GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICE
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（还原&非还原）编号：
SDS-PAGE蛋白电泳检测
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批准：年月日生效日期：年月日
文件分发部门：
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SDS-PAGE蛋白电泳检测编号：
SDS-PAGE蛋白电泳检测
一目的
保证产品电泳电泳分子量和纯度检测按规范进行和检定结果的准确可靠。
二范围
用于规范电泳电泳分子量和纯度的测定。
三责任
质量控制部人员。
四内容
1试剂与水：
所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
2 溶液的配制
2.1A液：1.5MTris·HCl pH8.8
称取90.75gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至8.8,加超纯水定容至500 ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。
6M盐酸（调pH用）：浓盐酸50ml，加50ml纯化水，混匀。
2.2、B液: 0.5MTris·HCl pH6.8
称取60.5gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至6.8,加超纯水定容至1000 ml。贴上标贴，室温储存。
2.3C液: 30%丙烯酰胺-0.8%N,N-亚甲基双丙烯酰胺溶液
称取300g丙烯酰胺(分析纯),8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解(一般500ml，因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点),再定容至1000 ml,用滤纸过滤。贴上标贴，避光4℃保存。
2.4D液:1%SDS
称取2gSDS(分析纯),用超纯水溶解至200 ml.贴上标贴，4℃保存。
2.5E液:10%过硫酸铵
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称取10g过硫酸铵(分析纯)，用超纯水溶解至100 ml，以1ml/支分装，贴上标贴，－20℃保存。
2.6 4%碳酸钠溶液：称取20g无水碳酸钠, 加水450ml, 搅拌，使完全溶解，并定容至500ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效期为三个月。
2.7F液:TEMED(市售)
2.8电泳缓冲液(5X)
称取75g Tris碱(分析纯)，360g甘氨酸(分析纯)，25gSDS(分析纯)，加超纯水溶解，调pH至8.3，定容至5L，贴上标贴，室温储存。临用前加超纯水稀释5倍使用。
2.9、样品缓冲液
2.9.1 4X样品缓冲液（还原性）
称Tris3.03g，溴酚蓝20mg，SDS 8g，盐酸1.89ml，甘油40ml，加超纯水溶解定容至100ml，再加20ml巯基乙醇（分析纯）贴上标贴，室温储存。
2.9.2 4X样品缓冲液（非还原性）
称Tris3.03g，溴酚蓝20mg，SDS 8g，盐酸1.89ml，甘油40ml，加超纯水溶解定容至100ml，贴上标贴，室温储存。
2.10 银染试剂（注：银染试剂配制所使用的超纯水均为两次过滤的无热源水）
2.10.1 固定液：量取500ml甲醇(分析纯)，120ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水至1000 ml, 贴上标贴，室温储存。
2.10.2 漂洗液：量取乙醇100ml（分析纯），500ml冰醋酸（分析纯），加超纯水至1000ml，室温储存。
2.10.3 辅染液：称取重铬酸钾10g，量取硝酸2ml，加适量水溶解并稀释至200 ml，用前40倍稀释。贴上标贴，室温储存。
2.10.4 银染液：现配现用。称取2.04g硝酸银，加超纯水溶解定容至1000ml。
2.10.5 显影液：称取30g碳酸钠(分析纯)，加超纯水溶解定容至1000ml, 贴上标贴，室温储存。
2.10.6 终止液：10ml冰醋酸，加水稀释至1000ml。
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2.11 考马氏亮蓝染色试剂
2.11.1 考马氏亮蓝染色液：称取1g考马氏亮蓝R-250(分析纯)，200ml甲醇(分析纯)，50ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水溶解定容至500ml，搅拌4h，滤纸过滤，贴上标贴，室温储存。（见溶液配制记录）染色液需回收利用，使用周期依染色效果定。
2.11.2 考马氏亮蓝脱色液：量取400ml的甲醇，100ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水溶解至1L，贴上标贴，室温储存。
脱色液使用后回收至装有活性炭的瓶中，滤过后可重复利用，使用周期依脱色效果定。
3 器皿与耗品：
所有玻璃器皿为清洁级；tube、tip一次性使用；微波炉盒。
4 仪器设备：
电泳仪电源（200--600V）；电泳槽；灌胶模具；染色具；脱色摇床；微波炉；
凝胶成像仪。
5 环境要求：
相对洁净环境，室温。
6 标准品（or 对照品）：
标准品：市售分子量标准蛋白，按说明书分装后-20℃保存。《标准品分装与使用记录》
6.1 标准品验证
6.1.1 标准品按说明书分装，储存，对标准品进行SDS-PAGE电泳；分装要填写分装记录《电泳标准品制备及检定》。
6.1.2 相对迁移率Rf =蛋白带迁移距离/溴酚兰迁移距离；
6.1.3 用每个蛋白标准分子量的对数(纵坐标)对它的相对迁移率(横坐标)作图,得一条直线,两者线性关系>0.98,方可用作电泳分子量测定。
7操作步骤：
7.1制胶
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7.1.1制备分离胶：（15ml二块凝胶的量）
凝胶种类分离胶浓缩胶
凝胶浓度7.5% 10% 12.5 % 15% 17.5％ 4.5％
