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高效液相色谱仪Waters 工作站 Empower2_现场培训教材

高效液相色谱仪Waters 工作站  Empower2_现场培训教材
高效液相色谱仪Waters 工作站  Empower2_现场培训教材

Empower 2 软件现场培训教材

(第三版)

沃特世科技(上海)有限公司

沈晓峰

2008年11月

目录

EMPOWER软件概述1

一.登录1二.P RO 界面主要组件的介绍3三.新建项目6

EMPOWER软件数据采集与处理11

一.概述11(一)方法组11(二)数据采集与处理的流程12二.数据的采集14(一)平衡系统样14(二)单个运行样品19(三)样品组运行样品20三.数据的处理24(一)利用处理方法向导建立处理方法24(二)修改样品信息30(三)定量计算34四.数据报告的打印39

系统管理43

一.系统配置43(一)查看色谱系统43(二)色谱系统管理43二.数据管理48(一)项目的备份48(二)项目的还原51

附录3D数据的处理55

(一)建立处理方法55(二)修改样品信息62(三)定量计算67

Empower软件概述一.登录

1.双击电脑桌面上的Empower图标

选择用户类型(提示:Empower 2 可以为一个用户分配多种身份,如果为您在建立用户的时候为该用户分配了多个身份,在每次登录的时候可以选择进行本次任务所使用的用户类型。系统默认的用户System只有一个“管理员”的身份。),首次登录时请选择您所在的时区(中国的时区为“PRC”),并选择所需的登录界面,然后单击确定。

关于不同的用户界面,请参阅下面的说明:

l QuickStart 为单一窗口界面,它将用户需要使用的所有功能置于同一个单一界面中,以简洁明确的方式提供了进行色谱分析需要的所有功能。用户甚至可以用QuickStart 界面进行包括PDA和质谱数据提取在内的分析方法开发工作,还能灵活地定制报告和管理数据。

l Pro 界面是进行系统管理的完美界面,可以控制所有软件功能。

l Open Access 界面适合没有任何色谱经验的初学者使用,使用者只需要选择方法、样品数,然后点击鼠标运行即可。

l Web 界面可以使远程用户或移动用户通过互联网或企业内部网方便地访问色谱系统中的信息。

本教程使用Pro 界面,请选择登录”Pro 界面”完成随后的操作。

二.Pro 界面主要组件的介绍

(一)“配置系统”界面

选择“Pro 界面”上的“配置系统”窗口,即可进入“配置管理器”界面,该界面用

于执行系统管理任务(例如创建项目和自定义字段、配置采集服务器和色谱系统、

管理光谱和化学结构库、管理用户、备份及还原项目和Empower 数据库、定

义样品板的物理属性(用于进样)),管理电子记录和签名设置(审计追踪),以

及管理项目和样品档案。

(二)“浏览项目”界面

单击Pro界面上的“浏览项目”,即可进入“浏览项目”界面,该界面可提供对每个项目的访问并充当关系数据库和Empower 之间的链接。使用“项目”窗口中的菜单、筛选视图和工具,可以处理、查看、报告和管理项目数据。

(三)“运行样品”界面

单击Pro界面的“运行样品”窗口,即可进入“运行样品”界面。

该界面用于运行样品以采集数据。Empower 依靠方法组(其中包括仪器方法)将控制和采集参数传递给已配置的色谱系统中的仪器,例如泵的流量或检测器的波长。它还依靠样品组方法来指定要运行的样品的数量和顺序,每个样品要应用的功能(如“标准进样”或“样品进样”),样品的运行模式,进行平衡、校正和定量的时间以及要使用的方法组或报告方法等等。

三.新建项目

项目是方法、结果、自定义字段、视图筛选器和原始数据的集合,由用户定义。该集合驻留在Empower数据库中并在“浏览项目”中显示。

建立项目是为了方便用户归类、管理和检索相应的数据,所以需根据实际情况来决定是否建立,而并不是每次开机都要创建。

1.进入到Emopwer 2 的Pro 界面,双击“配置系统”窗口。

2.出现配置管理器窗口。

3.选择菜单“文件-新建-项目”。

4.出现“新项目向导”的对话框:

在此对话框,需要确定项目是位于项目根目录中,还是为项目层次结构的一部分(作为父项目的一个子项目)。这种层次结构允许您将多个项目组织在一个公用项目结构中。

备份父项目及子项目时,该层次结构保持不变。

提示:在项目层次结构中选择要创建新项目的位置。要将项目创建为新的顶级项目,请单击“项目”文件夹。要将项目创建为现有项目的子项目,请单击一个现有项目文件夹。该现有项目即被指定为父项目,而新项目即作为该父项目的子项目进行创建。

5.单击“下一步”,出现“新建项目向导-表空间”,如下图所示:

在此向导步骤中,“表空间”中接受50MB的表空间缺省设置。

在该向导步骤中,系统默认设置了“支持‘全面审计追踪’”。“审计追踪”将对项目元素(如方法和样品)的所有修改进行记录。选中该复选框之后,还要再选择是否需要对“方法”、“结果”、“样品”和“删除”等更改进行记录。

提示:“完全审计追踪”功能用于符合法规的要求,如果有法规要求必须选择。

在数据处理技术区域,可以设定允许使用该项目的ApexTrack 积分与否,并可选择数据处理积分的类型——ApexTrack 或“传统”,以用作缺省算法。小

如果不需要,可取消“支持‘完全审计追踪’”复选框,以取消对项目元素(如方法和样品)所做的所有修改的记录。如需要,则选中该复选框之后,还再选择是否需要对“方法”、“结果”、“样品”和“删除”等的更改进行注释。

