猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
欧云文1，2 代军飞1 马炳1 张杰1 邓辉祥2 李潇2 张欣明2
【摘要】旨在制备猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的多克隆抗体。以PCV2毒株（CAU0673）DNA为模板进行PCR，扩增目的片段大小约为702 bp，构建pET30a-PCV2-Cap重组质粒，转入大肠杆菌BL21（DE3），IPTG 诱导表达；对目的蛋白进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化、复性，并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定；将纯化后的重组Cap蛋白与弗氏佐剂混匀乳化，经背部皮下多点注射4次，免疫新西兰大耳白兔，制备成兔抗Cap蛋白多克隆抗体，采用Western blot和间接免疫荧光试验（IFA）验证兔抗血清特异性，并用间接ELISA测定抗血清抗体效价。PCR、双酶切和测序鉴定结果表明，重组质粒pET30a-PCV2-Cap构建正确；重组Cap蛋白以包涵体的形式表达，大小约为34 kD，复性后重组Cap蛋白可与PCV2阳性猪血清发生特异性反应；制备的多克隆抗体与PCV2重组Cap蛋白和全病毒抗原均可发生反应，ELISA 抗体效价＞1∶12 800，显著高于商品化疫苗组。
【期刊名称】生物技术通报
【年(卷),期】2019(035)008
【总页数】6
【关键词】猪圆环病毒2型；Cap蛋白；多克隆抗体；鉴定
基金项目：“十三五”国家重点研发计划子课题（2017YFD0501801），四川省科技计划项目（2019GDRC0110）
猪圆环病毒 2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）属于无囊膜的、单股、环状、负链DNA病毒，是已知最小的动物病毒之一，是断奶仔猪多系统衰竭