山楂中黄酮的提取研究技术
生物工程耿本涛
指导老师张名爱
摘要：研究提取工艺对提取山楂总黄酮含量的影响。方法：采用单因素和正交试验法方法研究不同工艺条件对山楂黄酮提取效率的影响，确定最佳浸提工艺及相关工艺参数。结果：溶剂：70％乙醇；超声波频率：40kHz；超声波作用时间：1 5min。结论：乙醇超声波提取方法具有操作简单、超声波作用时间短、纯度高、得率高、无需加热，剩余物无有害残留，可以综合利用。
关键词：山楂；黄酮；提取
Extraction of Flavonoids from Hawthorn research technology Student majoring in Biological engineering Geng Bentao
Tutor Zhang Ming’ai
Abstract:Study on Extraction Technology for the extraction of flavone content in Hawthorn 's influence. Methods: using single factor and orthogonal test method to study the effect of different process conditions on hawthorn flavonoids extraction efficiency and the influence, to determine the optimal leaching technology and the related technology parameters. Results: the solvent:70% ethanol; ultrasonic frequency:40kHz; the effect of ultrasonic time: 15min. Conclusion: ethanol ultrasonic extraction method has the advantages of simple operation, short action time of ultrasonic wave, high purity, high yield, no heating, no harmful residue residue, comprehensive utilization.
Key words:Hawthorn;flavone; extraction
目录
摘要............................................................... I Abstract........................................................... I I 1 引言.. (1)
1.1 山楂植物的概述 (1)
1.2 黄酮提取的基本原理 (1)
1.3 黄酮的提取方法 (2)
1.3.1 浸渍法 (2)
1.3.2索氏提取法 (2)
1.3.3 超声提取技术 (2)
1.4 研究背景及意义 (3)
2 材料与方法 (3)
2.1 材料、试剂与仪器 (3)
2.1.1 材料 (3)
2.1.2 试剂 (3)
2.1.3 仪器 (3)
2.2 黄酮测定及提取实验方法 (4)
2.2.1 总黄酮的测定方法 (4)
2.2.2 总黄酮提取方法 (4)
2.2.3索氏提取法正交实验设计 (5)
Table 2-1 Factors and levels of orthogonal experiment) (5)
2.2.4 超声波提取法正交实验设计 (5)
3 结果 (5)
3.1 浸渍法对山楂中黄酮提取的影响 (5)
3.1.1 浸渍时间对山楂中黄酮提取的影响 (5)
3.1.2 乙醇浓度对山楂中黄酮提取的影响 (6)
3.1.3 温度对山楂中黄酮提取的影响 (7)
3.2 索氏提取法对山楂中黄酮提取的影响 (7)
3.2.1 实验极差分析 (7)
3.2.2 山楂正交设计方差分析 (9)
3.3 超声波提取法对山楂中黄酮提取的影响 (10)
3.3.1实验极差分析 (10)
3.3.2 山楂的正交设计方差分析 (11)
4 讨论 (12)
参考文献： (14)
致谢 (15)
1 引言
1.1 山楂植物的概述
山楂（Hawthorn）又称山里红、山楂果、山里红、红果、山梨等，为蔷薇科（Crataegus）植物。前两种习称“北山楂”，后一种习称“南山楂”。山楂、山里红主产河北、山东、河南、辽宁等省，多为种植[1]。野山楂主产江苏、云南、浙江，多为野生。北山楂多为饮片，果肉厚，颜色为浅棕色，质硬，气微清香，味酸甜。南山楂果实球形或半球形，表面多为棕红。在其顶端有圆形凹窝，基部有果柄或柄痕。南山楂果肉薄，气微弱，味酸涩。以片大，肉厚，核少者为最佳。山楂果多切成横切片或纵切片，果皮呈红色，具皱纹和白色小点，果肉深黄至浅棕色，中部横切片浅黄色果核，有的已脱落，极其坚硬，有的山楂片可见较短的果柄，气微香，味酸微甜。
山楂味酸，微温，归脾、肝经、胃，据文献报道[2]，山楂具有以下功效：行气散瘀，消食健胃，用于肉食积滞，胃脘胀满，产后瘀阻，泻痢腹痛，瘀血经闭，心腹刺痛，瘀气疼痛等。焦山楂消食导滞作用强，常用于肉食积滞，泻痢不爽。山楂入药在我国有悠久历史，李时珍释其名日“山楂味似楂子，故亦名楂”，《本草衍义补遗》载有“山楂”，《本草纲目》记载：此品“酸甘味温，消食积，补脾”。另外山楂除生吃外，根据不同的要求有炒山楂、焦山楂等规格、不同制品功效各有侧重，山楂制品历来采用清炒法，其主要目的是不同程度地破坏部分有机酸，从而降低酸度，减少刺激，现主要采用糖炒山楂既可抑制其酸性，又不降低有效成分[3]。
山楂植物一般在年平均气温为2．5℃～22．6℃，年积温为2200℃～5100℃，无霜期在100天以上的地区均能栽培；山楂有非常发达的根系能从深层的土壤中吸收营养物质和水分：叶表面有厚且光滑的角质层，其具有反光作用，茎表面有白色的蜡质层不利于蒸发，因此耐旱。能在海拔为100m～1500m的沙岩、山坡和石灰岩等土壤贫瘠地区生长。山楂植物生命力旺盛、适应性强、易于管理，因此对于绿化荒山防止水土流失，发展林果生产具有重要意义[4]。
1.2 黄酮提取的基本原理
黄酮的提取是根据相似相溶原理进行的，其实质是黄酮从山楂内部向溶剂
中转移的过程，溶剂从溶剂主体传递到固体颗粒的表面后溶剂渗入固体内部和内部孔隙内，黄酮慢慢溶解进入溶剂，然后通过固体孔隙通道中的溶液扩散至表面，黄酮从固体表面传送到溶剂。在这一系列步骤中，最影响黄酮提取的控制因素是所选用溶剂中溶解度的大小以及向溶剂扩散的难易[5]。由于黄酮来源和结构的不同，所以溶解特性差异也很大，应根据其极性和水溶性的大小来来选择合适的溶剂进行提取。[6]目前，对于苷类和极性较大的苷元，一般用极性较大的混合溶剂(甲醇一水（1：1））、水、甲醇、乙醇等进行提取，而对于大多数苷元如异黄酮、黄烷酮等则采用苯、乙醚或乙酸乙酷等极性较小的溶剂来进行提取[7]。
1.3 黄酮的提取方法
黄酮传统提取方法主要是溶剂提取法，乙醇和甲醇为常用的黄酮提取溶剂，高浓度醇(90％，95％)适于提取黄酮苷元，中等浓度醇(60％左右)适用于提取黄酮苷[8]。提取次数一般是2-4次。溶剂提取法又分为：浸渍法、渗漉法、索氏提取法和加热回流提取法[9]，但渗漉法由于其提取时间太长、溶剂用量大、操作麻烦、不利于产业化等缺陷使得对它的研究较少，故不展开讨论。
1.3.1 浸渍法
该法用于黄酮的提取不多。尽管该法过程简单，可操作性比较强，不用加热，能量消耗较少。但黄酮含量较低，对资源的充分利用有一定的影响，而且提取过程周期比较长、溶剂消耗大，如果用于工业化生产，频繁回收溶剂也不是很合理[10]。
1.3.2索氏提取法
该法的优点是提取液成分较简单，容易分析，但其黄酮得率和含量却不高，主要因为索氏抽提是静态提取而且醇是首先被蒸上。[11]该法的缺点是加热时间较长，能量消耗较大，索氏抽提的过程实际为：醇的加热一汽化一冷凝的循环，且乙醇的汽化潜热是846KJ／Kg，因此考虑到工业化生产成本过高，经济上对工业不合理。
1.3.3 超声提取技术
对于提取黄酮类物质，目前使用最多的是超声法[12]。其应用于山楂中黄酮的
提取主要利用它的空化作用，就是一定频率的超声波作用于溶液的时候，溶
液中尺寸适宜的气泡发生共振现象，其强烈的冲击波使得细胞壁破裂，有效成分会溶出。在综合考虑等可行性因素的情况下，超声波法明显优于其他的提取法，提取时间缩短，产率也比较高，而且实验可在室温下进行，设备简单宜操作，是提取黄酮类物质的一种有效方法[13]。