试液/ml 超纯水 6.09 4.97 3.39 2.37 0.97 4.393 30%丙烯酰胺 4 5.4 6.7 8 9.4 1.35 1.5MTris·HCl pH8.8 4 4 4 4 4 ――0.5MTris·HCl pH6.8 ―― 2.25 1%SDS 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 0.9 10%过硫酸胺0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.07 TEMED 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.007
7.1.2制备浓缩胶：
待分离胶聚合（约半小时）后，用滤纸吸去上面的水层，再灌入浓缩胶（配方见上表），插入样品梳，避免气泡出现。
7.2样品：
7.2.1样品处理：
7.2.1.1原液、半成品、成品：以H
2
O/PBS/生理盐水稀释样品至适当浓度，还原电泳2～3μg/孔上样，非还原电泳10μg/孔上样。
7.2.1.2发酵样品：若是上清，取上清30μl+30μl加样缓冲液，混匀，15μl上样；
若是菌体，以H
2
O/PBS/生理盐水混匀菌体，使其OD在15之间，取菌液30μl+30μl加样缓冲液，混匀，15μl上样。
7.2.1.3纯化样品：取样品30μl+30μl加样缓冲液，混匀，15μl上样。
注：还原电泳，样品上样前需100℃煮5分钟。
7.2.2 Marker ：考染10μl上样，银染5μl上样。
7.3加样：将浓缩胶聚合后拔出样品梳，将电极缓冲液注满电泳槽的前后槽，
在加样孔中加入处理好的样品5μg（银染）或10μg以上（考马氏亮蓝染色）。
7.4电泳：接通电源，先恒压100V开始电泳，至待检样品进入分离胶后将电压调至150V，直至溴酚兰至胶底部，电泳结束。
注：恒流或者恒压均参考仪器说明书。
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7.5染色脱色：(根据具体需要，选择9.5.1或9.5.2)
7.5.1考马氏亮蓝法
7.5.1.1染色：将电泳后的凝胶取下，浸入染色液中，微波炉加热1min避免沸腾，在摇床上染色45min左右；时间可根据染液配制的时间稍加长短；
7.5.1.2、脱色：将凝胶自染色液中取出，浸入脱色液中，微波炉加热1min避免沸腾，直至凝胶底色近于无色为止，并将凝胶保存在凝胶保存液中进行胶扫描、拍照再做干胶。用过脱色液需回收。
7.5.2、银染法（超纯水为两次过滤的无热源水）
除另有规定外，银染法一般不用于定量实验，做定性实验时，上样量可以适当增加。
7.5.2.1固定：将电泳后的凝胶取下，浸入固定液中过夜；
7.5.2.2漂洗：用漂洗液漂洗3次（温度应不低于25度），每次10分钟；
7.5.2.3辅染：将胶浸泡在辅染液中7~10分钟；
7.5.2.4清洗：倒去辅染液，用超纯水，清洗3次，每次2min（在清洗之前胶被固定液和辅染液泡过后有大量有机溶剂残留，与水不能很好的溶合在一起，要用超纯水漂洗去多余的有几溶剂让胶看上去能和水的溶合在一起）；
7.5.2.5银染：倒去超纯水，将浸洗后的胶浸于银染液中，置较强日光或类似光源下照射30分钟，再于室内光线下放置20分钟；
7.5.2.6清洗：用超纯水清洗2次，每次1分钟；
7.5.2.7显色：倒去超纯水，将胶浸入显色液中，每隔2分钟换液一次，直到条带显色完全；
7.5.2.8终止：将胶浸于终止液中10分钟；
7.5.2.9保存：将终止好的凝胶保存在超纯水中。
8拍照与存档
8.1拍照并制备干胶：对湿胶进行拍照，每次照片尺寸一致，照片与胶的点样面一致，拍好后制备干胶，剪两块比配胶板稍大的玻璃纸，把一块放在配胶板上，在清水冲洗下赶去汽包，把湿胶放在上面，盖上另一块玻璃纸，赶去气泡，夹好框架，晾干即可，做
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干胶24小时内完成。
8.2存档：电子版的胶图按项目归档，并对干胶进行编号，按拍照日期编号，如2008年2月3号拍的第一张胶，则编号为：20080203-01，照片与干胶编号一致，保证两者号码同一，编号后放入胶册并登记。
9分析：
9.1非还原电泳凝胶经扫描进行纯度分析；还原电泳凝胶中分子量标准，经扫描获得分子量标准曲线，计算样品的分子量。
9.2分子量标准蛋白（MARKER）条带不清，样品过浓或过淡需重做。
9.3分子量标准蛋白（MARKER）条带不清，样品过浓或过淡需重做。
9.4照片若是不规范，则重拍。
9.5遇到问题及处理
9.6.1拖尾，纹理现象：需离心或降低胶浓度；
9.6.2蛋白带过宽：加样过多或泄漏。
10注意事项
10.1丙烯酰胺有毒性，配胶时需戴手套，处理废液时加一定量SDS，等丙烯酰胺溶液凝聚后才能扔弃，不能直接把丙烯酰胺溶液倒入下水道；
10.2蛋白质与SDS(浓度>1mmol/L)结合重量比1:1.4,为充分结合重量比为1:4或1:3，B-ME终浓度为4-5%；
淡黄色：S、Na2O2、TNT、PCl5、AgBr、浓HNO3（混有NO2）、浓HCl（混有Fe3+）、硝基苯（溶有NO2）灰黄色：Mg3N2 棕黄色：FeCL3溶液、碘水（深黄--褐） 棕色：固体FeCl3、固体CuCl2、NO2（红棕）、Fe2O3（红棕） 常见微溶物： Ag2SO4、CaSO4、Ca(OH)2、MgCO3 Ag+ 与Cl－、Br－、I－、SO42－ Ca2+ 与CO32－、SO32－ Ba2+ 与CO32－、SO32－、SO42－ H+存在，其中不能大量含有OH－、弱酸根离子（如CO32－、SO32－、S2－、F－、ClO－、CH3COO－、C6H5O－、PO43－、AlO2－、SiO32－等）以及弱酸的酸式根离子（如HCO3－、HSO3－、HS－、HPO42－、H2PO4－等） OH－存在，其中不能大量含有H+、弱碱的阳离子（如NH4+、Mg2+、Ag+、Al3+、Zn2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+ 等）以及弱酸的酸式根离子。 Fe3+与S2－、SO32－、HSO3－、I－、HS-、CO32－、HCO3－、AlO2－ SO32－(H+)与S2－ MnO4－(H+)、Cr2O72-、ClO-与Cl－、I－、S2－、Fe2+、HS－、SO32－、HSO3－ NO3－(H+)与Fe2+、S2－、HS－、SO32－、HSO3－、Br－、I－ Al3+与CO32－、HCO3－、S2－、HS－、AlO2－ NH4+与AlO2－ 还原；K、Ca、Na、Mg、Al，Zn、Fe、Sn、Pb、（H），Cu、Fe3+、Hg、Ag、Pt、Au 氧化: F2>O2>Cl2>Br2>Fe3+>I2>SO2>S 还原: Fe-