提示:Empower 提供两种数据处理技术,传统积分和ApexTrack 积分。每种技术都使用专用的积分算法,因此处理数据时各不相同。ApexTrack 在峰的顶点而非峰起点检测峰值。ApexTrack 根据曲率检测顶点(二阶导数)。反之,传统积分在峰起点通过斜率检测峰值(一阶导数)。

ApexTrack 积分检测峰和定位基线的方法与“传统”积分方法的不同之处主要体现在以下几个方面:

l ApexTrack 使用色谱的二阶导数检测峰。(传统积分使用斜率阈值(一阶导数)检测峰。)

l峰检测参数独立于基线位置参数。(对于“传统”积分则不是这样。)

l搜索算法从每个峰的顶点开始,向下向外计算,画出基线。当展开的基线相遇并融合时,簇即被确定。

l ApexTrack 提供肩峰检测、改进的负峰检测和积分以及高斯切削。

设置完成后,单击“下一步”。

6.出现“新建项目向导-选项”页。选择用于本项目的选项。单击“下一步”。

Waters 提供扩展Empower 功能的多种选项。除PDA 和MS 选项之外,这些选项均需要用另外的密钥盘进行安装。安装了这些选项后,您可以在项目中启用它们。

提示:如果无法确定适当的设置,请接受默认选项。

7.出现“新建项目向导-访问控制”页。

根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限的用户和用户组,或者接受缺省的选项,然后单击“下一步”。

提示:如果无法确定适当的设置,请接受默认选项。

8.在“复制”页中,

接受默认的选项,然后单击“下一步”。

此页的复制是指从另一个项目复制现有设置。可以复制项目的“视图筛选器”、“自定义字段”、“方法”和“参数”。

关于视图筛选器和自定义字段的含义,请参阅Empower 帮助的“处理项目”与“自定义项目”内容。

9.在“新建项目向导-输入名称”页中,

输入项目的名称,最后单击“完成”来结束新项目的创建。

提示:项目名中不能出现空格。可使用下划线(_ ) 分隔词。另外,名称不能以数字和中文字符开头。如果在前面选中了“完全审计追踪”选项,则需要在注释框输入注释。

Empower软件数据采集与处理

一.概述

(一)方法组

在Empower软件中,必须在建立了适当的方法组后,才能采集数据。

方法组是用户定义的方法和数据通道的集合。方法组可以包括:

l用于采集数据以收集数据的仪器方法(“只运行”模式)

l用于收集并处理数据的仪器和处理方法(“运行并处理”模式)

l用于收集、处理并报告数据的仪器、处理和报告方法(“运行并报告”模式)

l用于导出数据的ASCII 或AIA 数据文件(可选)的导出方法

对于不同的方法类型的详细说明如下:

仪器方法用于指定仪器控制和数据采集参数,如流量和波长。仪器包括泵、溶剂管理系统、检测器、自动进样器、样品管理系统和气相色谱仪。可设置仪器方法以执行以下任务:l采集数据

l设置初始条件以平衡系统

l平衡色谱柱

l清洗自动进样器管路和检测器流动池

l通过设置清洗条件、关闭灯等来关闭系统

样品组方法包含一组函数和相关信息,用于指定从一组样品瓶中的每个样品瓶(标准样或未知样)采集数据的参数。

提示:如果每天都运行同一类型的样品,则可创建一个样品组,这样每次运行时只需修改其中具有新样品名的样品。

处理方法包括一组指令,用于定义Empower 如何对来自2D 通道或3D 提取通道的数据进行处理。可选择是使用ApexTrack 还是“传统”积分处理数据。处理方法用于执行以下任务:

l通过确定每个峰的峰开始和峰结束(“传统”积分)或者确定峰顶点(ApexTrack 积分)对峰积分

l定义软件如何校正标准样和定量未知样

l校正标准样并为色谱中每个组份生成校正曲线和结果

l定义被校正组份的组份含量或浓度

l定量未知样品(和QC 控制样品)并生成结果。

l将要对其峰进行积分的组份分组为一个组份

l为测试定义系统适应性计算,并为每一组份定义允许值范围

l定义PDA 处理参数以生成峰纯度和谱库匹配结果

l定义色谱匹配处理参数,将选定的2D 色谱指定为色谱匹配参比,并启用色谱匹配处理

l定义MS 处理方法参数,以生成库匹配结果并执行MS 内标校正

l定义GPC、GPCV 或GPC-LS 处理参数,以计算样品的分子量分布、粘度通道的固有粘度、长链、短链以及星形聚合物分支。

l计算检测器噪音和漂移参数

报告方法作为在生成的报告中组织数据、结果、校正曲线及方法内容的模板。报告方法与报告包含的任何数据无关。报告可包括已处理的或未处理的数据。

提示:可使用单个或综合报告方法来创建报告。单个报告为每个选定数据类型创建一个报告。综合报告则将一组选定数据的信息合并到一个报告中。该报告取决于要报告的数据。可用不同的报告方法组合相同的数据以创建不同的报告。例如,一个报告可以包含自己文件所要的信息,另一个报告可以记录法规符合性信息并设定其格式。

导出方法指定要用于导出数据的数据文件格式。已处理或未处理的数据均可以导出。文件格式包括ASCII、AIA、OpenLynx、PDF 或EMF。

(二)数据采集与处理的流程

对样品的结果处理和报告可以通过两种方式进行:

方法A:先建立方法组再进样,由系统自动进行结果处理和报告等操作。

方法B:先建立方法组中的仪器方法,然后进样,再在所得的结果的基础上建立结果处理、报告方法等,计算出结果,打印报告

1.方法A具体的流程:

