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产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南

关于印发《产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南（试行版）》的通知

卫办医政发〔2010〕161号各省、自治区、直辖市卫生厅局、中医药管理局，新疆生产建设兵团卫生局，各军区联勤部、各军兵种后勤部卫生部，总参三部后勤部，总参管理保障部、总政直工部、总装后勤部卫生局，军事科学院、国防大学、国防科学技术大学院（校）务部卫生部（处），武警部队后勤部卫生部，总后直属单位卫生部门：2010年8月以来，国际上陆续报道在印度、巴基斯坦、英国等地发现产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌（俗称“超级细菌”），引起了全社会广泛关注。

为指导各级各类医疗机构做好可能出现的产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染患者的诊疗工作，保障医疗质量和医疗安全，卫生部会同总后卫生部和国家中医药管理局共同组织专家制定了《产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南（试行版）》，现印发给你们，请参照执行。

附件：产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南（试行版）

卫生部办公厅

总后勤部卫生部医疗局

国家中医药管理局办公室

二〇一〇年九月二十八日

一、病原与流行情况

细菌产生能水解β-内酰胺类抗菌药物的β-内酰胺酶，是细菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制。临床分离细菌大多能产生β-内酰胺酶，已经确定的β-内酰胺酶有数百种；各种酶分子结构和对β-内酰胺类水解能力存在较大差异，一般根据分子结构分为A、B、C、D四大类，其中B类酶在其活性部位结合有锌离子，因此又称为金属β-内酰胺酶。其水解底物包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等，表现为产酶细菌对这些药物广泛耐药。金属β-内酰胺酶首先在铜绿假单胞菌、不动杆菌中发现。近年来，在肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等中也有发现。迄今为止已经确定的金属β-内酰胺酶除NDM-1外，还包括IMP、VIM、GIM、SIM、SPM等型别。

最早报道的产NDM-1细菌为肺炎克雷伯菌，于2008年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中发现，对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药，对环丙沙星也不敏感，仅对粘菌素敏感，深入研究发现这株细菌携带一种新型金属β-内酰胺酶，并根据患者可能感染地点命名这种酶为NDM-1，其后还在这名患者粪便中分离到产NDM-1的大肠埃希菌。

根据上述研究结果，英国、印度等国研究人员在印度、巴基斯坦、英国等开展了较大范围的流行病学调查，产NDM-1肠杆菌科细菌占所检测细菌的1.2%-13%，主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它细菌还有阴沟肠杆菌、变形杆菌、弗劳地枸橼酸菌、产酸克雷伯菌、摩根摩根菌、普罗威登菌等；这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感染等。在美国、加拿大、日本、韩国、澳大利亚、比利时以及我国香港地区等都已经有感染病例报道。

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产NDM-1细菌的传播方式尚无研究报道，但根据患者感染情况以及细菌本身特点，可能主要通过密切接触，如污染的手和物品等方式感染。

二、临床特点

与其它多重耐药菌感染相似，以下患者属于产NDM-1细菌感染的易感人群：疾病危重、入住重症监护室、长期使用抗菌药物、插管、机械通气等。

产NDM-1细菌感染患者临床表现与敏感菌感染没有差别。主要感染类型包括泌尿道感染、伤口感染、医院获得性肺炎、呼吸机相关肺炎、血流感染、导管相关感染等。感染患者抗菌治疗无效，特别是碳青霉烯类治疗无效，需要考虑产NDM-1细菌感染可能，及时采集临床样本进行细菌检测。

三、实验室诊断

产NDM-1细菌的实验室诊断包括表型筛查、表型确认和基因确证三个步骤。

（一）表型筛查

在细菌药物敏感性测定中，以美罗培南或亚胺培南纸片法（K-B法）或最低抑菌浓度（MIC）测定法对肠杆菌科细菌产酶情况进行初步筛查，如果达到以下标准，需要进行表型确认。厄他培南特异性较低，不推荐用于筛查试验。

1.K-B法：美罗培南（10μg纸片）或亚胺培南（10μg纸片）抑菌圈直径≤22mm。

2.MIC测定法：美罗培南MIC≥2mg/L；或亚胺培南对大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙门菌属和肠杆菌属MIC≥2mg/L。

（二）表型确认

双纸片协同试验:采用亚胺培南(10μg)、EDTA（1500μg）两种纸片进行K-B法，两纸片距离10-15mm，在含EDTA纸片方向处，亚胺培南抑菌圈扩大，即可判定产金属酶。

采用亚胺培南（美罗培南）/EDTA复合纸片进行K-B法药敏试验，复合纸片比单药纸片的抑菌圈直径增大值≥5mm；亚胺培南（美罗培南）/EDTA复合E试条协同试验测定MIC，单药与复合制剂的MIC比值≥8，即可判定产金属酶。

（三）基因确证

采用NDM-1的基因特异引物进行PCR扩增及产物测序，确定菌株是否携带blaNDM-1基因。

各医院对阳性结果须加以复核，同时将菌株送有条件的参考实验室进一步检测确证。

四、治疗

目前有关产NDM-1细菌感染治疗的临床研究较少。产NDM-1细菌几乎对所有β-内酰胺抗菌药物耐药，同时由于细菌具有其它耐药机制，对氨基糖苷类、喹诺酮类等也多耐药，对多粘菌素和替加环素具有较高体外敏感性。

（一）治疗原则

1.依据临床微生物检测结果，合理选择抗菌药物。

2.临床微生物室应扩大抗菌药物敏感性测定范围，包括范围更广的非β-内酰胺抗菌药物（如氨基糖苷类、喹诺酮类、替加环素、米诺环素、磷霉素、多粘菌素等），为临床用药提供参考。

3.去除感染危险因素，尽量减少对患者的侵袭性操作，及时拨出导管、脓肿引流等。

4.积极治疗原发疾病。

5.根据临床特征进行中医辨证治疗。

（二）抗菌药物

1.替加环素（tigecycline）:四环素类衍生物，超广谱抗菌药物，对产NDM-1细菌MIC90值为2-8mg/L，敏感率56%-67%。临床研究单用或联合用药治疗产碳青霉烯酶细菌感染有一定疗效。

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2.多粘菌素（polymyxins）:属多肽类抗菌药物，包括多粘菌素B和粘菌素两种。粘菌素对产NDM-1细菌MIC90为2-32mg/L，敏感率89%-100%。小样本研究提示单用治疗效果差，需要和其它药物联合用药。口服不吸收，需要静脉注射给药，肾毒性明显。

3.碳青霉烯类：产NDM-1细菌对碳青霉烯类耐药，但体外MIC值差异较大，个别研究发现，对MIC值低（<4mg/L）的菌株感染有一定疗效，需要和其它药物联合使用。

4.氨基糖苷类：不同药物间呈部分交叉耐药，我国临床分离的产金属β-内酰胺酶肠杆菌科细菌对阿米卡星、异帕米星具有一定敏感性。对轻、中度感染可以单用，重度感染需要与其它药物联合应用。用药期间注意药物耳肾毒性。

5.氟喹诺酮类：肠杆菌科细菌对喹诺酮类耐药突出，需要根据药物敏感性测定结果选择药物。

6.磷霉素：体外研究表明对部分耐药菌有效，但缺乏临床研究数据。

（三）治疗方案

1.轻、中度感染：敏感药物单用即可，如氨基糖苷类、喹诺酮类、磷霉素等，也可联合用药，如氨基糖苷类联合环丙沙星、环丙沙星联合磷霉素等。无效患者可以选用替加环素、多粘菌素。

2.重度感染：根据药物敏感性测定结果，选择敏感或相对敏感抗菌药物联合用药，如替加环素联合多粘菌素、替加环素联合磷霉素、替加环素联合氨基糖苷类、碳青霉烯类联合氨基糖苷类、碳青霉烯类联合多粘菌素、喹诺酮类联合碳青霉烯类等。应严密观察患者治疗反应，及时根据药物敏感性测定结果以及临床治疗反应调整治疗方案。