1.4 研究背景及意义
中国是山楂的世界主产国之一[14]。但受某些客观原因的限制，山楂的应用开发研究比较滞后，随着人们对健康的日益关注，山楂开始逐渐受到人们的重视，尤其是维生素C和黄酮类药品，具有良好的前景[15]。在对山楂黄酮研究中，大都集中在黄酮的药理作用及其保健功能，然而对山楂总黄酮的提取缺乏系统的研究，使得这成为制约其更进一步开发的瓶颈。[16]因此，针对研究的不足，本文对山楂总黄酮的提取主要在以下内容展开：
(1)紫外吸光光度法快速准确测定山楂中黄酮的优化研究
(2)几种不同方法提取总黄酮的比较
(3)山楂总黄酮的含量变化
2 材料与方法
2.1 材料、试剂与仪器
2.1.1 材料
山楂：购于城阳大润发商场。
2.1.2 试剂
芦丁中国药品生物制品检定所提供
三氯化铝分析纯，河南焦作市化工三厂
95%乙醇莱阳市康德化工有限公司
甲醇莱阳市康德化工有限公司
2.1.3 仪器
754型紫外分光光度计上海福玛实验仪器有限公司
SHZ一95A型循环水氏多用真空泵河南巩义市英峪予华仪器厂
RE．52A型旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂
破碎仪上海超虎电机有限公司
电子天平北京赛多斯仪器系统有限公司
KQ．100DV型数控超声波振荡仪昆山市超声波仪器有限公司2.2 黄酮测定及提取实验方法
2.2.1 总黄酮的测定方法
2.2.1.1 芦丁标准液
精密称取芦丁15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配制成150 ug／ml的芦丁标准溶液，作为对照品溶液。
2.2.1.2标准曲线
分别精密吸取芦丁标准液0．00、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00ml 相当于含芦丁0、150、300、450、600、7501μ g，置于12．5ml比色管中，加30％的乙醇补至5ml，各加入5％亚硝酸钠溶液0．30ml，摇匀后放置5min，加入10％硝酸铝溶液0．3ml摇匀后放置6min，加1.0mol／L NaOH溶液2．00ml，用30％乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min，以零管为空白。摇匀后用1cm的比色杯，在510nm处波长处测定吸光度，测3次取平均值，经回归处理，得标准曲线的回归方程和相关系数。绘制芦丁含量与吸光度的标准曲线，结果表明，芦丁浓度在150～750μg／ml范围内具良好的线性关系。
2.2.2 总黄酮提取方法
2.2.2.1 浸渍法
在室温的条件下对山楂进行乙醇提取，乙醇浓度分别为20％、30％、50％、70％、80％、90％，提取时间分别为30min、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h，进而选择最佳溶液浓度和提取时间，根据这两个条件，比较不同提取条件下黄酮的提取量，浸渍温度分别为室温(18℃)、30℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃。然后采用单因素实验的方法，考察提取时间、提取时溶剂浓度、提取温度这3个因素对山楂中黄酮提取的影响。得出最佳提取条件为4h、70％乙醇和40℃提取，黄酮含量为33．5mg／g。
2.2.2.2 索氏提取法
根据浸渍法得出最佳乙醇提取浓度的水平，对样品在提取温度(70℃、80℃、90℃)，提取时间(1．5h、3．Oh、6．Oh)，乙醇浓度（60%、70%、80%），加入液料比(20倍、25倍、30倍)进行提取比较。
2.2.2.3 超声波提取法
根据浸渍法和索氏提取法的结果选择最佳浓度，在超声时间(15min、30min、45min)，液料比(1：5、l：10、l：15)条件下进行寻求最佳超声波提取的方法。
2.2.3索氏提取法正交实验设计
正交实验因素和水平
水平A提取温度B提取时间 C 乙醇浓度
1 70℃ 1.5h 60%
2 80℃ 3.0h 70%
3 90℃ 6.0h 80%
表2—1（正交实验因素和水平）
Table 2-1 Factors and levels of orthogonal experiment)
2.2.4 超声波提取法正交实验设计
正交实验因素和水平
水平A超声时间B液料比 C 乙醇浓度
1 15min 1；5 60%
2 30min 1；10 70%
3 45min 1；15 80%
表2—2（正交实验因素和水平）
Table 2-2 Factors and levels of orthogonal experiment)
3 结果
3.1 浸渍法对山楂中黄酮提取的影响
在浸渍法对黄酮的提取过程中，均用烘干后的干样，进行粉碎，所以浸渍时间、乙醇浓度和浸渍温度是影响黄酮提取的主要因素。
3.1.1 浸渍时间对山楂中黄酮提取的影响
由图可以得，随着时间的不断增加，不同难度的乙醇所提取出来的黄酮的含量随着时间的增加而增加，但是当浸渍时间从4h到12h的时候，黄酮提取量随着时间增加而上升缓慢，提取时间的延长对浸渍效果影响不大，但是当时间延长到24小时的时候，黄酮的提取量又有一个明显的增加。考虑到生产，可选取4h并结
合加温若不加温也可选取长时间浸渍。
图3-1浸渍时间对山楂中黄酮提取的影响
Fig 3-1 Effect of different extracting time on the content of flavonoid in hawthorn fruit
3.1.2 乙醇浓度对山楂中黄酮提取的影响
由图3-2可以得，乙醇浓度从30％到50％逐渐的增加，提取出的黄酮含量基本不变，当乙醇浓度达到60％的时候，黄酮提取量增大，当浓度升到70％时黄酮提取量上升比较大并达到最高值。但是随着乙醇浓度的继续增加，黄酮提出量下降，70％乙醇所提取出的黄酮最多。
图3-2 乙醇浓度对山楂中黄酮提取的影响
Fig 3-2 Effect of different contents of Etoh on the content of flavonoid in hawthorn fruit
3.1.3 温度对山楂中黄酮提取的影响
图3-3 提取温度对山楂中黄酮提取的影响
Fig 3-3 Effect of different temperature Oil the content of flavonoid in hawthorn fruit 由图3-3可以得，当温度由室温(18℃)逐渐上升的时候，黄酮提取量也随着上升，这是由于黄酮在乙醇中的溶解度随着温度的升高而增大。但是当温度大于40℃的时候，随着温度的升高，黄酮提取量上升不那么明显，渐渐趋于平衡，生产中从山楂中提取黄酮，温度最高采用40℃即可。
3.2 索氏提取法对山楂中黄酮提取的影响
3.2.1 实验极差分析
(1)浓度极差从图中可得浓度极差最小值出现在水平1位置，最大值出现在水平3的位置，水平l到水平3之间差别不大，说明乙醇浓度对山楂中黄酮的索氏提取量影响小。
(2)温度极差从图中可得温度极差最小值出现在水平l位置，最大值出现在水平3位置，水平2和水平3之间差别不大，说明当温度升到一定值的时候，温度升高不影响黄酮提取量。
(3)液料比极差从图中可得液料比极差从水平l位置到水平3位置逐渐下降，但是变化幅度不是太大，这说明了加入水平l的液料比可以完全提取黄酮，水平2和3的下降可能是由于液料比过多，使得在实验过程中产生黄酮的损耗。
(4)时间极差水平2比水平1的增加十分明显，然而水平3只比水平2有一点的增加。提取时间一增长，黄酮提取量就慢慢开始恒定。
这说明了各个实验因素与因素水平对山楂中黄酮提取量的影响有一定的差异，由分析结果可以得出：因素B>A>D>C(注：A、提取温度B、提取时间C、乙醇浓度D、液料比)。
表3-1果实正交试验方案及结果
Table 3-1 Orthogonal exerimental programme and result in hawthorn fruit
序号因素factor 样品量
（g）总提取
物含量
（g)
黄酮含
量
number A B C D Quantity
of
sample Content
of
extract
Content
of
flavonoi
d
1 1 1 1 1 3.003 0.0891 23.4
2 1 2 2 2 3.025 0.1021 27.5
3 1 3 3 3 3.043 0.1256 38.5
4 2 1 2 3 3.001 0.13 33.2