这种方法的逻辑关系比较明确,非常容易理解,适用于进行大量重复分析工作的实验室,例如质量控制(QC)实验室。

2.方法B具体流程:

方法B的关键在于不是一下子建立好所有的方法,而是逐步地建立起方法组中的各个方法。但对于一些研究性的实验室,由于在开始分析的时候,对被分析的样品产生的结果还不了解,无法预先设定好所有的方法。在这种情况下,就可以采用方法B中的流程。

注意:

以下我们都将会按照方法B的流程进行相关的介绍。如果您需要按照方法A的流程进行工作,只需要参照后面的介绍,在运行样品前建立好所有的方法即可。

二.数据的采集

使用“运行样品”可完成下列任务:

控制仪器、更改仪器参数以及将更改保存到仪器方法中。

监视基线并查看数据(波长或光谱)的实时图。

加载样品(单个样品或样品组)。

从单一进样或样品组采集数据。

(一)平衡系统样

1.登录Empower2 的Pro 界面,选择运行样品窗口。

2.出现如下对话框,在左侧选择项目,在右侧选择对应的色谱系统,然后单击“确定”。

3.进入运行样品窗口。

4.选择

“新建”,会出现仪器方法编辑器。

b.窗口会为所选色谱系统中的每个仪器显示一个图标。选中不同的图标,即可编辑相应的仪器参数。请根据您的实验方法设置相应的每个仪器具体参数。

c.编辑仪器参数完成后单击“文件”> “另存为”,出现“保存仪器方法”对话框。

输入仪器方法名,单击“保存”,保存该仪器方法。

d.关闭“仪器方法编辑器”窗口。

e.新建的仪器方法出现在仪器方法列表中。

6.选中所要的仪器方法,单击“下一步”。

7.出现“选择缺省方法”页。

选择“处理方法”与“报告方法”(按照方法B的流程,接受默认设置,先不建立这两种方法;如果按照方法A的流程,可以在此处先建立“处理方法”、“报告方法”和“导出方法”。),单击“下一步”。

8.出现“命名方法组”页。

高效液相色谱仪Waters 工作站 Empower2_现场培训教材

Empower 2 软件现场培训教材 (第三版) 沃特世科技(上海)有限公司 沈晓峰 2008年11月

目录 EMPOWER软件概述1 一.登录1二.P RO 界面主要组件的介绍3三.新建项目6 EMPOWER软件数据采集与处理11 一.概述11(一)方法组11(二)数据采集与处理的流程12二.数据的采集14(一)平衡系统样14(二)单个运行样品19(三)样品组运行样品20三.数据的处理24(一)利用处理方法向导建立处理方法24(二)修改样品信息30(三)定量计算34四.数据报告的打印39 系统管理43 一.系统配置43(一)查看色谱系统43(二)色谱系统管理43二.数据管理48(一)项目的备份48(二)项目的还原51 附录3D数据的处理55 (一)建立处理方法55(二)修改样品信息62(三)定量计算67

Empower软件概述一.登录 1.双击电脑桌面上的Empower图标

选择用户类型(提示:Empower 2 可以为一个用户分配多种身份,如果为您在建立用户的时候为该用户分配了多个身份,在每次登录的时候可以选择进行本次任务所使用的用户类型。系统默认的用户System只有一个“管理员”的身份。),首次登录时请选择您所在的时区(中国的时区为“PRC”),并选择所需的登录界面,然后单击确定。 关于不同的用户界面,请参阅下面的说明: l QuickStart 为单一窗口界面,它将用户需要使用的所有功能置于同一个单一界面中,以简洁明确的方式提供了进行色谱分析需要的所有功能。用户甚至可以用QuickStart 界面进行包括PDA和质谱数据提取在内的分析方法开发工作,还能灵活地定制报告和管理数据。 l Pro 界面是进行系统管理的完美界面,可以控制所有软件功能。 l Open Access 界面适合没有任何色谱经验的初学者使用,使用者只需要选择方法、样品数,然后点击鼠标运行即可。 l Web 界面可以使远程用户或移动用户通过互联网或企业内部网方便地访问色谱系统中的信息。 本教程使用Pro 界面,请选择登录”Pro 界面”完成随后的操作。

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作 1. 目的:明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作,确保数据的准确性。 2. 范围:适用于安捷伦高效液相色谱仪。 3. 职责:检验人员对此负责。 4.操作规程: 系统组成 本系统由1个溶剂二元输送泵(分主/A泵和副/B泵)、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。 准备 4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相,用合适的μm滤膜过滤,超声脱气20min。 4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。 4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的μm滤膜过滤。 4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常 将待测样品按要求前处理,准备HPLC 所需流动相,检查线路是否连接完好,废液瓶是否够用等。 开机: 4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。4.3.2 打开1200 LC 各模块电源。 4.3.3 待各模块自检完成后,双击[Instrument 1 Online]图标,化学工作站自动与1200LC 通讯,进入的工作站画面如下所示。 4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏],[ 显示状态工具栏],[系统视图],[样品视图],使其命令前有[√]标志,来调用所需的界面。 4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。