五、预防和控制

（一）加强产NDM-1细菌的监测。

发现产NDM-1细菌后及时加以确认，并反馈相关科室，指导治疗与感染控制，同时按规定报告；各医疗机构应定期回顾耐药监测结果，如有产NDM-1细菌被遗漏，及时采取补救措施。

（二）加强抗菌药物合理使用管理。

严格执行抗菌药物合理使用的管理规定，将碳青霉烯类按照特殊使用类抗菌药物进行管理。

（三）加强医院感染预防与控制。

1.加强医务人员感染控制教育、培训，强化对NDM-1细菌等多重耐药菌感染的预防、控制的认识。

2.在进行各种侵袭性操作中，严格执行无菌操作。

3.严格执行《医务人员手卫生规范》（WS/T313-2009）：医疗机构必须提供充足的手卫生设施。医务人员在接触病人前后、进行侵入性操作前、接触病人使用的物品或处理其分泌物、排泄物后，必须洗手或用含醇类速干手消毒剂擦手。

4.加强对重点部门尤其是ICU物体表面的清洁、消毒。对医务人员和病人频繁接触的物体表面，如生命监护仪、微量输液泵、呼吸机等医疗器械的面板或旋钮表面、计算机键盘和鼠标、电话机、病人床栏杆和床头桌等，采用适宜的消毒剂，每天必须仔细擦拭、消毒，疑似或确认有产NDM-1细菌感染或带菌者，所处病室需增加消毒次数。

5.隔离确诊产NDM-1细菌感染或定植者，预防耐药菌传播。在标准预防的基础上，采用接触隔离的方法，将病人安置单独房间，接触患者时需要穿隔离衣、戴手套，相关医疗器械或物品如听诊器、血压计等专用，不能专用的物品，需用后严格消毒。隔离期间需要定期检测耐药菌情况。

六、其他

本指南也适合于其他类型产碳青霉烯酶耐药细菌感染的诊疗参考使用。

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专家解读耐药细菌知识

1. 什么是耐药细菌？

抗菌药物通过杀灭细菌发挥治疗感染的作用,细菌作为一类广泛存在的生物体，也可以通过多种形式获得对抗菌药物的抵抗作用，逃避被杀灭的危险，这种抵抗作用被称为“细菌耐药”，获得耐药能力的细菌就被称为“耐药细菌”。

2. 耐药细菌是从哪里来的？是天然存在的还是物种进化的结果？

抗菌药物大多属于微生物的代谢产物，据此自然界中的微生物按照是否能够产生抗菌药物分为两类，一类为产抗菌药物微生物（主要是放线菌和链霉菌），另一类不能产生抗菌药物（大多数细菌属于此类），在自然界中这两类微生物常常相伴而生，前者由于能够产生抗菌药物，具有杀灭其他细菌的能力而获得生存优势，相反不产生抗菌药物的细菌则需要获得抵抗抗菌药物的能力，达到种族延续的目的，可见抗菌药物与细菌耐药是自然界中长期存在的生物现象。研究表明细菌、细菌产生抗菌药物以及细菌耐药的历史甚至早于人类的出现。

在人类研究感染性疾病治疗药物时偶然发现了青霉素，并以此为契机不断在自然界中寻找抗菌药物，或者通过科学手段提高抗菌药物产量与抗菌效力，由此导致本身处于平衡状态的抗菌药物-细菌耐药的矛盾被破坏，抗菌药物在自然界、医疗环境、动物饲养场等浓度不断上升，具有耐药能力的细菌也通过不断的进化与变异，获得针对不同抗菌药物耐药的能力，这种能力在矛盾斗争中不断强化，细菌逐步从单一耐药到多重耐药甚至泛耐药，最终成为超级耐药，对临床各种抗菌药物都变得耐药。

由此可见，细菌耐药是一种被人类强化的自然现象。

3. 目前都有哪些耐药菌种？

由于抗菌药物的广泛使用，全球耐药情况非常严峻，应该说所有细菌都已经有耐药现象发现，对抗菌药物完全敏感的细菌几乎不存在了，但根据耐药的严重程度，可以称为超级耐药细菌的主要有：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）

耐万古霉素肠球菌（VRE）

耐万古霉素葡萄球菌（VRSA）

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（包括NDM-1）

多重耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）

泛耐药不动杆菌（PDR-AB）

产ESBL肠杆菌科细菌

多重耐药结核杆菌（XTB）

4. 耐药细菌为何能耐药？

细菌耐药属于一种自然现象，是千百年来微生物进化的结果。细菌的抗药性是细菌进化选择的结果，抗生素的滥用加剧了细菌耐药性的产生。细菌在生长繁殖过程中会产生耐药性基因的突变，在使用抗生素的选择压力下，耐药性细菌被筛选出来并优势繁殖。抗生素的滥用主要有两种形式：一是在人类疾病治疗过程中滥用抗生素；另一个是动物饲料添加抗生素的问题。有统计数据表明，世界上抗生素总产量的一半左右用于人类临床治疗，另一半则用在了畜牧养殖业。

产生耐药的细菌通过以下方式产生耐药：细菌改变自己结构，不和抗菌药物结合，避免抗菌药物作用；细菌产生各种酶，破坏抗菌药物（如NDM-1）；构建自身防御体系，关闭抗菌药物进入细菌的通道或者把已经进入细菌体内的抗菌药物排出菌体。

5. 抗生素耐药的主要危害是什么？

抗生素是人类对抗细菌感染的有效手段。细菌产生耐药性使原本有效的抗生素的治疗效果降低或丧失，增加了对患者的治疗难度和医疗成本。抗生素耐药问题的日益加剧，使人类对付细菌的有效武器越来越少。

6. 有无有效手段杀灭耐药细菌？

人类在和细菌斗争中，特别针对耐药细菌进行了大量研究，主要期望通过以下方式克服细菌耐药：

1)直接针对耐药细菌研究开发新的抗菌药物，期望只要有一种耐药菌就开发一种新抗菌药物，这是最理想办法，但结果令人失望，细菌耐药产生的速度远远超越抗菌药物研究速度，且抗菌药物研究开发难度越来越大。

2)克服耐药机制，恢复细菌对抗菌药物的敏感性：如针对细菌产生的bete-内酰胺酶，研究合成酶抑制剂，

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将酶抑制剂和抗菌药物联合使用，在克服细菌耐药同时发挥抗菌药物的杀菌作用，迄今为止，临床可供使用的只有bete-内酰胺酶抑制剂和青霉素（或头孢菌素）复方应用，其他众多耐药机制尚无法克服；

3)抗菌药物替代产品，如抗菌多肽、噬菌体等，但大多停留在实验研究阶段，离临床应用还很遥远。

根据大量研究，最有效的办法是避免细菌耐药，保持抗菌药物活性，要达到这一目的的最终办法是：合理使用抗菌药物。

7. 耐药细菌会引起哪些疾病？

耐药细菌和敏感细菌在致病性方面差异不大，细菌获得耐药性并不改变其致病能力，一般也不会产生新的感染类型，最主要的挑战在于细菌获得耐药后，治疗困难，对感染者治疗有效率降低、病死率增加、医疗费用会大幅上涨。

8. 什么是感染性疾病？与传染病有何区别？

凡是由各种病原体（包括病毒、细菌、支原体、衣原体、螺旋体、寄生虫等）引起的疾病都被称为感染性疾病，种类十分广泛。但其中一部分疾病可以通过各种方式，如接触、消化道、呼吸道、昆虫叮咬等在正常人体间传播，具有较强的传染性，对社会危害极大，这一类疾病被归于传染病范畴，并且通过一定的管理程序（包括法律）加以管理。可见感染性疾病范围大，包括传染病，而传染病属于感染性疾病的特殊类型。