5 2 2 3 1 3.010 0.1062 35.6
6 2 3 1 2 3.032 0.11
7 37.5
7 3 1 3 2 3.042 0.0969 29.1
8 3 2 1 3 3.005 0.1163 38.6
9 3 3 2 1 3.065 0.1108 40.5 ΣI98.9432 96.1825 109.456 108.486
ΣII115.889 111.476 110.824 104.567
3.2.2 山楂正交设计方差分析
从表3-1的山楂试验设计方案及结果来进行方差分析，结果见表3-2和3-3。 从表3-2和3-3可知，C 和D 两个因素的F 值都比较小，山楂中黄酮的索氏提取的 显著水平影响比较小，然而A 和B 的F 值和其显著水平都大于前两者，其影响也大于前者。所以，提取时间应选择为3h ，提取温度应该在80℃，其液料比为20，浓度在60％到80％之间。
表3—2正交设计方差分析表(完全随机模型)
Table 3-2 Mean standard deviation analysis(complete random modle)
变异来源 Source of variation 平方和 Sum
of squares 自由度 Freedom
均方 Mean square
F 值
显著水平 Significant
A 24.3546 2 12.1658 0.03547 0.9442
B 47.4126 2 23.7549 0.06643 0.93584
C 0.6321 2 0.32957 0.00084 0.99942
D 14.3687 2 7.18543 0.01997
0.98245
误差error
6469.53
18
359.627
ΣIII 118.157 125.383 112.783 120.042 均值l 10.9253 10.6842 12.1654 12.0571 均值II 12.8654 12.3448 12.3154 11.6487 均值III 13.1324 13.9348 12.5365 13.3385 极小值 10.9253 10.6842 12.1654 11.6487 极大值 13.1324 13.9348 12.5365 13.3385 极差R 2.2071 3.2506 0.3711 1.6908 调整R’
1.93084
2.3125
0.35073
1.5760
表3—3正交设计方差分析表(随机区组模型)
Table 3-3 Mean standard deviation analysis(modle of random block)
变异来源Source of variation 平方和
Sum of
squares
自由度
Freedom
均方
Mean
square
F值显著水平
significant
区组block 6295.4 2 3148.679
A 24.3497 2 12.1843 1.13842 p>0.1
B 47.5214 2 23.7284 2.21579 P<0.1
C 0.624 2 0.3452 0.02471 P>0.1
D 14.3594 2 7.1548 0.66571 P>0.1
误差error 172.1034 16 10.4813
总和major
total
65556.25
3.3 超声波提取法对山楂中黄酮提取的影响
3.3.1实验极差分析
(1)浓度极差浓度极差的最小值出现在水平l位置，其最大值出现在水平3的位置，水平2和水平l的位置差别不算大。这说明提取的时候乙醇浓度的升高，超声波提取法提取山楂中黄酮的量就增加。
(2)时间极差时间极差最小值在水平1位置，其最大值出现在水平3的位置。这说明随着提取黄酮时间的增大，提取出的黄酮含量也随着增加。
(3)液料比极差液料比极差值从水平1到水平3的数值逐渐加高，但是变化幅度不是很大，这说明随着加入的液料比的增加，黄酮提取量也随着增加。
各个实验因素与因素水平对山楂中黄酮的提取用超声波法提取的影响表现出一定的差别，从极差的分析结果可以得出：因素A>B>C(注：A、超声时间B、液料比C、乙醇浓度)
表3-4山楂正交验设计方案及结果
Table 3-4 Orthogonal exerimental programme and result in hawthorn fruit
序号因素factor 样品量
（g）
总提取
物含量
黄酮含
量
（g）（mg/g
）
number A B C D Quantity
of
sample Content
of
extract
Content
of
flavonoi
d
1 1 1 1 0 3.02
2 0.1254 23.54
2 1 2 2 0 3.035 0.1064 26.54
3 1 3 3 0 3.00
4 0.1109 35.41
4 2 1 2 0 3.06
5 0.14 34.25
5 2 2 3 0 3.014 0.0967 37.25
6 2 3 1 0 3.008 0.085
7 37084
7 3 1 3 0 3.085 0.114 38.54
8 3 2 1 0 3.006 0.1154 36.82
9 3 3 2 0 3.045 0.1054 41.59 ΣI941657 106.074 107.005
ΣII118.135 110.048 110.957
ΣIII107.008 110.945 120.6
均值l 7.8573 8.8456 8.9475
均值II 9.8541 9.185 9.25781
均值III 10.5781 10.2246 10.059
极大值7.8573 8.8456 8.9475
极小值10.5781 10.2246 10.075
极差R 2.6957 1.3864 1.167
调整R' 2.4587 1.2457 1.0459
3.3.2 山楂的正交设计方差分析
由表3-4的试验设计方案及结果作方差分析，结果见表3-4和3-5.由表3-5和3-6可知，ABC三个因素的F值均比较小，显著水平影响也比较小，而A的F值和显著
水平略大于B和C，影响稍大．
表3-5正交设计方差分析表(完全随机模型)
Table 3-5 Mean standard deviation analysis(complete random medic)
变异来源source of variation 平方和
Sum of
squares
自由度
Freedom
均方
Mean
square
F值显著水平
significant
A 47.045 2 23.5674 0.081224 0.92421
B 12.5473 2 6.25791 0.024571 0.8745
C 8.6542 2 4.2481 0.01547 0.98547 误差error 7829.54 27 289.6481
表3—6正交设计方差分析表(随机区组模型)
Table 3-6 Mean standard deviation analysis(modle of random block)
变异来源source of variation 平方和
Sum of
squares
自由度
Freedom
均方
Mean
square
F值显著水平
significant
区组block 7612.47 3 2537.488
A 47.057 2 23.5267 2.72687 P<0.1
B 12.5871 2 6.2847 0.72547 P>0.1
C 8.6716 2 4.2487 0.49561 P>0.1
误差error 207.057 24 8.657
总和major
total
7884.51
4 讨论
在用浸渍法提取山楂中黄酮的研究里面，采用单因素实验的方法，对比了提取时间、提取溶剂浓度、提取温度这3个因素对黄酮提取的影响。得出最佳的浸渍提取条件为4h、70％乙醇和40℃提取温度，黄酮含量为33．5mg／g。在使用浸渍法时，随着提取乙醇的浓度的加大，提取的黄酮含量下降，它的影响在于
不同含量的乙醇极性的不同，极性过大或过小会导致提取出的杂物较多，从而会影响黄酮的溶出，70％的乙醇浓度对山楂中黄酮的溶解度最好。随着提取时间的增加山楂中黄酮的提取量也随着增加，一定时间后渐渐趋于稳定，这个时间出现在4h的时候，温度升高，分子运动加快，黄酮提取率也随着增大。浸渍法需要的时间较长。黄酮提取效率较低，而且加温会增加成本，乙醇的回收也是一个大问题，因此并不适宜与工业生产。