SDS PAGE 电泳常见问题分析 1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的 Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。 2. 样品如何处理？ 根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。 1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100μl样品缓冲液中10μl 20%的碘乙酸胺，并在室温保温30min。 3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1%SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。 3. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？ 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关； 制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择tris－HCL系统， TEMED与AP：AP提供自由基，TEMED是催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实 验原理和操作步骤 实验原理： SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。 试剂和器材： 试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。 3. pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，
加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。 4. pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH 6.7，定容至100ml，4℃保存。 5. TEMED（四乙基乙二胺）原液 6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制） 7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，临用前稀释10倍。 8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。 器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。 实验操作
高中化学常见物质氧化性、还原性大小顺序归纳总结 1.强弱规律 ⑴氧化性、还原性的判断 ①氧化性是指得电子的能力，还原性是指失电子的能力。 ②氧化性、还原性的强弱取决于得失电子的难易程度，与得失电子的多少无关。 ③从元素的价态考虑：最高价态只有氧化性；最低价态只有还原性；中间价态既有氧化性 又有还原性。 (2).判断氧化性、还原性强弱常用的方法 ①根据金属的活泼性判断 a.金属的金属性越强，单质的还原性越强，其对应的离子的氧化性越弱。 b.单质的还原性：按金属活动性顺序依次减弱。 c.离子的氧化性：按金属活动性顺序依次增强（铁为Fe2+）。如：Ag+＞Hg2+＞Fe3+ ＞Cu2+＞H+＞Fe2+。 ②根据非金属的活泼性判断 非金属性越强，单质的氧化性越强，其对应离子的还原性越弱。如：氧化性F2＞Cl2＞Br2＞I2＞S； 还原性S2—＞I—＞Br—＞Cl—＞F—。 ③根据氧化还原反应进行的方向以及反应条件或剧烈程度来判断 a.氧化性：氧化剂＞氧化产物。 b.还原性：还原剂＞还原产物。 c.不同氧化剂（还原剂）与同一还原剂（氧化剂）反应时，反应条件越易，氧化性（还原 性）越强。 如：根据浓盐酸分别与KMnO4、MnO2、O2反应的条件分别为常温、加热、催化剂并加热，由反应条件可以判断氧化剂的氧化性顺序为KMnO4 ＞MnO2 ＞O2。 d.不同氧化剂（还原剂）与同一还原剂（氧化剂）反应时，反应现象越剧烈，氧化性（还 原性）越强。 如：钠和钾分别与水反应时，钾更剧烈，所以还原性：K ＞Na ④根据原电池或电解池的电极反应判断 a.两种不同的金属构成原电池的两极，负极金属是电子流出的极，正极金属是电子流入的 极，其还原性：负极＞正极。 b.用惰性电极电解混合溶液时,在阴极先放电的阳离子的氧化性较强，在阳极先放电的阴 离子的还原性较强。 ⑤某些物质的氧化性或还原性与外界条件有关 a.温度：如浓硫酸具有强的氧化性，热的浓硫酸比冷的浓硫酸的氧化性更强。 b.浓度：如硝酸的浓度越高，氧化性越强。 c.酸碱性：如KMnO4的氧化性随酸性的增强而增强。 2.相等规律： 在任何氧化还原反应中，氧化剂得到电子的总数与还原剂失去电子的总数相等。此规律应用于解氧化还原反应的计算题、氧化还原反应方程式的配平。
SDS-PAG电泳标准操作规程（网上） 3. 程序: 端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。 3.1.2分离胶的配置 3.122 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内（胶高度距样品模板 梳齿下缘约1cm）。 3.1 . 2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。静置约30min观察胶面 变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸 吸干残留的水液。 3.1.3浓缩胶的配置 混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内（分离胶上方），轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。约30分钟，聚合完全。 3.2.1安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。