4.3.6 打开冲洗阀。 4.3.7 点击[泵]图标,点击[设置泵…]选项,进入泵编辑画面。 4.3.8 设流速:5ml/min,点击[确定]。 4.3.9 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[启动],点击[确定] ,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。 4.3.10 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[关闭],点击[确定]关泵,关闭冲洗阀。 4.3.11 点击[泵]图标,点击[设置泵…选项],设流速:min。 4.3.12 点击泵下面的瓶图标,如下图所示(以单元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积,点击[确定]。 数据采集方法编辑 4.4.1开始编辑完整方法:从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项,如下图所示选中除[数据分析]外的三项,点击[确定],进入下一画面。 4.4.2方法信息 4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息(如:测试方法)。 4.4.2.2 点击[确定],进入下一画面。 4.4.3 泵参数设定 4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min,在[溶剂B]处输入,(A=100-B) ,也可[插入]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。 4.4.3.2 点击[确定],进入下一画面。 4.4.4 柱温箱参数设定 4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同],使柱温箱的温度左右一致。 4.4.4.2 点击[确定],进入下一画面。 4.4.5 检测器参数设定:检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽:一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区 域。参比带宽:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省

高效液相色谱实验报告

高效液相色谱实验报告 一、实验目的 1了解液相色谱的发展历史及最新进展 2 学习液相色谱的基本构造及原理 3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法,能够通过HPLC分离测定来对目标化合物的分析鉴定。 二、实验原理 液相色谱法采用液体作为流动相,利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。当两相做相对移动时,被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换,使溶质间微小的性质差异产生放大的效果,达到分离分析和测定的目的。液相色谱与气相色谱相比,最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质,这类物质在已知化合物中占有相当大的比例,这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。 高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物,更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析,目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。 三、高效液相色谱的分类 吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法 四、高效液相色谱仪的基本构造 高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。 1 输液系统: 包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、符合HPLC要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小,通过柱子的流动相受到的流动阻力很大,因此需要高压泵输送流动相。 2 进样系统: 将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。进样系统包括取样、进样两项功能。 3 分离柱: 色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。商品化的HPLC微粒填料,如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。采用的固定相粒度甚至可以达到1μm,而制备色谱所采用的固定相粒度通常大于10μm。HPLC填充柱效的理论值可以达到50000/m~160000/m理论板,一般采用100-300mm的柱长可满足大多数样品的分析的需要。由于柱效内、外多种因素的影响,因此为使色谱柱达到其应有的效率。应尽量的减小系统的死体积。 4 检测系统: HPLC检测器分为通用型检测器和专用型检测器两类。通用型检测器可连续测量色谱柱流出物(包括流动相和样品组分)的全部特性变化。这类检测仪器包括示差折光检测器、介

(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1.目的 描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。 2.适用范围 化验室 3.责任者 化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。 4.定义 HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。 5.安全注意事项 5.1有机溶媒有害健康,各溶剂瓶口应封严。 5.2注意检查废液桶中废液应避光,防止废液桶满外溢。 6.规程 6.1.Waters HPLC的组成:贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 ) 紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。 6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序 6.2.1打开顺序 ?对于分体式:请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关,待各部分分别显示初始化完毕后,最后 打开M i l l e nn i um32化学工作站。 泵与色谱工作站的连接:对于 510 泵,因为此泵与色谱工作站是 单向联系,如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制,首先要在泵 的键盘上按 Menu 键,待显示屏切换至 Mode 状态下,其状态是 Loca ,按 Edit/Enter 键,在 Local 的L 前有闪动的光标显示,按键, Local 转换成Rem,再按Edit/Enter 键,此命令已输入进去, 最后按 Stop/Run 键,使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。泵 的任何动作都可由工作站来控制。还应注意这一步工作在每次开机 时都要进行。

对于 Alliance 2690 系统:先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关, 待初始化完毕后,再进入 Millennium 32化学工作站。 对于流动相的要求:对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂;对于所 用到的固体试剂应采用分析纯试剂;对于水,应采用经纯水机处 理过的超纯水;流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜(滤膜分 为水相膜与有机相膜,确保使用正确的滤膜,参见附表 ) 过滤、超声 真空脱气方可使用,严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。 应养成良好操作习惯: 规范操作,树立保护 HPLC 整套系统的概念,尤其对于输液泵、色 谱柱、检测器,在使用后应及时冲洗,以免污染而使其寿命缩短或 损坏,尤其如操作者使用了含盐的流动相,更应注意清洗的步骤: 首先用脱过气的纯水在流速为1ml/min 左右冲洗 30~60 分钟,再用 含 50%以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗 20~30 分钟左 右。 如要卸下柱子,在经过上述冲洗过程之后,再经纯甲醇或乙腈以 1ml/min 的流速冲洗 20~ 30 分钟,柱子卸下后应马上拧紧柱堵。 流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式,启动泵时,应在 2 分 钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速,泵关闭时亦然( 流速递 减)。切忌流速的骤变。 6.2.2关闭顺序 首先退出 Millennium 32化学工作站,再关闭系统的其他部分。 https://www.doczj.com/doc/06514654.html,lennium 32化学工作站 Millennium 32色谱管理系统是集数据采集、处理、 HPLC系统的控制、结果的管理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。 6.3.1Millennium 32化学工作站的进入 打开化学工作站,系统自动进入Program Manager界面,双击 Millennium 肖像,这时进入Millennium界面,双击 Session Manager 图 标,系统将自动初始化,以使工作站和 HPLC整套系统进行联 接。初始化后,按系统要求键入你的 User Name和 Password,这时 你已进入该系统。 6.3.2Project的进入和建立

高效液相色谱仪使用注意事项[1]全解

岛津液相色谱仪使用注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品,血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法;①以异丙醇作溶剂冲洗:②放在异丙醇中间用超声波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。 11.要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 液相色谱柱使用经验谈 色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理: a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。 流动相的配制 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点: a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。 b、流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯

实验七高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯 一.实验目的 1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。 2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。 3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。 二.实验原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相,借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。 在高效液相色谱中,若采用非极性固定相,如十八烷基键合相,极性流动相,即构成反相色谱分离系统。反之,则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低,应用也更为广泛。 定量分析时,为便于准确测量,要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度(R)的计算公式为: R= 2[t (R2)-t (R1) ] /1.7*(W 1 +W 2 ) 式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间; t (R1) 为相邻两峰中前一峰的保留 时间; W 1及W 2 为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外,分离度应大于1.5。 本实验对象为邻苯二甲酸酯,又称酞酸酯,缩写PAE,常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品,如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明,邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用,是一类内分泌干扰物。待测物性质见表1。 表1色谱柱测试条件 如果要检测不同条件对谱图分离的影响,可按表1配制几种物质的混合溶液,在不同条件下进行HPLC分离检测。

三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪,50ul微量注射器。 2、试剂 甲醇(色谱专用),高纯水 四.实验步骤 1、色谱条件 色谱柱:辛烷基硅烷键合硅胶(C8) 柱温:室温 流动相:初始为高纯水:30%,甲醇:70% 检测器:DAD检测器; 检测波长:220nm; 进样体积:100μl定量环,实际注射每次可控制在200μl。 2、待测溶液的配制 首先用甲醇做溶剂配制储备液:邻苯二甲酸二甲酯(0.3880g/L),邻苯二甲酸二乙酯(0.2770g/L),邻苯二甲酸二丁酯(0.3776g/L)。然后各取1mL储备液用水和甲醇(20:80)稀释至10mL,作为待测溶液。 3、色谱测定 (1) 按操作规程开启电脑,开启脱气机、泵、检测器等的电源,启动Agilent 1100在线工作软件,设定操作条件。流量为1.000ml/min。 (2) 待仪器稳定后,开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置,用微量注射器吸取混合物溶液50ul,注入仪器进样口,顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置,此时显示屏显示进样标志。 (3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积及分离比。 (4) 实验完毕,清洗系统及色谱柱。依次用甲醇-水(60:40)、甲醇-水(70:30)……直到纯甲醇作流动相清洗,每次清洗至基线走稳,至少清洗15min。 五.实验结果

Waters高效液相色谱仪仪器校验报告

* Waters自动进样系列高效液相色谱仪 仪器校验报告 型号: 编号: 校验报告编号: 目录 1校验报告的起草说明.................................... ?............... (2) 1.1起草说明及目的................................. ?.......... ? .. (2) 1.2认可范围 (2) 1.3运行项目及认可标准 (2)

2校验报告的起草与批准 (3) 2.1校验报告的归属.................................................... . 3 2.2江苏恒瑞医药股份有限公司研究所分析高效液相色谱仪信息一览表 (3) 2.3待校验色谱仪各部件序列号......................................... .. (4) 3 .运行确认-------------------------------------------------------------------------------- 4 3.1目的--------------------------------------------------------------------------------- 4 3.2认可范围----------------------------------------------------------------------------- 4 3.3运行前准备--------------------------------------------------------------------------- 4 3.3.1 环境条件----------------------------------------------------------- ------ 4 3.3.2标准样准备--------------------------------------------------------- ------ 4 3.4运行测试项目及认可质量标准---------------------------------------------------------- 4 3.5试验方法及结果:--------------------------------------------------------------------- 5 3.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查 -------------------- ------------------------ 5 3.5.2柱温箱的检定------------------------------------------------------- ——6 3.5.3进样精密度检测--------------------------------------------------------------------- 7 3.5.4最小检测浓度----------------------------------------------------------------------- 8 3.5.5检测器噪声稳定性检查 -------------------------------------------------------------- 8 3.5.6检测器样品浓度响应线性检测 ------------------- --------------------- ------- 9 3.5.7进样体积线性检测 ------------------------------------------------------------------- 10 3.5.8检测器波长准确度 ------------------------------------------------------ 10 3.5.8.1重铬酸钾溶液检定----------------------------------------------------------------- 10 3.5.8.2咖啡因测试 ---------------------------------------------------------------------- 10 3.5.9 A/B通道梯度测试------------------------------------------------------------------- 11 3.5.10C/D通道梯度测试 ------------------------------------------------------------------ 12 3.6运行确认结论-------------------------------------------------------------------------- 14 Waters高效液相色谱仪仪器校验报告 1校验报告的起草说明 1.1起草说明及目的 根据国家《高效液相色谱仪检定规程》、根据仪器的不同配置要求,为了确保仪器使用正常,确保产品检测的准确性,对仪器的不同配置进行相应部件的确认

高效液相色谱仪HPCL使用中常见故障及解决方法

高效液相色谱仪HPCL使用中常见故障及解决方法 1 高效液相色谱仪系统 液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。 2 常见问题及解决方法 高效液相作为一种高精密仪器,如果在使用过程中不按照正确操作的话,就容易导致一些问题。其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。 2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI( 3.3 Bar)之间(在使用梯度洗脱时,柱压平稳缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。 2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题,指的是压力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时,我们应该分段进行检查。 (1).首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。处理方法:用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,在检查;

(2).打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。处理方法:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下,过滤白头正常,在检查; (3).把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以尽量少用。 2.1.1 压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏,处理方法:寻找各个接口处,特别是色谱柱两端的接口,把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就是泵里进了空气,但此时表现的往往是压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体。处理方法:打开Purge阀,用3~5ml/min的流速冲洗,如果不行,则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。 2.2.漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。 2.2.1基线漂移一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要半个小时的平衡时间,如果你用了缓冲溶液或缓冲盐,还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,但如果你在实验过程中发现基线漂移,则你要考虑下面的原因:

HPLC实验高效液相色谱分析实验

仪器分析实验报告实验名称:高效液相色谱分析实验

一、实验目的 1. 了解HPLC的结构,了解仪器的开、关程序。 2. 了解流动相的制备和样品溶液的制备。 3. 知道仪器的运行程序和进行样品分析。 二、仪器和试剂 仪器:美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器 试剂:磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸 三、实验步骤 1.流动相的准备 流动相只有一组:PH=3的磷酸乙腈溶液,进过脱气,用蠕动泵输送。2.开机,色谱柱平衡 当1完成后,开机,待色谱柱平衡。 3.样品溶液的准备 配置好邻氯苯甲酸溶液,按要求选好滤纸的孔径大小。用低压过滤装置过滤,由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置,因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。 4.基线的查看 由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动,因此,需等待压力稳定后,基线平稳才能进行进样。 5.样品进样分析

用10μL的微量注射器取5μL的邻氯苯甲酸,微量注射器中不能有气泡,将微量注射器的针头插入到注射的孔时,打开微量注射阀,将邻氯苯甲酸注射进去后,迅速关闭阀门,抽出针头,等待仪器的分析结果。 6.色谱柱的清洗 分析工作结束后,要清洗进样阀中的残留样品,也要用适当的液体来清洗色谱柱。 7.关机 实验完毕后,关闭仪器和电脑。 四、实验数据及处理 1.LC参数 2.色谱柱参数 3.四元泵状态 A:0.0%流速:1.000ml/min B:0.0%压力:91bar C:0.0% D:0.0%

5.色谱分析谱图见附页,经过注射5μL的邻氯苯甲酸,得到三组实验色谱图, 根据谱图列表数据如下: 色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为: n = L / H 理论塔板数和色谱参数之间的关系为: n = 16 ( t R / W b ) 2 = 5.54 ( t R / Y1/2 ) 2 则取第五组数据计算得: t R=2.437 min = 146.22s Y1/2 = 2.354(0.1375min / 4 ) = 4.855125 s n = 5.54 ( t R / Y1/2 ) 2 =5025 (块)

Waters_2695_型高效液相色谱仪操作方法

Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法 1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。 2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统,四通道在线真空脱气机(或氦气脱气机),可容纳120 个样品瓶的自动进样系统,柱温箱,内置的柱塞杆密封垫清洗系统,溶剂瓶托盘,液晶显示器,键盘用户界面及软盘驱动器。 1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695 分离单元后,约20s 仪器开始自检,约1min 后,显示主屏幕,此时继续各部件的初始化,待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时,仪器进入待命状态。 2 溶剂管理系统的准备 2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂,按【Menu/Status 】,进入“Status (1 )”屏幕,光标选“Degasser ”,按【Enter 】,显示选项屏幕,光标下移选“Continuous ”,按【Enter 】。 2.2 启动溶剂管理系统 2.2.1 干启动,当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时,在“Status (1 )”屏幕下,按【Direct Function 】,光标选“Dry Prime ”,按【Enter 】,显示“Dry Prime ”屏幕,按欲启动的溶剂管路的屏幕键,如【OpenA 】,光标选“Duration ”,按数字键输入5min ,按【Continue 】,待限定时间结束后,重复操作,使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 2.2.2 湿启动在“Status (1 )”屏幕下,光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相,输入10 0%,按【Direct Function 】,光标选“Wet Prime ”,按【Enter 】,显示“Wet Prime ”屏幕,输入7.5Ml/min 和6min ,按【OK 】,待限定时间结束后,对每种流动相重复操作。 2.2.3 平衡真空脱气机在“Status (1 )”屏幕下,光标选“Composition ”,输入流动相的组成,按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”,按【Enter 】,按【Direct Function 】,光标选“Wet Prime ”,输入0.000mL/min 和10min. ,按【OK 】。待限定时间结束后,按【Abort Prime 】。 3 样品管理系统的准备 3.1 冲洗自动进样器在“Status (1 )”屏幕下,光标选“Composition ”,输入流动相的组成。按【Direct Function 】,光标选“PurgeInjector ”,按【Enter 】,显示“Purge Injector ”屏幕,输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”,光标下移“Compression Check ”,按任意数字键,按【OK 】。 3.2 冲洗进样针在主屏幕下,按【Diag 】,显示“Diagnositcs ”屏幕,按【Prime Ndl Wash 】,显示“Prime Needle Wash ”屏幕,按【Start 】,30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit 】。 3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下,按【Diag 】,显示“Diagnosities ”屏幕,按Prime Seal Wash ,显示“Prime Seal Wash ”屏幕,按【Start 】,待排放口有水流出,按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。 3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置,打开样品仓门,显示“Door is Open ”屏幕,装入样品盘,按【Next 】,直至所有样品盘装毕,关仓门。 4 编辑分析方法及执行样品分析表 在主屏幕下,按【Develop Methods 】,显示“Methods ”屏幕。 4.1 编辑分析方法 4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下,按【New 】、【Separation Methods 】,输入方法名,按【Enter 】,显示分离方法屏幕,该屏幕共有6 页,通过按【Next 】或【Prev 】切换。如需设定梯度,在第( 1 )页按【Gradient 】,输入后按【Exit 】;如需设定色谱柱的温度,在第( 4 )页输入后按【Exit 】;在第(6 )页设定检测器的种类,光标选“Absorbance Detector ”,按【Enter 】,光标选“48 6﹨2487 ”,按Abs (1 )图标,设定检测波长,按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。 4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下,光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标,按【Edit 】,编辑\ 改各种分析参数,按【Exit 】、【Save 】。 4.2 编辑执行样品分析表 4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下,按【New 】、【Sample Set 】,输入样品组名,按【Enter 】,显示方法组屏幕,在样品组表中输入待分析样品的信息。在“Vial ”中输入样品放置的位