在用索氏提取法中，使用正交实验设计分析的方法，通过4因素3水平的正交实验得出最佳提取工艺为80℃、70％乙醇、3h、液料比为20的提取。索氏提取法原理与浸渍法类似，都是根据相似相溶的原理，但是它的提取率高于浸渍法。液料比的选择为20,增大液料比，黄酮的提取效果也随之增加，但是当液料比大于20的时候，提取效率增加不大。索氏提取法提取效果比较好，可以在提取后直接在此温度下进行浓缩，减少能量损失，可以用于工业生产。
在用超声波提取法中，通过3因素3水平正交实验得到最佳提取工艺。山楂的提取时间为45min，液料比为1：10，浓度为80％，因素A>B>C(注：A、超声时间B、液料比C、乙醇浓度)。在这些影响因素中超声波时间对山楂中黄酮的提取量影响最大。在考虑成本等因素下，使用超声波提取法，提取时间大大缩短，产率较高，而且在室温下便可进行，操作方便，也是提取山楂中黄酮类物质的一种有效方法，也可应用于工业生产。
参考文献：
[1] 赵焕谆，丰宝田等．1996，中国果树志一山楂卷．中国林业出版社
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致谢
经过将近两月的努力，毕业设计终于完成，在此向所有关心、帮助过我的老师和同学表示最诚挚的谢意！
首先感谢张名爱老师对我一如既往地热心帮助和细心指导。她认真负责的工作态度、严谨治学的精神和丰富的理论实践知识让我受益匪浅。无论是学习、工作还是其他方面，张老师都给予我许多的帮助，尤其是她耐心的辅导和宝贵的意见保证了我的毕业设计课题的按期完成。
同时，在毕业论文完成的过程中，我还得到了其他老师以及同实验室其他同学的帮助。正是在于他（她）们的协作中，我学习到了什么是兢兢业业、无私奉献、团结互爱，他们的无私帮助为我解决了许多难题，让我度过难关。是他们让我深深理解了互相帮助的快乐，体会到了“送人玫瑰手有余香”是怎样一种幸福。
还要感谢所有关心和帮助过我的同学们，感谢一直鼓励着我的朋友，你们的默默支持是我前进的动力，让我在人生的道路上充满自信，勇往直前。
最后再次向所有给予我真诚帮助的老师和同学致以深深的谢意！我的每一点进步都离不开老师和同学的帮助。
山楂，也称红果，蔷薇科山楂属植物，是起源于我国的特产果树，有3000多年的栽培历史。 山楂性酸、甘、味温，归脾、胃、肝经，全国各地均有栽培，为药食同源植物，具有消食化积、活血化瘀的功效。主产于山东、河南、河北等地者，习称“北山楂”，主产于浙江、江苏、安徽、湖北等者地，习称“南山楂”。 山楂片含多种维生素、山楂酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸等，还含有黄酮类、内酯、糖类、 蛋白质、脂肪和钙、磷、铁等矿物质，所含的解脂酶能促进脂肪类食物的消化，促进胃液分泌和 增加胃内酶素等功能。中医认为，山楂具有消积化滞、收敛止痢、活血化淤等功效，主治饮食积滞、胸膈脾满、疝气血淤闭经等症。山楂中含有三萜类及黄酮类等药物成分，具有显著的扩张血管及降压作用，有增强心肌、抗心律不齐、调节血脂及胆固醇含量的功能。适应范围：一般人皆可食用。儿童、老年人、消化不良尤其适合食用；伤风感冒、消化不良、食欲不振、儿童软骨缺钙症、儿童缺铁性贫血者可多食山楂片。 黄酮类物质 山楂的主要成分是黄酮类物质，对心血管系统有明显的药理作用。目前，从山楂中分离 得到60余种黄酮类化合物，其主要苷元为：芹菜素( Apigenin )、山奈酚类(Kaempferol )、木 犀草素(Luteolin )、牡荆素(Vitexin )、槲皮素类(Quercetin )及二氢黄酮类(Bi- hydroflav ono ids 、等。 有机酸类 草酸(Oxalic acid 、、苹果酸(Malic acid 、、枸橼酸(citricacid) 、柠檬酸(Citric acid ) 及其甲酯、绿原酸(Chlorogenic acid、、酒石酸(Tartaric acid、、棕榈酸(Palmitic acid )、硬脂酸(Stearic acid、、油酸(Oleic acid、、亚油酸(Linoleic acid、、亚麻酸(Linolenic acid、、琥珀酸(Succinic acid 、等。 三萜类化合物 三萜类物质有强心、增加冠脉血流、改善血流循环等重要作用。包含有山楂酸(Masli nic acid . I)、科罗索酸(Corosolic acid , II)、齐墩果酸(oleanlic acid , in)、熊果酸(ursolic acid , 1V) 山楂中原花青素 原花青素有较强的清除自由基和抑制脂质过氧化的能力，且对DNA损伤有保护作用。
准噶尔山楂叶总黄酮的超声波提取及抗氧化研究 任艳利，张维，刘影 （伊犁师范学院化学与生物科学学院，新疆伊宁835000） 摘要［目的］为准噶尔山楂叶的综合利用和深度开发提供一定的参考。［方法］利用超声波法提取准噶尔山楂叶中的总黄酮，用总黄 酮提取率作为衡量提取工艺的指标，对影响超声波提取的多个因子进行单因素、正交试验分析。［结果］准噶尔山楂叶中的总黄酮的超声波提取最佳条件为：乙醇浓度80%，提取温度50?，提取时间50min ，提取功率75W ，总黄酮的得率高达84．50%；影响总黄酮得率的主次因素依次为：乙醇浓度＞提取时间＞提取功率＞提取温度。［结论］准噶尔山楂叶总黄酮有较强的清除自由基能力，表现出明显的抗氧化性。 关键词超声波；准噶尔山楂叶；总黄酮；提取；抗氧化性中图分类号S122文献标识码A 文章编号0517－6611（2012）15－08710－03Study on the Ultrasonic Extraction and Antioxidative Activity of Total Flavonoids from Crataegus songorica K．Koch．Leaves REN Yan-li et al （College of Chemistry and Biological Science ，Yili Normal University ，Yining ，Xinjiang 835000） Abstract ［Objective ］To provide references for the comprehensive utilization and deep processing of Crataegus songorica K．Koch leaves．［Method ］The total flavonoids were extracted from Crataegus songorica K．Koch leaves by ultrasonic wave ，and the impact factors were ana-lyzed by single factor and orthogonal experiments．［Result ］The best ultrasonic extraction conditions were 80%ethanol concentration ，50?extraction temperature ，50min extraction time and 75W extraction power ，under the conditions ，the yield of total flavonoids could reach up to 84．50%，and the influential degree of each impact factor decreased in the order of ethanol concentration ＞ultrasonic time ＞ultrasound power ＞ultrasonic temperature．［ Conclusion ］The total flavonoids from Crataegus songorica K．Koch leaves had strong radical scavenging ability and significant antioxidative activity． Key words Ultrasonic extraction ；Crataegus songorica K．Koch leaves ；Total flavonoids ；Extraction ；Antioxidative activity 作者简介 任艳利（1978－），女，河南偃师人，讲师，硕士，从事生物化 学与分子生物学研究， E-mail ：ryl2003@126．com 。收稿日期2012-02-22黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的具有C －C 基本母核的一大类化合物 ［1－2］ ，总黄酮作为一种天然的植物提 取物，不仅有广泛的药理作用，还具有低毒安全的特性。