两块10%勺凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹 形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与 贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。倒入1X tris-gly 电泳缓冲液。 3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80 pl的样品，依次加上20Q 5x buffer （加了B-巯基乙醇），混匀。 对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer （加了B-巯基乙醇）煮沸10分钟。 3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10 p l，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker加 入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。 3.2.4电泳将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。电压调至约150v保持恒压。待溴酚蓝标记移 动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。 3.2.5剥离胶把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。 3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时, 完成后染液倒掉并用水洗掉染液。 3.4. 脱色取出染色过的胶放于加有脱色液的染缸里，脱色液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间 约1小时，本底色脱净，条带清晰可见即可，完成后倒掉脱色液。 3.5. 拍照将脱色后的胶置于透明文件夹中，把胶上面的气泡赶出（用前也可用酒精棉球擦干净文件夹），放到 扫描仪上，拍照。 4. 注意事项 4.1 根据目的蛋白的大小选择合适的胶片浓度。一般为100KD-50KD选用10%交；50KD-30KD选用12%胶； 30KD-10KD选用15%交。4.2 要根据样品浓度来加样品溶解液。每加一个样品后换一支吸头或清洗吸头后再点另一个样品。4.3 制备聚丙烯酰胺凝胶时，倒胶后常漏出胶液，那是因为二块玻璃板与塑料条之间没封紧，留有空隙，所以这步要特别留心操作.4.4 电泳完毕撬板取凝胶时要小心细致不能把胶弄破。 4.5 电泳缓冲液可重复利用，如果胶上出现不正常痕迹，就要及时更换新液。 4.6 分离胶高度控制得当，确保 有大约1cm左右的浓缩胶空间。过长或过短均不能得到理想的电泳结果。 4.7 电泳染色液注意进行回收再利用， 一般可重复使用2-3次。4.8 AP和TEMED是催化剂，加入的量要合适，过少则凝胶聚合很慢甚至不聚合，过多则聚合过
化学氧化性与还原性 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】
第2课时氧化剂和还原剂 一氧化还原反应的表示方法 氧化还原反应中伴有电子转移(得失或偏移)，试分析下述各氧化还原反应中电子转移情况如何 (1)Fe＋2HCl===FeCl2＋H2↑ (2)Fe2O3＋3CO2Fe＋3CO2 答案(1) (2) [归纳总结] 氧化还原反应的表示方法 (1)双线桥法：表示的是反应前后同一元素由反应物转化为生成物时电子转移的结果。双线桥法分析氧化还原反应的步骤： ①标出反应前后有化合价变化的元素的化合价； ②在反应物到生成物之间画一个线桥，箭头出发和指向的是有化合价变化的同一种元素； ③分析化合价的变化，找出反应中得失电子的总数(有价态变化的元素的一个原子转移的电子数×发生价态变化的原子个数)； ④将转移的电子数标在线桥上，并注明得失。如： (2)单线桥法：表示的是反应前后不同元素原子的电子转移情况。单线桥法分析氧化还原反应的步骤： ①标出反应前后有化合价变化的元素的化合价； ②用线桥将反应物中失电子的元素和得电子的元素连接起来，箭尾指向失电子的元素，箭头指向得电子的元素。注意：线桥只在反应物中，不跨越“===”与生成物相连。 ③在线桥上注明电子转移的数目。注意：只写数目，不标得失。 如： 二氧化剂和还原剂 1．有关概念 (1)氧化剂是得到电子(或电子对偏向)的物质；还原剂是失去电子(或电子对偏离)的物质。 (2)氧化反应是元素化合价升高的反应；还原反应是元素化合价降低的反应。
(3)氧化性是氧化剂得到电子的能力或性质；还原性是还原剂失去电子的能力或性质。 (4)氧化产物是还原剂被氧化后所对应的产物；还原产物是氧化剂被还原后所对应的产物。 （5）氧化剂++氧化产物 对应生成物 氧化性：氧化剂大于氧化产物氧化剂大于还原剂 还原性：还原剂大于还原产物还原剂大于氧化剂 例：2KMnO4+16HCl=2KCl+2MnCl2+5Cl2+8H2O 氧化性；KMnO4大于Cl2 还原性；HCl大于MnCl2 2．概念之间的关系 氧化还原反应中，氧化剂得到电子，所含元素的化合价降低，氧化剂发生还原反应，对应产物为还原产物；还原剂失去电子，所含元素的化合价升高，还原剂发生氧化反应，对应产物为氧化产物。3．中学阶段常用作氧化剂的物质有O2、Cl2、浓硫酸、硝酸、高锰酸钾、H2O2、FeCl3等。常用作还原剂的物质有活泼的金属单质如Al、Fe、Zn、Na等，以及C、H2、CO等。 15．已知R x O＋MnO＋H＋―→RO2＋Mn2＋＋H2O变化过程中，参加反应，共转移电子。 (1)反应的氧化产物为________。 (2)x＝________。 (3)参加反应的氢离子的物质的量为________。 答案(1)RO2(2)2(3) 解析(1)反应时转移了电子，即1molR x O反应时转移了2mol电子。 因为Mn元素化合价降低，所以R化合价升高。 (2)R x O～x O2～2e－ 设R x O42-中R的化合价为a ax-8=-2x(4-a)=2联立解得：x=2所以只有x＝2时成立。 (3)根据得失电子守恒：n(R x O)×2＝n(MnO)×5 n(R x O)∶n(MnO)＝5∶2， 又根据元素守恒(或电荷守恒)推出各物质的化学计量数，从而配平方程式： 5R2O＋2MnO＋16H＋===10RO2＋2Mn2＋＋8H2O，