9. 如何预防感染性疾病？

感染性疾病的预防可以通过如下方式进行：

1)注意个人卫生，包括环境卫生、饮食卫生；

2)锻炼身体，提高自身抵抗力；

3)合理使用抗菌药物，减少耐药菌产生与感染；

4)部分传染病可以通过接种疫苗预防；

5)医疗机构加强医院感染控制，减少住院患者获得耐药菌感染。

10. 人体自身免疫力能对抗耐药细菌吗？是如何起效的？

人体免疫系统只针对病原菌，可以通过体液免疫和细胞免疫对抗各种感染，但免疫系统不能克服细菌耐药。

11. 我国是否存在细菌耐药问题？

细菌耐药是全人类所面临的公共卫生挑战，没有哪一个国家能够幸免，只是耐药形式在不同地区有所差异。我国也存在细菌耐药问题，并且在一定程度上还比较严峻，需要政府、专业人员、全体公民共同努力加以遏止。

12. 卫生部门采取了哪些措施防控耐药细菌？

卫生部在控制耐药方面采取了以下措施：

1)合理使用抗菌药物：制订了“抗菌药物临床应用指导原则”，颁布了“医院药事委员会管理条例”、“处方管理办法”，建立了“临床药师制度”，要求各医院建立感染病科，专业处理各种感染性疾病，其他还有“医院感染管理办法”等；

2)建立了“细菌耐药监测网”和“抗菌药物使用监测网”，发现细菌耐药，评估抗菌药物合理使用情况；

3)开展了诸如“星火计划”“萌芽计划”等抗菌药物合理使用的培训教育的项目。

4)开展国际合作：与细菌耐药控制良好的国家（如瑞典）进行合作，与世界卫生组织也有良好协调。

13. 耐药细菌目前在世界上的情况如何？

由于各地区各国在抗菌药物应用管理上的差异，细菌耐药在不同地区也存在较大差异，亚洲国家（如日本、韩国、马来西亚、印度、巴基斯坦等）、南美各国、东欧以及部分西欧国家细菌耐药较为突出，形势严峻；美国、加拿大、北欧国家细菌耐药情况控制较好，特别是北欧国家是值得全球学习的榜样。

14. 一种耐药细菌会把耐药基因传播给非耐药细菌吗？

由于长期进化，细菌所获得的耐药能力已经根植于细菌基因之中，存在于细菌染色体上，代代相传，或者存在于染色体外的一种基因物质—质粒。耐药细菌会通过耐药质粒把耐药基因传播给非耐药细菌，导致耐药扩散。这也是细菌成为超级耐药的主要途径。

15. 什么是NDM-1？

2010年8月11日《柳叶刀》杂志一篇文献报道发现产“NDM-1的肠杆菌科细菌，对绝大多数常用抗生素耐药。该报道引起国内外广泛关注，媒体称之为“超级细菌”。研究发现，该细菌内存在一种β-内酰胺

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酶基因，该基因发现者认为其起源于印度新德里，因此将其命名为“新德里金属β-内酰胺酶-1”（NDM-1）基因。带有NDM-1基因的细菌，能水解β内酰胺类抗菌药物（如青霉素G、氨苄西林、甲氧西林、头孢类等抗生素），因而对这些广谱抗生素具有耐药性。

16.哪些细菌带有NDM-1基因？

目前，发现带有NDM－1的细菌主要为大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、摩氏摩根菌、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌等。这些细菌有的是条件致病菌，有的属于人体正常菌群成员，其本身通常不致病或致病性不强。

17. 带有NDM-1基因细菌对所有抗生素都耐药吗？

带有NDM-1基因的细菌对临床常用的大多数抗生素都耐药，如：亚胺培南、美罗培南、氧哌嗪青霉素-他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢匹罗、氨曲南、环丙沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、米诺四环素等，但对多粘菌素E和替加环素这2种抗生素敏感。

18.哪些人群容易感染带有NDM-1基因的细菌？

该类耐药细菌感染主要发生在医疗机构的住院病人中，特别是机体免疫力低下、正常菌群失调的病人，感染部位通常为血液、尿道、肺部和伤口等。

19.带有NDM-1基因的细菌能在人群中引起广泛传播么？

目前研究发现带有NDM-1基因的细菌主要在住院病人中引起感染，不会在社区的普通人群中广泛传播。

20.感染带有NDM-1基因的细菌后的症状和后果如何？

目前发现带有NDM-1基因的细菌多为致病力弱的条件致病菌或人体正常菌群，这类细菌带有NDM-1基因后，其致病性和传播能力并无改变，但患者感染带有NDM-1基因的细菌后，会使治疗变得更加困难。感染该类细菌的患者的临床表现及疾病的严重性，主要取决于感染部位、感染的细菌种类以及感染者自身的健康状况等因素。

21.目前哪些国家和地区发现了携带NDM-1基因的细菌感染者？

目前，报道发现带有NDM-1基因细菌国家有印度、巴基斯坦、英国、比利时、荷兰、奥地利、法国、德国、肯尼亚、澳大利亚、日本、美国、我国香港和台湾等国家和地区。

22. 世界卫生组织对NDM-1的评估与建议是什么？

2010年8月20日，针对携带NDM-1基因的细菌问题，世界卫生组织做出以下评估和建议：虽然多重耐药细菌并不属于一个新问题，并且今后也还会继续出现，但携带NDM-1基因的细菌的出现，表明细菌耐药性已成为一个日益严重的全球性公共卫生问题。世界卫生组织建议各国加强细菌耐药性监测；严格执行预防和控制措施，实施医院感染控制措施，控制多重耐药菌株的传播，同时，强化医务工作者和公众合理使用抗生素的相关政策，严格执行有关停止无处方销售抗生素的法规，减少耐药菌的产生。

23. 我国应对措施有哪些？

1)密切关注国际上NDM-1耐药基因的研究报道，及时获取信息，评估其对我国的影响。

2)开展NDM-1耐药基因的监测与研究，了解我国携带NDM-1基因的细菌种类与数量，研究评估其对医疗服务以及公共卫生造成的影响。

3)进一步强化各级医疗机构临床抗生素药物的规范使用，减少耐药细菌的产生。

4)加强医院感染控制，减少患者医院感染的风险。

24. 公众应该怎么做才能减少耐药细菌的产生？

公众要慎重使用抗生素，对抗生素的使用要坚持“四不”原则：

不随意买药：多数抗生素是处方药物，不能到药店随便购买，而应凭处方购药。

不自行选药：抗生素是用来对付细菌的，抗生素需对症方有疗效，选择哪类药物，需专业医师或临床检验后做出判断，不宜根据广告自行选药。

不任意服药：对于家庭小药箱中储备的抗生素类药物，要谨慎使用，最好到医院确诊后，根据医嘱服用，千万不要盲目乱用。类似感冒等日常小病，不要动辄就服用抗菌药物。

不随便停药：一旦使用抗生素治疗，就要按时按量服药，以维持药物在身体里的有效浓度。

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临床检验技师-微生物检验(2019)练习第十四章-肠杆菌科及检验.doc

2019第十四章肠杆菌科及检验一、A1 1、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误的是 A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻 B、E PEC主要引起婴儿腹泻 C、E IEC引起黏液脓血便 D、E HEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急性肾衰竭 E、E AggEC其中0157:117可引起出血性大肠炎 2、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 3、肠杆菌科细菌的菌体抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 4、志贺菌属分群、分型的依据是 A、0抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、V抗原 E、0抗原和K抗原 5、无鞭毛的细菌是 A、埃希菌属 B、沙门菌属 C、志贺菌属 D、变形杆菌属 E、枸椽酸杆菌属 6、宋内志贺菌 A、为A群志贺菌 B、为B群志贺菌 C、包括10个血清型