Waters 515高效液相色谱仪使用方法

Waters 515高效液相色谱仪使用方法 一、打开仪器与工作站: 1.按要求配制流动相,经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中,然后将恒流泵上末端带有过滤器的输 液管分别插入对应贮液瓶中。 2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关,在输液泵控制面板中,按向上或向下箭头, 找到“Local”,按“Edit”进入可编辑状态,再按向上或向下箭头,调至“Rem.”状态,按“Edit/Enter” 确认,按下面板左面的“Run/Stop”,此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。(接通电源前,应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡)。 3.双击电脑桌面上“Empower”图标,输入用户名“system”与密码“manager”,确定,进入工作站主窗 口。 二、运行样品: 1.在主窗口中点击运行样品,选择采集数据的项目与色谱系统后,点击“确定”打开运行样品窗口。 2.运行样品窗口中,在左面写入样品名称与合适的运行时间,左下部分上下两个按钮分别为“改变流 速”与“停止流液”,右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法,“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑,“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机,“监视器”用于察看色谱基线情况,色谱图在窗口右侧显示。 3.分析样品之前应设定压力上限,以保护色谱柱。 4.设置各参数后,待基线平直才可进样。 5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置,用微量注射器吸取一定量的试样溶液,插入进样口(插到底) 并将试样溶液缓慢推入。 6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”,待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时,扳下进 样阀手柄,进样运行即开始。 7.运行时间结束后自动停止运行,或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。 三、测定数据的察看 1.在工作站主窗口中点击浏览项目,在右侧窗口选定相应方法组后确定,打开数据列表,在表中第 一行选定“进样”,在表中找到相应数据,双击打开。 2.在数据显示窗口中,中间上半部分为等高图区,中间下半部分为色谱图区,右上部分为光谱图区; 点菜单“处理”-“提取色谱”后,等色谱图区中出现一白色数据框,上下拖动或双击-输入相应波长值-回车后,在色谱图区出现相应色谱图;点菜单“处理”-“提取光谱”,可以在窗口色谱图区中出现一白色数据框,左右拖动或双击-输入相应波长值→回车后,光谱图区出现相应光谱图; 中间最下面的部分是峰表,表中有峰号、保留时间、峰面积、峰高等项目。 四、关机: 1.在运行样品窗口中,点击左下方两个按钮中的“停止流液”钮,退出工作站。 2.依次关闭检测器与输液泵电源,关闭电脑及其它相关电源。 3.冷却10min后,盖上仪器罩。

Waterse2695高效液相色谱仪操作规程.docx

WaterS e2695高效液相色谱仪操作规程 1 目的 指导和规范WaterS e 2695 高效液相色谱仪的操作。 2 适用范围 该操作规程适用于Water e 2695 高效液相色谱仪的操作。 3 职责检验员应按操作规程进行仪器操作,质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。 4 操作 4.1 仪器组成和开机 4.1.1 仪器组成 本仪器由WaterS e 2695 分离单元、WaterS 2998 二极管阵列检测器、WaterS ELSD 2424 蒸发光散射检测器、Empower3 色谱工作站和打印机组成。 WaterS e2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统,四通道在线真空脱气,可容纳120 个样品瓶的自动分离单元,柱温箱,内置的柱塞杆密封垫清洗系统,溶剂瓶托盘;显示器,键盘用户界面。 4.1.2 开机 4.1.2.1 依次接通WaterS e 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。 4.1.2.2接通WaterS e2695分离单元后,约20s仪器开始自检,约3mn内各部件的初始化完成,待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时,仪器进入待命状态。 4.2溶剂管路系统的准备 4.2.1 流动相脱气 确认所有溶剂管路都充满溶剂,按[Menu/StatUS l,进入"Status(I)"屏幕,光标选“DegaSSer”,按[Enter】。 4.2.2 灌注 当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时,需进行干灌注(DryPrime),注入流动相。 否则,进行湿灌注(Wet Prime)以驱除气泡。干灌注:按主机面板上[Menu / Status l,进入“StatUS(1)”显示,按[Direct FUnction l,选择"Dry Prime”,选溶剂通道,如OPen A,选“DUratiOnlli按数字键输入5分钟,按” COntinue”,待限定时间结束后,重复操作,使所需的 溶剂通道注满流动相。湿灌注:进入αStatUS(1)"显示,选溶剂通道,输入100%,按[Direct FUnction],选“ Wet Prime ”,按【OK l,根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7. 5ml Z min ,一般不用更改,时间可设置为5min),按【0K1。 4.3 样品管理系统的准备 4.3.1 冲洗自动进样器 在“ StatUS(1)”,屏幕下,光标选“ Composition ”,输入流动相的组成。按【DireCt FUnCtion], 光标选“ PUrge InjeCtOr ”,按【Enter],显示“ PUrge InjeCtOr” 屏幕,输入“ SamPIe Loop Volumes 6. 0”,光标下移“ COmPreSSiOn Check”,按任意数字键,按【OK]。 4.3.2 冲洗进样针 在主屏幕下,按【Diag],显示“ Diagnostics ”屏幕,按【Prime Ndl WaSh l,显示“ Prime NeedIe WaSh”屏幕,按[Start],30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。 4.3.3 冲洗柱塞杆密封垫