第2课时 氧化剂和还原剂 一 氧化还原反应的表示方法 氧化还原反应中伴有电子转移(得失或偏移)，试分析下述各氧化还原反应中电子转移情况如何？ (1)Fe ＋2HCl===FeCl 2＋H 2↑ (2)Fe 2O 3＋3CO=====△ 2Fe ＋3CO 2 答案 (1) (2) [归纳总结] 氧化还原反应的表示方法 (1)双线桥法：表示的是反应前后同一元素由反应物转化为生成物时电子转移的结果。双线桥法分析氧化还原反应的步骤： ①标出反应前后有化合价变化的元素的化合价； ②在反应物到生成物之间画一个线桥，箭头出发和指向的是有化合价变化的同一种元素； ③分析化合价的变化，找出反应中得失电子的总数(有价态变化的元素的一个原子转移的电子数×发生价态变化的原子个数)； ④将转移的电子数标在线桥上，并注明得失。如：
(2)单线桥法：表示的是反应前后不同元素原子的电子转移情况。单线桥法分析氧化还原反应的步骤： ①标出反应前后有化合价变化的元素的化合价； ②用线桥将反应物中失电子的元素和得电子的元素连接起来，箭尾指向失电子的元素，箭头指向得电子的元素。注意：线桥只在反应物中，不跨越“===”与生成物相连。 ③在线桥上注明电子转移的数目。注意：只写数目，不标得失。 如： 二氧化剂和还原剂 1．有关概念 (1)氧化剂是得到电子(或电子对偏向)的物质；还原剂是失去电子(或电子对偏离)的物质。 (2)氧化反应是元素化合价升高的反应；还原反应是元素化合价降低的反应。 (3)氧化性是氧化剂得到电子的能力或性质；还原性是还原剂失去电子的能力或性质。 (4)氧化产物是还原剂被氧化后所对应的产物；还原产物是氧化剂被还原后所对应的产物。 （5）氧化剂++氧化产物 氧化性：氧化剂大于氧化产物氧化剂大于还原剂 还原性：还原剂大于还原产物还原剂大于氧化剂 例：2KMnO4+16HCl=2KCl+2MnCl2+5Cl2 +8H2O 氧化性；KMnO4大于Cl2 还原性；HCl大于MnCl2 2．概念之间的关系 氧化还原反应中，氧化剂得到电子，所含元素的化合价降低，氧化剂发生还原反应，对应产物为还原产物；还原剂失去电子，所含元素的化合价升高，还原剂发生氧化反应，对应产物为氧化产物。3．中学阶段常用作氧化剂的物质有O2、Cl2、浓硫酸、硝酸、高锰酸钾、H2O2、FeCl3等。常用作还原剂的物质有活泼的金属单质如Al、Fe、Zn、Na等，以及C、H2、CO等。
SDS-PAGE电泳原理： 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯 酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。 SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。 TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。 过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。 SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。 1.蛋白样品浓缩效应 在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，pH8.3)、浓缩胶缓 冲液(Tris—HCl，pH6.8)、分离胶缓冲液(Tris—HCl，pH8.8)，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝6.0，pK a=9.7)只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。这些离子在电泳时都向正极移动。C1—速度最快(先导离子)，其次为蛋白质，Gly 负离子最慢(尾随离子)。由于C1—很快超过蛋白离子，因此在其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域，该区电位梯度最高，这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续性，导致蛋白质和Gly 离子加快移动，结 果使蛋白质在进入分离胶之前，快、慢离子之间浓缩成一薄层，有利于提高电泳的分辨率。 2.分子筛效应 蛋白质离子进入分离胶后，条件有很大变化。由于其pH 升高(电泳进行时 常超过9.0)，使Gly 解 离成负离子的效应增加；同时因凝胶的浓度升高，蛋白质的泳动受到影响，迁移率急剧下降。此两项变化，使Gly 的移动超过蛋白质，上述的高电压梯度不复 存在，蛋白质便在一个较均一的pH 和电压梯度环境中，按其分子的大小移动。分离胶的孔径有一定的大小，对不同相对分子质量的蛋白质来说，通过时受到的阻滞程度不同，即使净电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把不同大小的蛋白质相互分开。
垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 一、实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。 二、实验原理 蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。 聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris —HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。 如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。蛋白质分子量愈小，在电场中移动得愈快；反之，愈慢。蛋白质的分子量与电泳迁移率之间的关系是： M r =K(10-b·m) logM r =LogK—b·R m ， 式中M r ——蛋白质的分子量； logK——截距； b——斜率； R m ——相对迁移率。 实验证明，蛋白质分子量在15,000—200,000的范围内，电泳迁移率与分子量
SDS-PAGE 一. 实验原理 SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。 二. 试剂器材 30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制； 注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。 分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；