D、培养中常有扁平的粗糙型菌落 E、快速发酵乳糖 7、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都不对 8、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是 A、发酵乳糖 13、发酵山梨醇 C、发酵葡篇糖 D、硫化氢试验 E、明胶水解试验 9、根据0抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为 A^痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、痢疾杆菌 10、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群（型） A、痢疾志贺菌福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都是 11、下列为沙门菌分群依据的抗原是 A、菌体抗原 B、鞭毛抗原 C、Vi抗原 D、M抗原 E、5抗原 12、辅助诊断伤寒病的实验是 A、肥达试验 B、汹涌发酵试验 C、抗溶血素“0”试验 D、Weil-Felix 试验

微生物检验肠杆菌科及检验

第十九章肠杆菌科及检验本章考点： 1.概述（1）概念（2）命名与分类原则（3）共同特点（4）自然与人体内的分布（5）微生物学检查方法（6）临床意义 2.埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属（1）生物学性状（2）微生物学检查法（3）临床意义一、概述和通性（一）概念肠杆菌科是由多个菌属组成，其生物学性状相似，均为革兰阴性杆菌。大多数肠道杆菌属于正常菌群，作为条件致病菌而引起疾病。其中包括常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属）和常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属），以及一些在一定条件下偶可引起临床感染的细菌。（二）分类根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌屑、耶尔森菌属等。（三）生物学特性 1.形态与染色革兰阴性杆菌，其菌体大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。多数有周鞭毛，除外志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。均不形成芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 2.培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长并形成中等大小的S型菌落，液体培养基中呈混浊生长。 3.生化反应：发酵葡萄糖产酸、产气，乳糖发酵试验: 肠道非致病菌（＋），肠道致病菌（－）（除外变形杆菌）。肠杆菌科定科试验主要项目是革兰阴性杆菌、触酶阳性，氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阳性。 4.抗原构造：包括菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原和表面抗原（如Vi抗原、K抗原）3种。 5.变异：包括菌落S～R变异，鞭毛H～O变异和耐药性或生化反应性质的改变。 6。抵抗力：不强。加热60℃，30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。（四）致病性肠杆菌科细菌种类多，可引起多种疾病： 1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。

肠杆菌科细菌讲义

第五节变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属 ( Proteus , Providencia , Morgannella ) 为一群苯丙氨酸脱氨酶阳性细菌，是肠道正常菌群，亦是引起医源性感染的重要条件致病菌。变形杆菌属包括4个种：普通变形杆菌(P.vulgaris，又分为生物2群和生物3群)、奇异变形杆菌( P.mirabilis)、潘氏变形杆菌(P.penneri) 、产粘变形杆菌( P.myxofaciens )。广泛存在于泥土、水和被粪便污染的物质中。与人类致病有关是前3种，普通变形杆菌和奇异变形杆菌能引起人的原发性和继发性感染，泌尿系感染的主要病原菌之一，还常引起伤口、呼吸道、新生儿脐带感染等，此外还能引起食物中毒，奇异变形杆菌是婴儿肠炎的病原菌之一。潘氏变形杆菌是新近发现命名的，是引起医院感染的病原菌。生物学性状：G-杆菌，呈多形性，有周身鞭毛，运动活泼，大多数菌株在普通琼脂平板上呈迁徙生长现象(可被石碳酸或胆盐等抑制)，产硫化氢、苯丙氨酸和脲酶均阳性，KIA 呈K(不发酵乳糖)/A++。抗原构造；本属菌X19、X2、Xk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，用这些菌株替代立克次体与患者血清作凝集反应，可作为立克次体病的辅助诊断，称外-斐反应。普罗威登菌属包括5种：产碱普罗威登菌(P.alcalifaciens)、斯氏普罗威登菌(P.stuartii)、雷氏普罗威登菌(P.rettgeri)、拉氏普罗威登菌(P.rustigianii)和海氏普罗威登菌(P.heimbochae).与人类致病有关常见前3种，有碱化尿液的作用，促使尿结晶形成，与泌尿系统结石形成有关。斯氏普罗威登菌和雷氏普罗威登菌可致泌尿道感染和其他肠外感染，并引起许多医院感染的爆发流行。种间鉴定见书P174表17-16 摩根菌属只有摩根摩根菌一个种，可致泌尿道和伤口感染，并与腹泻有关。种属间鉴别如下：总鉴定见表17-17（P176）第六节耶尔森菌属(Yersinia) 它包括7个种，与人类致病关系较大的有3种，即鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌。一、鼠疫耶尔森菌(Y.pestis) 是鼠疫(Plaque)的病原菌。通过人与感染动物(或人)接触或鼠蚤叮咬而受感染，属烈性传染病。是自然疫源性疾病。二、小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica) 本菌天然寄居在多种动物体内，通过污染食物和水，经粪-口途径感染或接触染疫动物而感染。本菌是肠杆菌科中的肠道致病菌之一，近年来某些血清型引起的肠道感染正逐年上升。 1

肠杆菌科细菌分布及耐药

肠杆菌科细菌是引起临床感染常见的革兰阴性杆菌，也是造成医院内感染的主要致病菌。近年来，随着第3代头孢菌素的广泛应用，各种肠杆菌科病原菌的种类与耐药情况已发生变化，造成的感染临床治疗困难。现对本院2006—2011年临床分离的肠杆菌科细菌的分布及耐药情况进行动态观察和分析，为临床抗菌药物的及时、合理使用提供依据，制定经验治疗方案。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株来源2006年12月至2011年12月本院临床科室送检的各种标本中分离到的肠杆菌科细菌，去除同一患者中同一部位所获重复菌株。质控菌株为大肠埃希菌（ATCC25922）和肺炎克雷伯菌（ATCC700603）符合《临床检验操作规程》3版[1]。 1.1.2抗菌药物及试剂药敏纸片及琼脂均为杭州天和微生物试剂公司产品。 1.2方法 1.2.1标本采集与培养按临床微生物培养操作规范进行标本的采集与培养[2]。 1.2.2细菌鉴定及药敏试验细菌鉴定采用肠杆菌科编码系统，药敏试验采用K-B法，按美国临床和实验室标准化协会（CLSI）规定判断药物敏感性。1.2.3产超广谱-内酰胺酶（ESBLS）测定：参照NCCLS推荐的纸片扩散表型确定法[3]。 1.3数据处理将结果输入WHONET5.3软件进行分析，同一患者的相同菌株只作1次分析。 2结果 2.1肠杆菌科细菌检出情况本院5年间从临床标本中分离661株肠杆菌科细菌，其中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性株280株，占42.4%。2007—2011年产ESBLs菌株分布情况见表1。 2.2菌种分布与变迁肠杆菌科细菌的检出率，从2007年的98株到2011年161株，而且主要是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，见表2。肠杆菌科细菌分布及耐药分析赵海1，沙迎菁2（1.青铜峡市人民医院检验科，宁夏青铜峡751600；2.青铜峡市妇幼保健所检验科，宁夏青铜峡751600）【摘要】目的动态观察并分析该院临床标本分离的肠杆菌科细菌的分布及耐药情况。方法采用2000年美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁布的纸片扩散法中的筛选试验和确认试验，药敏试验采用K-B法。结果最常见的肠杆菌科细菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、福氏志贺菌、变形杆菌属和沙雷菌属。耐药分析显示，亚胺培南一直对所有常见肠杆菌科细菌保持良好的抗菌活性，其次为阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦和头孢吡肟/舒巴坦。氟喹诺酮类药物对除大肠埃希菌以外的其他肠杆菌细菌抗菌活性好。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的比例逐年增高。结论院内细菌耐药性监测不仅能指导临床合理使用抗菌药，还能延缓耐药性的产生和蔓延。【关键词】β内酰胺酶类；肠杆菌科；抗菌药；抗药性，细菌；微生物敏感性试验文章编号：1009-5519（2012）16-2424-02中图法分类号：R378.2文献标识码：A Distribution and drug resistance analysis in Enterobacteriaceae bacteria Zhao Hai1，Sha Yingqing2（1.Department of Lab-oratory，Qingtongxia Municipal People′s Hospital，Qingtongxia，Ningxia751600，China；2.Department of Laboratory，Qingtongxia Municipal Maternal and Child Health Care Hospital，Qingtongxia，Ningxia751600，China）【Abstract】Objective To dynamically observe and analyze the distribution and drug resistance of Enterobacteriaceae bacteria isolated from the clinical specimens in this hospital.Methods The screening test and verification test in the disc diffu-sion method promulgated by the the American Committee for Clinical Laboratory Standards（NCCLS）in2000were adopted.The drug sensitivity test used K-B method.Results The most common Enterobacteriaceae bacteria were Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae，Shigella flexneri，proteus and Serratia.The drug resistance analysis showed that imipenem always matained good antibacterial activity to all common Enterobacteriaceae bacteria，followed by amikacin，cefoperazone/sulbactam and cefepime/sul-bactam.Fluoroquinolones had good antibacterial activity to other Enterobacteriaceae bacteria except Escherichia coli.The propor-tion of Escherichia coli and ESBLs-producing Klebsiella pneumoniae was increased year by year.Conclusion The drug resis-tance surveillance of nosocomial bacteria can not only guide clinical rational use of antibacterial drugs，but also delay the pro-duction and spread of drug resistance. 【Key words】Beta-lactamases；Enterobacteriaceae；Anti-bacterial agents；Drug resistance，bacterial；Microbial sensitivity tests 表1肠杆菌科细菌分布情况（株）年度 2007 2008 2009 2010 2011合计 98 111 140 151 161 661 24 34 63 65 67 253 47 50 52 55 57 261 15 18 16 17 19 85 8 6 6 10 13 43 4 3 3 4 5 19 32 37 61 71 79 280 32.7 33.3 43.6 47.0 49.1 42.4 总数痰尿大便咽拭子大便ESBLs阳性阳性率（%）