Waters高效液相色谱仪标准操作规程

XXXXXXXXXX部仪器设备标准操作规程 1 目的:建立Waters高效液相色谱仪标准操作规程。 2 范围:Waters高效液相色谱仪。 3 责任:化验室操作者。 4 规程: 4.1 型号与主要性能指标 4.1.1 型号 4.1.1.1 主机Waters2695分离单元、Waters2489紫外/可见光检测器。 4.1.1.2 工作站Empower2。 4.2 主要技术指标: 4.2.1 泵流量设定:0.000和0.010到10.000毫升/分,增量为0.001毫升/分。 流量准确度:±1%或10μL/分,取其中的较大值(0.200到5.000毫升/分),反压为600psi下的脱气甲醇。 4.2.2 检测器:光源:氘灯。 波长范围:190~700nm 波长精度:±1nm 4.2.3 柱温箱:温度设定范围:20~60℃,间隔:1℃ 控温精度:±5℃ 4.2.4 工作站计算机:Dell OPTIPLEX330(操作系统Windows XP)。 4.2.5 打印机:HP LaserJet P1008打印机。

5 操作条件: 5.1 电源要求:950VA(最大值) 线电压:85到132Vac或180到250Vac 频率:47到63Hz 5.2 环境条件:温度:4~40℃,相对湿度:20~80%。 5.3 机房内应清洁无尘,无易燃、易爆和腐蚀性气体,室内排风良好。 5.4 仪器应平稳放置在工作台面上,便于操作,周围无强烈的机械震动和电磁干扰,仪器接地应良好。 6 操作前准备: 6.1 配制所需流动相。 6.2 配制和制备所需的对照品溶液和供试品溶液。 6.3 将色谱柱连接到色谱仪管路系统上。 7 操作步骤: 7.1 打开交流稳压电源开关,稳压电源上电压表指示并稳定至220V。 7.2 将“2695分离单元”电源开关(位于左侧面板的面板顶部)推到(开)I 位置即可启动“2695分离单元”, 启动诊断程序将启动。启动诊断程序的初始部分成功后,前面板上将显示Main(主)屏幕。启动诊断程序将继续执行,将初始化:针头、注射器和阀门;样品转盘托架;溶剂管理系统。诊断运行时,Main(主)屏幕的标题区内将显示这些机械诊断测试的状态。如果启动诊断程序不成功,则排除故障。当启动诊断程序完成后,“分离单元”将进入“空闲”模式。仪器开始自检(4-5分钟),待屏幕上方出现“idle”字样表示自检成功。 7.3 将输液泵上的烧结不锈钢过滤器及吸液管放入流动相中,使导管内充满溶剂。打开在线脱气,使其伪on,设定柱温,一般为35℃,清洗柱塞杆1~2分钟(Prime seal wash),将每一个会用到的管道进行排气一次(Wet prime),注射器排气泡及清洗(Purge injector),清洗注射针(Prime needle wash)。

高效液相色谱定量分析分析实验

高效液相色谱定量分析实验 一、实验目的 ⑴进一步熟悉HPLC仪器的基本构造及工作原理,熟悉HPLC的基本操作; ⑵了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点; ⑶学习未知样品中甲苯的定量分析方法。 二、实验原理 ⑴校正因子: (1)绝对校正因子;(2)相对校正因子。 ⑵常见的色谱定量分析方法主要有: (1)归一化法。特点:简单、方便、准确,但要求所有组分必须全部出峰。 (2)内标法。特点:使用相对校正因子定量,结果准确,但操作繁琐,由于需要增加内标物,增大分离的难度。 (3)标准曲线法(外标法)。简单、方便,由于采用绝对校正因子定量,结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。 (4)内标标准曲线法。 三、仪器与试剂 LC-1000型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯)、二次去离子水、甲苯、系列甲苯标准溶液、平头微量注射器(100 l)、待测溶液 四、LC-1000型高效液相色谱仪操作步骤 ⑴流动相的预处理 用甲醇和二次去离子水配成500 mL (V/V=90:10)的甲醇溶液,用0.45μm 有机滤膜过滤,超声波清洗器脱气10~20 min,装入流动相贮液瓶。 ⑵高效液相色谱仪操作 (1)依次打开高压输液泵、紫外检测器电源开关 (2)打开色谱N2000在线工作站,选择通道,建立运行方法。 (3)打开三通阀(逆时针半圈),按“Purge”排除流路中的气泡。排气完毕后,按“Stop” 键,停泵,关闭三通阀。按“Flow”设置流速1.0 mL/min,“Enter”确认。 (4)按“设定”键,检测波长254 nm。按“↓”键,输入“1”,开启氘灯。 (5)按“Run”键,启动输液泵。 (6)检查基线,零点校正,待基线稳定后,用平头微量注射器取试液20 μL,将进样阀柄置于“Load”位置时注入样品,转动阀柄至“Inject”位置,同时点击软件“采集数据”。注意!平头微量注射器用甲醇清洗3次后,再用试液清洗3次,避免气泡。 (7)待所有色谱峰流出完毕后,按“停止采集”键,保存数据并在N2000离线工作站处理数据,记录组分的峰面积。 注意!注射器进不同样品前,使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置,用流动相清洗2~3次。 (4) 结束工作:所有样品分析完毕后,流动相继续流动10~20 min,至基线稳定。关闭检测器,按“Stop”停泵。关闭泵电源。 五、实验内容 ⑴分别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图,根据保留时间定性,确定甲苯组分峰的位置,并测定各自的峰面积。 ⑵根据实验数据,利用外标法绘制标准工作曲线,并计算待测溶液中甲苯的含量。

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