蛋白质亚基分子量测定SDS-PAGE凝胶电泳 一目的 掌握SDS-PAGE凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量的基本原理和操作方法 二原理 SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。 因此，在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。 基于上述SDS-PAGE的原理介绍，我们可以利用SDS-PAGE电泳进行未知蛋白质的分子量测定；以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校正曲线，然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量 三试剂和器材 试剂：1低分子量标准蛋白质 2 待测蛋白质样品（用上次测定的可溶性蛋白样液） 3 凝胶贮液：30g丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，溶于100ml蒸馏水中，过滤，于4°暗处贮存，一个月内使用 4 1mol/l，PH8.8 Tris-HCl 缓冲液，Tris121g溶于蒸馏水，用浓盐酸调至PH8.8，以蒸馏水定容至1000ml 5 10%(w/v)SDS 6 10%(w/v)过硫酸铵溶液（当天配） 7 四甲基乙二胺（TEMED） 8 电极缓冲液PH8.3：Tris30.3g，甘氨酸144.2g，SDS 10g，溶于蒸馏水并定容至1000ml,使用时稀释10倍。 9 2×样品稀释液：SDS 500mg,巯基乙醇1ml ,甘油3ml, 溴酚蓝4mg，1mol/L Tris-HCL (pH6.8)，用蒸馏水溶解并定容至10ml，按每份1ml分装，可在4℃存放数周，或在-20℃保存数月。以此液制备样品时，样品若为液体，则加入与阳平等体积的原液混合即可。 10 固定液：500ml 乙醇，100ml冰醋酸，用蒸馏水定容至1000ml 11 脱色液：250ml乙醇，80ml冰醋酸，用蒸馏水定容至1000ml 12 染色液：0.29g考马斯亮蓝R-250溶解在250ml脱色液中 器材：微量进样针，电泳仪，电泳槽 四操作步骤 1分离胶制备： 凝胶浓度5% 7.5% 10% 12.5% 15% 凝胶贮液ml 5 7.5 10 12.5 15 1mol/LPH8.8 Tris-HClml 11.2 11.2 11.2 11.2 11.2 水ml 13.7 11.2 1.2 8.7 3.7 10% SDS ml 0.3 10% 过硫酸铵ml 0.1 TEMED (μL) 20 将上述胶液配好，混匀后，迅速加入两块玻璃板间隙中，使胶液面与矮玻璃和高玻璃之间形
氧化性还原性强弱的判 断方法 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
氧化性，还原性强弱的判断方法 （一）根据氧化还原反应的方向判断? 氧化剂（氧化性）+还原剂（还原性）===还原产物+氧化产物? 氧化剂--得电子--化合价降低--被还原--发生还原反应--还原产物? 还原剂--失电子--化合价升高--被氧化--发生氧化反应--氧化产物? 氧化性：氧化剂>氧化产物? 还原性：还原剂>还原产物? 氧化性：氧化剂>还原剂还原性：还原剂>氧化剂 （二）根据元素活动性顺序比较? （1）金属活动顺序： K>Ca>Na>Mg>Al>Mn>Zn>Cr>Fe>Ni>Sn>Pb>(H)>Cu>Hg>Ag>Pt>Au? 从左到右，金属还原性逐渐减弱，对应阳离子氧化性逐渐增强 （2）非金属活动性顺序（常见元素）?：F---Cl---Br---I---S? 从左到右，原子（或单质）氧化性逐渐减弱，对应阴离子还原性增强? 氧化性：F 2>Cl 2 >Br 2 >Fe3+>I 2 >SO 2 >S 还原性：S2->SO 3 2->I->Fe2+>Br->Cl->OH->含氧 酸根>F- （三）根据反应条件判断，当不同氧化剂分别于同一还原剂反应时，如果氧化产物价态相同，可根据反应条件的难易来判断。反应越容易，该氧化剂氧化性就强。? （四）根据氧化产物的价态高低来判断? 当含有变价元素的还原剂在相似的条件下作用于不同的氧化剂时，可根据氧化产物价态的高低来判断氧化剂氧化性强弱。 （五）根据元素周期表判断? （1）同主族元素（从上到下）? 非金属原子（或单质）氧化性逐渐减弱，对应阴离子还原性逐渐增强。?
物质氧化性和还原性相对强弱的判断方法 李瑞臣七台河市高级中学2006年3月 物质的氧化性、还原性的强弱与得失电子的难易程度有关，而与得失电子数目的多少无关。得电子能力越强，其氧化性就越强；而失电子能力越强，其还原性就越强。那么如何根据一些相关的信息判断物质氧化性和还原性相对强弱？可以从以下几个方面入手： 1．根据物质的活动性顺序进行判断： ①根据金属活动性顺序进行判断： K、Ca、Na、……、Zn、Fe、……、Cu、Hg、Ag 在金属活动性顺序表中，金属的位置越靠前，其还原性就越强；金属的位置越靠后，其阳离子的氧化性就越强。（注意：上面说的阳离子中Fe有+2、+3两种价态，其中+2价按正常位置排列，但+3铁的氧化性在Cu2+、Hg2+之间，即：氧化性Cu2+ < Fe3+ < Hg2+） ②根据非金属活动性顺序判断： 氧化剂的氧化性越强，则其对应的还原产物的还原性就越弱；还原剂的还原性越强，则其对应的氧化产物的氧化性就越弱。对单质而言，非金属单质的氧化性越强，对应阴离子的还原性越弱，非金属单质的氧化性越弱，对于阴离子的还原性越强；金属单质的还原性越强，对于阳离子的氧化性越弱，金属单质的还原性越弱，对于阳离子的氧化性越强。 2．根据化学方程式进行判断： 氧化性：氧化剂>氧化产物；