多重耐药菌感染的临床治疗指导意见

多重耐药菌感染的临床治疗指导意见一、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）超广谱β-内酰胺酶( extended2spectrumβ2lactamases, ESBLs)是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药的主要机制之一，其预防与治疗已成为临床医生需要面对的重要问题。ESBLS革兰阴性杆菌主要见于大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌，应引起足够重视，注意做好ESBLS的检出工作。产ESBLs细菌主要在医院内引起感染和流行，其中60%发生在大型医院，特别是教学医院。产ESBLs细菌不仅引起院内暴发流行，还可以向院外传播,使流行范围扩大。研究显示,重症监护病房、住院日延长( ≥7 d) 、机械通气、导尿管和动脉导管的留置、严重疾病状态(如器官移植)、不适当联合使用抗菌药物或三代头孢菌素、年龄≥60岁等都是导致产ESBLs细菌感染的危险因素。因此，应加强抗菌药物的管理，临床医生要关注细菌的耐药现状，预测细菌耐药变迁。（一）产ESBLs细菌感染的治疗原则 1、去除产ESBLs细菌产生的诱因。包括及时拨出各种侵入性导管、尽量缩短住院时间、严格抗菌药物的使用原则等，同时应防止产EBSLs细菌的医院内扩散。 2、产ESBLs细菌对各种酶抑制剂复合制剂和碳青霉烯类抗菌药物敏感性较高。推荐使用的抗菌药物包括碳青霉烯类、头霉素类、酶抑制剂复合制剂等，也可以根据药敏试验和病情选择氨基糖苷类抗菌药物、氟喹诺酮类与上述抗菌药物联合治疗。具体用药时应关注到如下因素：(1)抗菌药物临床应用指征及目前关于药物的首选与次选的推荐意见；(2)已经使用的抗菌药物的临床疗效及更换药物后的临床表现；(3)本院流行细菌耐药性的流行情况；( 4)减低耐药性出现的策略；(5)抗菌药物的价格。 3、超广谱β-内酰胺酶：细菌在持续的各种β-内酰胺类抗菌药物的选择压力下，被诱导产生活跃的及不断变异的β-内酰胺酶，扩展了其耐受头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟等第3代及第4代头孢菌素，以及氨曲南等单环β-内酰胺类抗菌药物的能力。当怀疑产ESBLS时，即使体外试验对某些青霉素类、头孢菌素及氨曲南类抗生素敏感，临床上也应视为耐药，原则上不选用。 4、应该注意到，产ESBLs细菌可以在治疗过程中发展而来。对最初分离敏感的细菌，经(3～4) d三代头孢菌素的治疗后，有可能发展为耐药，因此对重复分离菌株应重复进行药敏试验。（二）治疗产ESBLs细菌感染的抗菌药物及使用的推荐意见 1、碳青霉烯类：碳青霉烯类对产ESBLs细菌敏感性很高，临床疗效显著，在严重感染或其他抗菌药物治疗疗效不佳时，可选择碳青霉烯类抗菌药物。对可能的产ESBLs细菌的社区感染、院内感染如重症监护室的呼吸机相关肺炎，均可经验性使用碳青霉烯类抗菌药物治疗。药物包括亚胺培南/西司他丁钠、美罗培南、帕尼培南、厄他培南、多尼培南等。美罗培南、帕尼培南不易发生神经系统的不良反应，可用于产ESBLs细菌引起的中枢神经系统感染。我院目前有亚胺培南/西司他丁钠、美罗培南。目前尚无确切临床资料说明碳青霉烯类与其它抗菌药物联合应用的疗效是否优于碳青霉烯类单独应用，但大多临床医生倾向于运用碳青霉烯类联合氨基糖苷类治疗产ESBLs细菌引起的严重感染。 2、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂：产ESBLs细菌对β-内酰胺类抗菌药物联合克拉维酸、舒巴坦或他唑巴坦的复方制剂较为敏感。此类药物可首选用于产ESBLs细菌所致的轻度至中度感染，但由于β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方对产ESBLs细菌的临床疗效不够理想，对产ESBLs细菌严重感染的患者，不宜作为首选药物。在已上市的β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方中，以头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的抗菌作用较强。应该注意，当细菌产生大量β-内酰胺酶或同时伴有外膜蛋白丢失时，β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方的抗菌活性也会降低。 3、头霉素类：体外研究显示，头霉素类抗菌药物对于产ESBLs细菌具有良好的抗菌作用，可以作为产ESBLs细菌的次选药物，也可以与氨基糖苷类抗菌药物等联合使用。头霉素类药物包括头孢米诺和头孢西丁。需要注意到是，头霉素类易诱导细菌产生诱导酶(AmpC酶) ，从而出现耐药。如果细菌同时有膜蛋白缺失也可引起细菌对头霉素类耐药。 4、其他抗菌药物：氨基糖苷类抗菌药物可作为产ESBLs细菌严重感染时的联合用药之一。喹诺酮类抗菌药物可用于治疗产ESBLs细菌引起的轻、中度感染(如尿路感染) ，但产ESBLs细菌对喹诺酮类的耐药性不断增加，限制了喹诺酮类药物在产ESBLs细菌感染中的应用。研究显示，替加环素对产EBSLs细菌有较好疗效，磷霉素（我院新修订的抗菌药物供应目录中已收录该药）对产ESBLs大肠埃希菌所致的复杂性或非复杂性下尿路感染有效率可达93. 8%，呋喃坦丁也可用于大肠埃希菌、变形杆菌等引起的急性尿路感染。药师提示：不同型别ESBLs对三代头孢菌素的水解能力各不相同，体外实验也可能显示产ESBLs细菌对第三代头孢菌素敏感，但临床上使用三代头孢菌素治疗产ESBLs细菌感染的疗效很差。第四代头孢菌素对ESBLs的稳定性高于第三代头孢菌素,但仍能为ESBLs不同程度的水解，因此，不管体外试验结果如何，所有的产ESBLs细菌均应视为对第三、四代头孢菌素耐药。（三）产ESBLs肠杆菌科细菌的抗菌药物治疗的推荐方案产ESBLs细菌感染的研究中,对肠杆菌科的大肠埃希菌、克雷伯菌的研究最多，其产ESBLs率也最高。应结合药敏试验结果和临床表现严重性，确定抗菌药物治疗方案。对轻至中度感染患者，首选复方β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂（药物包括阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉维酸等）。次选氨基糖苷类与头霉素类抗菌药物联合治疗（药物包括阿米卡星、妥布霉素、头孢西丁、头孢美唑等）。治疗效果不佳者，换用碳青霉烯类抗菌药物（药物包括亚胺培南、美罗培南、厄他培南、帕尼培南）。对严重的产ESBLs肠杆菌科细菌感染，以及医院发生产ESBLs肠杆菌科感染，可以首选碳青霉烯类抗菌药物或联合治疗方案。（四）产ESBLs细菌感染的预防