现代研究表明， 黄酮类化合物有明显的抗氧化、抗炎、抑菌、抗癌及降血脂等生物活性，已广泛应用于食品和医药行业［3－4］ 。准噶尔山楂（Crataegus songorica K．Koch．）是蔷薇科蔷薇属的植物， 在新疆伊犁州霍城县大、小西沟有大量分布 ［5－6］ 。笔者采用超声波法提取准噶尔山楂叶中的总黄酮， 探讨了准噶尔山楂叶中总黄酮提取工艺的影响因素，通过单因素和正交试验法得出超声波提取的优化条件，并对总黄酮的抗氧化性进行了探讨，为准噶尔山楂叶的综合利用和深度开发提供一定的参考［7－9］ 。 1材料与方法1．1 材料 以采自霍城县大、小西沟的准噶尔山楂叶为材 料，自然避光干燥，用粉碎机粉碎为粉末后备用。722型紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司；HHS 型电热恒温水浴锅， 上海博远实业有限公司医疗设备厂；FA1004．MAX100g 电子天平，上海天平仪器厂；TGL-18M ，台式高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器公司；DILON99-IID 型超声波细胞粉碎机，西安比朗仪器公司；RE-52AA 旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；DZF-6020真空干燥箱，上海和呈仪器制造有限公司。1．2方法 1．2．1 准噶尔山楂叶总黄酮的提取。称取一定质量的准噶 尔山楂叶粉， 用不同体积分数的乙醇作溶剂，在超声波细胞粉碎机中提取，抽滤。将抽滤液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩液 再经氯仿萃取、 醇沉、过滤后，将滤液浓缩成膏状，置于真空干燥箱中干燥，得到准噶尔山楂叶总黄酮测试样品。1．2．2 标准曲线的绘制。先用甲醇将烘干的标准品芦丁配 制成浓度1．128、0．940、0．752、0．564、0．376、0．188mg /ml 的标准溶液 ［10］ ，依次移取不同浓度的标准液1ml 分别置于带 刻度的10ml 试管中，各加甲醇至5ml ，分别加入5%NaNO 2溶液0．5ml ，摇匀，室温放置6min ，再加10%Al （NO 3）3溶液0．5ml ，摇匀，室温放置6min ，加4%NaOH 溶液4．0ml ，摇匀，室温放置15min ，在波长500nm 测定吸光度，绘标准曲线（图1）。其回归方程为：A =1．0228X +0．0457（R 2=0．9986） 。 图1 总黄酮标准曲线 1．2．3 单因素试验。以准噶尔山楂叶总黄酮提取率为指 标，分别研究乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度、提取功率对准噶尔山楂叶总黄酮提取率的影响。1．2．4 正交试验。在单因素试验的基础上，对提取时间、料 液比、提取温度、提取功率进行4因素3水平正交试验设计分析各因素影响主次，确定其最优提取工艺。1．2．5 DPPH 法测定总黄酮对总自由基的清除作用［11］。 DPPH ·溶液的配制：准确称取0．1984g DPPH ·，用无水乙 责任编辑李菲菲责任校对李岩 安徽农业科学，Journal of Anhui Agri．Sci．2012，40（15）：8710－8712
中草药叶下花总黄酮提取方法 作者：杨发忠，杨斌，杨德强，陈厚琴，代红娟，张丽，李东海 【摘要】目的对叶下花总黄酮的种类与提取方法进行初步研究。方法采用定性检测、光谱分析、单因素测定、正交实验等，研究黄酮种类，考察乙醇体积分数、温度、固液比、时间对提取率的影响。结果叶下花含黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇等多种黄酮类化合物；所考察的影响因素中，对总黄酮提取率影响程度大小顺序为乙醇体积分数＞温度＞时间＞固液比。结论最佳提取条件为A1B2C3D3 (乙醇体积分数30%、温度65℃，提取时间180 min，固液比1∶80)，在此提取条件下，提取量高达5.233%。 【关键词】叶下花总黄酮提取方法正交实验 Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction conditions for the total flavonoids from Ainsliaea pertyoides Franch and to study the categories of the total flavonoids. MethodsThe methods of the chemical qualitative detection, the spectral analysis, single factor determination, orthogonal test were adopted to study the categories of the total flavonoids, and the effect of four factors, i.e. the volume fraction of ethanol, the temperature, the ratio of solid to liquid, the
生物黄酮 1、含有生物黄酮的植物：首先，柠檬、柑橘等含有黄酮。早年柠檬皮的提取物中的一种白色结晶被称为维生素P，实际上这是黄酮类混合物而非单一物质。黄酮广泛存在自然界的某些植物和浆果中,总数大约有4千多种,其分子结构不尽相同,如芸香苷、橘皮苷、栎素、绿茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等都属黄酮。银杏、山楂、蓝梅、酸果、葡萄、接骨木果、洋葱、花椰莱、绿茶等都含有黄酮。两种含黄酮高的植物：1）银杏叶；银杏叶主要含黄酮类和萜烯内酯类化合物，含量很高，目前是提取黄酮的重要原料；2）刺梨；这是产于云贵的一种植物，富含芦丁黄酮，是目前植物中芦丁黄酮含量最高的。 2、黄酮的作用：黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止氧化的能力是维生素E的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，向天果中的黄酮还含有一种PAF抗凝因子，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。被称为花色苷酸的黄酮化合物在动物实验中被证明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，这种降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它对稳定胶原质的作用，因此它对糖尿病引起的视网膜病及毛细血管脆化有很好的作用。黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，栎素由于具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感症。 3、生物类黄酮，可调节血脂，降低血液粘稠度，改善血清脂质，延长红血球寿命并增强造血功能，预防心脑血管疾病；抑制HL-60白血病细胞生长和溶解癌细胞的作用；能够有效清除体内的自由基(Free Reaical)及毒素，预防、减少疾病的发生；消炎、抗过敏、广谱抗菌、抗病毒作用。松针提取物功能: 1. 具有清除自由基、抗氧化作用。