还原性：还原剂>还原产物。 例如：已知2FeCl2+Cl2=2FeCl3；2FeCl3+Cu=2FeCl2+CuCl2；则Fe3+、Cl2、Cu2+ 中氧化性由强到弱的顺序正确的是：Cl2＞Fe3+＞Cu2+ 3．根据氧化还原反应进行的难易程度（或剧烈程度）的不同进行判断：氧化还原反应越容易进行(表现为反应所需条件越简单)，则氧化剂的氧化性和还原剂的还原性就越强。 例如：2Na+2H2O＝2NaOH+H2↑，Mg+2H2O Mg(OH)2+H2↑ 前者比后者容易发生，可判断还原性：Na>Mg 再如：Cu+4HNO3(浓)=Cu(NO3)2+NO2↑+2H2O 3Cu+8HNO3(稀)=3Cu(NO3)2+2NO↑+4H2O 前者比后者反应剧烈，可判断氧化性：浓HNO3> 稀HNO3 4．根据使其它物质被氧化或被还原价态的不同进行判断 例如：Cu+Cl2CuCl2，2Cu+S Cu2S， 根据Cl2、S分别与Cu反应，使Cu被氧化的程度不同（Cu2+, Cu+），可判断出单质的氧化性：Cl2>S 5．根据元素的价态判断： 物质中元素具有最高价，则该元素只有氧化性；物质中元素具有最低价时，该元素只有还原性；物质中元素具有中间价时，该元素既有氧化性又有还原性。一般，对于同一种元素，价态越高，其氧化性就越强；价态越低，其还原性就越强（正价的卤素相反）。 例如：氧化性：Fe3+>Fe2+，H2SO4（浓）>H2SO3，（特例：HClO > HClO3 > HClO4） 还原性：Fe>Fe2+，S2->S>SO2 6．根据反应条件判断： 一般溶液的酸性越强或温度越高或浓度越大，则氧化剂的氧化性和还原剂的还原性就越强，反之则越弱。 如：①温度：氧化性热的浓H2SO4>冷的浓H2SO4 ②浓度：氧化性浓HNO3>稀HNO3；浓H2SO4>稀H2SO4 还原性浓盐酸>稀盐酸。 ③酸碱性：如KMnO4溶液的氧化性随溶液的酸性的增强而增强。一般来讲KMnO4、KCr2O7、KClO3氧化HCl中的Cl-，不能氧化NaCl中的Cl_。NO3-在酸 性条件下有强氧化性，氧化SO 32-、S2- 、Fe2+、I_ 。SO 3 2-、S2-在H+不共存。 当不同的氧化剂(或还原剂)作用于同一还原剂(或氧化剂)时，氧化产物(或还原产物)价态相同，可根据反应条件的难易进行判断，条件越简单，氧化性(或还原性)越强。 ①MnO2+4HCl(浓)MnCl2+Cl2↑+2H2O ②2KMnO4+16HCl(浓)=2KCl+2MnCl2+5Cl2↑+8H2O
氧化性和还原性强弱的判断 一、氧化性和还原性概念的判断方法 物质给出（失去）电子的性质称为还原性，还原剂是电子的给予体。物质接受（得到）电子的性质称为氧化性，氧化剂是电子的接受体。那么怎样才能判断物质能否给出或接受电子呢？由于给出或接受电子会引起化合价的变化，所以从物质中元素所处化合价高低就可以进行判断。规律是：元素处于最高价，不可能给出（失去）电子，只具有氧化性；元素处于最低价，不可能接受（得到）电子，只具有还原性；元素处于中间价态，既可能给出（失去）电子，又可能接受（得到）电子，故既有氧化性又有还原性，但反应时主要呈现一种性质。物质中若含有多种元素，其性质则是这些元素性质的综合体现。 例1. 下列变化需要加还原剂才能实现的是（ ） A M n O Mn B Cl Cl C H S SO D Fe Fe (422) 22 2-+-+→→→→ 分析：本题要求加还原剂才能实现，即物质本身作氧化剂，也就是说元素化合价从高价变为低价，不难发 现A 、D 选项是正确的。 二、氧化性和还原性强弱的判断依据 1. 根据元素在周期表中的位置确定 元素在周期表中越是位于左下方，其单质的还原性越强，其阳离子的氧化性越弱；元素在周期表中越是位于右上方，其单质的氧化性越强，其阴离子的还原性越弱。 2. 根据单质活动顺序确定 （1）金属活动性顺序（常见元素） 金属原子还原性（由强到弱）：K Ca Na Mg Al Zn Fe Sn Pb (H) Cu Hg Ag Pt Au 对应阳离子氧化性（由弱到强）：K Ca Na Mg Al Zn Fe Sn ++++++++223222 Pb H Cu Fe Hg Ag 2232++++++() （2）非金属活动顺序（常见元素） 非金属原子氧化性：F>Cl>Br>I>S 对应阴离子还原性：F Cl Br Fe I S ---+--<<<<<()22 3. 根据氧化还原方程式确定 通常情况下，氧化还原反应（电解除外）总是向着氧化性和还原性减弱的方向进行的——即“强强生弱弱”： 失电子，化合价升高，被氧化 强氧化剂+强还原剂→弱还原剂+弱氧化剂 （还原 产物）（氧化产物） 得电子，化合价降低，被还原 氧化性：氧化剂>氧化产物 还原性：还原剂>还原产物 这一规律正如较强的酸可以制取较弱的酸，较强的碱可以制取较弱的碱那样，较强的氧化剂可以制取较弱的氧化剂，较强的还原剂可以制取较弱的还原剂。
SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。 强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。 在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS 结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。 聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。 不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS 电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。 注意问题 1.样品处理 上样缓冲液的作用：形成SDS-蛋白复合物，使其带负电；SDS和巯基乙醇使蛋白质解离，综上两点为了在电泳中，只根据分子量来分离。 SDS作用：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠，还有助溶剂的作用。 2. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用 （1）浓缩与分离胶凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关。 3. 提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径 待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。 4. .“微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因 主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。 5. “皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。 处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。 6. 带出现拖尾现象 主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。 处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。 7. 带出现纹理现象 主要是样品不溶性颗粒引起的。