多重耐药菌管理

首都医科大学附属北京佑安医院李素英一、前言多重耐药菌 (Multidrug resistant bacteria ， MDRB) 在全世界广泛流传，细菌耐药受到世界性关注。多重耐药菌的产生与流行已构成社会性危害，也是医院感染经验性治疗失败的主要因素，了解医院感染菌谱及其 MDRB 的流行及变化趋势，对指导合理使用抗菌药物具有重要意义。 2011 年 4 月 7 日的世界卫生日主题定为，抵御抗药性：今天不采取行动，明天就无药可用。全球每天有 140 万人发生耐药。由于全球贸易和旅行的发展，使耐药性生物可在数小时内传播到全世界。面对严峻的形势，为加强耐药菌的管理，有效预防和控制多重耐药菌在医院内的传播，保障患者安全，近年来，卫生部采取了一系列措施推进抗菌药物临床合理应用。 2011 年 1 月又颁布了《多重耐药菌医院感染预防与控制技术指南》，这些规范性文件的颁布，对抗菌药物临床不合理应用现象必将得到有效遏制。二、定义和概念（一）耐药细菌什么是耐药细菌？抗菌药物通过杀灭细菌发挥治疗感染的作用，细菌作为一类广泛存在的生物体，也可以通过多种形式获得对抗菌药物的抵抗作用，逃避被杀灭的危险，这种抵抗作用被称为“细菌耐药”，获得耐药能力的细菌就被称为“耐药细菌”。（二）多重耐药菌什么是多重耐药菌？多重耐药菌（ Multidrug-Resistant Organism ， MDRO ）主要是指对临床使用的三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌。（三）泛耐药（PDR）目前泛耐药菌在临床上不断被发现，什么叫泛耐药？指的是对现有的（或可获得的）所有抗菌药物几乎都耐药，称为泛耐药。如泛耐药的鲍曼不动杆菌、泛耐药的铜绿假单胞菌和泛耐药的结核杆菌等。（四）临床常见多重耐药菌和泛耐药细菌临床常见的多重耐药菌，球菌类包括：耐甲氧西林或耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）；耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌（MRCNS）；耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（ VRSA ）；耐万古霉素的肠球菌（VRE），临床上比较多见的有粪肠球菌和屎肠球菌。杆菌类包括：产超广谱β-内酰胺酶细菌（ ESBLs ）如肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌等；染色体介导 I 型β-内酰胺酶（ AmpC ）如阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌等；耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（ CRE ）如产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶 [NDM-1] 或产碳青霉烯酶 [KPC] 的肠杆菌科细菌。多重耐药的结核分枝杆菌（ MDR-TB ）。常见的泛耐药细菌，泛耐药的鲍曼不动杆菌（ PDR-AB ）；泛耐药铜绿假单胞菌（ PDR-PA) ；产Ⅰ型新德里金属β - 内酰胺酶细菌（ NDM-1 ）。（五）耐药菌定植

阴沟肠杆菌感染的临床特点及耐药性分析

阴沟肠杆菌感染的临床特点及耐药性分析【关键词】肠杆菌；,,阴沟；,,抗感染药；,,药物耐受性摘要：目的：调查社区和院内获得性阴沟肠杆菌的临床分布特点和耐药情况。方法：收集五家医院分离63株阴沟肠杆菌采用琼脂纸片扩散法进行药敏试验，用WHONET5软件分析。结果：阴沟肠杆菌感染多见于60岁以上的老年患者，占53.9%，其中肺部感染占85.7%，该菌对三代头孢菌素的耐药率高达44.4～66.7%，其中对头孢唑啉耐药性最高，对环丙沙星和阿米卡星耐药率分别为24.1%和28.6%,而对亚胺培南的敏感性最好。结论：阴沟肠杆菌感染的治疗可根据药敏适用喹诺酮类及氨基糖甙类药物，重症患者可用亚胺培南。关键词：肠杆菌；阴沟；抗感染药；药物耐受性 Analysis of Clinical Distribution and Drug Resistance of Infection due to Enterobacter Cloacae Abstract：Objective: To investigate the clinical distribution and the drug resistance of infection due to enterobacter cloacae. Method: 63 strains of enterobacter cloacae were collected from 5 hospitals, A drug sensitive test was performed with kinby-Bauer method and the drug resistance

产NDM—1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南(试行版)

产NDM-1泛耐药肠杆菌科细菌感染诊疗指南（试行版）产NDM-1（New Delhi Metallo-β-lactamase 1,Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶）泛耐药肠杆菌科细菌(以下简称产NDM-1细菌)是新近报道的泛耐药细菌，由于其广泛耐药性导致感染治疗十分困难。为指导临床正确认识与诊疗这类细菌感染，特制定本指南。一、病原与流行情况细菌产生能水解β-内酰胺类抗菌药物的β-内酰胺酶，是细菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制。临床分离细菌大多能产生β-内酰胺酶，已经确定的β-内酰胺酶有数百种；各种酶分子结构和对β-内酰胺类水解能力存在较大差异，一般根据分子结构分为A、B、C、D四大类，其中B类酶在其活性部位结合有锌离子，因此又称为金属β-内酰胺酶。其水解底物包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等，表现为产酶细菌对这些药物广泛耐药。金属β-内酰胺酶首先在铜绿假单胞菌、不动杆菌中发现。近年来，在肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等中也有发现。迄今为止已经确定的金属β-内酰胺酶除NDM-1外，还包括IMP、VIM、GIM、SIM、SPM等型别。最早报道的产NDM-1细菌为肺炎克雷伯菌，于2008年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中发现，对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药，对环丙沙星也不敏感，仅对粘菌素敏感，深入研究发现

这株细菌携带一种新型金属β-内酰胺酶，并根据患者可能感染地点命名这种酶为NDM-1，其后还在这名患者粪便中分离到产NDM-1的大肠埃希菌。根据上述研究结果，英国、印度等国研究人员在印度、巴基斯坦、英国等开展了较大范围的流行病学调查，产NDM-1肠杆菌科细菌占所检测细菌的1.2%-13%，主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它细菌还有阴沟肠杆菌、变形杆菌、弗劳地枸橼酸菌、产酸克雷伯菌、摩根摩根菌、普罗威登菌等；这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感染等。在美国、加拿大、日本、韩国、澳大利亚、比利时以及我国香港地区等都已经有感染病例报道。产NDM-1细菌的传播方式尚无研究报道，但根据患者感染情况以及细菌本身特点，可能主要通过密切接触，如污染的手和物品等方式感染。二、临床特点与其它多重耐药菌感染相似，以下患者属于产NDM-1细菌感染的易感人群：疾病危重、入住重症监护室、长期使用抗菌药物、插管、机械通气等。产NDM-1细菌感染患者临床表现与敏感菌感染没有差别。主要感染类型包括泌尿道感染、伤口感染、医院获得性肺炎、呼吸机相关肺炎、血流感染、导管相关感染等。感染患者抗菌治疗无效，特别是碳青霉烯类治疗无效，需要考虑产NDM-1细菌感染可能，及时采集临床样本进行细菌检测。