黄酮类化合物提取工艺研究 唐鹰1 (1.湖北民族学院湖北恩施445000） 摘要黄酮类化合物是一类存在于高等植物及蕨类植物中的活性物质，具有特殊的保健及治疗功能。本文综述了天然黄酮类物质的多种提取工艺，分别是水提法、碱性水或碱性烯醇提取法、有机溶剂提取法、微波法、超声波法、酶解法、大孔树脂吸附法、超滤法、超临界萃取法，比对各工艺利弊进行了分析。 关键词黄酮类化合物提取工艺研究 The extracting technology of flavonoids compounds Tang Ying1 （1.Hubei institute for nationalities Hubei Enshi 445000） Abstract There is a type of flavonoids in higher plants and ferns of active substances, with special care and treatment function.This paper analyses summarized the natural flavonoids substances respectively,a variety of extraction process was water -extraction and alkaline water or alkaline propylene alcohol extraction, organic solvent extraction,microwave-extraction method, ultrasonic method, enzyme hydrolysis and macroporous resins, ultrafiltration , supercritical fluid extraction, each process than and analyzed the advantages and disadvantages. Keywords Flavonoids extraction technology research 黄酮类化合物在植物界中分布广泛，,属于植物次级代谢产物 ,在植物的叶子和果实中少部分以游离形式存在，大部分与糖结合成苷类以配基的形式存在。黄酮类化合物广泛存在于植物的各个部位 ,尤其是花叶部位 ,主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞性科、银杏科与菊科等。有文献记载 ,约有 20 %的中草药中含有黄酮类化合物。它是以黄酮 ( 2一苯基色酮)为母核，同时黄酮母核上连有羟基、甲氧基、氢氧基等取代基，是植物经光合作用产生的一大类化合物。到目前为止，已发现2000多种。它们包括黄酮(Flavone)、黄烷醇(Fla-vano1)、异黄酮(Isoflavone)、双氢黄酮(Flavanone)、双氢黄酮醇(Flavanono1)、黄烷酮(Flavanone)、花 色素(Anthocynidia)、查耳酮(Chal—cone)、色原酮(Chromarme)等。近年来，科学家们发现其具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病及抗衰老等作用。随着对其研究方法和技术的不断提高，又发现了许多新的种类和生理作用。特别是抗自由基和抗癌、防癌的
总黄酮的提取方法 1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法 2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单 3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。 4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。 5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。黄剑波等[22]采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质的提取率为91%，提取纯度为54%。王悦等[23]对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取，黄酮得率分别是%，% 和%，和传统的方法相比，游离酶法的总黄酮得率提高了81%。
黄酮提取工艺 2-1 微波辅助提取金银花总黄酮工艺流程图 3.实验方法 3.1 标准曲线的制备 3.1.1最大吸收波长的选择方法 以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显色剂，分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，在510nm处均有1个强吸收峰，因此选择510nm为测定波长。 3.1.2对照品溶液的制备方法 精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。 3.1.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0，1，2，3，4，5mL，分别置10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝0.3mL，振荡摇匀，放置6min；最后加入4%氢氧化钠试液4mL，加甲醇定容至刻度，摇匀，放置15min。采用分光光度法，在510nm处测定吸光度，以对照品量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3.2 微波提取单因素实验方法 分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,乙醇浓度,固液比对提取效果的影响 3.3 提取工艺正交试验设计方法 系统考察微波提取法的工艺参数，根据已有的资料及实际情况，选用微波辐射功率（A），辐射时间（B），乙醇浓度（C），固液比（D）作为考察因素，以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标，选用L9（34）正交表设计，得到供试液。 3.4微波辅助提取法与乙醇回流法比较 比较两种提取方法的处理时间和液固比对总黄酮提取量的影响。传统乙醇回流法提取总黄酮的所需时间比微波辅助提取法提取长得多，且金银花总黄酮提取量比较低;而微波辅助提取的总黄酮较乙醇回流法高。比较此两种方法在最佳条件下的总黄酮含量。 3.5总黄酮含量测定方法 取0.5mL液，加入5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀，放置6min加入10%硝酸铝0.3mL荡摇匀，放置6min入4%氢氧化钠试液4mL，30%（V/V）乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。 4. 结果 4.1 标准曲线绘制 表4-1 标准曲线表 编号 0 1 2 3 4 5 芦丁浓度 0 0.02 0.03 0.05 0.07 0.09 （mg/mL） 吸光度 0 0.206 0.381 0.548 0.738 0.911 （OD）
醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究 采用乙醇提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验分析，确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺。荷叶黄酮醇法提取的最佳工艺是：料液比1：25，提取时间1h，提取温度80℃，乙醇浓度60%，验证试验证明实际提取率为3.82%。 标签：总黄酮；荷叶；乙醇提取法 荷叶为睡莲科植物莲的叶。荷叶中所含的黄酮类化合物，其主要成分是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。实验研究表明，黄酮类物质具有很高的生物活性，如抗氧化作用、抑菌作用、降血脂、减肥作用等[1]。本课题以荷叶为研究对象，利用乙醇提取法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 实验设备 电热恒温水浴锅、722型分光光度计、鼓风干燥箱、电子天平、粉碎机、旋转蒸发器等。 1.2 试验材料 原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。 1.3 黄酮测定方法[2] 用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。用NaN02-Al （N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。准确称取芦丁标准品0.625mg，用体积分数30%乙醇定容于100mL容量瓶中，得质量浓度为0.625mg/mL的标准储备液。分别吸取芦丁标准储备液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分别置于0、1、2、3、4、5、6号共7支10mL具塞试管中，用体积分数30%乙醇补充至5mL，分别加入0.3mL质量分数10%硝酸铝溶液，混匀，用体积分数30%乙醇标定至刻度线，放置10min后于510nm处，以0号试剂作为空白参比，测定其吸光度值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图1所示。 得到回归曲线方程：y=0.5011x+0.0022，R2=0.9997。 式中：y，提取液的吸光度；x，提取液黃酮类物质的浓度，mg/mL。 1.4 荷叶总黄酮单因素试验与分析
