稀释），即为实际n万/mL 细胞浓度。
涉密载体管理制度 根据工作变化，为了进一步加强公司秘密载体保密管理，确保国家秘密安全，根据国家有关保密法规，遵循严格管理、严密防范、确保安全、方便工作的原则，制定本管理制度。 一、适用范围 1.1 适用于以文字、数据、符号、图形、图像、声音等方式记载、存储国家秘密信息的纸介质、磁介质、光盘等涉密载体。 1.2 适用于涉密载体的制作、收发、传递、使用、复制、保存、维修和销毁等过程的保密管理。 二、职责 2.1 办公室负责涉密载体的制作、复制与管理。 2.2 保密办公室负责涉密载体的监督检查。 2.3 党务工作部负责涉密磁带、录音带、录像带的制作与管理。 2.4 涉密部门负责外来涉密载体、公司发放涉密载体的保密管理。 三、涉密载体制作管理 3.1 涉密部门因工作需要制作涉密载体（含内部资料），应填写秘密载体定密审批表，经部门负责人、保密办公室和定密责任人同意后到办公室进行制作。 3.2 办公室制作国家秘密载体，应记录载体制作数量和去向。制作涉密载体应编排份号，并在台账上予以记录。 3.3 涉密音像制品由摄制和编辑单位建立照相、录像登记表，对记录和
存储涉及军工科研事项的音像资料进行管理。 四、涉密载体复制管理 4.1 涉密载体复制由办公室统一完成。禁止到营业场所复印、制作含有涉密信息的载体。各类涉密载体必须按照原稿确定的密级、保密期限进行标识，严格按知悉范围和批准的用途控制载体制作数量。 4.2 因工作需要对涉密载体进行复制、扫描、存储和刻制光盘时，需办理审批手续。涉密载体（含电子文档）的复制由业务部门申请经保密办公室审批后办公室负责复制。个人一律不得私自制作、复制涉密文件资料。涉密载体复制件的密级标识应与原件保持一致，纸介质载体须加盖“中信机电制造公司保密办公室复印专用章”印戳。 4.3 因工作需要摄制武器装备科研、生产、试验现场背景和密品实物的声像制品，由单位专职人员按批准的范围和数量完成摄制、编辑和制作，还应进行密级分类，涉密音像制品应在图像播映首页和存储介质同时进行密级标识。 4.4 过程文件资料是涉密载体在起草、修改和制作过程中产生的。制作过程中的多余份数、废页、废件应及时销毁，保证涉密载体登记数量和实物一致。 5、涉密载体的收发、传递管理 5.1 涉密载体收发时，应当履行清点、登记、编号、签收等手续，确保涉密载体处于受控状态。 5.2 办公室应建立涉密文件收发文登记薄，对外来文件资料和公司产生的涉密文件资料进行收发登记，记录文件资料在公司内部传递过程直至归档。
汉恒生物科技(上海)有限公司 400‐092‐0065 1 汉恒生物---腺相关病毒操作手册 一、腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector ，AAV ）简介 腺相关病毒属微小病毒科( parvovirus)，为无包膜的单链线状 DNA 病毒。AA V 的基因组约 4700bp ，包括上下游两个开放读码框架(ORF)，位于分别由 145 个核苷酸组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。 基因组中有 3 个启动子(P5、P19 和 P40) 和 2 个开放阅读读框(ORF)，rep 和 cap ，如图 1 所示。rep 编码 4 个重叠的多功能蛋白，即 Rep78、Rep68、Rep52 和 Rep40，其中 Rep78 与 Rep68 参与 AA V 的复制与整合，Rep52 和 Rep40 具有解螺旋酶和 ATP 酶活性，与 Rep78、Rep68 共同参与单链基因组的复制；cap 编码的 VP1、VP2、VP3是装配成完整病毒所需要的衣壳蛋白，它们在 AA V 病毒整合、复制和装配中其重要作用。 图 1. AA V 基因组结构 二、腺相关病毒的优点 1. 安全性高：迄今从未发现野生型A A V 对人体致病，重组A A V 基因组序列上去除了大部分的野生型A A V 基因组元件，进一步保证了安全性； 2. 免疫原性低：AA V2 的基因组仅 4681 个核苷酸，便于用常规的重组 DNA 技术进行操作，而且进行动物实验时造成的免疫反应小； 3. 宿主范围广：能感染分裂细胞和非分裂细胞； 4. 表达稳定：能介导基因的长期稳定表达； 5. 物理性质稳定：在60℃不能被灭活，能抗氯仿； 三、重组腺相关病毒载体系统简介
汉恒重组腺病毒操作手册 目录 腺病毒安全使用和注意事项 腺病毒储存与稀释的注意事项 一、整体实验流程 二、实验材料 三、腺病毒包装和浓缩 四、重组腺病毒滴度（PFU）的测定 五、重组腺病毒感染目的细胞 六、重组腺病毒用于动物实验 附1：汉恒生物腺病毒载体 附2：腺病毒感染细胞最佳MOI的摸索（表达荧光的病毒）附3：汉恒生物常见三种病毒感染目的细胞比较