微生物检验第十四章肠杆菌科及检验讲义

第十四章肠杆菌科及检验概述和通性——分类根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。大多数属于正常菌群（条件致病菌）。引起腹泻和肠道感染：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属等。导致院内感染：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属等。概述和通性——生物学特性形态与结构形态：杆菌。染色：G-。特殊结构：多数有周鞭毛，能运动。志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛。均不形成芽胞，少数菌属（埃希菌属和克雷伯菌属）可形成荚膜。培养特性营养要求：不高。

气体环境：需氧或兼性厌氧。菌落特征：普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长，并形成中等大小的菌落，湿润光滑。抗原变异：包括菌落S-R变异和鞭毛H-O变异。表现为耐药性或生化反应性质的改变。抵抗力：不强。加热60℃，30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。概述和通性——微生物检验及鉴定标本采集形态学检查：革兰阴性杆菌。分离培养：将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离。克氏双糖铁琼脂（KIA）培养基：葡萄糖/乳糖发酵；产气；硫化氢试验。动力-吲哚-尿素（MIU）培养基生化反应： ①用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌鉴别； ②用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群； ③选择生化反应进行属种鉴别； ④用诊断血清做凝集反应。埃希菌属——分类包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。临床最常见的是大肠埃希菌，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群。埃希菌属——生物学特性形态与结构

多重耐药菌感染的临床治疗

多重耐药菌感染的临床治疗一、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）超广谱β-内酰胺酶( extended2spectrumβ2lactamases, ESBLs)是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药的主要机制之一，其预防与治疗已成为临床医生需要面对的重要问题。ESBLS革兰阴性杆菌主要见于大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌，应引起足够重视，注意做好ESBLS的检出工作。产ESBLs细菌主要在医院内引起感染和流行，其中60%发生在大型医院，特别是教学医院。产ESBLs细菌不仅引起院内暴发流行，还可以向院外传播,使流行范围扩大。研究显示,重症监护病房、住院日延长( ≥7 d) 、机械通气、导尿管和动脉导管的留置、严重疾病状态(如器官移植)、不适当联合使用抗菌药物或三代头孢菌素、年龄≥60岁等都是导致产ESBLs细菌感染的危险因素。因此，应加强抗菌药物的管理，临床医生要关注细菌的耐药现状，预测细菌耐药变迁。（一）产ESBLs细菌感染的治疗原则 1、去除产ESBLs细菌产生的诱因。包括及时拨出各种侵入性导管、尽量缩短住院时间、严格抗菌药物的使用原则等，同时应防止产EBSLs细菌的医院内扩散。 2、产ESBLs细菌对各种酶抑制剂复合制剂和碳青霉烯类抗菌药物敏感性较高。推荐使用的抗菌药物包括碳青霉烯类、头霉素类、酶抑制剂复合制剂等，也可以根据药敏试验和病情选择氨基糖苷类抗菌药物、氟喹诺酮类与上述抗菌药物联合治疗。具体用药时应关注到如下因素：(1)抗菌药物临床应用指征及目前关于药物的首选与次选的推荐意见；(2)已经使用的抗菌药物的临床疗效及更换药物后的临床表现；(3)本院流行细菌耐药性的流行情况；( 4)减低耐药性出现的策略；(5)抗菌药物的价格。 3、超广谱β-内酰胺酶：细菌在持续的各种β-内酰胺类抗菌药物的选择压力下，被诱导产生活跃的及不断变异的β-内酰胺酶，扩展了其耐受头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟等第3代及第4代头孢菌素，以及氨曲南等单环β-内酰胺类抗菌药物的能力。当怀疑产ESBLS时，即使体外试验对某些青霉素类、头孢菌素及氨曲南类抗生素敏感，临床上也应视为耐药，原则上不选用。 4、应该注意到，产ESBLs细菌可以在治疗过程中发展而来。对最初分离敏感的细菌，经(3～4) d三代头孢菌素的治疗后，有可能发展为耐药，因此对重复分离菌株应重复进行药敏试验。（二）治疗产ESBLs细菌感染的抗菌药物及使用的推荐意见 1、碳青霉烯类：碳青霉烯类对产ESBLs细菌敏感性很高，临床疗效显著，在严重感染或其他抗菌药物治疗疗效不佳时，可选择碳青霉烯类抗菌药物。对可能的产ESBLs细菌的社区感染、院内感染如重症监护室的呼吸机相关肺炎，均可经验性使用碳青霉烯类抗菌药物治疗。药物包括亚胺培南/西司他丁钠、美罗培南、帕尼培南、厄他培南、多尼培南等。美罗培南、帕尼培南不易发生神经系统的不良反应，可用于产ESBLs细菌引起的中枢神经系统感染。我院目前有亚胺培南/西司他丁钠、美罗培南。目前尚无确切临床资料说明碳青霉烯类与其它抗菌药物联合应用的疗效是否优于碳青霉烯类单独应用，但大多临床医生倾向于运用碳青霉烯类联合氨基糖苷类治疗产ESBLs细菌引起的严重感染。 2、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂：产ESBLs细菌对β-内酰胺类抗菌药物联合克拉维酸、舒巴坦或他唑巴坦的复方制剂较为敏感。此类药物可首选用于产ESBLs细菌所致的轻度至中度感染，但由于β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方对产ESBLs细菌的临床疗效不够理想，对产ESBLs细菌严重感染的患者，不宜作为首选药物。在已上市的β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方中，以头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的抗菌作用较强。应该注意，当细菌产生大量β-内酰胺酶或同时伴有外膜蛋白丢失时，β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方的抗菌活性也会降低。 3、头霉素类：体外研究显示，头霉素类抗菌药物对于产ESBLs细菌具有良好的抗菌作用，可以作为产ESBLs细菌的次选药物，也可以与氨基糖苷类抗菌药物等联合使用。头霉素类药物包括头孢米诺和头孢西丁。需要注意到是，头霉素类易诱导细菌产生诱导酶(AmpC酶) ，从而出现耐药。如果细菌同时有膜蛋白缺失也可引起细菌对头霉素类耐药。 4、其他抗菌药物：氨基糖苷类抗菌药物可作为产ESBLs细菌严重感染时的联合用药之一。喹诺酮类抗菌药物可用于治疗产ESBLs细菌引起的轻、中度感染(如尿路感染) ，但产ESBLs细菌对喹诺酮类的耐药性不断增加，限制了喹诺酮类药物在产ESBLs细菌感染中的应用。研究显示，替加环素对产EBSLs细菌有较好疗效，磷霉素（我院新修订的抗菌药物供应目录中已收录该药）对产ESBLs大肠埃希菌所致的复杂性或非复杂性下尿路感染有效率可达93. 8%，呋喃坦丁也可用于大肠埃希菌、变形杆菌等引起的急性尿路感染。药师提示：不同型别ESBLs对三代头孢菌素的水解能力各不相同，体外实验也可能显示产ESBLs细菌对第三代头孢菌素敏感，但临床上使用三代头孢菌素治疗产ESBLs细菌感染的疗效很差。第四代头孢菌素对ESBLs的稳定性高于第三代头孢菌素,但仍能为ESBLs不同程度的水解，因此，不管体外试验结果如何，所有的产ESBLs细菌均应视为对第三、四代头孢菌素耐药。（三）产ESBLs肠杆菌科细菌的抗菌药物治疗的推荐方案产ESBLs细菌感染的研究中,对肠杆菌科的大肠埃希菌、克雷伯菌的研究最多，其产ESBLs率也最高。应结合药敏试验结果和临床表现严重性，确定抗菌药物治疗方案。对轻至中度感染患者，首选复方β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂（药物包括阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉维酸等）。次选氨基糖苷类与头霉素类抗菌药物联合治疗（药物包括阿米卡星、妥布霉素、头孢西丁、头孢美唑等）。治疗效果不佳者，换用碳青霉烯类抗菌药物（药物包括亚胺培南、美罗培南、厄他培南、帕尼培南）。对严重的产ESBLs肠杆菌科细菌感染，以及医院发生产ESBLs肠杆菌科感染，可以首选碳青霉烯类抗菌药物或联合治疗方案。