山楂药理研究 1 简介 山楂为蔷薇科植物山楂、山里红及野山楂的干燥成熟果实。性微温，味酸、甘。归脾、胃、肝经。山楂中含有熊果酸、黄酮类、皂苷、糖类、有机酸类、色素等多种活性成分[赵宏，杨波，刘玉含．山楂果中主要成分的提取及成分分析方法研究[J]．黑龙江医药科学，2005，88(6)：42—43．]，具有消食化积、活血化瘀的功效，临床用于食滞不化及产后瘀阻腹痛（孙波，山楂的现代药理与临床应用分析，中国医药指南2009，7（12），122-123）。近几年来对山楂的研究着重于降血压、降血脂、改善心肌缺血、降低胆固醇、抗脂质过氧化等方面，用于治疗心脑血管疾病取得了很好的效果（卓斌，谭泳怡。山楂的药理作用研究，2009,5(3),18-19）。本文对山楂的药理研究简述如下。 2 药理作用及临床应用 2 1 健脾消食 近代研究表明，山楂中含维生素C、维生素B2、胡萝卜索及多种有机酸，口服能增加胃中消化酶的分泌，并能增强酶的活性，促进消化。对胃肠功能具有一定调节作用，对活动亢进的兔十二指肠平滑肌呈抑制作用，而对松弛的大鼠胃平滑肌有轻度的增强收缩作用。山楂对胃肠功能紊乱有明显调整作用，能够健脾消食。重用山楂并配用健脾药治疗小儿泄泻疗效较好（戚建军．重用山植、乌梅治疗小儿泄泻60例小结【J】甘肃中医,2000,(2)：39-39。）。 2 2 对心血管的作用 2 2 1 抑制血小板聚集作用 山楂叶中提取的有效成分总黄酮对血小板、红细胞电泳均有增速作用，有利于改善血流动力学，提高红细胞及血小板表面电荷，增加细胞之间的斥力，加快它们在血中的流速，促进轴流，减少边流和聚集黏附。WH505对动脉血管内皮损伤所致的血栓形成具有明显的抑制作用，其机制可能与血管内皮细胞损伤有关。 2 3 2 强心作用 山楂具有增加心肌收缩力、增加心输出量、减慢心律的作用：还具有扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉流量、降低心肌耗氧量的作用。北山楂提取物在大鼠和家兔中均有预防和减轻实验性心肌缺血缺氧和心肌坏死的作用。山楂黄酮还能缩小心肌梗塞范围。山楂的扩张冠状动脉作用与其B一肾上腺能受体激动作用有关。山楂提取物可对抗家兔因注射脑垂体后叶绿素引起的心律失常。山楂提取物可望成为慢性心力衰竭植物药治疗的新选择。山楂中能扩张冠状动脉的一类化合物，能使氯化钾收缩后离体兔骨股动脉环节产生的剂量依赖型血管舒张，推断出山楂中黄酮类化合物对心肌有正性肌力作用，很可能是通过对磷酸二酯酶的抑制而产生的。 2 3 3 抗心律失常作用：山楂黄酮和皂苷可对抗静脉注射乌头碱引起的心律不齐，且作用较强。用山植提取物对家兔时脑垂体后叶索引起的心律失常有抑制作用。 2 3 4降压作用 山楂总提取物或山楂总皂苷均可引起小鼠、兔及猫血压下降。以较小剂量山楂的流浸膏、黄酮或水解产物注射于麻醉猫、麻醉兔或麻醉小鼠，均有缓慢而持久的降压作用，其降压原理以扩张外周血管为主（【3】陶小萍．山楂茶叶汤治疗酒精性肝病的疗效观察[J】．辽宁中医杂志，2001，(2)：86—86．）。临床用山楂糖浆治疗高血压疗效达90％以上。 2 3 5降血脂作用 山楂及山楂黄酮能显著降低血清和肝脏丙二醛(MDA)含量，增强红细胞和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)的活性，同时可增加全血谷胱甘肽还原酶(GSH—Px)的活性，并对实验性动脉粥样硬化有治疗作用。山楂及山楂黄酮还能显著升高大鼠低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白水平，
毕业设计开题报告 应用化学 山楂中总黄酮的提取工艺的研究 一、选题的背景和意义 总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。 山楂为蔷薇科植物山里红或山楂干燥成熟果实。主要功能为消食健胃，行气散瘀，用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，高血脂症等。对山楂的研究发现其具有丰富的化学成分而且具有重要的药理活性。主要含有机酸和黄酮类化合物 , 随着药理学的发展,对山楂的药理活性研究发现其中有机酸为山楂消食 化积的主要有效成份,黄酮类化合物能扩张冠状动脉,改善微循环,抗动脉粥样硬化,且 可调节血脂、降低胆固醇,预防心血管疾病,临床试验证明其疗效显著且安全无毒副作用。山楂果肉及山楂叶中含有丰富的黄酮类化合物，由于其对心脑血管疾病有显著疗效而被受人们的关注。 山楂在全国各地均有栽培,为药食同源植物。其资源丰富,将其做为保健食品和治疗药品开发有着广阔的前景。 总黄酮的提取方法有很多，包括传统的乙醇提取方法和新型提取技术如超声提取、微波提取、超临界流体提取、酶法提取、半仿生提取法等。不同的提取方法所提取的总黄酮的量会有所不同。 近年来国内外对茶多酚、银杏类黄酮等的药理和营养性的广泛深入的研究和临床试验，证实类黄酮既是药理因子，又是重要的营养因子为一种新发现的营养素，对人体具有重要的生理保健功效。目前，很多著名的抗氧化剂和自由基清除剂都是类黄酮。例如，茶叶提取物和银杏提取物。葛根总黄酮在国内外研究和应用也已有多年，其防治动脉硬化、治偏瘫、防止大脑萎缩、降血脂、降血压、防治糖尿病、突发性耳聋乃至醒酒等不乏数例较多的临床报告。 随着对生物总黄酮与人类营养关系研究的深入，不远的将来可能证明黄酮类化合物
举例说明黄酮的提取分离方法 组长：崔宁 组员：翟雪王璐璐冯子涵赵子惠罗春雨刘红成 1.提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2～4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜：生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花：各取5g干菊花4份, ，在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低；pH为11时,虽然黄酮
荷叶提取物最佳工艺的研究 摘要：荷叶提取物有较好的调节血脂功效，有药理[1]研究表明其主要活性组分为荷叶生物碱、黄酮类化合物。并且目前荷叶生物碱[2]、黄酮的需求量不断增加，但是缺少方便有效的分离分析荷叶生物碱和黄酮的方法[3]，限制了对荷叶资源进一步的开发和利用。本实验通过对荷叶生物碱、黄酮的提取、分离纯化，寻找荷叶提取物的最佳工艺，以期为荷叶提取物的深入研究和合理开发利用提供参考。 关键词：荷叶提取物;黄酮;生物碱;分离纯化 Abstract: Better regulation of blood lipid effect of the extract from Lotus leaf, pharmacological research has shown that group into the alkaloid from Lotus leaf, its main activity of flavonoid compounds. And Lotus Leaf alkaloids, flavonoids in demand now increasing, but the lack of convenient and effective method of separation and analysis of alkaloids and flavonoids in Lotus leaf, limited the further development and utilization of resources in Lotus leaf. This experiment by alkaloids from Lotus leaves, extraction, isolation and purification of the flavonoids, finding best technology of Lotus leaf extract, for in-depth research and rational development and utilization of Lotus leaf extract of reference. Key words: Lotus leaf extract; flavonoids; alkaloids; isolation and purification 1.前言 荷叶属睡莲科植物(Nelumbo nuxifera Gaerth)的叶片，作为一种天然、安全有效的保健食品和药物[4]，越来越受到人们的青睐。我国荷叶资源丰富，具有发展荷叶产业的有利条件，深入发展荷叶产业能够带来可观的经济效益、社会效益[5]。荷叶作为我国的传统中药在医学中应用不仅历史悠久，而且范围广泛。其性味苦、涩，平。入心、肝、脾经，能清热解暑，散瘀止血，并有降低血脂和降低血压的作用。前人有“荷叶服之，令人瘦劣”的记载，足见其具有良好的降脂减肥功效[7]。荷叶提取物中生物碱类化合物众多，主要活性组分是生物碱和黄酮类化合物[8]，但它们各自的最佳提取分离工艺尚不清楚，且将单味荷叶黄酮、生