腺病毒安全使用和注意事项 ?腺病毒安全使用注意事项（*非常重要！！！*） 1)腺病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。 2)操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。 3)操作病毒时需要特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用 70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。 4)接触过病毒的枪头、离心管、培养板及培养瓶请用84消毒液浸泡后统一处理。 5)如实验过程中需要离心，应使用密封性好的离心管，必要时请用封口膜封口后离心。 6)病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。 7)实验完毕后请用香皂清洗双手。 ?腺病毒储存与稀释的注意事项 1）腺病毒的储存 收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长期保存请分装后放置于-80 ℃。 注：
a.反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%），因此在病毒使用过程中 尽量避免反复冻融。汉恒生物对病毒已进行分装（200 μl/tube），收到后请直接放置-80℃冰箱保存即可。 b.若病毒储存时间超过6个月，汉恒生物建议在使用前重新测定病毒滴度（参见附表2-慢病毒滴 度测定方法）。 2）腺病毒的稀释 需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于4℃保存(一周内使用完最佳)。 重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。重组腺病毒具有以下几个显著优点：感染范围广，几乎可以感染所有的细胞系、原代细胞和部分组织；感染效率高达100%，可全面超越其他病毒载体工具和脂质体转染；对外源基因容载能力大（可以高达8Kb）；不整合基因组；滴度高，操作方便。因此，重组腺病毒是一种最具有潜力的基因递送工具。 目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36Kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。 目前最常用的腺病毒包装体系有AdEasy和AdMAX两种，其共同特点是目的基因首先克隆到穿梭载体，然后再重组到腺病毒的大骨架上。这两个系统均具有腺病毒早期转录复制基因E1和E3的缺陷(ΔE1, ΔE3)，其中E3基因对病毒产生并非必需。因此，腺病毒包装
秘密载体的管理规定 《国家秘密载体印制资质管理办法》是为了加强国家秘密载体印制资质管理，确保国家秘 密安全而制定的，下面给大家介绍关于秘密载体管理规定的相关资料，希望对您有所帮助。 秘密载体管理规定第一章 总 则第一条 为加强国家秘密载体印制资质管理，确保国家秘 密安全，根据《中华人民共和国保守国家秘密法》和有关法律法规，制定本办法。 第二条 本办法所称国家秘密载体，是指以文字、数据、符号、图形、图像、声音等方式 记载国家秘密信息的纸介质、光介质、电磁介质等各类物品。 国家秘密载体印制，是指以印刷、复制等方式制作国家秘密载体的行为。 第三条 从事国家秘密载体印制业务的生产经营性企业事业单位应当依照本办法，取得国 家秘密载体印制资质。 国家机关和涉及国家秘密的单位(以下简称机关、单位)委托印制国家秘密载体，应当选择 具有国家秘密载体印制资质的单位(以下简称资质单位)。 第四条 国家秘密载体印制资质实行分类分级管理。 不同类别、等级的资质单位应当在规定的范围内从事国家秘密载体印制业务。 第五条 国家秘密载体印制资质分为涉密文件资料、国家统一考试试卷、涉密防伪票据证 书、涉密光电磁介质(含档案数字化加工)四类。 第六条 国家秘密载体印制资质分为甲级和乙级两个等级。 甲级资质单位可以在全国范围内承担绝密级、机密级、秘密级国家秘密载体印制业务;乙 级资质单位可以在工商注册地省(自治区、直辖市)行政区域内承担机密级、秘密级国家秘密载 体印制业务。 乙级资质单位跨省(自治区、直辖市)承接国家秘密载体印制业务的，应当经委托印制业务 的机关、单位所在地省(自治区、直辖市)保密行政管理部门批准。 第七条 国家秘密载体印制资质审批遵循安全保密、公平公正、总量控制、合理布局的原 则。 第八条 国家保密行政管理部门主管全国国家秘密载体印制资质管理工作。 省(自治区、直辖市)保密行政管理部门负责本行政区域内国家秘密载体印制资质管理工 作。 第二章 申请条件和标准第九条 国家秘密载体印制资质申请单位 (以下简称申请单位)应 当具备以下基本条件：(一)在中华人民共和国境内注册的企业法人或者事业单位法人;(二)参 与国家秘密载体印制业务的人员为中华人民共和国境内公民，国家另有规定的除外;(三)具有 与所申请资质类别、等级相适应的固定生产经营场所和办公场所;(四)从事相应印制业务 3 年 以上，具有良好的诚信记录，无违纪违法行为;(五)具备相应规模的印制设备和技术力量等生 产经营条 件;(六)生产经营和监督管理制度健全。 第十条 申请单位应当具备以下保密条件：(一)保密制度完善;(二)保密组织健全，有专门 的机构或者人员负责保密工作;(三)对涉密人员的审查、考核、登记手续完备，且涉密人员具