14.肠杆菌科及检验

一、概述 1.多数有周鞭毛，志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。无芽孢，少数有荚膜 2.需氧或兼性厌氧，在普通培养基或麦康凯培养基上均能生长形成中等大小的菌落，表面光滑，液体培养基中呈浑浊生长。 3.发酵葡萄糖，产酸产气，H2S试验阳性（志贺菌、大肠埃希菌等为阴性） 4.定科试验：触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性、乳糖发酵试验（非致病菌+，致病菌-，变形杆菌除外） 5.抗原结构包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原（Vi、K等）二、埃希菌属 1.革兰阴性杆菌，兼性厌氧，多数有周鞭毛、菌毛、荚膜及微荚膜 2.发酵葡萄糖、乳糖麦芽糖和甘露醇，产酸产气 3.氧化酶（-）、IMViC（++--）、MIU（++-） 4.主要引起疾病胆囊炎、泌尿系感染等。 5. ①肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：霍乱样肠毒素腹泻 ②肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻（血清学鉴定试验为血清凝结试验） ③肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：志贺样腹泻（脓血便） ④肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：其中O157：H7可引起出血性大肠炎和出血性尿毒综合征。临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复血性腹泻，伴发热、呕吐 ⑤肠黏附型大肠埃希菌（EAggEC）：腹泻三、志贺菌 1.志贺菌属分为痢疾、福氏、鲍氏、宋内四群。可引起人类细菌性痢疾 2.取粪便或肛拭标本接种GN肉汤增菌，再进行分离培养。可选择SS培养基、麦康凯培养基、中国蓝培养基。 3.KIA：K/A（宋内志贺菌可迟缓分解乳糖）、产气-/+、硫化氢（-）、MIU：-、+/-、-、氧化酶（-）、IMVIC（-+--） 4.在普通平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑性菌落 5.可引起人类细菌性痢疾，小儿易引起急性中毒性痢疾四、沙门菌 1.革兰阴性直杆菌，周身鞭毛，多数有菌毛。为胞内寄生菌，寄生于肠道 2.可导致疾病 ①肠热病（伤寒、副伤寒）：为法定传染病②食物中毒③慢性肠炎④败血症 3.肥达试验：由已知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒菌的H抗原与不同稀释度的病人血清做定量凝集实验。属于直接凝集试验，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热病并判断沙门菌种类 4.发酵葡萄糖，产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气） 5.在SS培养基中产H2S，菌落中心呈黑色 6.抗原结构包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原（Vi、M、5） 7.为提高检出率，血液1-2周采集，粪便与尿液（2-3周采集）。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高 8.沙门菌属最后鉴定是通过血清学鉴定

微生物检验第十四章肠杆菌科及检验练习

第十四章肠杆菌科及检验一、A1 1、吲哚试验阳性的组合 A、大肠埃希菌、普通变形杆菌、霍乱弧菌 B、大肠埃希菌、鼠伤寒沙门菌、产气肠杆菌 C、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、肺炎克雷伯菌 D、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌 E、产气肠杆菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌 2、能利用含硫氨基酸生成硫化氢的细菌是 A、大肠埃希菌 B、奇异变形杆菌 C、产气肠杆菌 D、肺炎克雷伯菌 E、宋内志贺菌 3、从腹腔感染患者腹腔液中出分离一革兰阴性杆菌，氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性，在血平板上有迁徙生长，H2S阳性，它可能是 A、变形杆菌 B、摩根菌 C、普罗威登斯菌 D、伤寒沙门菌 E、枸橼酸杆菌 4、用于粪便污染检测指标的是 A、霍乱弧菌 B、产气肠杆菌 C、阴沟肠杆菌 D、变形肠杆菌 E、大肠杆菌 5、主要流行的肠出血性大肠埃希菌的O血清型是 A、O6 B、O25 C、O157 D、O111 E、O158 6、致病性大肠埃希菌的致病特点是 A、只引起肠道感染 B、不引起泌尿生殖器感染 C、腹泻可由两种肠毒素引起 D、外毒素可引起严重的毒血症

E、不引起败血症 7、下列除哪项外，均为肠道菌的主要抗原 A、O抗原 B、H抗原 C、荚膜抗原 D、芽胞抗原 E、菌体抗原 8、典型的大肠埃希菌的生化反应结果是 A、乳糖（－），IMViC（＋、－、－、－） B、乳糖（＋），IMViC（＋、＋、－、－） C、乳糖（－），IMViC（＋、＋、－、－） D、乳糖（－），IMViC（＋、＋、＋、－） E、乳糖（－），IMViC（＋、－、－、－） 9、肠杆菌科中，表面抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、以上都是 E、以上都不是 10、IMViC试验不包括 A、糖发酵试验 B、V-P试验 C、甲基红试验 D、枸橼酸盐利用试验 E、吲哚试验 11、H-O变异属于 A、毒力变异 B、菌落变异 C、鞭毛变异 D、形态变异 E、耐药性变异 12、目前筛选伤寒带菌者的方法是检测血清中的 A、O抗体 B、H抗体 C、K抗体 D、Vi抗体 E、M抗体 13、属于直接凝集反应的是 A、抗“O”试验

食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验编制说明

食品安全国家标准《食品微生物学检验肠杆菌科检验》（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况: （一）任务来源受国家卫生与计划生育委员会食品安全标准与监测评估司（原卫生部食品安全综合协调与卫生监督局）委托，根据《食品安全国家标准管理办法》、《食品安全国家标准制（修）订项目管理规定》，按照食品安全国家标准审评委员会的工作安排，对本标准进行制定。（二）简要起草过程 2011年7月，卫生部食品安全综合协调与卫生监督局下达《食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验》标准制定任务，项目编号为spaq-2011-61。随即成立标准制定专家组，确立标准制定的基本原则，比较与研究我国及国际标准相关内容，并结合方法的研究工作，形成《食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验》标准的征求意见稿。（三）起草单位、协作单位、主要起草人参与本标准的起草单位有辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、山东出入境检验检疫局、浙江出入境检验检疫局及河南出入境检验检疫局。（四）主要起草人本标准主要起草人为：刘淑艳、卢行安、蒋丹、赵守成、王刚、姜英辉、程洁、苗丽、吕佳、柳媛、宋慧君、马惠蕊。起草人员负责标准制定工作的组织、协调，相关资料的查阅、收集，标准文本及编制说明的起草、撰写，通过电子邮件、传真等方式，征集、整理和归纳相关的意见和建议。二、标准的重要内容及主要修改情况本标准研究对比了国际标准ISO 21528-1：2004 食品和动物饲料微生物学肠杆菌科检测和计数方法第1部分：带前增菌的MPN法和ISO 21528-2：2004食品和动物饲料微生物学肠杆菌科检测和计数方法第2部分：菌落计数法；并依据伯杰细菌鉴定手册第八版，肠杆菌科的分类，选择肠杆菌科12个属及其它对照菌株，共25株进行了本标准方法的检验，确定了肠杆菌科检验的MPN法及菌落计数法。

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