正交优选表面活性剂提取山楂黄酮的工艺研究目的：优选用表面活性剂提取山楂中黄酮的最佳工艺条件。方法：以总黄 酮含量为指标，采用单因素试验和正交试验确定最佳提取工艺。结果：山楂中黄酮的最佳提取工艺条件为，采用质量分数为1.5%的吐温80水溶液，在90℃提取1 h，提取2次，料液比为1∶20，提取率为4.55%，比传统的乙醇回流提取山楂黄酮的提取率增加了16.97%。结论：该法以溶有少量表面活性剂的水替代高浓度的醇进行活性成分的提取，能大大降低提取成本，并提高提取率，是较理想的一种提取新工艺。 [Abstract] Objective: To optimum extraction technology of flavonoids from hawthorn fruits with surfactant. Methods: Single factor and orthogonal test were used to study the extraction conditions to extract flavonoids from hawthorn fruits. Results: The optimum extracting condition of extracting flavones from hawthorn was showed as follows, mass fraction of Tween 80 solution 1.5%; temperature of estraction 90℃; time of extraction 1 h; twice and the solid- liquid ratio 1∶40 (g/ml). Conclusion: The method is low cost, high yeild and no need for organic solvent and can be applied multipurposely. [Key words] Surfactan; Hawthorn; Flavones; Orthogonal test 山楂为蔷薇科植物山楂（Crataegus Pinnatifida Bunge）、山里红（Crataegus pinnatifida Bunge vat.Major N.E.Br.）及野山楂（Crataegus cuneata Sieb et Zucc.）的干燥成熟果实。山楂性酸、甘、味温，归脾、胃、肝经，具有消食化积、活血化瘀的功效。山楂含有丰富的黄酮类化合物，对心脑血管疾病有显著疗效，具有降血脂、抗心肌缺血及再灌注损伤、增加冠状动脉流量等作用[1]。 山楂黄酮的提取主要有有机溶剂浸提、微波辅助提取[2]、超声波辅助提取[3]和超临界萃取等。而表面活性剂具有双亲结构，能降低表面张力，增强溶剂对物料的润湿性和渗透性，且对天然产物的有效成分具有增溶作用，从而增加浸出效能和萃取率，目前在天然产物提取中得到较多的应用[4-5]。目前，尚无使用表面活性剂辅助提取山楂黄酮的相关报道。故本实验利用表面活性剂的增溶作用，以溶有少量表面活性剂的水替代高浓度的醇或其他有机溶剂进行活性成分的提取，能大大降低提取成本，并提高提取率，为山楂资源的深度开发利用提供技术支持。 1 材料与仪器 1.1 药物与试剂 山楂，经浙江中医药大学生药教研室姚振生教授鉴定为Crataegus Pinnatifida Bunge的干燥成熟果实；吐温80（Tween-80）温州清明化工有限公司；平平加（Peregal）上海文华化工颜料公司；聚乙二醇（PEG）上海文华化工颜料公司；烷基糖苷（APG）北京信诺久恒料贸有限公司；椰子油脂肪酸二乙醇酰胺（CDEA）
黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景 任红丽2009090141 摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。在 药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。 关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。 1.提取纯化方法 1．1 传统提取方法 1．1．1 热水提取法 水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。此外，水提取物容易发霉发酵[22]。1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法 中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。 1．1．3 有机溶剂热回流及冷浸提取法 根据杂质极性不同，可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇为提取溶剂[15]。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/077577218.html, 山楂的药理作用研究 作者：冯志晖 来源：《医学信息》2014年第13期 摘要：山楂：蔷薇科落叶灌木（或小乔木植物）山楂、山里红及野山楂的成熟干燥果实。山楂，味酸、甘，微温，为药用之品。有消食化积，行气散瘀功效。山楂对人体消化效果最好，特别适合于脾胃虚弱，肉食不化及油腻反胃。山楂善行胃肠之气，适用于食积肠胃，脘腹胀满等症。近年来，发现山楂还具有降血压、降血脂和扩张冠状动脉血管的作用。 关键词：山楂；药理作用；研究 山楂为蔷薇科落叶灌木（或小乔木植物）山楂、山里红及野山楂的成熟干燥果实。性微温，味酸、甘。归脾、胃、肝经。山楂中含有熊果酸、黄酮类、皂苷、糖类、有机酸类、色素等多种活性成分，具有消食化积、行气散瘀功效，对人体消化效果最好，特别适合于脾胃虚弱，肉食不化及油腻反胃[1]。山楂善行胃肠之气，适用于食积肠胃，脘腹胀满等症。临床用 于食滞不化及产后瘀阻腹痛。近年来发现山楂具有降血压、降血脂、改善心肌缺血、降低胆固醇、抗脂质过氧化等作用，用于治疗心脑血管疾病取得了很好的效果。本文试就山楂的药理作用浅析如下。 1 山楂的传统论述 《本草纲目》文献："楂化饮食，消肉积、症瘕、痰饮、痞满吞酸、滞血痛胀。"《随息居饮食谱》："醒脾气，消肉食，破瘀血，散结消胀，解酒化痰，除疳积，止泄痢。"《新修本草》："汁服止痢，洗头及身瘥疮疡。"《本草衍义补遗》："健胃，行结气，治妇人产后儿枕痛，恶露不尽，煎汁入砂糖，服之立效。" 2 山楂的现代医学研究 2.1健脾消食近代医学研究可知，山楂中富含维生素C、B2、胡萝卜素及多种有机酸，口服能增加胃中消化酶的分泌，增强活性酶，促进消化，调节胃肠，抑制十二指肠平滑肌，增强胃平滑肌的收缩作用，消除胃肠功能紊乱，健脾消食。可用山楂健脾药治疗小儿腹泻。食欲减退脾虚消化不良者，出现食欲不振，脘腹胀满，大便溏泄时，用山楂15g，炒麦芽20g，党参15g，白术10g，大枣10枚，煎煮2次合并药液，代茶饮用。有健脾开胃，消食化滞功效。肉食积滞症因脾胃虚弱，油腻食物，引起消化不良，脘腹胀闷者，用山楂15g，炒麦芽15g，隔山撬15g，莱菔子（打碎）10g，加水适量，煎煮后分早中晚服用。有消食化滞，去除油腻功效。 2.2抑制血小板聚集、抗心律失常、降压、降脂山楂叶中的总黄酮对血小板、红细胞均有增速作用，有利于改善血流动力，提高红细胞及血小板表面电荷，增加细胞的斥力，加快它们