氧化性和还原性强弱比较方法 1、以原子结构为依据： 例如，比较Na+、Mg2+、Al3+的氧化性强弱。Na+、Mg2+、Al3+三种微粒电子结构相同，但核电核数依此增大，微粒半径依此减小，故氧化性由强到弱的顺序为Al3+＞Mg2+＞Na+ 2、以元素在周期表中的位置为依据 ⑴同主族元素从上到下原子还原性增强（氧化性减弱），离子氧化性减弱（还原性增强） ⑵统周期元素，从左向右原子还原性减弱，氧化性增强。 3、根据氧化－还原程度的大小判断 ⑴不同氧化剂与同一还原剂反应，看还原剂被氧化的程度。使其呈高价态者氧化性强。 ⑵不同还原剂与同一氧化剂反应，看氧化剂被还原的程度。使其呈低价态者还原性强。 4、由强到弱——依据自发的氧化还原反应 对于氧化－还原反应一般有如下对应关系：氧化剂＋还原剂＝还原产物＋氧化产物。 则氧化性：氧化剂＞氧化产物，还原性：还原剂＞还原产物。 如根据：K2CrO7+14HCl(浓)=2KCl+CrCl3+Cl2↑+7H2O 可以判断 在酸性条件下，氧化性：K2CrO7＞ Cl2，还原性：HCl＞ CrCl3 5、依据金属活动性顺序判断 按照金属活动性顺序，排在前面的金属元素其原子的还原性强，排在后面的金属元素其阳离子的氧化性强。 例如，还原性Na>Mg>AI, 氧化性Cu2+>H+>Zn2 6、根据非金属活动性顺序比较． 如，按F、 O 、CI、 Br 、I 、S的顺序从左向右原子氧化性减弱，而相应的阴离子的还原性却逐渐增强。 7、根据和同一物质反应的难易程度或者反应的剧烈程度 就如金属性强弱的判断、非金属性的强弱判断方法。譬如：二氧化锰、高锰酸钾、氧气都可以制备氯气，但条件不一样，很容易判断。 常温下KMnO4可将HCI氧化为CI2，而MnO2则需加热才能将HCI氧化为CI2，因此得知氧化性：KMnO4>MnO2 8、根据原电池、电解池的电极反应判断 ⑴两种不同的金属构成原电池的两极，还原性：负极金属＞正极金属（一般情况） ⑵在电解过程中，氧化性越强的金属阳离子优先在阴极放电，还原性强的非金属阴离子优先在阳极放电。 9．氧化性、还原性强弱与外界条件有关 (1) 浓度。一般而言，同种氧化剂浓度大者氧化性强。如氧化性：浓HNO3>稀HNO3 (2)温度。升高温度氧化剂氧化性增强，还原剂还原性也增强。反之，可根据温度条件判断氧化性和还原性强弱。 (3)溶液得酸碱度。一般在酸性环境下，氧化性较强，如酸性KMnO4或酸性K2CrO7，相反，很多物质的还原性在碱性条件下较强 10．根据微粒得失电子放出（或吸收）的能量判断 当几种原子获得相同的电子数形成稳定结构的阴离子时，放出的能量越大或形成的离子稳定性越强，则该原子的氧化性越强，反之越弱；同理，当失去电子也一样。 注意一：物质的强弱是相对的，有时浓度、温度以及介质发生了改变，其氧化性或还原性的强弱顺序会发生逆转的！ 注意二：常温或高温下能分解得到氧气的物质，氧化性往往很强，譬如：氯酸钾、次氯酸、双氧水、臭氧、硝酸钾、高锰酸钾。
十招比较氧化性、还原性强弱 氧化性、还原性的强弱即物质得、失电子能力强弱。得电子能力强的物质氧化性强，失电子能力强的物质还原性强，且氧化性、还原性的强弱只与该物质得失电子的难易程度有关，而与得失电子数目的多少无关。氧化性和还原性的相对强弱是物质的本性，但也与外界的诸多因素有关，我们一般比较氧化性和还原性时往往针对的是物质在外界因素相近的情况。中学常见有如下比较方法： （1）直接比较： 如果两种待比较的物质能够直接发生氧化还原反应，充当氧化剂的物质比充当还原剂的物质的氧化性要强。如需比较硫和氧气的氧化性强弱时，直接根据硫在氧气中燃烧生成二氧化硫的反应，可以判断氧气的氧化性比硫的氧化性要强。 （2）根据物质所含元素化合价的高低判断：对于同种元素的不同价态而言，一般价态越高，其氧化性就越强，价态越低，还原性就越强。 如：氧化性 FeCl3 >FeCl 2、 KMnO 4> K 2MnO 4 >MnO2 >Mn 2+；这里需注意的是：一，必须是指不同物质中的同种元素；二，存在一组特殊物质——卤素含氧酸。例如高氯酸、氯酸、亚氯酸、次氯酸的氧化性顺序却恰好相反，次氯酸氧化性最强，高氯酸氧化性最弱。 （3）根据产物中化合价的变化情况判断： 几种氧化剂和同种还原剂发生反应，氧化产物中所含元素化合价升高的越多，对应的氧化剂氧化性越强。例如：氯气和硫分别可以和铁发生反应，分别生成氯化铁和硫化亚铁。氯化铁中铁元素的化合价为 +3 价、硫化亚铁中铁的化合价为 +2 价，由此可以判断：氯气的氧化性比硫的氧化性强。 （4）可根据氧化还原规律比较： 在氧化还原反应中：氧化性：氧化剂> 氧化产物；还原性：还原剂 >还原产物。 运用这个规律时应当注意，该规律一般适用于溶液中的氧化还原反应，如果在高温或者加热时的氧化还原反应，有可能不符合这个规律。例如：在溶液中，铁和盐酸反应生成氢气，此时，铁是还原剂、氢气是还原产物，得到结论：还原性Fe>H2；而在加热时，氢气与氧化铁反应可得到单质铁，此时氢气是还原剂，铁是还原产物，得到结论：还原性 H2> Fe o那么到底如何比较氢气和铁的还原性强弱呢？正是由于该规律的适用条件，我们才能确定：一般来说，铁的还原性大于氢气。 （5）根据金属活动顺序表： 一般来说，金属的位置越靠前，其还原性就越强；金属的位置越靠后，其阳离子的氧化性就越强。 运用这种方法比较时要注意一种特殊的离子Fe3+, Fe3+的氧化性比Ag+和Hg2+都要弱。 阳离子氧化性强弱顺序一般为： Hg2+>Ag +>Hg 22+>Fe3+ >Cu2+>H +>Pb2+>Sn2+>Fe2+>Zn2+>Al 3+>Mg2+>Na+>Ca2+>K+ （6）根据反应条件或反应现象进行比较： 同一还原剂与不同的氧化剂反应时，所需条件越简易，说明氧化剂的氧化性越强；所需条件越苛刻，则对应氧化剂的氧化性越弱。例如，高锰酸钾、二氧化锰、氧气分别与氯化氢发生反应的条件是：常温、加热、高温和催化剂，根据反应条件的难易判断，高锰酸钾的氧化性最强、氧气的氧化性最弱。又如不同的金属与同一种酸反应时，反应现象越剧烈，则说明该金属的还原性越强。 运用这种方法比较氧化性或还原性的强弱时要注意“两同”；一是同种参照物、二是除了需比较的因素外其他因素必须相同。 （7）利用元素周期表： 根据元素金属性、非金属性与物质氧化性、还原性的关系判断。一般来说， ①同周期从左到右，元素金属性越来越弱，对应的金属还原性也越来越弱，非金属性越